Buletinul AM. tiinele vieii. Nr.

3(318) 2012

Microbiologia i Biotehnologia

MICROBIOLOGIA I BIOTEHNOLOGIA
CARACTERELE FENOTIPICE I COMPOZIIA BIOCHIMIC A
TULPINILOR DE DROJDII - PRODUCTOARE DE -GLUCANI
Usati Agaa, Chiselia Natalia, Molodoi Elena, Efremova Nadejda,
Chiselia Oleg, Borisova Tamara, Fulga Ludmila.
Institutul de Microbiologie i Biotehnologie al Academiei de tiine a Moldovei
Rezumat
Sunt descrise caracterele fenotipice i compoziia biochimic a tulpinilor de drojdie
Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 i Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21.
Prezena n componena drojdiilor a complexului de substane de natur proteic,
bogat n aminoacizi eseniali i cu activitate nalt a enzimelor antioxidante, precum i
a carbohirailor, preponderent al -glucanilor, permite a recomanda aceste tulpini spre
utilizare n biotehnologie. Rezultatele sunt importante n descrierea standard a speciilor
propuse ca obiect de valoare industrial.
Cuvinte cheie: Saccharomyces cerevisiae - -glucani - caractere fenotipice - compoziia
biochimic - carbohidrai.
Depus la redacie 27 martie 2012
--------------------------------------------------------------------------------------------------------Adresa pentru coresponden: Usati Agaa, Institutul de Microbiologie i Biotehnologie
al Academiei de tiine a Moldovei, str.Academiei, 1, MD 2028 Chiinu, Republica
Moldova, e-mail: usatyi.agaa@gmail.com, (+373 22)73-80-13

Introducere
Microorganismele cunoscute sub denumirea de drojdii prezint un grup complex
i eterogen n care sunt ncadrai taxoni micotici cu caractere relativ intermediare
ntre organismele procariote i eucariote [16]. Studiile efectuate asupra drojdiilor sunt
importante nu numai prin aplicaiile lor practice n industrie, dar i prin valoarea lor
ca model experimental asupra crora i-au ndreptat atenia cercettorii din diverse
specialiti citologie, microbiologie, biotehnologie, biochimie, biologie celular,
genetic [ 15,22].
Peretele celular este o structur extracelular cu o compoziie variabil la diferite
grupuri taxonomice. ns, nectnd la diferene, aceast structur extracelular
indiferent de proveniena ei prezint un ansamblu proteico-polizaharidic, care
include n calitate de monomeri glucoza, manoza, galactoza, xiloza, arabinoza,
glucozamina i ali hidrai de carbon. Componena polizaharidic a diferitor exponeni
ai drojdiilor genului Saccharomyces este distinct, ns componentele de baz ale
peretelui celular pot repartizate n dou grupe. Prima grup este reprezentat de
aa componente structurale ca poliaminozaharide (chitin, chitozan) i glucani care
au -(1-3), -(1-4), -(1-6) legturi, iar cea de a doua grup include mannoproteine,
galactomannoproteine, etc. [12].
n timpul de fa produsele biotehnologiilor levuriene ptrund tot mai mult n
diferite domenii ale economiei, utilizndu-se n producerea buturilor alcoolice i

