Citogenetica= ramura a geneticii care

se ocupa cu studiul structurii si

morfologiei cromozomilor

Cromozomii = organite nucleare ce

fixeaza intens coloranti bazici si
stocheaza materialul genetic
Denumirea vine de la grecescu croma
culoare si soma corp deci corp colorat
Toate eucariotele poseda cromozomi

1.Cromatida
2.Centromer
3.Brat scurt
(p)
4.Brat lung
(q)

1. Se poate vedea ca
in benzile G numarul
de gene e mai scazut
ca in interbenzi
2. In regiunea
centromerului lipsesc
gene exprimate

Metacentric centromer median (raportul

bratelor este egal : q/p=1,0-1,7)

Submetacentric centromerul este plasat

catre unul din capete (raportul bratelor=1,73,0)

Subtelocentric centromerul este situate in

regiunea subterminala (raportul bratelor =
3,0-7,0)

Acrocentric centromerul este plasat

aproape terminal (raportul bratelor= 7,0infinit)

Telocentric centromerul este situat terminal

(fara brat scurt)

Bandare GTG

Culturi celulare
Blocarea in metafaza cu substante ce inhiba fusul
de diviziune(colchicina, colcemid)
Solutia salina hipotona (KCl 0,075M) pentru
spargerea celulelor
Fixarea celulelor, etalarea pe lama microscopica
Bandarea si colorarea cromozomilor
Examenul microscopic al preparatului : scanarea,
identificarea si sortarea pe baza unui soft
specializat a cromozomilor pe baza dimensiunilor,
morfologiei si aspectului bandarii

cromozomii obtinuti dupa scoaterea din

cultura sunt uniform colorati si au putine
repere pentru identificarea lor
bandarea cromozomilor (G,Q,R) se obtin
cromozomi cu o structura specifica de
benzi alternative intens colorate si putin
colorate ( aceste tehnici permit
identificarea precisa a fiecarui cromozom)
tehnici de citogenetica moleculara - FISH

Cariotip aranjarea sistematizata a cromozomilor unei

celule
ISCN (International System for Human Cytogenetics Nomenclature) a stabilit o
serie de abrevieri
Formula de baza are 3 itemi separati de virgula:
primul precizeaza nr de cromozomi (46);
al doilea constitutia cromozomilor sexuali (XX, XY);
al treilea anomaliile de nr si structura ale autozomilor ;
Ex: 46,XX,t(9;22),+8

In urma tehnicilor de bandare fiecare brat cromozomial

poate fi divizat in mai multe regiuni, iar o regiune in benzi
si subbenzi.
Ex : 1q21.1 cromozom 1, brat lung, regiunea 2, banda 1, subbanda 1.

Citogenetica moleculara
Principiu: hibridizare prin
complementaritate a unei sonde ADN cu o
anumita regiune a unui cromozom
Pentru a fi evidentiate dupa hibridizare,
sondele sunt marcate cu un
fluorocrom(vizibil la microscopul cu modul
de fluorescenta)

Sonde centromerice
Sonde telomerice
Sonde locus specifice
Whole chromosome paints
M-FISH si SKY

Sonda centromerica cromozom 3

Sonde subtelomerice pe cromzom 1

Whole chromosome
paint cromozom 1

Whole arm paint

cromozom 1

Celulele somatice normale sunt diploide

(n=46)
Celulele sexuale normale sunt haploide
(n=23)
Euploidie = constitutie cromozomiala cu
multiplu exact al lui n ; de ex. n, 2n, 3n, 4n,
etc
Poliploidiile
Aneuploidiile

Poliploidiile = prezenta in plus a unuia sau

mai multor seturi haploide de cromozomi
( 3n =69 triploidie; 4n=92 tetraploidie). Cauza
dispermia (fecundarea unui ovul de doi
spermatozoizi); rar, fertilizarea unui gamet
normal (n) de un gamet diploid (2n):
spermatozoid (diandrie), ovul (diginie);
produc modificari majore ale fenotipului, cu
efect letal

Monosomii = prezenta in celula somatica a

unui singur cromozom, in locul unei perechi de
cromozomi(2n-1); singura monosomie
compatibila cu viata monosomia X
Trisomii = prezenta in celula somatica a 3
exemplare ale aceluiasi cromozom (2n+1)in locul
perechii normale ( majoritatea trisomiilor complete sunt
incompatibile cu viata exceptie trisomia 21,18 si 13
numai in mozaic)
In cazul anomaliilor gonosomale sunt posibile
tetrasomii/pentasomii

Monosomie de cromozom X, caritip 45, X0

Exista 2 tipuri de anomalii cromozomiale importante in

cancer:
1. Rearanjamente cromozomiale echilibrate
(translocatiile si inversiile) si translocatii neechilibrate
2. Castigarea sau pierderea unui cromozom
(aneuploidie), sau a unei parti din cromozom
( aneuploidie segmentala)
Aceste 2 tipuri de anomalii cauzeaza fie activarea unor
oncogene, fie deletia unor gene supresor tumoral, fie
formarea unor gene hibride
Clona= 2 celule prezinta aceleasi anomalii structurale sau
aditia aceluiasi cromozom si 3 celule care prezinta
pierderea aceluiasi cromozom

