Sunteți pe pagina 1din 20

1.

APARATUL GENETIC AL
CELULEI

I. DATE TEORETICE
A. GENETICA - TIINA EREDITII I VARIABILITII
1. DEFINIII
a. EREDITATEA
Ereditatea reprezint capacitatea unui individ de a transmite la urmai caracterele
sale personale, precum i pe cele ale speciei creia i aparine. Deoarece copiii nu sunt
niciodat identici cu prinii lor, ereditatea este procesul prin care se realizeaz
similitudinea biologic ntre prini i descendeni. Prinii, ns, nu transmit la copii
caractere, ci informaiile necesare pentru realizarea lor. n acest context, ereditatea este un
proces informaional care presupune stocarea, transmiterea i expresia informaiei
ereditare pentru formarea caracterelor morfofuncionale specifice unui individ.
b. VARIABILITATEA
Variabilitatea cuprinde fenomenele care produc diferenele genetice dintre indivizii
unei populaii precum i dintre populaii diferite. Principalele surse de variabilitate
genetic sunt: mutaiile, recombinrile genetice i migraiile. Datorit acestor procese,
fiecare individ are o structur genetic unic.

2. ADN - SUBSTRATUL BIOCHIMIC AL EREDITII


Ereditatea este o funcie care are ca substrat molecular acidul deoxiribonucleic (ADN).
ADN-ul ndeplinete trei funcii majore, care reprezint esena ereditii (figura 1.1.):
ADN deine informaia genetic codificat pentru realizarea caracterelor specifice unui
organism. Unitatea de informaie ereditar este gena, un segment de ADN ce deine
informaia necesar pentru realizarea unui caracter ("o gen un caracter"). Alterarea

Aparatul genetic al celulei

Caten sens

accidental a structurii genei se numete mutaie; ea poate duce la modificarea


caracterului respectiv (caracter mutant).
ADN exprim informaia genetic, prin sinteza unor proteine specifice care determin
caracterele organismului ("o gen o protein") (figura 1.1. A). La realizarea acestor
caractere particip ns i factorii de mediu. Ansamblul de caractere manifeste i specifice
unui organism, determinate de ereditate i mediu, se numete fenotip.

Figura 1.1. Reprezentarea schematic a funciilor ADN

A. Gena este un segment de ADN care deine codificat, sub forma unei secvene de nucleotide, informaia
genetic pentru un caracter. Aceast informaie este copiat (pe baz de complementaritate) n ARNm i

Aparatul genetic al celulei

apoi decodificat (translat) sub forma unei secvene specifice de aminoacizi, constituind o protein care
st la baza unui anumit caracter fenotipic.
B. Transmiterea informaiei genetice prin biosinteza ADN-ului (replicare semiconservativ) i diviziunea
celulei.

ADN transmite informaia genetic n succesiunea generaiilor de celule sau organisme,


prin replicare (biosinteza, pe baza informaiei coninute de cele dou catene ale
moleculei de ADN iniial, a dou molecule noi de ADN identice) urmat apoi de
distribuirea egal a moleculelor de ADN n cursul diviziunii celulei (figura 1.1. B).
Genetica este tiina ereditii i variabilitii
Ereditatea este proprietatea unui individ de a transmite la urmai caracterele
sale personale, precum i cele de specie.
Variabilitatea cuprinde fenomenele care produc diferenele genetice dintre
indivizii unei populaii i dintre populaii diferite.
Substratul molecular al ereditii este ADN. ADN-ul conserv, exprim i
transmite informaia genetic

B. APARATUL GENETIC AL CELULEI


Structurile celulare care conin ADN (nucleul i mitocondriile) precum i cele care
intervin n realizarea funciilor sale (ribosomii i centriolii) alctuiesc aparatul genetic al
celulei (figura 1.2.).

Mb.c
R
RE
M
L
C
Mb.Nc
Nc
CR
CRT.X
CRM

membrana celular
ribosomi
reticul endoplasmatic
mitocondrii
lizozom
centriol
membran nuclear
nucleol
cromocentri
cromatina X
cromonem
Microscop electronic

Microscop optic

Figura 1.2. Schema morfologiei nucleului interfazic


a. NUCLEUL
Elementul principal al aparatului genetic este nucleul; el conine 99,5% din ADN
celular i este centrul de comand i control al tuturor activitilor celulare. n nucleu,
fiecare molecul de ADN se asociaz specific cu anumite proteine (histonice i

Aparatul genetic al celulei

nehistonice) i formeaz, prin spiralizri succesive, fibrele de cromatin. La nceputul