139

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(318) 2012

Microbiologia i Biotehnologia

nealcoolice, produselor alimentare, biocombustibilului, chimicalelor, enzimelor,

suplimentelor furajere, preparatelor medicale, n agricultur la rezolvarea multor
probleme ecologice [23]. innd cont de sigurana sntii publice, interes comercial
prezint polizaharidele peretelui celular al drojdiilor Saccharomyces cerevisiae,
acceptate spre utilizare pe larg. Caracteristicile importante a -glucanilor izolai din
pereii celulari, cum ar activitatea imunomodulatoare i imunostimulatoare [6,28],
anticancerigen [29,30], antiviral i antibacterian [24], sunt promitoare n contextul
aplicrii n industria farmaceutic, alimentar, cosmetic.
Analiza domeniilor de utilizare a carbohidrailor de origine microbian demonstreaz
importana studiilor ce pun n eviden proprietile tehnologice a tulpinilor selectate
pentru ulterioara utilizare la producerea industrial. Oportune n acest context apar
investigaiile menite s elucideze biologia i compoziia biochimic a drojdiilor,
cunotine ce pot promova idei de valoricare ecient a potenialului biosintetic al
tulpinilor productoare de -glucani.
Scopul studiului dat const n descrierea caracterelor fenotipice i elucidarea
compoziiei biochimice a tulpinilor de drojdii selectate ca activi productori de
-glucani, rezultate necesare pentru a completa informaiile disponibile n prezent.
Materiale i metode de cercetare
Tulpini. Au fost cercetate tulpinile de drojdii Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y20 i Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21 selectate anterior ca surse valoroase de
-glucani [7,27]. Caracterele morfologice, culturale i ziologice a tulpinilor s-au
stabilit conform [4,18].
Medii de cultur. S-a utilizat mediul pentru nsmnare must de bere [3], mediile
de fermentare YPG (yeast-peptone-glucoze), (w/v), (g/L ): glucoz 20, pepton -20,
extract de drojdie 10 [2], Rieder, (w/v), (g/L ): 30,0 glucoz; 3,0 (NH4)2SO4; 0,7
MgSO47H2O; 0,5 NaCl; 0,4 Ca(NO3)2; 1,0 KH2PO4, 10 ml autolizat de drojdii, ap
potabil 1l, pH- 5,0-6,0 [3 ].
Condiii de fermentare. Cultivarea tulpinilor de drojdii s-a realizat n baloane
Erlenmayer cu capacitate de 1 L ce conine 0,2 L mediu de cultur, pe agitator
rotativ (200 r.p.m.), la temperatura de +22...250 C, aeraie n limitele 7-8 mg/L,
timp de 96 ore.
Metodele de investigaie. Biomasa drojdiilor s-a determinat gravimetric
[13]. Proteina s-a determinat spectrofotometric conform metodei Lowry [21].
Carbohidraii totali n biomasa de drojdie s-au determinat la spectrofotometrul T60
VIS Spectrophotometer, la lungimea de und 620 nm cu utilizarea reactivului antron
i D-glucozei n calitate de standard [9,10]. Determinarea coninutului de -glucani i
mannoproteine s-a realizat gravimetric conform procedeelor [25,32]. Determinarea
lipidelor n biomasa de drojdii s-a efectuat prin metoda propus de Bligh, Dyer i
preluat de Kates [17], adaptat la obiectul de studiu [26]. Componena aminoacizilor
s-a identicat cu ajutorul analizatorului AAA-339 Microtehnica (Cehia) utiliznd
metoda clasic [33]. Determinarea activitii catalazei s-a realizat conform metodei
descrise [1]. Determinarea activitii superoxiddismutazei s-a realizat conform metodei
descrise [5]. Analiza statistic a rezultatelor s-a efectuat compiuterizat cu calcularea
erorilor standard pentru valorile relative i medii, cu ajutorul setului de programe
Statistica 7.

140

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(318) 2012

Microbiologia i Biotehnologia

Rezultate i discuii
Drojdiile sunt folosite n mod frecvent pentru explicarea sau conrmarea unor
aspecte fundamentale, n special, a celor care delimiteaz celula eucariot de cea
procariot. Potenialul multiplu pe care l prezint drojdiile condiioneaz folosirea lor
pentru descifrarea multor aspecte legate de originea, evoluia, compoziia chimic,
ultrastructura i rolul ziologic al unor organite celulare i la rezolvarea multor probleme
de biologie i genetic molecular [31].
Un element important n dirijarea proceselor metabolice este cunoaterea
caracterelor morfo-culturale i ziologo-biochimice ale tulpinii cu statut de productor.
Cercetrile efectuate asupra tulpinii Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 au
evideniat c la cultivarea submers pe mediul YPG sau Rieder, se ntlnesc celule
ovale care nmuguresc, solitare, cultura formeaz asce, ascospori rotunzi, neeliberai,
netezi. Mrimea celulelor constituie 5x10 . Tipul respiraiei este aerob, la limita de
separare dintre suprafaa mediului lichid i peretele vasului se formeaz un inel, pe
fundul vasului se formeaz un depozit dens mucoid (mediul Rieder) sau poros (mediul
YPG), de culoare crem deschis. Cultura nu este patogen.
Aspectul coloniilor examinat pe must de mal, YPG i Rieder indic colonii
S-form, uneori R-form (mediul YPG) cu prol convex, cu gurgui roz (pe mediul
must de mal), lucioase, diametrul coloniilor variat 1-2 ...3-6 mm. Pigmentaia alb sau
crem-deschis, consisten pstoas/mucoid (g. 1).

Figura 1. Aspectul coloniilor Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 pe diferite medii

de cultur. a) mediul must de malt; b) mediul YPG; c) mediul Rieder

Din caracterele ziologo-biochimice menionm capacitatea de fermentare, cultura

metabolizeaz glucoza, maltoza, zaharoza, fructoza, galactoza, ranoza, glicerina,
alcoolul etilic. Nu asimileaz L-ramnoza, L- inozitolul, D-manitolul, D-lactoza,
D-celobioza, D-sorbitolul i dulcita. Din gama surselor de azot drojdia asimileaz
diferite forme de compui sulfatul de amoniu, fosfatul de amoniu. Nu asimileaz
nitraii, ureea, lizina.
Temperatura optim de dezvoltare a tulpinii de drojdie este de +15...200C, pH-ul
optim este 5,5-6,5.
Coninutul de biomas uscat acumulat de tulpina Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y-20 variaz de la 2,9 g/L (mediul Rieder) pn la 4,3 g/L (mediul YPG),
n cadrul investigaiilor asupra tulpinii Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y- 21 s-a
stabilit c la cultivare pe medii lichide se ntlnesc celule rotunde care nmuguresc,
solitare, cultura nu formeaz pseudomiceliu, este ascosporogen, ascospori rotunzi,
neeliberai, netezi. La limita de separare dintre suprafaa mediului lichid i peretele

