Citologie i Histologie

Practic

Curs 2

Diagnosticul citologic

Simplu, ieftin, repetabil.

Scop principal: leziunea este sau nu malign.
Studiul citologiei exfoliative : la mijlocul
secolului XIX
n 1843 Walshe face referire la mici fragmente
expectorate cu caracter malign (tumori de
tract respirator).
n 1847 Pouchet face primele referiri asupra
citologiei vaginale normale.
n 1860 Beale face primele referiri asupra
celulelor descuamate n context diagnostic
(sputa la o tumor faringian).
1864 Sanders : citologia urinar la pacienii
cu tumori vezicale.
1927 Babe arat pentru prima oar c este o
metod util pentru diagnosticul cancerului
de col uterin nainte de invazie (articol
publicat).
1928 Papanicolaou public un articol pe
aceeai tem.
1940 intr n atenia lumii medicale ajutat de
Charles Cameron (directorul medical i
tiinific al Societii Americane de Cancer)
care popularizeaz testul PAP.

Aurel Babe

Raportul citologic - principii

Foarte important tehnica efecturii

frotiurilor
Fr descriere macroscopic.
Sunt importante datele clinice primite
de la clinician.
Citodiagnosticul se refer la
caracterul malign sau benign al
celulelor.
Nu face referiri asupra formei
histopatologice de tumor.
Nu face referiri legate de stadiu i
gradul tumoral (G)
Citodiagnosticul negativ nu infirm
existena tumorii.
Nu aduce informaii prognostice i
terapeutice.
Citologia nu substituie examenul
histopatologic.
Metode speciale de coloraie ?

Principiile de baz ale interpretrii

i raportrii citologiilor

Diagnosticul citologic este

considerat att tiin ct i art.
Este adeseori mai dificil dect
diagnosticul histopatologic.
Diagnosticul citologic are la baz o
sintez a ntregului ansamblu i nu
doar modificri ale celulelor
individuale.
Datele clinice sunt indispensabile.
Uniformitatea metodelor tehnice din
fiecare laborator.
Diagnosticul citologic se bazeaz
adesea pe modificri minore
(nucleare i/sau citoplasmatice).
Sistemul de raportare (sistemul
Bethesda) are valoare din punct de
vedere epidemiologic i n
cercetare, dar uneori priveaz
patologul de flexibilitate n
diagnostic.
Este foarte important cunoaterea
caracterelor celulare normale

Istoric

Georgios Nicolas Papanicolaou

(1883-1962)
Kymi (Grecia)
1898 Universitatea din Atena
1904-1906 asistent medical n
armat
ncepe cariera medical bolnavii de
lepr
1907 Institut de Zoologie din
Munchen
1910 obine doctoratul
1912 locotenent n corpul medical
al armetei
1914 N.Y. n departamentul de
Anatomie
1920 ncepe studiul citologiei
vaginale
1943 public monografia
Februarie 1962 insuficien
cardiac cu EPA.

Citologie? De unde?
Toate zonele anatomice

Citologia exfoliativ
Citologia abraziv
Puncie aspirativ cu ac fin
Citologia sanguin i a
mduvei hematogene

Citologia exfoliativ

Se bazeaz pe desprinderea
spontan a celulelor, de la
suprafaa unor organe, la nivelul
unor caviti.
Celulele exfoliate sunt recoltate
prin metode non-abrazive.
Nu poate fi stabilit vrsta
celulelor exfoliate.
Diagnostic precoce n tumori cu
localizare superficial.
Exemple:

Citologia vaginal
Citologia sputei
Citologia seroaselor
Citologia urinar

Citologia exfoliativ
- citologia vaginal

Citologia vaginal
Evalueaz celule din zona fundului de sac posterior al vaginului, care provin
din mai multe surse.
Adesea conine pe lng celule epiteliale descuamate i alte tipuri celulare:
leucocite i macrofage (cresc numeric n procesele inflamatorii)
diverse microorganisme

