Sunteți pe pagina 1din 71

Genetica bacterian

studiaz ereditatea i variabilitatea la bacterii;


suportul material al ereditii este reprezentat de
genomul bacterian, suma genelor unui
microorganism;
gena constituie unitatea funcional de baz a
informaiei genetice;

Genetica bacterian
genomul bacterian este reprezentat de

- ADN cromozomal (include gene eseniale)


- ADN plasmidic (conine gene care codific caractere de
tulpin);

genotip = totalitatea informaiei nscris n


genomul bacterian;
fenotip = suma caracterelor observabile consecutiv
interaciunii genotipului cu mediul ambiant.

Fenomenul de variabilitate genotipic


- modificare brusc, transmisibil la descendeni a unuia
sau a mai multor caractere prin dou mecanisme
mutaia
transferul de ADN de la un donor la un acceptor.
Variaia fenotipic
- indus de interaciunea genomului cu factori de
mediu;
- este reversibil i nu se transmite ereditar;
- are la baz controlul transcripiei genelor n ARNm i
traducerii n sinteza proteinelor, prin inducia sau
represia acestora.

Mutaia
reprezint o modificare n secvena
nucleotidelor ntr-o gen, datorit unei erori n
cursul replicrii;
eveniment rar, spontan i imprevizibil;
mutaiile acumulate de-alungul a miliarde de
ani, sub efectul seleciei naturale, explic
evoluia speciilor;

Mutaia
noile gene aprute prin mutaie se numesc alele
i ocup acelai locus genetic ca gena de origine;
mecanisme moleculare ale mutaiei
- substituia unei perechi de baze printr-o alt
pereche, cu nlocuirea unui codon printr-un alt
codon
- inseria sau deleia uneia sau a mai multor
baze, cu decalarea citirii mesajului genetic.

Rata mutaiei = probabilitatea de apariie


spontan a unei mutaii ntr-o populaie bacterian;
rata mutaiei este foarte sczut (10-7 10-9) dar
poate crete n prezena unor ageni mutageni
(chimici sau fizici).
Frecvena mutaiei = proporia unui anumit
mutant ntr-o populaie bacterian;
frecvena mutantului poate crete ca urmare a
seleciei

- relative (mutantul are un timp de generaie mai scurt)


- absolute (prin prezena unui factor de mediu favorabil
mutantului, dar defavorabil restului populaiei).

Mutaii bacteriene observate n laborator:


mutaii privind morfologia coloniei bacteriene
(variaia S R);
mutaii nutriionale (mutani auxotrofi vezi LP);
mutaii care duc la pierderea unor factori de
patogenitate (mutani aviruleni la S.pneumoniae care iau pierdut capsula);
mutaii care conduc la apariia fenomenului de
rezisten la antibiotice (att ADN cromozomic ct i cel
plasmidic poate fi sediul unor asemenea mutaii).

Transferul genetic

se realileaz n sens unic, de la o bacterie donor la

una receptor;
exogenot = materialul genetic transferat;
endogenot = materialul genetic propriu;

Transferul genetic
evoluia exogenotului n celula receptor
- recombinare: alinierea secvenelor cu omologie

structural, urmat de substiutirea uneia sau mai


multor gene ntre exo- i endogenot;
integrare n genomul bacteriei receptor
(transpozoni, fagi);
meninerea n poziie extracromozomal dac este
un replicon (plasmide, fagi);
supus aciunii endonucleazelor de restricie
( informaie genetic pierdut).

Mecanisme de transfer al exogenotului


I. Transformarea

bacteria acceptor este capabil s primeasc


ADN exogen provenit din mediu, de la bacterii
moarte (stare de competen);
exogenotul trebuie s prezinte o structur
bicatenar i s reprezinte nu mai mult de 1% din
mrimea genomului bacterian;
fenomenul a fost descoperit prin experimentri pe
oarece cu S.pneumoniae, n 1928, i explicat
dup dou decenii mai trziu.

II.Transducia

- transfer de ADN bacterian prin intermediul


-

bacteriofagilor transductori;
exist dou tipuri de transducie
generalizat (transfer aleator al unui fragment din

genomul bacterian);
specializat (transfer de gene localizate n cromozomul
bacterian n vecintatea locului de integrare a
profagului).

Conversia lizogen
Conversie lizogen = informaie genetic
adiional, de origine fagic, avnd asemnri
cu transducia specializat (toxigeneza tulpinilor
de Corynebacterium diphtheriae, Streptococcus
pyogenes etc).

Transducia generalizat

Transducia specializat

Concluzie:
Transducia reprezint un transfer de gene
cromozomale de la o celula bacterian la alta,
mediat de bacteriofagi.
Unii bacteriofagi sunt capabili s transfere orice
gen bacterian (transducie generalizat) iar alii
numai anumite gene (transducia specializat).

