Curs 8.

Proteine cu rol n transportul sau stocarea oxigenului

Se cunosc trei clase de proteine care transport sau stocheaz oxigenul:
familia hemoglobin (Hb) - mioglobin (Mb), hemocianinele (Hc) i
hemeritrinele (Hr). Hemoglobinele i hemeritrinele au n componen fier
iar hemocianinele cupru.
(Prefixul hem este legat de snge. Prefixul deoxi se refer la speciile fr
oxigen iar oxi la cele care au oxigenul coordinat. Prefixul met se
utilizeaz pentru formele oxidate inactive ale transportorului de oxigen.)
Hemoglobina i mioglobina
Hemoglobinele se ntlnesc la toate vertebratele (cu excepia unor peti
din zona antarctic), au fost izolate i din unele bacterii, leguminoase
(nodulii care fixeaz azotul), nevertebrate (inclusiv unele larve ale
insectelor), molute (melci) i de la aproape toi viermii din familia
anelidelor.
Corpul uman adult conine aproximativ 4 g de fier i din aceast cantitate
n jur de 3 g se gsesc sub form de hemoglobina, cantitate care este
meninut prin absorbia unei cantiti puin mai mari de 1 mg pe zi.
Eritrocitul uman conine 200-300 milioane de molecule Hb i are o via
de aproximativ 120 zile, dup care este eliminat din circulaie, iar
hemoglobina este catabolizat n splin, ficat i mduv. Fierul eliberat
este nglobat n feritin, proteina este catabolizat n aminoacizi iar
ligandul porfirinic n pigmeni biliari.
Structura molecular a Hb i Mb
Mioglobina (Mb) i hemoglobina (Hb) au fost printre primele proteine
caracterizate structural (Perutz, premiul Nobel 1966) i ambele conin ca
centru prostetic combinaia complex a fierului cu protoporfirina IX
(hemul b). Pentru ambele funcia depinde de fixarea reversibil a
dioxigenului dar rolul lor biologic este diferit, Mb stocheaz oxigenul n
celule n timp ce Hb transport oxigenul n plasma sanguin. Diferena
dintre Mb i Hb este aceea c n timp ce Mb este o specie monomer, Hb
este un tetramer.
Protoporfirina IX este ncapsulat ntr-un buzunar format din resturi de
amino acizi care conin grupri hidrofobe n proteina numit globin.
Aceste grupri blocheaz accesul moleculelor voluminoase la atomul de
fier i previn formarea speciilor dinucleare cu puni Fe3+-O2-Fe3+ care apar
prin oxidarea hemului n absena proteinei.
Ionul Fe(II) formeaz nc o legtura coordinativ cu azotul imidazolic al
unui rest de histidin proximal din globin. Pe o parte a hemului, opus

fa de histidina proximal, un alt rest de histidin cunoscut ca distal

controleaz accesul O2, CO, CN, S2O32sau NO n buzunarul de legare al
ligandului.
O
O
N

O2

Fe N
N
His

Fe

His

CO2H

CO2H

CO2H

CO2H

Hemoglobina

Oxihemoglobina

Mioglobina, prezent n esutul muscular, cu o greutate molecular de

aproximativ 17.000 Da este alctuit din hemul b i un lan polipeptidic
format din 153 resturi de aminoacizi fr grupri disulfur sau tiol, numit
i lan m. Acest lan polipeptidic are un grad mare de ordonare i anume
2/3 se gsete sub form de -helix (fig. 1).

(a)

(b)

Figura 1. Reprezentarea schematic a mioglobinei (a) i hemoglobinei (b)

Hemoglobina este o unitate tetramer cu o mas de 64.450 Da format
din patru uniti hem i cte dou lanuri peptidice i dispuse
tetraedric. Lanurile conin resturile a 141 aminoacizi n timp ce
lanurile au n componen resturi de la 146 aminoacizi.
Studiile de difracie cu raze X efectuate pe deoxi-Hb i deoxi-Mb au
indicat faptul c sunt semnificative modificrile care apar n interaciile
-NH3+....OCO- din interiorul i dintre lanurile polipeptidice numite puni
saline. Exist opt asemenea puni care se rup prin coordinarea dioxigenului
la fier.
2

n deoxi-Hb a asea poziie de coordinare a Fe(II) este orientat n

interiorul proteinei i blocat steric de o grupare salin. Prin coordinarea O2
de ctre prima unitate hem are loc ruperea punii saline care este asociat
cu o modificare conformaional a lantului proteic care afecteaz
urmtoarea unitate proteic, expune a asea poziie de coordinare a ionului
de fier din acest unitate, i aa mai departe. Acest fenomen se numete
cooperativitate ntre unitile hemului, adic dup ce o unitate a fixat
dioxigenul celelalte fixeaz mult mai rapid.
Forma oxi a Hb este cunoscut ca starea R (relaxat) n timp ce forma
deoxi ca starea T (tensionat).
Perutz a sugerat un mecanism care explic cooperarea celor patru grupri
heminice n Hb fundamentat pe ideea c o interacie ntre o molecul de
oxigen i o grupare hem poate afecta poziia lanului proteic ataat la el,
care la rndul ei afecteaz cellat lan proteic prin legturi de hidrogen, i
aa mai departe.
Cheia mecanismului indicat de Perutz este modificarea strii de spin a
ionului de fier in forma oxi-Hb compatativ cu deoxi-Hb.
n hemul deoxigenat ionul de Fe(II) are configuraie de tip spin maxim
(t2g4eg2), raza Fe(II) cu este de 0,78 iar lungimea legturii Fe-N trebuie s
fie ca urmare pentru hem de 2,18 . n interiorul protoporfirinei IX exist
un spaiu pentru o lungime a legturii de 2,00 i ca urmare fierul se gsete
cu aproximativ 0,8 deasupra planului macrociclului.