Citologia exfoliativ

Citologia sputei - colecie de

material mucoid care conine
celule provenite din:

cavitatea bucal
faringe
laringe
trahee
arborele bronic
alveolele pulmonare

Citologia urinar
Citologia seroaselor

Citologia seroaselor

Lichidul este colecionat n containere

sterile i transferat rapid n laborator.
Stocare posibil la 4 grade Celsius
(maxim 2 zile)
Volum satisfctor : aproximativ 50 ml
Se adaug n container peste lichidul
de evaluat o soluie fixatoare (etanol
50%).
Regul: soluia fixatoare trebuie sa aib
acelai volum (sau puin mai mare) cu
lichidul pentru evaluare

Dac sunt lichide cu coninut hemoragic

se adaug n plus i un anticoagulant
(heparin)
Necesar 2 frotiuri/caz pentru
diagnoastic
Centrifugare uzual la 600 rotaii timp de
10 minute.
Lichidele decelabile clinic/imagistic:
patologice

Citologia exfoliativ
- caracteristici

Citologia exfoliativ se
caracterizeaz de prezena
celulelor din diverse surse.
O caracteristic important:
slaba pstrare a unor tipuri
celulare exfoliate
unele celule se pstreaz
relativ bine (ex. celulele
scuamoase)
Altele se altereaz uor
(ex. celulele glandulare,
leucocitele)

Necesar fixarea rapid

Citologia abraziv

Metoda este utilizat pentru a

obine prin abraziune, un numr
sporit de celule direct de pe
suprafaa unui organ.
Spatula cervical a fost
introdus de Ayre n 1947.
Permite recoltarea celulelor de la
nivelul epiteliului exocervical i
endocervical

Alte instrumente pentru citologia

exfoliativ

Citologia abraziv

Frotiu de snge periferic

Frotiul de snge periferic (venos
sau capilar)
snge capilar - arteriolar

Strat subire, uscare rapid la

temperatura camerei
Colorare

Metoda de elecie: May-GrnwaldGiemsa (MGG)

Alternative: Wright, Romanowsky
Metode citochimice: peroxidaza,
fosfatazele, PAS
Metode imunocitochimice: markeri
leucocitari de membran
Examinare

Obiectiv x40 sau x100 (imersie)

Se urmrete:
aspectul general al frotiului
morfologia eritrocitelor
formula leucocitar

Frotiu de snge periferic

Frotiul de snge periferic (venos
sau capilar)
snge capilar - arteriolar

Strat subire, uscare rapid la

temperatura camerei
Colorare

Metoda de elecie: MayGrnwald-Giemsa (MGG)

Alternative: Wright, Romanowsky
Metode citochimice: peroxidaza,
fosfatazele, PAS
Metode imunocitochimice: markeri
leucocitari de membran
Examinare

Obiectiv x40 sau x100 (imersie)

Se urmrete:
aspectul general al frotiului
morfologia eritrocitelor
formula leucocitar

Recoltare la nou-nscut
i copilul mic

Frotiu de snge periferic

Frotiul de snge periferic (venos
sau capilar)
snge capilar - arteriolar

Strat subire, uscare rapid la

temperatura camerei
Colorare

Metoda de elecie: May-GrnwaldGiemsa (MGG)

Alternative: Wright, Romanowsky
Metode citochimice: peroxidaza,
fosfatazele, PAS
Metode imunocitochimice: markeri
leucocitari de membran
Examinare

Obiectiv x40 sau x100 (imersie)

Se urmrete:
aspectul general al frotiului
morfologia eritrocitelor
formula leucocitar

Snge venos

Snge capilar

Frotiu din aspiratul medular i/sau

biopsie
Aspiratul i biopsia cresta
iliac postero-superioar
(cortical subire)
sigur
riscul sczut de durere
accesibilitate bun

Alternative:
Creasta iliac anterosuperioar

Doar aspirat:
Stern :
peste 12 ani, obeze
Nivelul corespunztor celui deal 2-lea i al 3-lea spaiu
intercostal

Tibie:
la copii sub 1 an (anestezie
general)
Suprafaa proximal
anteromedial

Frotiu din aspiratul medular i/sau

biopsie

Aspiratul i biopsia cresta

iliac postero-superioar
(cortical subire)
sigur
riscul sczut de durere
accesibilitate bun

Alternative:
Creasta iliac anterosuperioar

Doar aspirat:
Stern :
peste 12 ani, obeze
Nivelul corespunztor celui
de-al 2-lea i al 3-lea spaiu
intercostal

