DEPARTAMENT MICROBIOLOGIE LABORATOR SYENVO ROMANIA MEDGIDIA

PROCEDURA SPECIFICA PENTRU TESTAREA SENSIBILITATII LA ANTIBIOTICE PRIN METODA

DIFUZIMETRICA
COD: PS-MG-01
VERSIUNEA 1.1 martie 2012
EXEMPLAR NR.

Nota asupra dreptului de proprietate

Acest document este proprietatea SC Synevo Romania SRL.
Reproducerea integral sau parial a prezentului document n orice publicaii i prin orice procedeu (electronic, mecanic, fotocopiere, microfilme,
etc.), este interzis dac nu exist acordul scris al Synevo Romania
Acest document este elaborat pentru utilizarea de catre personalul Laboratorului Synevo Romania. Reproducerea integral sau parial a
prezentului document n orice publicaii i prin orice procedeu (electronic, mecanic, fotocopiere, microfilme etc.), este interzis, dac nu exist
acordul scris al Synevo Romania.
Nu se permite modificarea acestui document de catre utilizator. Synevo Romania nu i asum responsabilitatea, nu garanteaz explicit sau implicit
caracterul complet, nealterat i gradul de utilitiate a documentului n cazul n care utilizatorul a operat modificri i nu poate fi fcut responsabil de
orice fel de pagube rezultate n urma utilizrii sale. Utilizatorul, isi asuma intreaga responsabilitate pentru desfasurarea, finalizarea si implementarea
corespunzatoare a documentului.
Indicatorul actualizarilor

Versiunea
(#)
1.0
1.0
1.0
1.1

NUME
FUNCTIE
SEMNATURA

Persoana care a elaborat

documentul
Dr Eugen Stefanescu
Dr Eugen Stefanescu
Dr. Sorin Tomasian
Dr Sorin Tomasian

Mentiuni asupra documentului elaborat

Document initial
Nu necesita revizie
Nu necesita revizie
Prima revizie

Data elaborarii
ian. 2009
Ian 2010
Ian 2011
Martie 2012

ELABORAT
Dr Sorin Tomasian

VERIFICAT
Mihaela Vladut

APROBAT
Dr Sorin Tomasian

Medic Laborator

Specialist Calitate

Sef Laborator

DATA

Cunoasterea si respectarea prezentei proceduri este obligatorie pentru tot personalul implicat in efectuarea antibiogramei in laboratorul Synevo
Medgidia
1/

DEPARTAMENT MICROBIOLOGIE LABORATOR SYENVO ROMANIA MEDGIDIA

PROCEDURA SPECIFICA PENTRU TESTAREA SENSIBILITATII LA ANTIBIOTICE PRIN METODA
DIFUZIMETRICA
COD: PS-MG-01
VERSIUNEA 1.1 martie 2012
EXEMPLAR NR.