Oncogenele = variante mutante ale unei clase

de gene normale numite protooncogene.
Activarea acestor gene duce la proliferare celulara
sau confera protectie fata de mecanismele de
supresie tumorala
Genele supresoare a cresterii tumorale =
gene ce blocheza dezvoltarea neoplaziilor
maligne prin reglarea cresterii si proliferarii
celulare. Mutatii cu pierderea functiei acestor
gene conduc la proliferare si crestere celulara
necontrolata si la apoptoza ineficienta

A.Cromozomul Philadelphia (Ph) t(9;22)

B.Translocatii si inversii comune
C.Deletii, castigarea sau pierderea unui
cromozom
D.Anomalii cromozomiale mai putin comune

Criteriu de diagnostic pentru LMC

Rearanjament t(9;22) (q34;q11.2) implicand Breakpoint Cluster
region (BCR) (22q11) si Abelson kinase (ABL) (9q23) prezent
in 90-95% din cazurile de LMC la diagnostic
5-10% din cazurile de LMC pot sa nu aiba rearanjamentul
clasic ci un rearanjament complex in care sunt implicati cei 2
cromozomi 9,22 sau o translocatie criptica (identificabila prin
FISH)
Aceasta translocatie creeaza gena de fuziune BCR-ABL
producand 3 proteine diferite functie de situl de rupere al genei
BCR (p190(LAL),p210(LMC) si p230 - exista mai multe
variante acestea fiind celel mai frecvente)

Citogenetica joaca un rol important in monitorizarea

pacientilor cu LMC
Raspunsul citogenetic (CyR) putand fi complet,
major,minor si minimal
Raspunsul complet absenta cromozomului
Philadelphia iar major prezenta lui in procent de 35.
Pe langa faptul ca stabileste diagnosticul (prezenta
cromozomului Philadelphia) citogenetica poate prezice
trecerea din faza cronica in faza accelerata sau criza
blastica
Cele mai comune modificari care pot anunta criza
blastica sunt aparitia trisomiei 8 si izocromozomul 17

Anomaliile cromozomiale primare sunt

reprezentate de translocatia echilibrata
intre doi cromozomi diferiti sau inversie:
t(8;21), t(15;17) and inv(16)
Anomalii neechilibrate: deletia, pierderea
sau castigarea unui cromozom
reprezentate de: deletia 5q, monosomia
7, deletia 7q, trisomia 8, deletia 9q,
trisomia 11,trisomia 13, and trisomia 1
Aceste rearanjamente implica gene cu rol
in hematopoieza normala

10-20% din pacientii cu LAM au un caritip

complex ce se asociaza cu un prognostic prost
CARIOTIP COMPLEX: prezenta a cel putin trei
anomalii citogenetice
70-80% din pacientii care prezinta t(8;21) au
ca aberatie secundara pierderea cromosomului
X
30-50% din pacientii cu inv(16) au ca aberatie
secundara trisomia de 8,21 si 22
30-40% din pacientii cu t(15;17) au ca
aberatie secundara trisomia 8 si
isocromosom17*

Frecventa:
- 50% din LAM2
Prognostic favorabil cu
remisiune completa in
90%din cazuri, dar
recaderile sunt frecvente
Gene implicate:
AML1(8q22)
ETO(21q22)
Anomalii aditionale:
monosomie Y, X, 7
trisomie 8
del(7q), del(9q)

LAM3(promielocitara)
Frecventa: 70% din LAP
Prognostic favorabil
Gene implicate:
PML(15q25)
RAR(17q21)
Gena hibrid: PML/RAR
(106kDa)
Absenta acestei translocatii la
un numar mic de pacienti se
explica prin prezenta altor
translocatii ce au in comun
reararanjarea genei RAR:
t(11;17)(q23;q12-21),
PLZF/RAR
t(11;17)(q13;q21), NuMA/RAR
t(5;17)(q35;q12-21),NPM1/RAR

LAM4 cu eozinofile
Frecventa:
- 5-10% din LAM
- 30% din LAM4
Prognostic favorabil
(supravietuire mediana de
5 ani)
Gene implicate:
MYH11(16p13)
CBF(16q22)
Anomalii aditionale:
+8, +21, -7/del(7q), +13,
-5/del(5q)

Anomalii Cromozomiale
Prognostic

t(9;22)(q34;q11.2)
Nefavorabil
t(4;11)(q21:q23)
Nefavorabil
t(1;19)(q23;p13.3)
Nefavorabil
t(12;21)(p13;q22)
Hyperdiploid >50
Favorabil
Hypodiploidy
Nefavorabil

Gene
BCR/ABL
AF4/MLL

PBX1 (PBX1/E2A)
TEL/AML1

Favorabil

Studiul citogenetic joaca un rol important in

evaluarea pacientilor cu SMD avand rol in
evaluarea prognosticului cat si in alegerea
terapiei
Majoritatea anomaliilor cromozomiale sunt
nespecifice cu exceptia del 5q
50% din pacientii cu SMD au ca anomalie
cromozomiala deletia interstitiala
5q,7q,20q,11q,13q,12p si 17q
15% prezinta monosomii, trisomii, translocatii
neechilibrate

Anomalii
cromozomiale

Prognostic

Cariotip normal, 5q- izolat, 20qizolat,-Y izolat

Bun

Trisomia 8

Intermediar

Anomalii ale crz 7, Cariotip

complex,Translocatii specifice t(1;3);
t(6;9);rearanjamente in care este
implicat 11q23; anomalii 3q21q26 si
t(1;7) (p11;q11)

Nefavorabil