Tibie:
la copii sub 1 an (anestezie
general)
Suprafaa proximal
anteromedial

Puncia aspirativ cu ac fin

FNA (Fine Niddle Aspiration)

Diagnosticul tumorilor palpabile

1853 James Paget diagnosticul
tumorilor mamare.
Menetrier (1886) i Kronig (1887)
diagnosticul tumorilor pulmonare.
Cteva centre specializate.
n 1925 Martin i Coley se implic
n diagnosticul preoperator (peste
1000 cazuri)

Mamare
Ganglion limfatic
Plmn
Os

Institutul Karolinska (Suedia)

Nils Soderstrom i Josef Zajicek
Tumori mamare, prostatice,
tiroidiene, glande salivare,
pulmonare
Prezent: tumori localizate profund
Ghidaj: eco, CT

FNA: avantaje

Nu impune pregtire special

Fr anestezie specific
Elimin perioadele de
ateptare
Rapid, sigur
Nedureroas
Ieftin
Raportarea FNAB:

nesatisfctor
benign
malign
suspicios

Realizarea preparatelor citologice

Fixarea este o etap foarte important
Pentru cele mai multe cazuri, preparatele bine fixate i colorate adecvat
sunt mai uor de interpretat dect cele care sunt uscate la aer.

Trebuiesc preparate frotiuri n strat subire i cu material uniform

ntins.
Prepararea materialelor citologice prin periere sunt mai dificil de
efectuat.
Exceptnd cazurile cnd este necesar uscarea preparatului la aer
(ex. frotiurile sanguine), restul preparatelor citologice necesit fixare
rapid cu soluie fixatoare specific.
Cel mai utilizat fixator pentru coloraia Papanicolaou: alcool 95%
Durata optim a fixrii: 15 minute
Exist i fixatori tip spray.
n cazul frotiurilor uscate se poate realiza rehidratarea acestora:
soluie apoas de glicerin 3 minute
2 bi de alcool etilic 95%
etapele coloraiei Papanicolaou

Coloraiile fundamentale
coloraia Papanicolaou (1942)

Fixare n alcool etilic 95% - 15 min

Ap distilat 1 min
Hematoxilin Harris 6 min
Ap distilat 2 minute
Se scufund de 6 ori n soluie apoas
de acid clorhidric 0,25%
Ap curgtoare 6 minute
Limpezit n ap distilat (cteva
secunde)
Soluie alcol etilic de 50%, 70%, 80%
i 95% (cte 1 min)
Colorare cu OG6 1,5 min
Alcool 95% (2 bi a 0,5 min)
Colorare cu EA 1,5 min
Limpezire n alcool 95% (3 bi a cte 1
min)
Deshidratare cu alcool etilic 100% - 1
min
Amestec alcool-xilen (1:1) 1 min
Xilen 1 min
Montare balsam de Canada

Durata total :
45 min preparatele nefixate
30 min preparatele fixate

Coloraiile fundamentale
coloraia APT-Drgan (1968)
1.
2.
3.
4.
5.

Colorare cu soluia AP (albastru

policrom) 15 sec
Splare n dou bi de ap
distilat sau de robinet 15 sec
Difereniere n soluia T (tanin
1%) 15 sec
Splare n ap distilat sau de
robinet 15 sec
Montare balsam de Canada
Carte : Citodiagnostic cu metoda
de colorare rapida APT-Drgan;
Editura de Vest, 2004

Durata total : 60 sec

Imunocitochimia

Are un mare potenial de utilizare.

Cazuri selectate.
Imunocitochimia este util n 70% din
cazuri.