141

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(318) 2012

Microbiologia i Biotehnologia

MICROBIOLOGIA I BIOTEHNOLOGIA
CARACTERELE FENOTIPICE I COMPOZIIA BIOCHIMIC A
TULPINILOR DE DROJDII - PRODUCTOARE DE -GLUCANI
Usati Agaa, Chiselia Natalia, Molodoi Elena, Efremova Nadejda,
Chiselia Oleg, Borisova Tamara, Fulga Ludmila.
Institutul de Microbiologie i Biotehnologie al Academiei de tiine a Moldovei
Rezumat
Sunt descrise caracterele fenotipice i compoziia biochimic a tulpinilor de drojdie
Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 i Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21.
Prezena n componena drojdiilor a complexului de substane de natur proteic,
bogat n aminoacizi eseniali i cu activitate nalt a enzimelor antioxidante, precum i
a carbohirailor, preponderent al -glucanilor, permite a recomanda aceste tulpini spre
utilizare n biotehnologie. Rezultatele sunt importante n descrierea standard a speciilor
propuse ca obiect de valoare industrial.
Cuvinte cheie: Saccharomyces cerevisiae - -glucani - caractere fenotipice - compoziia
biochimic - carbohidrai.
Depus la redacie 27 martie 2012
--------------------------------------------------------------------------------------------------------Adresa pentru coresponden: Usati Agaa, Institutul de Microbiologie i Biotehnologie
al Academiei de tiine a Moldovei, str.Academiei, 1, MD 2028 Chiinu, Republica
Moldova, e-mail: usatyi.agaa@gmail.com, (+373 22)73-80-13

Introducere
Microorganismele cunoscute sub denumirea de drojdii prezint un grup complex
i eterogen n care sunt ncadrai taxoni micotici cu caractere relativ intermediare
ntre organismele procariote i eucariote [16]. Studiile efectuate asupra drojdiilor sunt
importante nu numai prin aplicaiile lor practice n industrie, dar i prin valoarea lor
ca model experimental asupra crora i-au ndreptat atenia cercettorii din diverse
specialiti citologie, microbiologie, biotehnologie, biochimie, biologie celular,
genetic [ 15,22].
Peretele celular este o structur extracelular cu o compoziie variabil la diferite
grupuri taxonomice. ns, nectnd la diferene, aceast structur extracelular
indiferent de proveniena ei prezint un ansamblu proteico-polizaharidic, care
include n calitate de monomeri glucoza, manoza, galactoza, xiloza, arabinoza,
glucozamina i ali hidrai de carbon. Componena polizaharidic a diferitor exponeni
ai drojdiilor genului Saccharomyces este distinct, ns componentele de baz ale
peretelui celular pot repartizate n dou grupe. Prima grup este reprezentat de
aa componente structurale ca poliaminozaharide (chitin, chitozan) i glucani care
au -(1-3), -(1-4), -(1-6) legturi, iar cea de a doua grup include mannoproteine,
galactomannoproteine, etc. [12].
n timpul de fa produsele biotehnologiilor levuriene ptrund tot mai mult n
diferite domenii ale economiei, utilizndu-se n producerea buturilor alcoolice i