1. NOTIUNI INTRODUCTIVE
1.1. Scop
Stabilirea procedurii pentru determinarea sensibilitatii la antibiotice a germenilor patogeni.
1.2. Documente de referinta:
- Metode de laborator de uz curent Ministerul Sanatatii vol. II pg. 187 - 199,
- Tratat de Microbiologie clinica Ed Medicala 2008, D. Buiuc, M Negrut
- CLSI 2012: Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Eeighteenth Informational Supplement 2008
- Instructiuni de lucru cu micropipeta
- Instructiuni pentru elaborarea procedurii specifice
- Ghidul serviciilor medicale ale Laboratorului Synevo, ultima editie in vigoare
- Ghidul national de biosiguranta pentru laboratoarele medicale, Ed. I, Bucuresti, Ed. Medicala, 2006, pg. 47 71
- Diagnostic Microbiology, B. Forbes, D. Sahm, A. Weissfeld
1.3. Termeni, definitii si abrevieri:
- QC control de calitate
- MRSA Staphylococcus aureus meticilino-rezistent
- MRSE Stafilococ coagulazo-negativ meticilinorezistent
- ESBL beta-lactamaza cu spectrul extins
- CTX cefotaxim
- AMC amoxicilin/clavulanic acid
- CAZ ceftazidim
- CRO- ceftriaxona
- AZT aztreonam
- ANC, TAZ, TIM, CES
1.4. Domeniu de aplicare
Procedura este stabilita pentru a fi utilizata in Departamentul de Microbiologie de catre personalul tehnic atunci cand este necesar;
Sensibilitatea la antibiotice a unui agent bacterian poate fi apreciata din punct de vedere clinic in: rezistent, intermediar si sensibil .
1.5. Informaii generale
Determinarea sensibilitatii bacteriei la antibiotice este fondata pe studiul multiplicarii bacteriene fata de un gradient de concentratie a antibioticului
realizat intr-un mediu de cultura. Un procedeu pentru obtinerea unui gradient de concentratie a antibioticului in mediu de cultura consta in a face sa
difuzeze un antibiotic intr-un mediu gelozat pornind de la o sursa (biodisc). Apare o competitie intre difuziunea antibioticului si cresterea bacteriana.
1.6. Recomandri pentru determinare
- stabilirea antibioticului necesar pentru tratarea infectiei cu anumit germene patogen.
1.7. Masuri de securitate in munca si prevederi in caz de accidente
Inainte de desfasurarea oricarei activitati in laborator personalul trebuie sa se asigure ca poseda cunostinte de protectia si securitatea muncii in
laboratorul medical. Este obligatoriu sa purtati echipament de protectie;
Toate echipamentele de diagnostic in vitro, probele pacientilor, trebuie tratate ca materiale cu potential risc biologic. Toate materialele care intra in
contact cu produsele mai sus mentionate sunt considerate materiale infectioase.
Echipamentele si instructiunile de protectie constau in: manusi chirurgicale, halat/ costum incheiat, parul strans, ochelari de protectie sau hote de
siguranta biologica, fara bijuterii sau accesorii mari.
Riscuri in cazul nerespectarii normelor de securitate in munca
- Contaminrea cu probe biologice, riscul de expunere la aerosoli, stropiri si inoculari accidentale.
Aerosolii sunt produsi de orice activitate care determina aparitia de miniparticule sau stropi de material lichid sau semilichid, cum ar fi agitarea,
turnarea, amestecarea sau picurarea unui lichid pe o suprafata sau intr-un lichid. Activitatile de laborator precum insamantarea placilor de agar prin
Cunoasterea si respectarea prezentei proceduri este obligatorie pentru tot personalul implicat in efectuarea antibiogramei in laboratorul Synevo
Medgidia
2/

DEPARTAMENT MICROBIOLOGIE LABORATOR SYENVO ROMANIA MEDGIDIA

PROCEDURA SPECIFICA PENTRU TESTAREA SENSIBILITATII LA ANTIBIOTICE PRIN METODA
DIFUZIMETRICA
COD: PS-MG-01
VERSIUNEA 1.1 martie 2012
EXEMPLAR NR.
efectuarea de striuri paralele, inocularea flacoanelor de culturi prin folosirea unei pipete pentru a distribui suspensii de agenti infectiosi, efectuarea de
dilutii in tuburi sau placi, omogenizarea si agitarea prin producerea de vartej a materialelor infectioase, centrifugarea lichidelor contaminate pot
genera aerosoli infectiosi. Particulele de aerosoli cu diamentru sub 5 micrometri si picaturile mici cu diametrul 5-100 micrometri nu sunt vizibile cu
ochiul liber. Contactul cu toate acestea poate duce la infectii. Tehnicianul de laborator trebuie avertizat asupra formarii acestor particule si asupra
faptului ca ele pot fi inhalate sau pot contamina suprafete si materiale. Atunci cand manipulati probele si deseurile asigurati-va ca purtati echipament
de protectie. Daca probele/deseurile vin in contact direct cu pielea, spalati-o imediat cu apa si aplicati dezinfectant. Consultati de urgenta un medic.
Exista posibilitatea de perforare a manusilor de protectie. De aceea, este necesara o atentie sporita atunci cand se lucreaza. Daca proba biologica
este varsata pe o suprafata de lucru, aceasta se acopera cu o solutie dezinfectanta, se lasa sa actioneze pentru inactivarea microorganismelor si
apoi se indeparteaza.
- Contactul cu reactivii si solutiile de curatenie si dezinfectare: Folositi intotdeauna manusi de protectie (rezistente chimic) si ochelari de
protectie atunci cand manipulati solutiile de colorare . Exista posibilitatea de perforare a manusilor de protectie. De aceea, este necesara o atentie
sporita atunci cand se lucreaza .
In cazul reactivilor tineti cont de atentionarile existente la nivelul cutiilor de reactivi.
- Socul electric La orice echipament electric, poate surveni socul electric. NU incercati sa accesati nici o componenta a echipamentului marcata
corespunzator. NU incercati sa lucrati in nici un compartiment electronic. Instalarea, service-ul si repararea trebuie efectuate doar de catre personal
autorizat si calificat.
- Manipularea in siguranta a probelor de laborator
Containerele pentru probe pot fi din sticla sau preferabil din plastic. Ele trebuie sa fie rezistente si nu trebuie sa permita scurgerea materialului din
ele cand dopul sau capacul sunt corect aplicate. Nimic din materialul recoltat nu trebuie sa ramana inafara containerului .Containerele trebuie corect
etichetate pentru o identificare usoara . Documentele de insotire nu trebuie infasurate in jurul containerului ci plasate separat
Transportul probelor in laborator. Pentru evitarea scurgerilor accidentale sau a varsarii probelor, trebuie utilizate containere secundare cum sunt
cutiile cu stative pentru ca probele sa ramana in picioare atunci cand sunt transportate. Containerele secundare pot fi din metal sau plastic, pentru a
putea fi autoclavabile sau rezistente la actiunea dezinfectantilor chimici. Ele trebuie decontaminate regulat.
Primirea probelor. Laboratorul care primeste un numar mare de probe trebuie sa aiba o incapere separata sau un spatiu special pentru acest scop
Deschiderea pachetelor. Personalul care primeste si despacheteaza probele trebuie sa fie constient de potentialul pericol si trebuie instruit sa
adopte precautiile standard in special cand se confrunta cu spargerea sau varsarea containerelor. Containerele primare cu probe trebuie deschise
intr-o hota. Trebuie sa existe dezinfectante la indemana.
Trebuie respectate precautiile de siguranta