Lichid pleural: pentru diferenierea

celule mezoteliale vs tumori
metastatice (util n 82% din cazuri).
Carcinom urotelial vs carcinom
prostatic invadant n vezic/uretr.
n cazul FNA este util la 69% din
cazuri.
Fixarea optimal impune:
uscare preparatelor,
apoi plasarea n soluie de formol
salin 0,1% peste noapte la 27grade C
plasare n etanol 100% timp de 10
minute

Criterii de malignitate celular

Se bazeaz pe:
modificrile structurale ale celulelor
interrelaiile perturbate dintre celule

Diagnosticul histopatologic : se bazeaz n primul rnd pe

modificrile arhitecturale.
Diagnosticul citologic : se bazeaz pe modificri ale celulelor
individuale.
Aspectul morfologic al celulelor de pe preparatele citologice difer
semnificativ de cele evaluate pe preparatele histopatologice.
Din acest motiv sunt necesare criterii de diagnostic citologic
Criterii de malignitate:
generale
modificri structurale ale celulei (nucleu, citoplasm)
modificri ale interrelaiei cu alte celule (pentru grupuri de celule)
criterii indirecte

specifice

Criterii generale de malignitate

1- modificri

structurale celulare
- modificri nucleare -

Cretere disproporionat a
nucleului cu alterarea raportului
N/C

Hipercromazia

Elongat
Contur neregulat
Identaii profunde
Lobulaie

Creterea dimensiunii i a
numrului nucleolilor
Multinucleere
Activitate mitotic cu mitoze
atipice

modificri degenerative
supracolorare

Pattern cromatinian aberant:

Normal: celule endocervicale,

din pelvisul renal

Normal: eroziuni cervicale,

exudat

ngroarea membranei nucleare

Modificri degenerative:
vacuolizri anormale

Criterii generale de malignitate

1- modificri

structurale celulare
- modificri citoplasmatice -

Accentuarea bazofiliei sau

acidofiliei
acidofilia n special pentru
carcinomul scuamocelular
apare i n leziuni nontumorale

Incluziuni citoplasmatice:
pigment, leucocite, resturi
celulare
Melanina (melanom malign)
Incluziuni leucocitare
(adenocarcinoame)

Vacuolizri atipice n special

n adenocarcinoame
observate i n celule nonmaligne (normale sau
patologice) (ex: celule
endometriale)

Criterii generale de malignitate

1- modificri structurale celulare
- modificri generale celulare

Creterea dimensiunii celulare

peste limita normal acceptat
Hipertrofia celular se poate
ntlnii i n condiii normale
(ex: celule endocervicale,
pelvisul renal, celule
prostatice)

Aspecte aberante ale formei

celulare cu elogri i forme
bizare
celula fibr

Modificri necrotice i
degenerative

Criterii generale de malignitate

2- bazate pe interrelaii celulare

Iregulariti de pattern lipsa

uniformitii n ceea ce privete
orientarea celulei i a nucleilor
Anizokarioz i anizocitoz
Se refer la variaii ale
dimensiunilor nucleare i celulare
de acelai tip dintr-un grup celular
nu se refer la variaiile de
mrime ale celulelor individuale
de pe frotiu

Lipsa limitei celulare distincte

prezent i n celulele normale
(ex: celule endometriale)
fixarea improprie

Aglomerri de celule i nuclei

Normal n celulele endometriale

Canibalismul celular
Formare de pattern-uri particulare
Rozet (adenocarcinoame)

Criterii generale de malignitate

3- indirecte

Prezena sngelui cu eritrocite

degenerate
Absent n stadiile iniiale ale
proceselor maligne

Excesul de limfocite
(specimenele de sput i
lavajul bronhoalveolar)
n agregate largi

Numr crescut de histiocite

Adenocarcinomul
endometrioid
i n condiii normale

Clasificarea frotiurilor
(clasificarea Papanicolaou)
C I : - absena celulelor normale i atipice
C II : - citologie atipic dar fr evidena aspectelor de
malignitate
C III : - citologie sugestiv dar nu concluziv pentru
malignitate
C IV : - citologie puternic sugestiv pentru malignitate
C V : - citologie concluziv pentru malignitate

Clasificarea frotiurilor cervicovaginale

(clasificarea Bethesda)
Frotiu normal (corespunde C I)
ASCUS (celule atipice scuamoase fr semnificaie
cunoscut); AGUS (celule atipice glandulare fr
semnificaie cunoscut) (corespunde C II)
LGSIL (neoplazia intraepitelial de grad sczut)
(corespunde C III)
HGSIL (neoplazia intraepitelial de grad crescut)
(corespunde C IV)
Cancer (corespunde C V)