diviziunii fibrele de cromatin se condenseaz i formeaz cromosomii, substratul
morfologic al ereditii.
Numrul i forma cromosomilor sunt elemente caracteristice fiecrei specii. La om,
n celulele somatice sunt 46 cromosomi (2n = numr sau set diploid). Informaia genetic
coninut de genele din cei 46 de cromosomi este denumit genotip.
n celulele sexuale mature (ovulul i spermatozoidul) numrul de cromosomi este
redus, prin meioz, la 23 cromosomi (n = set haploid). Informaia genetic dintr-un set
haploid de cromosomi se numete genom 1. Cantitatea de ADN a genomului nucleului
haploid este denumit valoare C i este caracteristic i constant pentru fiecare specie.
Coninutul de ADN al celulelor diploide poate fi 2C sau 4C n funcie de stadiul ciclului
celular (vezi figura 1.3.). Anumite celule difereniate din organismul uman sunt tetraploide
(unele hepatocite, cardiomiocite) sau chiar poliploide (celulele musculare scheletice) n
timp ce altele sunt lipsite de nucleu i implicit i de cromosomi (hematii mature,
trombocite) ca fenomen adaptativ pentru o mai bun realizare a funciilor celulare
caracteristice.
b. MITOCONDRIILE
Mitocondriile conin 0,5 % din ADN-ul celular, responsabil de ereditatea
citoplasmatic. Informaia genetic din ADN mitocondrial se numete plasmotip i
provine exclusiv de la mam (zigotul motenete mitocondriile ovulului).
Structurile celulare care conin ADN (nucleul i mitocondriile) precum i
cele care particip la realizarea funciilor sale (ribosomii i centriolii)
alctuiesc aparatul genetic al celulei.
Elementul principal al aparatului genetic este nucleul, care conine 99,5%
din ADN i a crui morfologie depinde de fazele ciclului celular.
Cromosomii sunt substratul morfologic al ereditii.

C. CICLUL CELULAR
1. DEFINIIE. PERIOADE. DURAT
Ciclul celular reprezint succesiunea de evenimente biochimice i morfologice care se
produc n viaa unei celule, din momentul formrii i pn la sfritul diviziunii sale. Ciclul
celular are dou mari perioade: interfaza i diviziunea (figura 1.3.).
a. INTERFAZA
Interfaza reprezint perioada cuprins ntre dou diviziuni succesive, n care se
desfoar toate activitile specifice unei celule.
Evenimentul cel mai important al interfazei este sinteza de ADN (replicare, prin care
1

Termeneul de genom este adesea folosit pentru a descrie totalitatea informaiei genetice din
celula uman. El este alctuit dintr-un genom nuclear i un genom mitocondrial. Pentru a face o
distincie ntre genomul celulelor somatice i al gameilor se mai folosesc termenii de genom
diploid i genom haploid

Aparatul genetic al celulei

se dubleaz cantitatea de material genetic (4C). Ea se produce ntr-o perioad limitat a


interfazei, denumit faza S. Interfaza poate fi subdivizat n trei etape succesive: faza G 1
(presintetic), faza S (de sintez) i faza G 2 (postsintetic sau premitotic).
b. DIVIZIUNEA CELULAR
Diviziunea celular sau faza M ("mitotic") este alctuit dintr-o serie de procese
secveniale prin care materialul genetic (ADN) replicat n interfaz, se distribuie egal i
total (segregare cromatidian) formnd doi nuclei distinci, iar celula se mparte n dou
celule fiice (citokinez); acestea vor fi identice genetic cu celula din care au provenit
(figura 1.1.B). Prin replicarea ADN-ului i diviziune se asigur transmiterea fidel a
informaiei genetice n succesiunea generaiilor celulare.
c. DURATA CICLULUI CELULAR
Durata ciclului celular poate varia mult ntre diferite esuturi, datorit duratei fazei
G 1 , celelalte faze fiind relativ constante ca durat. Pentru o durat medie de 24 ore a
ciclului de via a celulelor eucariote superioare, duratele aproximative ale fazelor sunt: G 1
= 10 ore, S = 9 ore, G 2 = 4 ore, M = 1 or.

Aparatul genetic al celulei

4 catene de
ADN per
cromosom
46 cromosomi
condensai
bicromatidieni

4 catene de
ADN per
cromosom

2 catene de ADN per


cromosom
92 de cromosomi
monocromatidieni, ce vor fi
mprii la cele dou celule
fiice

46 cromosomi
despiralizai

Sintez de ADN

2 catene de
ADN per
cromosom

46 cromosomi
monocromatidieni

2C
Figura 1.3. Ciclul celular mitotic

(adaptat dup Strachan i Read, 1996)

2. FAZELE CICLULUI CELULAR MITOTIC


a. FAZA G1
n faza G 1 (engl. gap - interval) se produce o sintez intens de substane (ARN,
proteine) necesare creterii i funcionrii celulei (tabelul 1.1.).
Tabelul 1.1. Caracteristicile principale ale fazelor ciclului celular mitotic2
PERIOADA FAZA I
EVENIMENTE
CANTITATE ASPECT LA MICROSCOPUL
DURATA
ADN
ELECTRONIC
(ore)
Interfaz
G 1 10h Sintez intens de ARN i
2C
2n cromosomi monocromatidieni
2

Ciclul celular meiotic are o serie de particulariti (vezi capitolul 2)

Aparatul genetic al celulei

S 9h
G 2 4h

Diviziune

M 1h

proteine
Sintez de ADN i histone
Sinteza proteinelor fusului
de diviziune
Sinteza factorului de
declanare al mitozei
Profaz
Metafaz
Anafaz
Telofaz

4C
4C

2n cromosomi bicromatidieni
despiralizai

4C
4C
2C

2C

Cromosomi bicromatidieni
condensai (vizibili la
microscopul optic)
Cromosomi monocromatidieni