139

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(318) 2012

Microbiologia i Biotehnologia

nealcoolice, produselor alimentare, biocombustibilului, chimicalelor, enzimelor,

suplimentelor furajere, preparatelor medicale, n agricultur la rezolvarea multor
probleme ecologice [23]. innd cont de sigurana sntii publice, interes comercial
prezint polizaharidele peretelui celular al drojdiilor Saccharomyces cerevisiae,
acceptate spre utilizare pe larg. Caracteristicile importante a -glucanilor izolai din
pereii celulari, cum ar activitatea imunomodulatoare i imunostimulatoare [6,28],
anticancerigen [29,30], antiviral i antibacterian [24], sunt promitoare n contextul
aplicrii n industria farmaceutic, alimentar, cosmetic.
Analiza domeniilor de utilizare a carbohidrailor de origine microbian demonstreaz
importana studiilor ce pun n eviden proprietile tehnologice a tulpinilor selectate
pentru ulterioara utilizare la producerea industrial. Oportune n acest context apar
investigaiile menite s elucideze biologia i compoziia biochimic a drojdiilor,
cunotine ce pot promova idei de valoricare ecient a potenialului biosintetic al
tulpinilor productoare de -glucani.
Scopul studiului dat const n descrierea caracterelor fenotipice i elucidarea
compoziiei biochimice a tulpinilor de drojdii selectate ca activi productori de
-glucani, rezultate necesare pentru a completa informaiile disponibile n prezent.
Materiale i metode de cercetare
Tulpini. Au fost cercetate tulpinile de drojdii Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y20 i Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21 selectate anterior ca surse valoroase de
-glucani [7,27]. Caracterele morfologice, culturale i ziologice a tulpinilor s-au
stabilit conform [4,18].
Medii de cultur. S-a utilizat mediul pentru nsmnare must de bere [3], mediile
de fermentare YPG (yeast-peptone-glucoze), (w/v), (g/L ): glucoz 20, pepton -20,
extract de drojdie 10 [2], Rieder, (w/v), (g/L ): 30,0 glucoz; 3,0 (NH4)2SO4; 0,7
MgSO47H2O; 0,5 NaCl; 0,4 Ca(NO3)2; 1,0 KH2PO4, 10 ml autolizat de drojdii, ap
potabil 1l, pH- 5,0-6,0 [3 ].
Condiii de fermentare. Cultivarea tulpinilor de drojdii s-a realizat n baloane
Erlenmayer cu capacitate de 1 L ce conine 0,2 L mediu de cultur, pe agitator
rotativ (200 r.p.m.), la temperatura de +22...250 C, aeraie n limitele 7-8 mg/L,
timp de 96 ore.
Metodele de investigaie. Biomasa drojdiilor s-a determinat gravimetric
[13]. Proteina s-a determinat spectrofotometric conform metodei Lowry [21].
Carbohidraii totali n biomasa de drojdie s-au determinat la spectrofotometrul T60
VIS Spectrophotometer, la lungimea de und 620 nm cu utilizarea reactivului antron
i D-glucozei n calitate de standard [9,10]. Determinarea coninutului de -glucani i
mannoproteine s-a realizat gravimetric conform procedeelor [25,32]. Determinarea
lipidelor n biomasa de drojdii s-a efectuat prin metoda propus de Bligh, Dyer i
preluat de Kates [17], adaptat la obiectul de studiu [26]. Componena aminoacizilor
s-a identicat cu ajutorul analizatorului AAA-339 Microtehnica (Cehia) utiliznd
metoda clasic [33]. Determinarea activitii catalazei s-a realizat conform metodei
descrise [1]. Determinarea activitii superoxiddismutazei s-a realizat conform metodei
descrise [5]. Analiza statistic a rezultatelor s-a efectuat compiuterizat cu calcularea
erorilor standard pentru valorile relative i medii, cu ajutorul setului de programe
Statistica 7.

140

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(318) 2012

Microbiologia i Biotehnologia

Rezultate i discuii
Drojdiile sunt folosite n mod frecvent pentru explicarea sau conrmarea unor
aspecte fundamentale, n special, a celor care delimiteaz celula eucariot de cea
procariot. Potenialul multiplu pe care l prezint drojdiile condiioneaz folosirea lor
pentru descifrarea multor aspecte legate de originea, evoluia, compoziia chimic,
ultrastructura i rolul ziologic al unor organite celulare i la rezolvarea multor probleme
de biologie i genetic molecular [31].
Un element important n dirijarea proceselor metabolice este cunoaterea
caracterelor morfo-culturale i ziologo-biochimice ale tulpinii cu statut de productor.
Cercetrile efectuate asupra tulpinii Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 au
evideniat c la cultivarea submers pe mediul YPG sau Rieder, se ntlnesc celule
ovale care nmuguresc, solitare, cultura formeaz asce, ascospori rotunzi, neeliberai,
netezi. Mrimea celulelor constituie 5x10 . Tipul respiraiei este aerob, la limita de
separare dintre suprafaa mediului lichid i peretele vasului se formeaz un inel, pe
fundul vasului se formeaz un depozit dens mucoid (mediul Rieder) sau poros (mediul
YPG), de culoare crem deschis. Cultura nu este patogen.
Aspectul coloniilor examinat pe must de mal, YPG i Rieder indic colonii
S-form, uneori R-form (mediul YPG) cu prol convex, cu gurgui roz (pe mediul
must de mal), lucioase, diametrul coloniilor variat 1-2 ...3-6 mm. Pigmentaia alb sau
crem-deschis, consisten pstoas/mucoid (g. 1).