2. FAZA PREANALITICA
2.1. Efectuarea comenzii se realizeaza conform PG-02, Procedura generala de analiza a comenzii, ofertei si contractului
2.2. Pregatirea pacientului pentru recoltare: - nu este cazul
2.2. Recipient: nu se aplica
Specimen recoltat: cultura izolata si identificata
2.3. Etichetarea recipientilor se folosesc eprubete sterile, transparente, numerotate
2.4. Transportul probelor - nu este cazul
2.5. Conditii de prelucrare si pastrare a probelor patologice pana la examinare
- respectand normele de securitate in departament pentru evitrea contaminarii incrucisate
2.6. Volumul minim necesar: 2-3 colonii din cultura pura ( in functie de germenul izolat )
2.7. Criterii de respingere a probei: daca cultura nu este pura sau identificata

3. FAZA ANALITICA
3.1. Echipamente si consumabile
Cunoasterea si respectarea prezentei proceduri este obligatorie pentru tot personalul implicat in efectuarea antibiogramei in laboratorul Synevo
Medgidia
3/

DEPARTAMENT MICROBIOLOGIE LABORATOR SYENVO ROMANIA MEDGIDIA

PROCEDURA SPECIFICA PENTRU TESTAREA SENSIBILITATII LA ANTIBIOTICE PRIN METODA
DIFUZIMETRICA
COD: PS-MG-01
VERSIUNEA 1.1 martie 2012
EXEMPLAR NR.
3.1.1.
Echipament principal de masurare: nu este aplicabila
3.1.2.
Ustensile si consumabile necesare:
- Termostat
- Bec Bunsen
- Ansa bacteriologica
- dispenser
- placi Petri
- densimat
- rigla gradata
- lupa
- eprubete sterile
- tampoane de bumbac pentru uz bacteriologic de unica folosinta
3.2. Reactivi (prelucrare, conditii de pastrare, stabilitatea)
- cultura pura pe mediu solid a tulpinii de testat
- solutie salina NaCl 0.9% sterila
- Mediile utilizate pentru culturi: amestec reducator, Muller-Hinton, Muller Hinton cu 5% sange de berbec, agar chocolate;
- Microcomprimate de antibiotice, selectate in functie de germenul izolat conform recomandarilor CLSI
3.3. Conditii de mediu si de operare:
Mediu:
- Mediu fara praf cu o ventilatie adecvata
- Temperatura trebuie sa fie 18-26C;
- Umiditatea 45-70%;
Apa apa distilata pentru prepararea mediilor
Electric: La termostate nu se deconecteaza de la sursa de energie in timpul utilizarii acestuia.