Fiecare cromosom (puternic despiralizat) este monocromatidian, fiind alctuit dintr-o


singur molecul de ADN. Cantitatea de material genetic este 2C molecule de ADN, sub
forma a 2n (46) cromosomi despiralizai (figura 1.3.).
n prima parte a fazei G 1 (G 1 A), celulele acumuleaz ARN i proteine pn la o
concentraie prag, numit punct de restricie "R", dup care trec n subfaza G 1 B, fiind
pregtite s intre n faza S (figura 1.4.). 3
n anumite condiii (lipsa factorilor de cretere, a aminoacizilor sau prezena unor
inhibitori ai sintezei proteinelor etc.) celulele aflate n subfaza G 1 A trec ntr-o faz de
activitate metabolic redus, numit faza G 0 sau G 1 Q (engl. "quiescent" - inert, linitit) n
care rmn viabile i pot supravieui timp ndelungat.
Dac condiiile restrictive dispar, celulele G 0 pot reveni n G 1 i apoi pot progresa
spre faza S, deoarece i pstreaz capacitatea de diviziune. Fazele G 1 i G 0 sunt dou stri
fiziologice distincte ale celulei.
Unele celule aflate n subfaza G 1 A prsesc definitiv ciclul celular i trec n faza
G 1 D, ce corespunde celulelor difereniate; ele nu se mai divid i mor dup un anumit timp.
b. FAZA S
Faza S (engl. "synthesis" - sintez) se caracterizeaz prin sinteza de ADN (realizat
prin replicare semiconservativ) i sinteza de histone; se produce astfel o dublare a
cantitii de material genetic (4C), condiie obligatorie pentru desfurarea diviziunii
celulare. Numrul de cromosomi rmne 46, dar fiecare cromosom va fi bicromatidian,
alctuit din dou cromatide identice ("surori") ce conin dou molecule identice de ADN.

Poziia punctului de oprire R este incert, fie aproape de faza S, fie la mijlocul fazei G1

Aparatul genetic al celulei

Figura 1.4. Fazele ciclului celular mitotic i evoluia celulelor rezultate prin diviziune
Replicarea ADN n faza S este asincron: unele segmente de ADN (bogate n
perechi de baze G-C) se replic precoce, la nceputul fazei S, iar alte segmente (bogate n
perechi de baze A-T) se replic tardiv, la sfritul fazei S. Informaii precise despre
sinteza/replicarea ADN pot fi obinute fie prin autoradiografie (cu ajutorul unui izotop
radioactiv, de regul timidin tritiat T3H) fie prin utilizarea bromodeoxiuridinei (BrdU),
un analog al timinei. Ele se vor ncorpora n molecula nou sintetizat, marcnd-o
radioactiv, n primul caz, sau modificndu-i configuraia, n al doilea caz.
c. FAZA G2
Faza G 2 se caracterizeaz prin sinteza unor proteine specifice i a unor mici cantiti
de ADN (necesar n procesul de "corectare" a erorilor de replicare). Fiecare cromosom
este bicromatidian (cantitatea de ADN este 4C) dar despiralizat. Spre sfritul fazei G 2 se
activeaz/ sintetizeaz "factorul de declanare al mitozei" (MPF) ce determin
condensarea filamentelor de cromatin n cromosomi i formarea fusului de diviziune. O
demonstraie elegant a existenei MPF este fenomenul de "condensare prematur a
cromosomilor", realizat prin fuziunea unei celule n diviziune (metafaz) cu o celul n
interfaz (figura 1.5.); se produce rapid o condensare precoce a filamentelor de cromatin
interfazic, care n mod obinuit, sunt puternic despiralizate i deci invizibile la
microscopul optic, iar membrana nuclear se dezasambleaz.
n lipsa factorului de condensare, celulele se opresc n faza G 2 i pot abandona ciclul
celular, formndu-se celule tetraploide (4n cromosomi); unele dintre ele devin prin
amitoz, celule binucleate (de exemplu, o parte din cardiomiocite adulte) (figura 1.4.).
d. FAZA M
Faza M corespunde mitozei i dureaz aproximativ 1 or. Ea ncepe cu diviziunea
nucleului (mitoz) i se termin cu diviziunea citoplasmei (citokinez). n aceast etap,
materialul genetic dublat n interfaz (4C molecule ADN - 46 cromosomi bicromatidieni)
segreg, adic se distribuie n mod egal i total celulelor "fiice" (2C molecule ADN - 46

Aparatul genetic al celulei

cromosomi monocromatidieni) care vor fi identice cu celula din care provin.


Procesul de "distribuie" (segregarea
cromatidelor surori) a materialului genetic
prin diviziune se desfoar, de obicei, cu
mare
precizie
asigurnd
fidelitatea
transmiterii
informaiei
genetice
n
succesiunea generaiilor de celule. El poate
suferi ns i erori, care vor genera anomalii
cromosomice (vezi capitolul 2).

3. EVOLUIA CELULELOR
REZULTATE PRIN
DIVIZIUNE
Celulele rezultate dup diviziune pot
evolua n trei direcii: proliferare,
difereniere i trecerea n stadiul de repaus.
a. PROLIFERAREA
Celulele parcurg un nou ciclu celular
i se divid repetat; aceste "celule ciclice"
alctuiesc compartimentul proliferativ al
organismului i se gsesc n esuturile
Figura 1.5. Fenomenul de condensare
embrionare, mduva hematogen, stratul
prematur a cromosomilor
bazal al epidermului .a.
b. DIFERENIEREA
Celulele prsesc definitiv ciclul celular i se transform n celule specializate, cu
anumite structuri i funcii, care nu se mai divid i mor dup un timp determinat. De
exemplu: neuronii, celulele musculare, granulocitele, hematiile mature etc.
c. STADIUL DE REPAUS
Unele celule (de ex.: celulele "stem", limfocitele .a.) prsesc ciclul celular n faza
G 1 i rmn n faza G 0 , avnd o activitate metabolic minim, dar pstrndu-i capacitatea
de diviziune. Aceste celule formeaz compartimentul neproliferativ. n condiii speciale,
ele reacioneaz la anumii stimuli din mediu (factori de cretere, unii hormoni, substane
mitogene etc.) i pot reintra n ciclul de diviziune.
Un exemplu edificator l reprezint activarea limfocitelor T din sngele periferic sub
aciunea fitohemaglutininei (PHA); ele se transform n limfoblaste, celule tinere, care se
divid intens. Acest fenomen este utilizat pentru studiul cromosomilor prin culturi de
limfocite (vezi capitolul 3).