Figura 1. Aspectul coloniilor Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 pe diferite medii

de cultur. a) mediul must de malt; b) mediul YPG; c) mediul Rieder

Din caracterele ziologo-biochimice menionm capacitatea de fermentare, cultura

metabolizeaz glucoza, maltoza, zaharoza, fructoza, galactoza, ranoza, glicerina,
alcoolul etilic. Nu asimileaz L-ramnoza, L- inozitolul, D-manitolul, D-lactoza,
D-celobioza, D-sorbitolul i dulcita. Din gama surselor de azot drojdia asimileaz
diferite forme de compui sulfatul de amoniu, fosfatul de amoniu. Nu asimileaz
nitraii, ureea, lizina.
Temperatura optim de dezvoltare a tulpinii de drojdie este de +15...200C, pH-ul
optim este 5,5-6,5.
Coninutul de biomas uscat acumulat de tulpina Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y-20 variaz de la 2,9 g/L (mediul Rieder) pn la 4,3 g/L (mediul YPG),
n cadrul investigaiilor asupra tulpinii Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y- 21 s-a
stabilit c la cultivare pe medii lichide se ntlnesc celule rotunde care nmuguresc,
solitare, cultura nu formeaz pseudomiceliu, este ascosporogen, ascospori rotunzi,
neeliberai, netezi. La limita de separare dintre suprafaa mediului lichid i peretele

141

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(318) 2012

Microbiologia i Biotehnologia

vasului se formeaz un inel, pe fundul vasului se formeaz un depozit dens mucoid de

culoare crem deschis.
Aspectul coloniilor examinat pe must de mal, YPG i Rieder indic colonii
S-form, cu prol convex, lucioase, diametrul coloniei 2...4 mm. Pigmentaia albcrem, centrul roz, consisten pstoas (g. 2).

Figura 2. Aspectul coloniilor Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21 pe diferite medii

de cultur. a) mediul must de malt; b) mediul YPG; c) mediul Rieder

Din caracterele ziologo-biochimice a tulpinii Saccharomyces cerevisiae

CNMN-Y- 21 menionm capacitatea de fermentare, activ sunt metabolizate glucoza,
maltoza, zaharoza, fructoza, galactoza, ranoza, glicerina, alcoolul etilic. Nu asimileaz
L-ramnoza, L-inozitolul, D-manitolul, D-lactoza, D-celobioza, D-sorbitolul i dulcita.
Din gama surselor de azot drojdia asimileaz diferite forme de compui sulfatul de
amoniu, fosfatul de amoniu. Nu asimileaz nitraii, urea, lizina.
Temperatura optim de dezvoltare a tulpinii de drojdie este de +15...200C, pH-ul
optim este 4,5-5,5.
Tulpina Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y- 21, cultivat n profunzime,
acumuleaz 2,7 ... 4,5 g/L biomas uscat (mediul Rieder, respectiv mediul YPG).
Celula drojdiilor, similar cu cea a eucariotelor vegetale, are dou nveliuri peretele
celular i plasmolema (membrana celular) care, dei se difereniaz clar unul de
altul din punct de vedere zic, chimic i arhitectural, ndeplinesc funcii, n bun parte,
asemntoare sau complementare. Proprietile de protecie, reglatoare, informaionale
sunt rezultatul cooperrii funcionale ntre aceste dou structuri de suprafa. Peretele
celular ndeplinete funcii importante pentru celul: regleaz nivelul secreiilor, are rol
homeostatic i este elementul indispensabil n meninerea integritii i duritii celulei.
Cercetrile asupra peretelui celular al drojdiilor au relevat att unitatea, ct i diversitatea
biochimic a acestuia. Unitatea este asigurat de prezena a trei componente majore:
glucani, mannoproteine i chitin, care mpreun reprezint 60 80% din substana
uscat a peretelui [20]. Diversitatea este consecina modicrii raporturilor cantitative
i structurii particulare a unor componente chimice parietale. Variaiile biochimice pot
aprea la aceeai tulpin n funcie de condiiile de cultivare i etapa ciclului de via
[8,11].
Cercetrile noastre asupra compoziiei chimice a speciilor de drojdii productori
de -glucani au evideniat un coninut moderat de protein 28,74....31,92 % BAU
pentru tulpina Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y- 20 i 28,15...29,80 % pentru
Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21 (tab. 1). Analiza biochimic a artat c n
biomasa uscat a ambelor tulpini de drojdie se conin n medie 7,1 ...7,6 % lipide.

142

Microbiologia i Biotehnologia

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(318) 2012

Carbohidraii totali determinai la tulpina Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 variaz

n limitele a 31,02 % (mediul YPG) i 33,96 (mediul Rieder). Pentru Saccharomyces
cerevisiae CNMN-Y-21 valorile carbohidrailor totali variaz, n dependen de mediu
de cultivare, de la 29,82% pn la 35,64% s.u. (tab.1). Conform datelor din literatura
de specialitate carbohidraii totali, la unele tulpini de drojdii constituie pn la 44 % din
substana uscat a peretelui celular [25].
Tabelul 1. Coninutul de proteine, lipide i carbohidrai la tulpinile Saccharomyces
cerevisiae CNMN-Y-20 i Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21
Componente biochimice

Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y-20

Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y-21

Mediul YPG

Mediul Rieder

Mediul YPG

Mediul Rieder

Proteine, % S.U.

28,740,41

31,920,40

28,150,34

29,800,35

Lipide % din S.U.