3.4. Specificatii de performanta: - nu este aplicabil

3.5. Principiul Metodei
Testarea sensibilitatii la antibiotice se face prin metoda difuzimetrica (KIRBY-BAUER).
Metoda se bazeaza pe urmatoarele mecanisme fizico-chimice si biologice:
1. Antibioticul continut intr-un vehicul (disc de hartie, tableta, benzi), aplicat pe suprafata unui mediu de cultivare adecvat cresterii agentului bacterian
pentru care se face testarea, difuzeaza in jurul discului pe o raza depinzand de :
- cantitatea de antibiotic continuta in vehicul (incacatura);
- solubilitatea antibioticului;
- greutatea moleculara, sarcina electrica si structura chimica a antibioticului;
- grosimea stratului de mediu de cultura;
- vascozitatea, structura si ph-ul mediului de cultura;
- temperatura de incubare.
2. Daca cultura bacteriei de testat este insamantata pe suprafata unui mediu definit, iar placa este incubata in conditii definite, ea nu creste in zona in
care a difuzat antibioticul, in cazul in care este sensibila fata de acesta.
Aria in care nu a avut loc cresterea este numita zona de inhibitie si variaza in functie de :
- densitatea inocului;
- compozitia si ph-ul mediului;
- conditiile de incubare.
Interpretarea testului necesita compararea zonelor masurate cu valori acceptate (puncte de rupere, respectiv valori cutt-off), specifice standardului
utilizat, pentru fiecare pereche antibiotic/microorganism.
3.6. Prelucrarea probei inainte de introducerea in aparat : nu se aplica
3.7. Mentenanta analizorului: nu se aplica
3.8. Etalonare analizor: - Etalonarea se face conform planului de etalonare, de catre institutii autorizate in domeniu (etalonarea termostatelor);
Cunoasterea si respectarea prezentei proceduri este obligatorie pentru tot personalul implicat in efectuarea antibiogramei in laboratorul Synevo
Medgidia
4/

DEPARTAMENT MICROBIOLOGIE LABORATOR SYENVO ROMANIA MEDGIDIA

PROCEDURA SPECIFICA PENTRU TESTAREA SENSIBILITATII LA ANTIBIOTICE PRIN METODA
DIFUZIMETRICA
COD: PS-MG-01
VERSIUNEA 1.1 martie 2012
EXEMPLAR NR.
3.9. Calibrare: nu este aplicabila
3.10.
Control de calitate QC:
Frecventa QC: - controlul recipientelor sterile la fiecare sarja de turnare, odata cu mediile;
- controlul mediilor de cultura (testarea eficientei biologice) la fiecare sarja de turnare si verificarea microcomprimatelor cu ajutorul
tulpinilor de referinta la schimbarea lotului si saptamanal;
- controlul sterilitatii mediilor turnate se efectueaza la fiecare sarja de turnare;
- controlul truselor de coloratie cu tulpini de referinta la schimbarea lotului si zilnic (coloratia Gram);
- controlul sterilizarii la etuva la fiecare sterilizare (teste biochimice) si lunar (teste biologice);
- verificarea sterilitatii la autoclavul de medii si infecte la fiecare autoclavare (teste biochimice) si lunar (teste biologice);
- controlul suprafetelor saptamanal;
- controlul aeromicroflorei saptamanal.
Prepararea mediilor se efectueaza conform instructiunilor IL
Identificarea fractiunilor: nu se aplica
Stabilitate la intuneric: nu se aplica
Utilizare: Controlul intern pentru mediile utilizate se efectueaza cu tulpinile de referinta de unica utilizare. Acestea se pastreaza la frigider la
tenperatura de 2 8 C cu acces controlat.
Descrierea modului de lucru pentru efectuarea controlului intern se efectueaza conform PG 18 Procedura generala de control intern de
calitate.
3.11.Criterii de acceptare/respingere ale rezultatelor controlului intern.
Nu se utilizeaza tulpini de referinta cu expirarea termenului de valabilitate si cu peste 4 pasaje.
3.12. Actiunile corective aplicate la incalcarea regulilor stabilite pentru controlul intern;
daca controlul sterilitatii si eficientei biologice a mediilor de cultura utilizate apar neconformitati, pentru controlul sterilitatii se toarna o noua
sarja, iar pentru controlul eficientei biologice se schimba mediul.
la verificarea aeromicroflorei si suprafetelor pentru evitarea contaminarii incrucisate la aparitia neconformitatilor se face sterilizarea cu
lampa UV si substante dezinfectante;
pentru sterilitatea recipientelor de recoltare se schimba lotul
3.13. Rularea probelor.
In prima zi:
1. Prepararea inoculului:
se repica cu tamponul de bumbac steril un numar de colonii izolate de pe mediu de cultura pura pentru obtinerea unei suspensii cu
turbiditate comparabila cu cea a standardului McFarland 0.5. (pentru bacteriile cu crestere rapida 4-5 colonii pentru cele fastidioase un
numar de colonii necesar realizarii turbiditatii dorite).
se amesteca continutul tubului cu suspensie.
nu se va face niciodata repicarea de pe medii selective
daca tulpinile sunt pastrate in cultura inainte de testare, ele trebuie subcultivate cu 24h inainte de testare.
2. Standardizarea inoculului:
se utilizeaza densimatul pentru masurarea densitatii optice sau se foloseste un standard de referita MC Farland;
se agita bine standardul de referita MC Farland (prin rasturnarea tubului bine inchis);
se agita bine cultura inainte de calibrare
se compara turbiditatea standardului cu cea a suspensiei folosind o sursa de iluminat adecvata, pentru vizualizarea suspensiilor se pun
ambele tuburi in fata unui card Wickerham. Daca se vad mai usor liniile de pe cardul Wickeham prin tubul cu suspensia test decat prin
tubul cu standard, suspensia este prea slaba, se mai adauga cate o colonie pana cand turbiditatea suspensiei este echivalenta cu cea a
standardului. Daca se vad mai greu liniile de cardul Wickerham prin suspensia test decat prin test atunci suspensia este prea concentrata.
Se dilueaza suspensia cu ser fiziologic steril pana cand este echivalenta cu standardul de referinta.
3. Inocularea placilor:
inoculul se insamanteaza pe placi cu mediu adecvat: Muller-Hinton pentru stafilococi si alte bacterii cu crestere rapida, Muller-Hinton cu 5%
sange de berbec pentru Streptococcus pneumoniae, mediu geloza chocolate pentru H. influenzae.
Placile se aduc la temperatura camerei si se usuca prin mentinerea cu capacul interdeschis timp de 10 30 minute;
Se insamanteaza cu tamponul inmuiat in suspensia calibrata si apoi presata de peretii tubului pentru inlaturarea excesului de suspensie;
Insamantarea se face in trei directii prin rotirea placii cu cate 60;
Dupa inoculare, placile se mentin 10-15 minute la temperatura camerei la uscare
Cunoasterea si respectarea prezentei proceduri este obligatorie pentru tot personalul implicat in efectuarea antibiogramei in laboratorul Synevo
Medgidia
5/

