Lab 2 Biochimie

clinic
Explorarea metabolismului
lipidic

Clase de lipide serice

Colesterol

Esterificat
Neesterificat
Trigliceride
Fosfolipide
Acizi

grai liberi

Lipidele serice

Grup heterogen de compui chimici

Sunt insolubile in ap i solubile n solveni
organici
Rol
Energetic (TG, AGL)
Funcional (acizi biliari, hormoni steroizi, PGL,
leucotriene)
Structural (fosfolipide)

~ 15-20% din greutatea unui adult normal

conformat
Combinaii ale AG cu alcooli sau amine

Determinarea lipidelor

Se

poate face

Dozarea lipidelor totale sau a fraciunilor

de LP
Separarea LP

Lipide totale
Test

cu valoarea orientativ
VN: 400-800mg/dl
VC: dislipidemii primare,DZ,
mixedem, sdr. nefrotic, alcoolism
cronic, pancreatit acut
VS:hipertireoz, stri careniale,
infecii acute, anemii grave
Metod de determinare: fotometric

Colesterol total
Parametru important in etiologia
aterosclerozei
2/3 este esterificat
VN:

La adulti:
risc sczut 140 200mg/dl (3,6 5,1mmol/l)
limit de risc: 200 240 mg/dl (5,18 6,20 mmol/l)
risc crescut: peste 240 mg/dl (peste 6,2 mmol/l)

La copii:

risc sczut: < 170 mg/dl (< 4,40 mmol/l)

limita de risc: 170 200 mg/dl (4,40 5,16mmol/l)
risc crescut: peste 200 mg/dl (5,18 mmol/l)

Colesterol total

VC: obstrucii biliare, ciroz portal,

hepatite acute, sdr. nefrotic, pancreatit
cronic, DZ, hipotireoz,
hipercolesterolemie familial, dislipidemii
VS:hepatopatii grave, uremii, stri septice,
hipertireoz, boala Tangier(deficienta
familiala a alfalipoproteinelor-HDL), anemii,
macroglobulinemie Waldenstrm,
analfalipoproteinemie, strii careniale
Metod de determinare:
fotometric/enzimatic

Colesterol liber
(neesterificat)

VN: <75mg/dl

VC: obstrucii biliare, ciroz portal,

colangite, pancreatit acut,
hipercolesterolemie familial

VS: ca i colesterolul total

Metod de determinare: fotometric/enzimatic

Colesterol esterificat
VN:

60-100mg/dl

VC:

ca i colesterolul total

VS:

ciroz hepatic, stri septice

Metod

de determinare: fotometric
cuplat cu calcul matematic

Dozarea colesterolului total

Metoda enzimatic colorimetric

determinarea cantitativ specific a colesterolului
total

Esteri colesterol + H2O

colesterolesteraza colesterol liber+
acizi grai

Colesterol liber total+ O2 colesteroloxidaza 3colestenona + H2O2

2 H2O2+ fenol + 4-aminoantipirina (AAP)-peroxidaza
chinonimina(rou)
Incubare 5 minute la 37C (stabil 1 h)
Se citete la =546 nm Es i Ep

Dozarea colesterolului total

Ep
Colesterol total =
x Cs
Es
UM= mmol/l sau mg/dl
Transformarea mg/dl in mmol/l
Mmol/l = mg/dl x 10/M colesterolului
M colesterol = 386

Fosfolipide
VN:

160-280mg/dl

VC:ciroz
VC:

biliar, obstrucii biliare,

sdr.nefrotic, DZ, hipercolesterolemie
familial

Metod de determinare:
fotometric/enzimatic

Trigliceridele

Valori normale:

risc sczut sub 150 mg/dl (1,70 mmol/l)

risc mediu 150 200 mg/dl (1,70 2,25 mmol/l)
risc crescut 200 500mg/dl (2,25 5,6mmol/l)
risc foarte crescut peste 500 mg/dl (peste 5,6
mmol/l)

VC: HLP tip I,V; dislipidemii, pancreatit, sdr.

nefrotic, microvasculite, DZ decompensat,
hipotireoz/mixedem
VS: stri careniale, hipertireoz, lipodistrofii,
anemii grave
Metod de determinare: enzimatic
/fotometric

Acizi grai liberi (AGL,FFA)

substrat energetic eliberat din esuturile de

depozit
excesul transportat n plasm de albumin
VN: <20mg/dl
VC: vasculite, IMA, infarct pulmonar acut,
pancreatit acut, pneumonii, colangite,
colecistit, peritonit
VS:stri
careniale
VS:
Metod de determinare: enzimatic
/fotometric/ electroforetic

Lipoproteinele

agregate macromoleculare complexe,

solubile n ap
autosamblarea necovalent a diverselor
categorii de lipide cu proteine
specifice(apoproteine-ApoP)
Rol:
1.transport moleculele de lipide de la locul de
absorbie (intestinul subire) sau sintez
(ficatul) la locurile de utilizare i stocare
(esuturile periferice)
2. reglatori ai metabolismului lipidic