7,40,31

7,1 0,25

7,60,35

7,620,18

Carbohidrai totali
% din S.U.

31,021,31

33, 961,04

29, 82 1,15

35,642,2

Studiul asupra valorii biologice a proteinei a relevat pentru ambele tulpini de

drojdii coninut nalt al aminoacizilor eseniali - valin, leucin, izoleucin, triptofan,
fenilalanin, metionin, lizin, treonin (Fig.3). n total au fost identicai 21
aminoacizi.
Un rol deosebit n protecia antioxidativ a proteinelor revine enzimelor
superoxiddismutazei i catalazei prin prentmpinarea oxidrii grupelor tiolice de ctre
speciile reactive de oxigen. Din datele experimentale obinute urmeaz c la tulpina
Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20, la cultivare pe mediile nutritive cercetate,
activitatea catalazei constituie 2249...2468 U/mg de protein, iar superoxiddismutazei
119 ....135 U/mg de protein. Pentru tulpina Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21,
catalaza variaz n diapazonul 2051... 2424 U/mg de protein, iar superoxiddismutaza
103...135 U/mg de protein (tab.2). Datele obinute demonstreaz c
tulpinile
sunt capabile s serveasc ca surs important de protein alimentar cu activitate
antioxidant nalt.
Din principiile bioactive valoroase des utilizate n industriile alimentar, cosmetic,
farmaceutic fac parte componentele de baz ale peretelui celular -glucanii i
mannoproteinele, sintetizate preponderent de ctre drojdiile genului Saccharomyces.
Conform studiului dat, tulpina Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 sintetizez
cantiti importante de -glucani, cca 15,55... 18,29 % (tab. 3). Pentru tulpina
Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21 coninutul de -glucani constituie 15,52 %
(mediul YPG) i 20,59 % (mediul Rieder).
Pentru ambele tulpini de drojdii s-au remarcat valori importante de mannoproteine.
Specice pentru tulpina Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 sunt cantitile ce
variaz n limitele 5,91...7,47% din S.U., iar pentru tulpina Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y-21 - 8,03 ....10,1% din S.U. (tab.3). n literatura de specialitate se indic
prezena pn la 10,43% de mannoproteine n biomasa uscat specice tulpini
Saccharomyces cerevisiae [14] i 12- 13% -glucani [ 2,19].

143

Microbiologia i Biotehnologia

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(318) 2012

Figura 3. Coninutul de aminoacizi eseniali n proteina drojdiilor Saccharomyces

cerevisiae CNMN-Y-20 i Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21.
Tabelul 2. Activitatea catalazei i superoxiddismutazei la tulpinile de Saccharomyces
cerevisiae CNMN-Y-20 i Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21
Enzime

Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y-20

Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y-21

Mediul YPG

Mediul Rieder

Mediul YPG

Mediul Rieder

Catalaza, U/mg de
protein

246882

2249102

242463

205183

Superoxiddismutaza,
U/mg de protein

1354,3

1197,50

1356,58

1039,56

144

Microbiologia i Biotehnologia

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(318) 2012

Tabelul 3. Coninutul de -glucani i mannoproteine la tulpinile Saccharomyces

cerevisiae CNMN-Y-20 i Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21.
Polizaharide

Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y- 20

Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y- 21

Mediul YPG

Mediul Rieder

Mediul YPG

Mediul Rieder

-glucani, % S.U.

15,550,96

18,290,57

15,520,93

20,591,12

Mannoproteine, % S.U.