DEPARTAMENT MICROBIOLOGIE LABORATOR SYENVO ROMANIA MEDGIDIA

PROCEDURA SPECIFICA PENTRU TESTAREA SENSIBILITATII LA ANTIBIOTICE PRIN METODA
DIFUZIMETRICA
COD: PS-MG-01
VERSIUNEA 1.1 martie 2012
EXEMPLAR NR.
4.
-

Nu se intarzie insamantarea cu peste 15 minute de la calibrarea suspensiei

Suspensia se agita inante de inoculare
Aplicarea discurilor
se selecteaza antibioticele si incarcatura lor conform standardului;
se aduc discurile la temperatura camerei cu 1 2 h inainte de aplicare;
nu se folosesc discuri expirate
numarul de biodiscuri/placa este in functie de diametrul placii utilizate (dispenserul utilizat in laborator permite asezarea a 8 biodiscuri pe
placa de 90 mm);
discurile se aplica pe placi cat de repede posibil dar nu mai tarziu de 15 minute de la inoculare;
daca discul a cazut nu se schimba pozitia;
discurile de antibiotice trebuie pastrate la frigider (4-8C), betalactaminele si alate antibiotice cu labilitate mare (imipenem, cefaclor,
combinatii cu acid clavulanic) se pastreaza congelate la -20C, iar discurile pentru lucrul curent se pot pastra o saptamana la frigider.
Daca se utilizeaza dispenser, acesta trebuie pastrat in frigider bine inchis si adus la temperatura camerei inainte de utilizare. ( IL
dispenser )
5. Incubarea placilor:
temperatura de incubare este de 35 370 C;
timpul este in mod normal este 16 -20 h pentru bacteriile cu crestere rapida (in aerobioza) si pana la 24h pentru germenii fastidiosi in
atmosfera cu 5% CO2;
placile se rastoarna si se introduc in termostat asezate cu capacul in partea inferioara.
Teste speciale (efectuate la cererea clinicianului):
1. Testarea sensibilitatii la penicilinele M a Staphylococcus aureus rezistent la meticilina (MRSA)
Rezistenta S. aureus la meticilina este incrucisata cu toate betalactaminele. De aceea testarea sensibilitatii se face in mod sistematic pentru
fiecare izolat clinic
testarea se face prin inocularea tulpinii de testat pe agar Muller-Hinton si utilizand un disc de cefoxitin de 30 g, dupa care se incubeaza la
35 C timp de 24h.
Pentru Staphylococcus aureus si S. lugdunensis:
diametrul discului zonei de inhibitie la cefoxitin 19 mm = rezistent, 20 mm = sensibil
Pentru stafilococii coagulazo-negativi exceptie S. lugdunensis:
diametrul discului zonei de inhibitie la cefoxitin 24 mm = rezistent, 25 mm = sensibil
2. Testarea producerii de beta-lactamaze cu spectru extins (ESBL) la enterobacterii
ESBL sunt enzime care inactiveaza cefalosorinele de generatia a treia (C3G) si pot fi sisntetizate de majoritatea enterobacteriilor
Producerea de ESBL se poate observa la antibiograma difuzimetrica prin imaginea in in dop de sampanie intre un disc de C3G si un disc
impregnat de inhibitori de beta-lactamaza, singur sau in asociere cu un alt antibiotic.
Antibioticele utilizate sunt ceftazidimul (CAZ, 30 g) si augmentinul (AMC, 20/10 g)
Distanta recomandata intre CAZ si AMC este de 20 mm, la antibiograma difuzimetrica
Imaginea in dop de sampanie este sugestiva pentru producerea de ESBL
3.
4.
-