2+

Fe
sp. max.

2,82
2+

Fe
sp. min.
ciclu porfirinic

Deoxi Hb

1,97

Oxi Hb

Cnd oxigenul completeaz a asea poziie de coordinaie configuraia

devine de tip spin minim (t2g6) iar raza Fe(II) spin minim este cu 0,17
mai mic dect a Fe(II) spin maxim. Lungimea legturii Fe-N va fi prin
urmare aproximativ 2,00 , ca urmare Fe(II) spin minim se va potrivi cu
golul porfirinei i coordinarea O2 va determina deplasarea fierului n
planul macrociclului. Gruparea imidazolic a restului histidinic ataat la
Fe(II) trebuie s l urmeze i astfel structura teriar a lanului proteic din
care face parte va fi i ea drastic alterat, predispunnd cellalt hem s

reacioneze. Raportul constantelor succesive de fixarea a O 2 de ctre cele

patru uniti hem este 1:4:24:9. Cnd molecula de hemoglobin complet
saturat ajunge la esut are loc procesul invers. Pe msur ce fiecare
molecul de oxigen prsete HbO2, aceasta se rearanjeaz cu creterea
tendinei de a mpinge n afar moleculele de oxigen rmase.
Fixarea dioxigenului. Curbele de oxigenare
Natura legturii Fe-O2 nu este nc lmurit. Este n general acceptat c
O2 se coordineaz monodentat i legtura Fe-O2 are un caracter
considerabil de dubl legtur dar exist controverse legate de orientarea
O2 fa de planul hemului i de transferul de electroni de la Fe(II) la O2.
Studii cu raze X pe MbO2 au indicat un unghi de 120 ntre axa moleculei
de oxigen i planul hemului n timp ce n spectrul IR al HbO 2 apare o
banda care se poate atribui vibraiei de valen (O-O) pentru superoxid.
Ca urmare, una dintre ipoteze ia n considerare existena pentru HbO2 a
Fe3+ cu configuraie de tip spin minim i a anionului O2. Diamagnetismul
speciei se explic prin cuplarea electronilor Fe3+ cu cel al O2.

Figura 2. Curbele de saturare cu oxigen pentru mioglobin i hemoglobin

Oxigenarea reversibil a Hb i Mb prezint urmtoarele caracteristici (fig.

2):
- mioglobina are o afinitate de ~10 ori mai mare pentru oxigen
comparativ cu hemoglobina; acest lucru este justificat de funcia sa de
stocare a oxigenului n esutul muscular unde concentraia acestuia este
mic;
Mb + O2 MbO2

- constanta de echilibru pentru complexarea Mb cu O2 este dat de o

expresie simpl de forma:
KM

[MbO 2 ]
[Mb][O 2 ]

Forma hiperbolic pentru oxigenarea mioglobinei este tipic pentru

atingerea nivelului de saturaie chiar la o concentraie sczut a
oxigenului.
Hb + O2 HbO2
- constanta de echilibru pentru formarea HbO2 este oarecum mai
complicat fiind dat de o expresie de forma:
KH

[HbO 2 ]
[HbO 2 ]

n
[HbO 2 ][O 2 ]
[Hb][p o 2 ] n

Exponentul n (constanta Hill) are pentru hemoglobin valoarea de 2,8 i

rezult din faptul c o singur molecul de Hb poate accepta patru
molecule de O2, iar fixarea lor nu este independent. Curba de oxigenare
are o form sigmoid care este un indiciu al cooperativitii.
Legarea oxigenului la hem este dependent de pH. Sngele ncrcat cu
CO2 are un pH acid datorit hidratrii acestuia, reacie catalizat de
anhidraza carbonic:
CO2 + 2H2O HCO3 + H3O+
Protonul se poate lega n diverse zone ale globinei dar HCO3se leag la
gruparea aminic din poziia a lanului de globin cu formarea
anionului carbamat. Legarea acestora scade capacitatea de legare a
oxigenului care este pus n libertate n celul. Hemoglobina cu protonul i
HCO3 ataate la aceasta ajunge la plmni i ca urmare a concentraiei
mici de CO2 n capilarele pulmonare acetia sunt eliberai, are loc
procesul de deshidratare sub aciunea anhidrazei carbonice i CO2 este
eliberat. Eliberarea acestor ioni crete afinitate Hb pentru O2 care este
fixat la nivelul plmnilor. Acest control al Hb pentru legarea i eliberarea
O2 prin modificarea pH-ului este cunoscut sub denumirea de efect Bohr.