Separarea lipoporteinelor

Metoda de referin
Ultracentrifugarea
probe centrifugate pn la 18 ore la 10C, 40 000 rpm
chilomicronii, VLDL, LDL plutesc la suprafaa tubului
HDL, proteinele plasmatice sedimenteaz la baza
tubului
permite separarea componentelor i estimarea
consecutiv a fiecrei fraiuni de colesterol

!!! Nu se utilizeaz de rutin n laboratoare

Timpul ndelungat de prelucrare
Costuri ridicate

Separarea LP prin ELFO

n funcie de sarcina lor

electric, n cmp electric
lipoproteinele vor migra,
producndu-se o separare
clar (n ordinea scderii
mobilitii) acestora n 4
fraciuni:

-LP: HDL
pre-beta-LP: VLDL
beta-lipoproteine: LDL
chilomicroni: START

Valori normale

Alfa: 20-30%
pre-Beta: 5-17%
Beta: 50-70%
Chilomicroni: 0-1%

1-lipoproteinele (LP cu
densitate mare, HDL)

transportorul "colesterolului bun", antiaterogen

Metod:
procentaj relativ din lipidogram n gel de agaroz
determinare indirect enzimatica colesterolului din HDL
(dup blocarea selectiv a LP cu ApoB100)

Valori normale
brbai: 20-25% sau >35 mg/dL
femei: 25-30%sau >45 mg/dL

Valori patologice/sczute:
primar: boala Tangier (epurare accelerat a LP cu ApoAII)
secundar: fumtori, sedentari/obezi, femei
postmenopauz, alcoolici

-lipoproteinele (cu
densitate mic, LDL)

Principalul transportor de colesterol esterificat din

organism, cea mai aterogen dintre LP
Metod:
procentaj relativ din lipidogram
determinare direct (specific/imunologic)
determinare din calcul (formula Friedewald) cu ApoB100

Valori normale:

brbai: 60-70%sau <155mg/dL

femei: 50-70% sau <155 mg/dL

Valori patologice/crescute (dislipidemiile cu

hipercolesterolemie): hipercolesterolemia
familial sau cea poligenic, hipotiroidie, afeciuni
hepato-biliare, tratamente hormonale
(anticonceptive, corticosteroizi

Dozarea LDL

Ecuaia Friedewald
LDL=CT-HDL-(TG/5)
Ecuaia corect doar atunci cnd:

nivelul TG <400mg/dl (4,5 mmol/l)

nu sunt prezeni chilomicroni
proba nu conine beta-VLDL
necesit probe recoltate dup o perioad de post

!!! Estimarea LDL n afara acestori

limitri duce la subestimri
semificative ale acestuia.

Apoproteina AI (ApoAI)
component proteic majoritar a HDL
factor de prognostic pozitiv n
ateroscleroz, mai important dect
HDL
Metoda: nefelometric
Valori normale:

brbai: 100-200 mg/dL

femei: 110-225 mg/dL

Apoproteina B (ApoB)
component

proteic unic a LDL

factor de prognostic negativ n
ateroscleroz, chiar mai important
dect LDL
Metoda: nefelometric
Valori normale:
brbai: 65-135 mg/dL
femei: 60-115 mg/dL

Lipoproteina X (LP-X)

lipoprotein patologic, discoidal, coninnd

lipide biliare, bogat n fosfolipide, colesterol
liber i diferite apoproteine
Metod:
electroforetic (migreaz catodic n gel de agaroz)
imunologic

Valori:
normal absent n serul persoanelor sntoase
prezent exclusiv n serul bolnavilor cu colestaz

Lipoproteina(a)[LP(a)]
factor de risc independent pentru
boala ateroclerotic
structur identic cu LDL+Apo(a)
similitudine structuralcu
plasminogenul
factor de risc lipidic i trombotic
Metod: electroforetic/nefelometric
Valori normale: <30 mg/dL

Tulburrile metabolismului
lipidic

Dislipidemiille - stri nsoite de modificri

cantitative/calitative ale lipoproteinelor
Hiperlipidemiile

stri patologice caracterizate prin cretere

concentraiei TG i/sau colesterolului peste
limitele acceptate ca normale pentru vrsta, sexul
i starea de sntate a persoanei

Hipercolesterolemia izolat:LDL
Hipertrigliceridemia: VLDL, mai rar
Chilomicroni
Hiperlipidemia combinat: LDL,VLDL,
mult mai rar IDL

Clasificarea fenotipic a
hiperlipoproteinemiilor
Tipul

Chilomicroni

VLDL

IDL

LDL

+++

IIa

++

IIb

++

++

III

+/-

++

IV

++

++

++

Clasificarea HLP prin pastrarea

serului la 4C/12h

Diagnosticul DLP

I-a etap: Colesterol total + TG

II-a etap:
analiza Colesteroluluidinlipoproteineleserice: LDL
i HDL

III-a etap:
Lipidograma (determinarea proporiei fraciunilor
lipoproteice)
Diagnosticul diferenial al dislipidemiilor mixte
(tipurile IIb, III i V)
Identificarea prezenei n cantitate crescutLp(a)