Testarea producerii de beta-lactamaze inductibile

antibiotice utilizate: CAZ 30 g si imipenem 10 g,
discurile se dispun in vecinatete
se incubeaza timp de 18 h, la 37 C;
o aplatizare a zonei de inhibitie la nivelul discului de CAZ indica prezenta unei tulpini producatoare de beta-lactamaza inductibila;
Detectarea tulpinilor de Streptococcus pneumoniae cu sensibilitate diminuata la beta-lactamine
se face printr-un test prezumtiv prin metoda difuzimetrica
se utilizeaza un disc de oxacilina de 1 g (recomandat de CLSI) sau de 5 g;
diametrele sunt de 19 mm (<20 mm) pentru discul cu incarcatura de 1 g si 25 mm (< 26 mm) pentru discul de 5 g, se raporteaza tulpina
de pneumococ cu sensibilitate diminuata la beta-lactamina
5. Testarea rezistentei enterococilor la amino-glicozide:
- se utilizeaza un disc de gentamicina de 120 g, diametrul 6 mm = rezistent, 7-9 mm = intermediar, 10 mm = sensibil
6. Testarea rezistentei la macrolide
- se utilizeaza disc de eritromicina de 15 g si clindamicin 2 g
- distanta recomandata este de 20 mm intre cele doua antibiotice;
Cunoasterea si respectarea prezentei proceduri este obligatorie pentru tot personalul implicat in efectuarea antibiogramei in laboratorul Synevo
Medgidia
6/

DEPARTAMENT MICROBIOLOGIE LABORATOR SYENVO ROMANIA MEDGIDIA

PROCEDURA SPECIFICA PENTRU TESTAREA SENSIBILITATII LA ANTIBIOTICE PRIN METODA
DIFUZIMETRICA
COD: PS-MG-01
VERSIUNEA 1.1 martie 2012
EXEMPLAR NR.
- se incubeaza timp 18h la 37 C;
o aplatizare adiacenta discului de eritromicina indica rezistenta rezistenta inductibila la macrolide cu 14 atomi de carbon
din 2005 CLSI raporteaza si rezistenta inductibila la Clindamicina cu urmatorul comentariu Aceasta tulpina poate prezenta R inductibila la
Clindamicina . Clindamicina poate fi totusi eficienta la unii pacienti
In a doua zi se face citirea si interpretarea antibiogramei si eliberarea rezultatului.
citirea diametrelor se face cu linia gradata si etalonata
se compara cu tabelele standard pentru aprecierea sensibilitatii la antibioticele testate;
testarile efectuate pe mediu cu adaos de sange se citesc cu placa deschisa in lumina reflectata, celelalte testari se citesc cu placa inchisa
pe fond intunecat
Situatii speciale:
zona dubla si cu margini in fierastrau: se citeste distanta intre marginile interioare ale zonei de crestere;
colonii in aria de inhibitie, se repeta testarea rezistentei si identificarea pe colonii, daca la a doua testare reapar colonii in aria de inhibitie se
declara rezistent;
pentru Proteus se face abstractie de zona de migrare;
la sulfamide si trimetoprin se face abstractie de val
3.14. Efectuarea dilutiilor pentru standardizarea inoculului
3.15. Calcularea si inregistrarea rezultatelor
Nu este cazul calculului.
Inregistrarea rezultatelor se efectueaza pe suport de hartie (demande-uri) si informatic prin introducere manuala a rezultatului.
3.16. Coduri de alarma si defectiuni nu se aplica
3.17. Validare si transmiterea rezultatului in LIS;
Verificarea rezultatelor se realizeaza de catre seful de departament (medic de laborator).
Transmisia si validarea rezultatelor la nivelul SILAB se efectueaza manual- se introduce rezultatul manual in sistemul informatic.