4. CONTROLUL CICLULUI CELULAR


Progresia ordonat i desfurarea normal a ciclului celular sunt realizate prin
reacii biochimice n care multiple kinaze dependente de cicline (CDK)(1-7) sunt

Aparatul genetic al celulei

10

activate, prin fixarea unor proteine numite cicline (A-H). Dup activare, fiecare complex
proteic CDK-ciclin fosforileaz anumite proteine sepecifice, necesare pentru reaciile
care au loc ntr-o anumit faz a ciclului. Apoi, complexul CDK-ciclin poate fi inactivat,
fie prin degradarea proteolitic a ciclinei (de ctre ubiquitin) fie prin intervenia unor
molecule inhibitoare CKI (p27, p21 .a) .
Interaciunea dintre activarea i inactivarea activitilor CDK, n diferite momente
cheie, asigur progresia normal i reglarea ciclului celular. Fiecare faz a ciclului are un
control specific (fig. 1.6) realizat n G 1 de complexul CDK4-ciclina D, la tranziia G1/S de
complexul CDK2-ciclin E, n faza S de complexul CDK2-ciclin A, iar n fazele G2 i M
de complexul CDC2-ciclin B.
Mitogeni, factori nutriionali, factori de cretere
P
CAK (ciclin H/CDK7)

Ciclin D
CDK4/
6

Mitoz
4C/2

p15, p16, p18, p19


P

Ciclin B
CDC

MPF

G2
4C

p21, p27, p57

Rb

E2F

G1
2C

G0
2C

CDK2
Ciclin A

Faza S
2C

4C

p21, p27, p57

Ciclin A

Ciclin E
CDK2

p21, p27, p57

puncte de restricie sau de control

CDK2

Figura 1.6. Reprezentare schematic a reglrii fazelor ciclului celular prin


intermediul complexelor CDK-ciclin
(adaptat dup Jameson et al., 1998)

Tranziia de la o faz la alta a ciclului celular este controlat prin mecanisme specifice, care
acioneaz n anumite puncte de control i verific dac anumite procese sunt terminate naintea
nceperii altora sau dac nu exist alterri ale componentelor mainriilor de replicare i
segregare cromatidian; n cazul identificrii unor defecte se blocheaz progresia n ciclul celular
(prin inactivarea CDK) i se induce repararea sau, dac aceasta nu este posibil, apoptoza
(moartea celular programat).
Pe parcursul ciclului celular se produc urmtoarele evenimente corelate cu reglarea

Aparatul genetic al celulei

11

ciclului:

Celulele aflate n faza de start G1 reacioneaz la stimuli externi (mitogeni, factori de cretere)
formndu-se complexul CDK4-ciclin D, care fosforileaz i deci activeaz diferite proteine ce
funcioneaz n aceast faz. Printre acestea, un rol important l are proteina Rb, care (dup
fosforilare) elibereaz un factor activator (E2F) al transcripiei genelor ce funcioneaz n faza S i
realizeaz replicarea ADN.
Intrarea n faza S este determinat de un semnal activator, complexul CDK2-ciclin E. Formarea
acestui complex este ns blocat de inhibitorul p27 al CDK; trecerea n faza S implic mai nti
degradarea p27 (de ctre ubiquitin)
n punctul de control G1/S are loc o verificare a parametrilor de evoluie normal a celulei: orice
alterare a ADN, depleie de oxigen / metabolii / energie sau pertrurbare fiziologic declaneaz
sinteza proteinei p53 (gardianul genomului uman) care activeaz transcripia genei ce codific
proteina p21, un inhibitor al complexelor CDK-ciclin. Celulele sunt oprite n G1, oferindu-li-se timp
de corecie; dac alterrile (n special cele din structura ADN) nu sunt reparate, celula va fi
direcionat spre apoptoz
Progresia ulterioar prin faza S i replicarea ADN sunt reglate de ctre CDK2-ciclina A.
n faza G2, la punctul de control G2/M, se decide dac celula intr n mitoz; acest lucru este
determinat de activarea brusc a complexului CDC2-ciclin B (numit anterior i factorul MPF, de la
Mitosis Promoting Factor). Celulele cu aberaii cromosomice sau defecte ale aparatului mitotic sunt
oprite s intre n mitoz (prin aciunea p53 p21, care blocheaz formarea complexului CDC2-ciclina
B)).
n cursul mitozei, n metafaz, mai exist un punct de control M n care diviziunea se oprete i este
verificat alinierea perfect a cromosomilor, naintea separrii cromatidelor surori. Aciunea este
realizat de ctre o protein inhibitoare ISS; degradarea proteolitic a acestei proteine (determinat de
ubiquitin) declaneaz anafaza prin separarea cromatidelor.
La sfritul mitozei are loc degradarea brusc a ciclinei B (produs de ctre ubiquitin) i inactivarea
CDC2, fenomene ce permit celulei s treac ntr-o nou faz G1.