5,910,48

7,470,51

8,030,25

10,10,11

Prin urmare, investigaiile efectuate asupra caracterelor fenotipice a tulpinilor

Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 i Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21
precizeaz trsturile ziologice i ofer date semnicative taxonomice. Acumularea
datelor privind biologia ecrei tulpini de drojdie permite asigurarea proceselor
fermentative, astfel mbuntind eciena tehnologiilor de producere a compuilor
bioactivi, cum ar n cazul nostru, producia de -glucani.
Realizarea studiilor comparative a compoziiei biochimice a tulpinilor
Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 i Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21
conrm rezultatele trecute n revist de ali autori. Prezena la tulpinile n studiu
a cantitilor importante de polizaharide atest perspectiva utilizrii lor n calitate de
obiecte biotehnologice n special ca productori activi de glucani. Datele prezint
valoare teoretic i practic pentru dirijarea activitii biosintetice a tulpinilor i ne
conduc spre concluzia necesitii continurii cercetrilor privind elucidarea cilor de
stimulare a biosintezei polizaharidelor, n particular a -glucanilor.
Concluzii
1. Caracterele fenotipice specice tulpinilor de drojdii Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y-20 i Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21 sunt importante n descrierea
standard a speciilor propuse ca obiect biotehnologic de valoare industrial.
2.
Compoziia biochimic a Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 i
Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-21 variaz n limite largi i se evideniaz printrun coninut echilibrat de proteine 28,15...31,92%, carbohidrai 29,82...35,64%, lipide
7,1...7,62% din biomasa uscat. Tulpinile selectate manifest activitate antioxidant
nalt: activitatea catalazei constituie 2051...2468 U/mg protein, a superoxiddismutazei
103...135 U/mg protein.
3. Complexul polizaharidic constituie componenta de baz a peretelui celular
al tulpinilor de drojdie Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 i Saccharomyces
cerevisiae CNMN-Y-21, exprimat prin prezena a 15,52... 20,59 % la s.u. a -glucanilor
i 5,91... 10,1 % la s.u. a mannoproteinelor. Culturile se propun a incluse n lista
microorganismelor cu potenial biotehnologic pentru producerea -glucanilor.
Bibliograa
1. Aebi H. Catalase in Vitro.//n: Methods in Enzymology. 1984, no. 105,121-126.
2. Aguilar-Uscanga B., Francois J. M. A study of the yeast cell wall composition and
structure in response to growth cond. and mode of cultiv. // n: Lett. in Appl. Microbiol. 2003,
vol. 37, p. 268-274.
3. Anghel I., Vamanu A., Mitrache L.. et. al. Biologia i tehnologia drojdiilor. Bucureti:
Editura Tehnic. 1993, vol. 3, 308 p.
4. Barnett J. A., Payne R. W., Varrow D. Yeasts: Characteristics and Identication. 3-rd
edition, Cambridge Univ. Press, 2000. 1150 p.

145

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(318) 2012

Microbiologia i Biotehnologia

5. Bulimaga Valentina, Efremova Nadejda, Dencicov Lidia. Metod de determinare a

activitii superoxiddismutazei// Brevet de invenie MD 375. Cererea depus 28.03.2008, BOPI
nr 11/2008.
6. Chiselia O; Usati A., Taran N., Rudic V., Chiselia N., Adajuc V. Tulpin de drojdie
Saccharomyces cerevisiae surs de - glucani// Brevet de invenie MD 4048, BOPI nr. 6/2010,
20-21.
7. Chaung H.C, Huang T.C, Yu J.H, Wu M.L, Chung W.B. Immunomodulatory effects of
beta-glucans on porcine alveolar macrophages and bone marrow haematopoietic cell-derived
dendritic cells. //n: Vet. Immunol Immunopathol. 2009; 131 (3-4): 147-157.
8. De Nicola R., Hazelwood, L.A., De Hulster, E.A. et al. Physiological and transcriptional
responses of S. cerevisiae to zinc limitation in chemostat cultures.// In: Appl. Environ. Microbiol.,
2007, vol. 73(23), p. 7680-7692.
9. Dey P. M. & Harborne J. B. Methods in Plant Biochemistry. Vol. 2. Carbohydrates,
Academic Press, 1993, 529 p.
10. Duca M., Savca E., Port A. Fiziologia vegetal. Tehnici speciale de laborator. Chiinu:
USM, 2001, 173 p.
11. Francois J., Parrou J. Reserve carbohydrates metabolism in the yeast S. cerevisiae.//
In:: FEMS Y. Microbiol. Rev., 2001, vol.25, p. 125-145.
12. Frans M. Klis, Pieternella Mol, Klaas Hellingwerf, Stanley Brul . Dynamics of cell
wall structure in Saccharomyces cerevisiae.// n. FEMS Microbiology Reviews, 2002, 26, 3.
239-256.
13. Hong-Zhi Liu, Qiang Wang, Xiao-Yong Liu, Sze-Sze Tan. Effects of spaceight on
polysaccaharides of Saccharomyces cerevisiae cell wall.// n: Appl. Microbiol. Biotechnol.
2008, 81, 543-550.
14. Hong-Zhi Liu, Qiang Wang, Yin He. Immunoactivities and antineoplastic activities of
Saccharomyces cerevisiae mannoprotein. // n: Carbohydrate Polymers, 2011, 83, 16901695.
15. Jennifer C. Bayly a,b, Lois M. Douglas b, Isak S. Pretorius a,c, Florian F. Bauer
a, Anne M. Dranginis. Characteristics of Flo11-dependent occulation in Saccharomyces
cerevisiae. // n: FEMS Yeast Research, 2005, 5, 11511156.
16. Jose Perez-Martin. Growth and development: eukaryotes.// n: Current opinion in
Microbiology, 2010, 13., 661-662.
17. Kates M. Separation of lipid mixtures. Techniques of Lipidology. Elsevier, 1988. p.
186-278.
18. Kreger-Van Rij N.J.W. General classication of the yeasts. The yeast: Ataxonomic
study,-3rd. ed. Ed. N.J.W. Kreger-Van Rij-Amsterdam Elesevier Biomed. Preis, 1984. 1082 p.
19. Kwang S. K., Hyun S. Y. Production of soluble -glucan from the cell wall of S.
cerevisiae.// In: Enz. and Microb. Technol., 2006, vol. 39(3), p. 496-500.
20. Lesage G., Bussey H. Cell Wall Assembly in S. cerevisiae.// In: Microbiol. and Mol.
Biol. Rev., 2006, vol. 70(2), p. 317-343.
21. Lowry O., Rosebough N., Farr A. et. al. Protein measurment with the folin phenol
reagent.// n: J. Biol. Chem.1951, vol. 193, 265-275.
22. Marta Rubio-Texeira. A comparative analysis of the GAL genetic switch between notso-distant cousins: Saccharomyces cerevisiae versus Kluyveromyces lactis.// n: FEMS Yeast
Research, 2005, 5, 11151128.
23. Pretorius I. S., du Toit Maret, van Rensburg P. Designer yeasts for the fermentation
industry of the 21st century.// In: Food Technol. and Biotechnol., 2003, vol. 41(1), p. 3-10.
24. Rondanelli M, Opizzi A, Monteferrario F. The biological activity of beta-glucans// n:
Minerva Med., 2009, 100(3), 237-245.
25. Thammakiti, Saowanee; Manop Suphantharika, Thanaporn Phaesuwan & Cornel
Verduyn. Preparation of spent brewers yeast -glucans for potential applications in the food