III. Conjugare

- transfer genetic consecutiv contactului fizic ntre


-

dou bacterii cu polaritate sexual diferit;


bacteria donor (sex masculin) posed un
plasmid conjugativ (factorul F+) cu gene care
codific sinteza de pili sexuali, prin care se
ataeaz la receptori specifici de pe suprafaa
unei celule receptor ( F-, de sex feminin);

Pil sexual

Pil sexual (E. coli)

III. Conjugare

- retragerea pililor aduce cele dou celule n


-

contact, prin puntea citoplasmatic care se


stabilete, urmnd s fie transferat ADN
plasmidic;
consecutiv acestui tip de conjugare rezult dou
celule F(+) ;
plasmidul F poate purta gene adiionale ( ex. gene de
R la antibiotice) care pot fi transferate;

III. Conjugare

- plasmidul F integrat n cromozom poate conduce la


-

transfer de gene cromozomale (ntre o bacterie Hfr


-high frequency of recombination - i una F(-));
transferul incepe din vecintatea locului de inserie
a plasmidului F, care este ultimul transferat;
cel mai frecvent bacteria receptor ramne F(-);
transferul de ADN la bacterii gram-pozitive este
controlat de feromoni sexuali (molecule de
suprafa. prin care celulele bacteriene ader ntre
ele).

Elemente genetice transpozabile


reprezint segmente de ADN capabile s se
excizeze i apoi s se insere n acelai
replicon (cromozom sau plasmid) sau n unul
diferit, putnd determina blocarea expresiei
unei gene n care se inser (factor mutagen);
are loc cu intervenia unei enzime,
transpozaza, fr s fie necesar omologia
genetic.

Elemente genetice transpozabile


Tipuri de elemente transpozabile
secvene de inserie (SI) constituite din
gena care codific transpozaza, flancat de
repetri inversate, a 20-40 perechi de baze;
transpozoni, care posed n regiunea
central una sau mai multe gene care
codific anumite caractere (ex. rezistena
la antibiotice), flancate de SI.

Patogenitatea bacteriilor
Patogenitate = ansamblul proprietilor biologice
ale unui microorganism care i permit s determine
mbolnvirea gazdei.
Clasificarea bacteriilor n raport de patogenitate
- nepatogene (prezena lor nu determin mbolnviri);
- nalt patogene sau patogene primare (determin

cel mai frecvent mbolnviri la gazda normoreactiv dar


lipsit de aprare specific);
condiionat patogene sau oportuniste (prezente
pe suprafeele de nveli, pot determina mbolnviri
cnd:
apar disfuncii ale barierelor de aprare antimicrobian
variaia genetic le confer factori de patogenitate).

Atributele majore ale unei bacterii


patogene
transmisibilitatea = posibilitatea de a trece
de la o gazd la alta;
infectivitatea = abilitatea de a ptrunde, de
a persista prin depirea sau neutralizarea
barierelor i mecanismelor antimicrobiene,
de a se multiplica i de a invada organismul
gazdei;
virulena = capacitatea microorganismului de
a vtma gazda.

I. Transmisibilitatea conferit
de:

- prezena endosporilor care asigur indefinit


-

supravieuirea n condiii nefavorabile (specii


Bacillus i Clostridium);
rezistena la condiii de desicaie/uscciune
(Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus,
Corynebacterium diphtheriae etc);

I. Transmisibilitatea conferit
de:

supravieuirea i chiar multiplicarea n medii umede,


minimale nutritiv (specii din familia
Enterobacteriaceae sau Pseudomonas aeruginosa);
adaptarea la transmiterea direct (ex. transmitere
sexual) sau prin vectori biologici (artropode
hematofage) n cazul speciilor extrem de fragile n
mediul extern (Neisseria gonorrhoeae, Treponema
pallidum, respectiv specii Rickettsia, Borrelia).

II. Infectivitatea
1. Depirea barierelor externe de aprare
- discontinuiti ale tegumentului;
- discontinuiti ale stratului de mucus (plcile Peyer);
- producere de neuraminidaz ( hidroliza stratului de
mucus);
- forma spiralat i mobilitatea (Vibrio cholerae,
Helicobacter pylori, Campylobacter jejuni);
- producere de ureaz (neutralizeaz bariera acid
gastric , ex. Helicobacter pylori, H.heilmannii);
- sinteza de bacteriocine (afecteaz bariera biologic a
suprafeelor).

2. Meninerea prin aderare la suprafeele de


nveli

necesit participarea a doi factori:


adezin sau ligant componente macromoleculare pe
suprafaa celulei bacteriene,
receptori celulari prezeni pe suprafaa celulelor gazdei;
adezinele i receptorii interacioneaz n manier
complementar i specific;
confer rezisten la splarea mecanic (prin secreii sau
excrete) sau prin micri peristaltice;
structuri de suprafa cu rol de liganzi: fimbrii, glicocalix,
proteine de suprafa (proteina M, proteina F), acizi teichoici i
lipoteichoici.