Proliferarea celular este reglat pe o durat limitat de factori extracelulari (hormoni,


factori de cretere etc.) precum i de anumite gene de proliferare sau "mitogene" (ce codific
cicline, receptori ai factorilor de cretere, proteine necesare sintezei de ADN, etc.). Deoarece
prin mutaia i activarea lor anormal se produce o proliferare celular anormal i cancer,
aceste gene normale mai sunt numite i proto-oncogene. O alt categorie de gene, numite
antiproliferative, au rolul de a inhiba proliferarea celular. De aceea aceste gene mai sunt
numite gene supresoare de tumori sau antioncogene.
n cancer se produce o perturbare a desfurrii normale a ciclului celular. Celulele
canceroase, purttoare de mutaii, "scap" de controlul mecanismelor care regleaz proliferarea
normal, parcurg rapid i repetat ciclul celular, multiplicndu-se permanent i anarhic. Multe
medicamente anticanceroase (citostatice) determin "blocarea" proliferrii celulelor, prin
oprirea evoluiei lor n diferite faze ale ciclului celular.
Ciclul celular reprezint o succesiune de evenimente biochimice i
morfologice care se produc n viaa unei celule. El prezint dou perioade:
interfaza i diviziunea.
Interfaza, perioada cuprins ntre dou diviziuni, este alctuit din trei faze
succesive: G 1 , S, G 2 ; n faza S, se produce sinteza de ADN, prin replicare
semiconservativ, iar cantitatea de material genetic se dubleaz (4C).

12

Aparatul genetic al celulei

Prin diviziune (faza M) coninutul nuclear dublat n interfaz se distribuie


egal i total celulelor fiice. Prin aceasta se asigur transmiterea fidel a
informaiei genetice n succesiunea generaiilor celulare.
Celulele rezultate dup diviziune pot evolua n trei direcii: proliferarea
(printr-o nou diviziune) diferenierea (specializarea celulelor), trecerea n
stadiul de repaus G 0 (celule cu activitate metabolic redus).
Ciclul celular este reglat prin intervenia genelor proliferative (protooncogene) i a genelor antiproliferative (gene supresoare de tumori) a cror
mutaie produce cancer.

D. NUCLEUL
Elementul principal al aparatului genetic este nucleul, centrul de comand i control
al tuturor activitilor celulelor eucariote.
n nucleu, fiecare molecul de ADN se asociaz specific cu anumite proteine
(histonice sau nehistonice) i constituie un complex supramolecular deoxiribonucleoproteic. El formeaz prin spiralizri succesive fibre de cromatin (cromoneme)
din care, printr-o condensare progresiv, se formeaz la nceputul diviziunii cromatida
unui cromosom (figura 1.7.).
Fiecare cromatid a unui cromosom bicromatidian este alctuit dintr-o singur
molecul de ADN. La sfritul diviziunii se produce fenomenul invers, de despiralizare a
cromosomilor.
Cromosomii sunt structuri permanente ale nucleului, dar ei sunt vizibili la
microscopul optic numai n diviziune. n interfaz cromosomii sunt despiralizai i nu se
observ la microscopul optic.

1. NUCLEUL INTERFAZIC
Nucleul interfazic este alctuit din membrana nuclear, nucleoplasm, cromatin i
nucleol(i) (figura 1.2.). Constituentul cel mai important este cromatina, forma interfazic
a materialului genetic.
a. COMPOZIIA CHIMIC A CROMATINEI
Cromatina este alctuit din ADN, proteine histonice, ARN, ioni bivaleni etc. Dintre
acizii nucleici predomin ADN, care se evideniaz histochimic prin reacia Feulgen
(ADN se coloreaz n rou-violet) sau coloraia cu verde de metil pironin (ADN se
coloreaz n verde, iar ARN din nucleol i citoplasm, n rou crmiziu).
b. ASPECTUL CROMATINEI LA MICROSCOPUL OPTIC
La microscopul optic cromatina se observ sub forma unor granule mici, fine, slab
colorate, printre care se gsesc corpusculi mari, condensai i intens colorai bazofil,
numii cromocentri; ei reprezint pri din cromosomi care nu s-au despiralizat n
interfaz.
Cromatina se prezint sub dou forme sau stri morfo-funcionale: eucromatin i
heterocromatin, difereniate prin gradul de condensare, intensitatea coloraiei, momentul
replicrii, compoziia chimic i activitatea genetic (tabelul 1.2).

