DIAGNOSTIC SEROLOGIC

IN INFECTIA HIV

1. DIAGNOSTIC SEROLOGIC IN INFECTIA HIV/SIDA

TESTE DE TRIAJ- sensibilitate inalta
ELISA de detectie a Ac antivirali
TESTE RAPIDE

TESTE DE CONFIRMARE- specificitate inalta

WESTERN BLOT
RADIOIMUNOPRECIPITAREA (RIPA)
IMUNOFLUORESCENTA INDIRECTA

2. DETECTIA DIRECTA A VIRUSULUI SAU A

PRODUSELOR VIRALE
IZOLARE VIRALA
DETECTIA ANTIGENEMIEI p24 ELISA de detectie a Ag virale
DETECTIA ACIDULUI NUCLEIC VIRAL

TESTE DE TRIAJ

Principiul ELISA de detectie a anticorpilor antivirali

Anticorpii sunt detectati cu ajutorul unui CONJUGAT ce contine un marker
enzimatic (cel mai frecvent peroxidaza) apoi evidentiati prin o reactie de
culoare la adaugarea SUBSTRATULUI.
Reactia este citita cu ajutorul spectrofotometrului, existnd n fiecare
reactie ELISA martori pozitivi si negativi; in final se citesc densitatea optica
sau absorbanta pentru fiecare proba si martor.
In protocolul de reactie sunt precizate criteriile de validare a probei
(respectiv, raportul valorilor absorbantei citite la spectrofotometru pentru
martorii pozitivi si negativi) si criterii de pozitivitate (prin compararea cu
valorea prag (n engleza - "cut-off").

ELISA de detectie a anticorpilor antivirali

TEHNICA INDIRECTA

ETAPE
1. Incubare ser pacient 1h la 37C
2. Spalare
3. Incubare conjugat (Ac anti IgG uman x enzima)- 1h la 37C
4. Spalare
5. Incubare substrat 20 30 min la temp camerei
6. Citire la spectrofotometru DO probe, martori, cut off, zona gri

TESTE DE CONFIRMARE
Tehnica WESTERN BLOT
Principiu: WB este o tehnica de detectie raspunsului imun
antiviral defalcat pe grupe antigenice distincte (de ex. pentru
infectia HIV: anticorpi anti-gp120, anticorpi anti-gp41,
anticorpi anti-p24, etc).
ETAPE:
1. SDS-PAGE electroforeza in gel de policacrilamida in prezenta
unui detergent anionic (sodium dodecyl sulphate).
2. BLOT (transfer) - transferul antigenelor virale din gelul de
policacrilamida pe o membrana de nitroceluloza
3. DETECTIA ANTICORPILOR din serul pacientului prin punerea in
contact a serului de cercetat cu membrana de nitroceluloza, si
urmarirea aparitiei benzilor colorate induse de prezenta
anticorpilor prin aparitia reactiei imunoenzimatice.

(1)

(2)

Etapele
WESTERN BLOT
(1) SDS-PAGE
(2) BLOT (transfer)
(3) DETECTIA
ANTICORPILOR

(3)

WESTERN BLOT detectia Ac serici (3)

Substrate

Antiviral antibody

Stop

color

gp160
gp120

p66

p55
p51

gp41

p31
p24

p17
p10/11
p7/9

Western blot
in infectia HIV
Criteriul minim de
pozitivitate
2 env
+
1 gag

DIAGNOSTIC SEROLOGIC IN INFECTIA HIV

ELISA
NEGATIV=

POZITIV IN DUPLICAT

ABSENTA
INFECTIEI HIV

WESTERN BLOT
NEGATIV

POZITIV=
INFECTIE HIV

! Ferestra
serologica

INDETERMINAT

risc rezidual al
transfuziei = 2/1 milion

repeta la 6-8 saptamini

alt test de confirmare

Ag p24- 1.48/1 milion

ADN proviral1.48/1 milion
ARN HIV 1.01/1 milion