Exemple:
- S. aureus si T. pallidum se leaga de
fibronectin prin diferite proteine de
suprafa;
- S. pyogenes posed: acizi teichoici,
proteina M i proteina F (ultima este ligant
pentru fibronectina).

Adhesion
BACTERIUM

adhesin
receptor

EPITHELIUM

S. pyogenes
F-protein
lipoteichoic acid

fibronectin

Tulpini uropatogene
(E. coli - prezint pili)

Absena pililor

3. Invazia
majoritatea bacteriilor i exercit efectul patogen prin
invazia esuturilor, precedat de aderarea la suprafaa
mucoaselor;
invazia poate fi din:
- aproape n aproape
- pe cale limfatic
- hematogen
- nervoas;
bacteriile invazive sunt capabile s penetreze n celulele
nefagocitare prin endocitoz, graie unor proteine de suprafa
invazine;

3. Invazia
unele bacterii posed: factori de difuziune
(hialuronidaz, colagenaz, fibrinolizine), exoenzime care
degradeaz esutul conjuctiv care se opune invaziei
(ciment intercelular, membran bazal, depozite de
fibrin, fascii).
- Factori de difuziune (exoenzime: hialuronidaza S.
pyogenes, S. aureus; colagenaza Clostridium,
stafilochinaza, streptokinaza pentru stafilococi si,
respectiv streptococi).

4. Supravieuirea n organismul gazdei

- protecia fa de fagocite i complement prin:

inhibarea chemotaxiei fagocitelor i uneori a producerii i


eliberrii lor din mduva hematogen;
sinteza de polizaharide capsulare;
supravieuirea i multiplicarea n celulele fagocitare;
liza celulelor fagocitare (prin leucocidine);

- eludarea supravegherii imune:

variaia antigenic;
identitatea antigenic cu celulele gazdei;
diversitatea antigenic;
localizarea n situs-uri privilegiate anatomic sau celular;
supresia rspunsului imun.

Exemple:
inhibarea chemotaxiei fagocitelor (streptolizina
distruge fagocitele);
S. aureus produce coagulaza legat cu producerea
de fibrin: bacteria nu poate fi recunoscut de
fagocite;
capsula cu rol antifagocitar (S. pneumoniae, H
influenzae, K. pneumoniae, E coli, S typhi);
AgO aciune antifagocitar, mpiedica activarea
C
Proteina A a S. aureus; leag IgG prin fragmentul Fc i blocheaz fagocitoza mediat de
opsonine.

- bacterii facultativ intracelulare (Salmonella spp,


Shigella, E. coli enteroinvaziv (ECEI), Legionella
pneumophila, Neisseria spp, Mycobacterium spp,
Bordetella pertussis) si obligator intracelulare
(Rickettsiia spp, Chlamydia spp, Coxiella burnetii)
rezist aciunii microbicide intrafagocitare;
- leucocidine i hemolizine produse de S. aureus, S.
pyogenes, C. perfringens lizeaz leucocitele,
respectiv eritrocitele.

INFECTIVITATEA
bacterii obligator,
facultativ intracelulare
i extracelulare

- eludarea supravegherii imune:

variaia antigenic;
identitatea antigenic cu celulele gazdei;
diversitatea antigenic;
localizarea n situs-uri privilegiate anatomic
sau celular;
supresia rspunsului imun.

b) Eludarea supravegherii imune


- variaia antigenic: infecia gonococic;
Borrelia recurrentis febra recurent;
- localizarea in situs-uri anatomice (ex. accesul
Ac dificil in LCR, articulaii, vezica biliar) sau
celulare privilegiate (e.g. bacteriile facultativ sau
obligator i.c. nu sunt influenate de Ac serici);

b) Eludarea supravegherii imune


- identitatea antigenic: tulpinile K1 de E. coli au
determinani antigenici comuni cu polisialozilglicopeptidele cerebrale nu sunt recunoscute c
nonself determin infecii bacteriemice si
meningite grave la nou-nscut; ulterior, cantitatea
acestor Ag-ne scade;

INFECTIVITATEA
b) Eludarea supravegherii imune:
- absorbia Ac prin Ag solubile:
Ag capsulare solubile neutralizeaz Ac specifici;
proteina A a S. aureus inactiveaz parial IgG;
- producerea de IgA proteaz (de ctre N. gonorrhoeae,
N. meningitidis, H. influenzae, S. pneumoniae) - cliveaz
specific IgA;
- supresia rspunsului imun: rar implicate bacteriille (e.g.
lepr, tuberculoz, cu activarea limf. T supresor).