Aparatul genetic al celulei

Cromatide surori

80 Mb de
ADN

13

80 Mb de
ADN

Dublu helix
Centromer
2 nm
600 nm

600 600
nm nm

Nucleosomi
10 nm
Zon internucleosomal

300 nm
Fibre de cromatin pliate n bucle
laterale (75 kb)

30 nm
Fibr de cromatin

10 nm
Filament cu nucleosomi

Figura 1.7. Relaia ADN - fibre de cromatin - cromosomi


(dup Strachan i Read, 1996)

Tabelul 1.2 Caracteristicile eucromatinei i heterocromatinei


CARACTERISTICI
Condensare
Colorare
Replicare n faza S
Activitate genetic
Compoziie chimic

EUCROMATIN
Fin dispersat
Slab
Precoce
Activ
Predomin p.b. C-G i
ADN nerepetitiv

HETEROCROMATIN
Puternic condensat (cromocentri)
Intens
Tardiv
Inactiv
Predomin p.b. A-T i
ADN repetitiv

Heterocromatina poate fi de dou feluri:


heterocromatin constitutiv, prezent n toate celulele n poziii identice la ambii
cromosomi omologi, fie la centromer, fie n diferite segmente cromosomice;
heterocromatin facultativ, este prezent fie numai n anumite celule sau esuturi, fie
numai la un anumit sex (de exemplu cromatina sexual X la femei i cromatina sexual
Y la brbai - vezi capitolul 3).
c. ASPECTUL CROMATINEI LA MICROSCOPUL ELECTRONIC
La microscopul electronic cromatina apare ca o aglomerare de filamente de grosimi

14

Aparatul genetic al celulei

diferite, spiralizate i condensate neregulat 4. Filamentele cele mai groase, din care la
nceputul diviziunii se formeaz cromosomii, se mai numesc cromoneme (figura 1.7.).

2. NUCLEUL N DIVIZIUNE
Nucleul n diviziune i pierde aspectul caracteristic interfazei. Materialul
cromatinian se prezint sub form de cromosomi. Ei rezult printr-o accentuare a
spiralizrii cromonemelor, care se condenseaz, se scurteaz i se "acoper" cu un nveli
proteic, devenind vizibili la microscopul optic (figura 1.7.).
a. NUMRUL CROMOSOMILOR
Numrul i morfologia cromosomilor sunt elemente caracteristice fiecrei specii. La
om n celulele somatice sunt 46 de cromosomi (2n = numr diploid). Celulele sexuale
mature (gameii) au 23 de cromosomi (n = numr haploid); dup fecundarea gameilor, la
zigot se reface numrul diploid de 46 cromosomi.
b. CROMOSOMII OMOLOGI
n celulele somatice cromosomii se gsesc n perechi de omologi, identici ca mrime i
form, dar diferii ca origine (unul matern, altul patern). Din cele 23 de perechi de cromosomi,
22 sunt identice la cele dou sexe i se numesc autosomi, iar o pereche difer la cele dou
sexe, XX la femeie i XY la brbat, numindu-se gonosomi (heterosomi sau cromosomi
sexuali). Cromosomii X i Y, dei sunt "omologi" ca funcie (n determinismul sexual) se
prezint morfologic diferit: cromosomul Y este mult mai mic dect cromosomul X.

C. MORFOLOGIA CROMOSOMILOR
Morfologia cromosomilor poate fi uor analizat n metafaz. n aceast faz
cromosomii ajung la condensarea maxim, sunt bine individualizai i se gsesc n acelai
plan, n placa ecuatorial.
Cromosomul metafazic (figura 1.8.) este alctuit din dou cromatide paralele, identice
ca mrime i form (cromatide surori"), unite ntr-o regiune, mai slab colorat, numit
centromer. El conine dou structuri specializate numite kinetocori, prin care cromosomul
se fixeaz pe filamentele fusului de diviziune (vezi figura 2.2.A).
n zona centromerului se realizeaz o ngustare pe traiectul cromosomului numit
constricie primar. Centromerul mparte cromatidele n dou brae, egale sau inegale,
notate convenional cu "p" - braul scurt - i "q" - braul lung.
Poziia centromerului (figura 1.8.) poate fi:
median, la cromosomii metacentrici (M);
submedian, la cromosomii submetacentrici (SM);
aproape terminal, la cromosomii acrocentrici (A).
Pe unii cromosomi se observ i constricii secundare, produse prin ngustarea
cromatidelor; ele conin heterocromatin. Prile terminale ale cromatidelor sunt denumite
telomere. Cromosomii acrocentrici prezint constricii secundare aproape de extremitatea
braelor scurte; ele determin separarea unor mici mase de heterocromatin, cunoscute sub
numele de satelii.
4

Relaia ADN fibre cromatin cromosomi va fi discutat la curs

Aparatul genetic al celulei

15

Cromatide surori
Telomer

Satelii
Centromer

Metacentric Submetacentric Acrocentric


Figura 1.8. Morfologia diferitelor tipuri de cromosomi
Clasificarea cromosomilor dup poziia centromerului
(dup Thompson, 1991)

n nucleul interfazic materialul genetic se gsete sub form de cromatin,


alctuit din ADN, proteine i ARN. La microscopul optic cromatina se
prezint sub dou forme: eucromatin (activ genetic) i heterocromatin
(inactiv genetic).
La microscopul electronic cromatina apare format din fibre de ADN i
proteine.
La nceputul diviziunii fibrele de cromatin se condenseaz,
transformndu-se n cromosomi. n celulele somatice se gsesc 46 de
cromosomi (2n = numr diploid). Celulele sexuale mature (gamei) au 23 de
cromosomi (n= numr haploid).
Dup fecundarea gameilor, la zigot se reface numrul 2N = 46 de
cromosomi. De aceea, n celulele somatice, cromosomii se gsesc n perechi
de cromosomi omologi, identici ca mrime, form i coninut genetic, dar
diferii ca origine (unul matern i altul patern).
Din cele 23 de perechi de cromosomi omologi, 22 sunt identice la cele
dou sexe i se numesc autosomi; o pereche este diferit: XX la femeie i XY
la brbat, numindu-se cromosomi sexuali sau gonosomi.
Cromosomul metafazic este alctuit din dou cromatide, unite prin
centromer; acesta mparte cromatidele n brae scurte (notate cu "p") i lungi
(notate cu "q").