4. FAZA POSTANALITICA
4.1. Raportarea si interpretarea rezultatelor
Exprimarea rezultatelor se face prin: sensibil, intermediar sau rezistent, prin comparare cu diametrele standard din CLSI.
Pentru testele speciale (effectuate la cererea clinicianului) se fac urmatoarele comentarii:
- pentru MRSA: - MRSA/MRSE prezinta in vivo rezistenta incrucisata intre grupurile penicilinelor M si cefalosporine.
- pentru ESBL : - Tulpina secretoare de betalactamaza cu spectrul extins, se comunica rezistente toate C3G si toate
antibioticele cu inhibitori de beta-lactamaza (AMC, TAZ, TIM, CES)
- pentru pneumococ: Tulpina cu sensibilitate diminuata la beta-lactamine
- pentru rezistenta inductibila la beta-lactamine: Tulpina secretoare de beta lactamaza inductibila se comunica rezistente
toateC3G si sensibile AMC, TAZ, TIM
- pentru rezistenta inductibila la macrolide: Tulpina cu rezistenta inductibila la macrolide
Inregistrarea rezultatelor se face face pe formularul F14-PG14 si apoi in sistemul informatic.
4.2. Interferente
La efectuarea antibiogramei, daca etapele de lucru nu sunt respectate, pot sa apara erori de interpretare.
Erori de interpretare a antibiogramelor pot sa apara si daca:
- mediul pe care se efectueaza antibiograma nu este corect ales si nu are grosimea corespunzatoare de 4 mm;
- prepararea inoculului nu se face conform standardului
- alegerea biodiscurilor nu este corespunzatoare tulpinii de testat, si distanta dintre ele nu este respectata
- timpul de incubare si atmosfera de incubare nu sunt corect alese;
- citirea antibiogramei si compararea cu diametrele standard pentru fiecare antibiotic, nu se efectueaza corect
4.3. Stocarea si distrugerea probelor dupa prelucrare (Neutralizare/Inactivare):
Cunoasterea si respectarea prezentei proceduri este obligatorie pentru tot personalul implicat in efectuarea antibiogramei in laboratorul Synevo
Medgidia
7/

DEPARTAMENT MICROBIOLOGIE LABORATOR SYENVO ROMANIA MEDGIDIA

PROCEDURA SPECIFICA PENTRU TESTAREA SENSIBILITATII LA ANTIBIOTICE PRIN METODA
DIFUZIMETRICA
COD: PS-MG-01
VERSIUNEA 1.1 martie 2012
EXEMPLAR NR.
Placile Petri inainte de incinerare, se neutralizeaza prin autoclavare.
Materialele infectioase (probe biologice si orice material ce a intrat in contact cu acestea), sunt eliminate in saci galbeni cu inscriptia Risc biologic
Materialele neinfectioase sunt eliminate in saci negrii/transparenti.
Probele sunt ulterior trimise spre incinerare (prin intermediul personalului care efectueaza curatenia si transportul, care asigura eliminarea tuturor
deseurilor).
4.4. Arhivarea rezultatelor
Arhivarea rezultatelor analizelor se efectueaza pe demande-uri si formulare pentru rezultate, timp de 1 an, dupa care sunt trecute in arhiva generala
a laboratorului (identificate prin continut, perioada si persoana care a efectuat arhivarea).
Arhivarea rezultatelor de control intern se efectueaza pe formularele corespunzatoare.
Arhivarea rezultatelor calibrarilor nu este cazul
Fisele de mentenanta sunt arhivate la nivelul departamentului timp de 1 an, dupa care sunt trecute in arhiva generala a laboratorului (identificate prin
continut, perioada si persoana care a efectuat arhivarea).
4.5. Potentiale surse de variabilitate (Bugetul de incertitudine)
Componentele
incertitudinii
Modul de cuantificare si
recoltare al inoculului
Mediile de cultura
(preparare, turnare,
verificarea sterilizarii)
Incubare