Achiziia de nutrieni

- necesarul de Fe n medii feriprive este asigurat prin:


sinteza de siderofori (enterochelin, aerobactin);
legarea transferinei sau lactoferinei la receptori de pe
suprafa bacteriei;
reducerea Fe feric n Fe feros.

INFECTIVITATEA
Achiziia de nutrieni: fierul.
Fe complexat cu proteinele: hem i feritin, intracelular;
transferina T i lactoferina - L, extracelular.
H. influenzae, N. meningitidis, N. gonorrhoeae, leag,
printr-un receptor de suprafata, direct L sau T, alte bacterii,
(Vibrio cholerae) fixeaza hemul.
Sideroforii (enterochelina, aerobactin) cu afinitate mare
pentru Fe, l deplaseaza din complexele proteice ale gazdei.
Proteine ale ME au rol de receptori pentru complexul Fesiderofori favorizeaza ptrunderea Fe n celul.

III. Virulena

- reprezint capacitatea microorganismelor de a


-

vtma gazda;
este un atribut de tulpin cuantificabil (DLM; DL50);
condiii majore pentru recunoaterea unui
constituient celular ca factor de virulen (postulatele
moleculare Koch)

- genele de virulen sunt cel mai frecvent prezente pe


elemente genetice mobile (plasmide, fagi, transpozoni).

Postulatele moleculare Koch:


factorul de virulen este prezent numai la
tulpinile virulente;
inactivarea prin mutaie a genei care-l codific
duce la pierderea virulenei;
reversia la gena slbatic restaureaz
virulena;
produsul genei induce, de regul, un rspuns
imun protector;

Mecanisme de lezare a gazdei

- mecanisme directe

exotoxine, produse de metabolism bacterian de


natur proteic, eliberate n mediul extracelular
att de bacterii gram-pozitive ct i gram-negative;
endotoxine, prezente numai la bacterii gramnegative, eliberate numai n momentul lizei celulei
bacteriene;
agresine, exoenzime capabile s determine alterri
tisulare.
mecanisme indirecte
reacii de sensibilizare de tip II, III sau IV
(Coombs i Gell) vezi Imunologia

Proprieti comparative
exotoxine
- n general termolabile
- intens antigenice
- pot fi transformate n anatoxine

endotoxine
- termostabile

- slab antigenice
- nu pot fi
transformate
- DLM ng/Kg corp
- DLM g/Kg corp
- aciune specific (enterotoxine, - aciune nespecific
neurotoxine, citotoxine)
(febr, leucopenie
urmat de leucocitoz,
CID, oc endotoxinic)

Definiii
Antitoxine: Ac anti-toxine (terapie).
Anatoxine: toxine care prin tratare cu formol,
la cald, pierd toxicitatea dar pstreaz
imunogenicitatea (vaccinare).
Endotoxinele sunt mai puin imunogene (ex. si
vaccinuri lipopolizaharidice)

Clasificarea exotoxinelor
citolitice
atac fosfolipide din membrana citoplasmatic
(fosfolipaze);
creaz pori prin membrana celular (hemolizine,
leucocidine).
bipartite, constituite din dou subuniti
subunitaea B permite legarea toxinei la un receptor celular
subunitatea A, cu proprieti enzimatice, ptrunde n celul
acionnd asupra unor inte moleculare.
superantigene
activeaz limfocitele T prin legare simultan la receptori de
pe suprafaa acestora i la CMH clas II de pe suprafaa
macrofagelor
este stimulat eliberarea unor mari cantiti de limfokine,
mediatorii fenomenelor morbide.

Membrane damaging exotoxins


Proteases
Phospholipases
Detergent-like action

A-B toxins
Cell surface

Active

Binding

Toxina tetatnic tip AB

Inhib acidul -aminobutiric


(influxul nervos nu mai este blocat neuronii motori
sunt stimulai n exces contracturi spastice ale
musculaturii striate)

Superantigene
activeaz limfocitele T prin legare simultan la

receptori de pe suprafaa acestora i la CMH


clas II de pe suprafaa macrofagelor
este stimulat eliberarea unor mari cantiti de
limfokine, mediatorii fenomenelor morbide.

Efecte biologice ale endotoxinelor

activarea complementului pe cale alternativ cu stimularea


procesului inflamator;
fixarea pe suprafaa macrofagelor, cu eliberare de citokine
(IL-1, IL-6, IL-8, FNT etc), mediatori ai inflamaiei i ocului
endotoxic;
activarea unor factori ai coagulrii, care conduce la CID;
activarea plasminei, cu apariia de hemoragii;
fixarea pe celule endoteliale cu, creterea permeabilitii
vasculare.
n infecii cu bacterii gram-pozitive sau a.a.r., peptidoglicanul,
acizii teichoici i respectiv arabinogalactanul pot determina
efecte endotoxin-like.