II. APLICAII PRACTICE


1. ASPECTUL CELULELOR PE PARCURSUL CICLULUI CELULAR
Analizai (la microscop sau pe fotografii) preparate obinute din culturi de limfocite i
stabilii n ce faze ale ciclului celular se gsesc diferite celule din seria limfocitar.

Aparatul genetic al celulei

16

Precizai criteriile pe care se bazeaz opiunile Dv.

2. SCHIMBURILE DINTRE CROMATIDELE SURORI


Uneori, n faza S a ciclului celular mitotic se produce un "schimb egal de material
genetic ntre cromatidele surori" (SCE - engl. sister chromatides exchanges) care poate
fi evideniat prin tehnici speciale aplicate n metafaz. Acest fenomen este important din
punct de vedere practic, deoarece frecvena schimburilor (normal 7-10 per metafaz)
crete n anumite boli, precum i dup expunerea organismului la substane mutagene.
Astfel SCE reprezint o metod de evaluare a aciunii mutagene a diferiilor ageni din
mediul ambiant.
a. PRINCIPIUL METODEI SCE
Celulele n cultur efectueaz dou cicluri de replicare n prezena unui analog al
timinei, numit 5-bromodeoxiuridin (BrdU). BrdU se ncorporeaz, n locul timinei, n
moleculele de ADN nou sintetizat, modificnd proprietile de colorare ale cromatidelor.
Folosind soluia Giemsa sau colorantul fluorescent Hoechst 33258 se coloreaz cromatida
n care numai o caten a ncorporat BrdU (figura 1.9.). n zonele n care se produce SCE
se observ aspectul particular ("arlechin") al cromatidelor, cu zone colorate alternnd cu
zone necolorate.

Figura 1.9. Principiul metodei BrdU


Sgeile indic cromosomii la nivelul crora exist schimburi ntre cromatidele surori
(dup Emerys, 1998)

b. IDENTIFICAREA SCE
Identificai pe fotografii i/sau preparate cromosomice "schimburile ntre cromatidele
surori"; calculai numrul de schimburi per metafaz i evaluai dac rezultatul obinut
este normal sau nu.

Aparatul genetic al celulei

17

3. METODE DE EVALUARE A REPLICRII ASINCRONE A ADN


Replicarea ADN n faza S este asincron. Fenomenul poate fi studiat fie prin
autoradiografie, cu ajutorul unui izotop radioactiv, fie cu ajutorul bromodeoxiuridinei,
ambele substane ncorporndu-se n moleculele de ADN nou sintetizate.
a. PRINCIPIUL METODEI AUTORADIOGRAFICE
n cazul autoradiografiei, n cultura de celule se adaug timidin tritiat (3HT) care va
fi ncorporat numai n celulele/cromosomii care sintetizeaz activ ADN. Ulterior,
celulele sunt fixate i se realizeaz preparate pentru analiza cromosomic. Preparatele se
acoper cu o emulsie fotografic i sunt pstrate cteva sptmni la ntuneric. 3HT,
ncorporat n celule, emite radiaii care acioneaz asupra granulelor de argint (AgBr) din
emulsie. Dup developarea lamelor i colorarea cromosomilor aceste granule negre de
argint metalic sunt vzute numai pe cromosomii sau segmentele de cromosomi care au
ncorporat 3HT n timpul sintezei ADN.
Variind timpul de expunere la 3HT al celulelor n cultur se poate stabili momentul
replicrii diferiilor cromosomi sau segmente.
b. IDENTIFICAREA REPLICRII TARDIVE
Pe metafaze cu cromosomi umani n care s-a ncorporat 3HT la sfritul fazei S,
identificai cromosomii care se replic tardiv.
Observai pe fotografii de metafaze cu cromosomi umani aspectul cromatidelor n
care s-a ncorporat BrdU n cursul replicrii ADN, innd cont de faptul c se coloreaz
numai cromatidele n care numai o caten a ADN a ncorporat BrdU.

4. CONDENSAREA PREMATUR A CROMOSOMILOR


Analizai n figura 1.5. modul de producere al fenomenului de "condensare
prematur" a cromosomilor i apoi studiai pe fotografii aspectul cromosomilor obinui
prin "condensare prematur" dup hibridarea unor celule interfazice de obolan cu celule
umane HeLa n diviziune. Dup aspectul cromosomilor, stabilii fazele ciclului celular n
care se gsesc celulele interfazice.

5. COMPOZIIA CHIMIC A CROMATINEI


Observai la microscop sau pe fotografii preparate celulare colorate prin reacia
Feulgen i reacia cu verde de metil pironin. Precizai diferenele observate i explicai-le
innd cont de specificitatea acestor reacii.

6. ASPECTUL CROMATINEI LA MICROSCOPUL OPTIC


Examinai la microscop i pe fotografii aspectul nucleului interfazic la diferite tipuri
de celule. Precizai tipurile de cromatin care se observ i caracterizai-le morfologic.

7. MORFOLOGIA CROMOSOMILOR
Analizai la microscop i pe fotografii morfologia cromosomilor umani n metafaze
obinute prin culturi de limfocite.
Desenai o metafaz i identificai elementele principale descrise n morfologia

Aparatul genetic al celulei

18

cromosomilor, precum i diferitele tipuri de cromosomi dup poziia centromerului.