146

Microbiologia i Biotehnologia

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(318) 2012

industry.// n: International Journal of Food Science & Technology. 2004, vol. 39 no. 1, 21-29.
26. Usati A., Calcatiniuc A., Grosu L., irov T. Procedeu de extragere a lipidelor din
drojdii.// Brevet de invenie MD 1930 G2, C 11 B 1/10, C 12 N 1/16. BOPI nr. 5/2002, 26-27.
27. Usati Agaa, Molodoi Elena, Chiselia Natalia, Chiselia Oleg, Efremova Nadejda,
Borisova Tamara, Fulga Ludmila. Tulpini de drojdii surse valoroase pentru obinerea
-glucanilor i mananilor. // n: Buletinul Academiei de tiine a Moldovei. 2011, nr. 3(325),
128-134.
28. Volman JJ, Ramakers JD, Plat J. Dietary modulation of immune function by betaglucans.// n: Physiol Behav. 2008, 23/94(2), 276-284.
29. Volman JJ, Mensink RP, Ramakers JD, de Winther MP, Carlsen H, Blomhoff R,
Buurman WA, Plat J. Dietary (1-->3),(1-->4)-beta-D-glucans from oat activate nuclear factorkappa B in intestinal leukocytes and enterocytes from mice.// n: Nutr Res. 2010, 30(1), 40-48.
30. Yoon Taek J., Kim Tack J., Lee H., Shin Kwang S., Yun, Y., Moon W. Anti-tumor
metastatic activity of -glucan puried from mutated Saccharomyces cerevisiae. // n:
International Immunopharmacology. 2008, 8(1), 36-42.
31. Ziman M, Preuss D, Mulholland J, OBrien JM, Botstein D, Johnson DI. Subcellular
localization of Cdc42p, a Saccharomyces cerevisiae GTP-binding protein involved in the control
of cell polarity.// n: Mol Biol Cell. 1993, 4(12), 1307-1316.
32. .., .. . :
. , 1982, 192 .
33. , . . ..
. M.: ,1974, 103 .
Not: Cercetrile s-au realizat n cadrul proiectului 11.817.08.19 A, nanat de ctre
CSDT al AM.

APRECIEREA INCIDENEI BOLII ULCEROASE A STOMACULUI

I DUODENULUI PRIN METODA CITOLOGIC
Florea Natalia1, Zatc Anatol2
1

Universitatea de Stat de Medicin i FarmacieNicolae Testemianu,

Catedra Microbiologie, Virusologie i Imunologie
2
Institutul Oncologic Republican
Rezumat

Prin metoda citologic a fost apreciat nivelul depistrii Helicobacter pylori n diverse
patologii ale stomacului i duodenului. Lotul de cercetare a inclus 210 pacieni investigai
endoscopic n Policlinica Institutului Oncologic. Investigarea citologic a amprentelor
de pe bioptatele colectate din stomac i duoden este o completare adecvat i informativ
a investigaiei histologice. Ea permite a detaliza i constata nu doar procesele maligne ci
i procesele de fond i precanceroase.
Cuvinte-cheie: brogastroduodenoscopie - H.pylori stomac duoden - boala ulceroas
biopsie - investigare histologic - investigare citologic.
Depus la redacie 22 octombrie 2012
--------------------------------------------------------------------------------------------------------Adresa pentru coresponden: Florea Natalia, Universitatea de Stat de Medicin i
Farmacie Nicolae Testemianu, Catedra Microbiologie, Virusologie i Imunologie,
bd. Stefan cel Mare si Sfant, 165 MD-2004 Chisinau, Republica Moldova,
e-mail: dr.natalias@gmail.com, tel. +373(22)205461

147