Cauza
- nerespectarea numarului de colonii
necesare
- nu se respecta instructiunile de lucru
- cantitate variabila la turnare
- neasigurarea sterilitatii la turnare
- conditiile improprii de pastrare
- neetalonarea sticlariei
-neetalonarea termostatului
(variatii ale temperaturii)
- nerespectarea temperaturii si a duratei de
incubare
- nerespectarea conditiilor de aerobioza
- nerespectarea timpului de uscare
-nerespectarea timpului de predifuziune
- nerespectarea timpului de echilibrare
termica a microcomprimatelor
- nerespectarea calitatii

Metoda de determinare (de

estimare) a
incertitudinii: A/B
Nu pot fi cuantificabile
Nu pot fi cuantificabile

Tip B
Tip B
Nu pot fi cuantificabile

Ponderea asupra incertitudinii

totale a determinarii
Mare
Mare
Mica
Mare
Mica
Mica
Mare

Nu pot fi cuantificabile

Mare
Mare

Nu pot fi cuantificabile

Mare
Mica
Mare

- nerespectarea modului de lucru

- instruirea insuficienta a personalului

Nu pot fi cuantificabile
Nu pot fi cuantificabile

Mare
Mare

- neetalonarea riglei
- nerespectarea procedurii de control

Tip B
Nu pot fi cuantificabile

Mare
Mare

- necorelarea probei (rezultatului) cu

demande-ul
- interpretarea incorecta a rezultatului
- nevalidarea sistemului informatic
Factorul uman
- oboseala
- neatentia
4.6. Instruire personal si Responsabilitati

Nu pot fi cuantificabile

Mare

Nu pot fi cuantificabile

Mare
Mare
Mare

Timpii de lucru

Microcomprimate de
antibiotice
Dispenserul
Citirea
Controlul respectarii
procedurii de lucru
Prezentarea rezultatelor

Cunoasterea si respectarea prezentei proceduri este obligatorie pentru tot personalul implicat in efectuarea antibiogramei in laboratorul Synevo
Medgidia
8/

DEPARTAMENT MICROBIOLOGIE LABORATOR SYENVO ROMANIA MEDGIDIA

PROCEDURA SPECIFICA PENTRU TESTAREA SENSIBILITATII LA ANTIBIOTICE PRIN METODA
DIFUZIMETRICA
COD: PS-MG-01
VERSIUNEA 1.1 martie 2012
EXEMPLAR NR.
4.6.1.
Instruire personal:
Determinarea sensibilitatii la antibiotice a germenilor patogeni va fi efectuata numai de personal instruit de catre Seful de Departament, respectand
procedura si planul de instruire.
4.6.2.
Responsabilitati:
Asistentii de la Departamentul Recoltare:
- etichetare probe biologice
- asezarea in stative pe tipuri de recipiente de recoltare
- transporta probele biologice la Departamentul de Microbiologie
- verifica criteriile de acceptare ale probelori biologice: probe neidentificate/neetichetate corespunzator; tip de recipient de recoltare necorespunzator,
recipiente degradate
Asistentii de la Departamentul Microbiologie
- receptioneaza probele aduse de personalul de la Departamentul Recoltare
- verifica criteriile de acceptare ale probelor biologice: specimen intens contaminat bacterian; volum insuficient de proba, recipiente degradat
Medic de laborator:
- instruieste personalul
- supervizeaza personalul in curs de instruire
- intreprinde actiuni corective, preventive si propune imbunatatiri
- organizeaza activitatea in cadrul departamentului
- este responsabil de actualizarea procedurii
- verifica si valideaza buletinul de rezultate.
- adauga comentarii generale, daca este cazul.
- dispune repetarea unor determinari sau verificarea aparatelor, daca observa valori neconcordante
Sef Laborator:
- stabileste metoda de determinare
- aproba procedura de determinare
- stabileste intervalul de validare automata
- este responsabil de respectarea normelor de protectie a muncii
- organizeaza activitatea tehnica a laboratorului
- este responsabil de asigurarea calitatii rezultatelor
Manager Laborator:
- aproba procedura de determinare
- organizeaza activitatea intregului laboratorului
Responsabil cu Managementul Calitatii/Director Calitate:
- stabileste formatul procedurii
- verifica continutul procedurii
- efectueaza audituri interne
- este responsabil de tinerea sub control a procedurii

Cunoasterea si respectarea prezentei proceduri este obligatorie pentru tot personalul implicat in efectuarea antibiogramei in laboratorul Synevo
Medgidia
9/