III. VERIFICAREA CUNOTINELOR


A. DEFINII NOIUNILE URMTOARE:
- EREDITATE
- GENOTIP
- GENOM
- PLASMOTIP
- FENOTIP
- CICLU CELULAR

- INTERFAZA
- FAZA G 1
- FAZA S
- FAZA G 2
- FAZA G 0
- DIVIZIUNE

- CROMATIN
- EUCROMATIN
- HETEROCROMATIN
- CROMOSOMI
- CROMATID
- CENTROMER

B. NTREBRI CU RSPUNS SIMPLU


1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.

Prinii transmit la descendeni caracterele lor (adevrat/fals?)


De ce un individ are o structur genetic unic, specific?
Nucleul, mitocondriile, centriolii i ribosomii alctuiesc aparatul genetic deoarece
conin ADN (adevrat/fals?)
Genotipul este informaia genetic a celulei somatice. (adevrat/fals?)
Genomul constituie ansamblul genelor din cromosomii gameilor. (adevrat/fals?)
Contribuia matern la ereditatea copilului este reprezentat de genomul ovulului
(adevrat/fals?)
Ce eveniment major are loc n faza S a ciclului celular?
Celulele din faza G 0 se pot divide (adevrat/fals?)
Cancerul poate fi considerat o boal produs prin perturbarea mecanismelor de
control ale ciclului celular (adevrat/fals?)
n eucromatin se gsete ADN inactiv genetic. (adevrat/fals?)
Ci cromosomi se gsesc n nucleul celulelor somatice? Ci provin de la mam?
Cte cromatide se observ la cromosomii metafazici?
Gonosomii sunt cromosomii celulelor sexuale. (adevrat/fals?)
Toi cromosomii au o constricie primar. (adevrat/fals?)

C. TESTE CU ALEGERE MULTIPL


I. La urmtoarele ntrebri rspundei alegnd un singur rspuns, cel mai bun din cele
enunate ("complement simplu"):
1. Care din urmtoarele organite celulare NU face parte din aparatul genetic al celulei:
A. Nucleul;
C. Mitocondriile;
E. Ribosomii.
B. Centriolii;
D. Lizozomii;
2. Care este cea mai scurt faz a ciclului celular:
A. Faza G 1 ;
C. Faza S;
B. Faza G 0 ;
D. Faza G 2

E. Faza M.

Aparatul genetic al celulei

19

3. Cromocentrii reprezint:
A. Corpusculi de cromatin cu replicare precoce a ADN;
B. Poriuni de cromatin mai condensat i mai intens colorat;
C. Zona cu care cromosomul se fixeaz pe filamentele fusului de diviziune;
D. Organitele care formeaz fusul de diviziune;
E. Zonele terminale ale cromosomilor.
II. La urmtoarele ntrebri rspundei astfel ("complement grupat"):
A - dac sunt corecte rspunsurile 1,2,3;
B - dac sunt corecte rspunsurile 1,3;
C - dac sunt corecte rspunsurile 2,4;
D - dac este corect rspunsul 4;
E - dac sunt corecte rspunsurile 1,2,3,4.
4. Care din urmtoarele organite celulare conin ADN:
1. Nucleul;
3. Mitocondriile;
2. Centriolii;
4. Ribosomii.
5. n ce faze ale ciclului celular o celul somatic uman normal are 92 de molecule de
ADN:
1. Sfritul fazei S i faza G 2 ;
3. Profaza i metafaza;
2. Fazele S i anafaz;
4. Fazele G 2 i G 1 .
6. Heterocromatina facultativ este:
1. Prezent numai n anumite celule;
2. Prezent numai la sexul feminin;
3. Inactiv genetic;
4. Constituit din ARN i proteine.
7. Care din urmtoarele afirmaii privind centromerul sunt corecte:
1. Formeaz constricia secundar;
2. mparte cromosomul n dou brae;
3. Separ sateliii de telomer;
4. Poziia sa clasific cromosomii n trei categorii.
III. La urmtoarele ntrebri rspundei astfel ("teste tip cauz-efect"):
A - dac ambele propoziii sunt adevrate i ntre ele exist relaie cauz-efect;
B - dac ambele propoziii sunt adevrate, dar ntre ele nu exist relaie cauz-efect;
C - dac prima propoziie este adevrat, iar a doua fals;
D - dac prima propoziie este fals, iar a doua este adevrat;
E - dac ambele propoziii sunt false.
8. ADN este substratul material al ereditii deoarece conine informaia genetic
codificat.
9. n faza G 2 cromosomii sunt bicromatidieni, deoarece a aprut factorul de condensare al
cromosomilor.

20

Aparatul genetic al celulei

10. Cromosomii submetacentrici au satelii deoarece, centromerul realizeaz o constricie


aproape de extremitatea braelor scurte.
IV. Asociai enunurilor din coloana din stnga, notate cu cifre, enunurile
corespunztoare din coloana din dreapta, notate cu litere:
Asociai structurile celulare din coloana din stnga cu definiiile sau caracteristicile
(funciile) care le corespund, din coloana din dreapta:
11. Nucleul
A. Formeaz fusul de diviziune
12. Mitocondriile
B. Aspectul materialului genetic n interfaz
13. Ribosomii
C. Elementul principal al aparatului genetic
14. Cromatina
D. Particip la sinteza proteinelor
15. Centriolii
E. Conin 0,5 % din ADN-ul celulei