Sunteți pe pagina 1din 19

6.

Modificatori ai gating-ului i blocani


6.1 pH
Efectele variaiilor de pH asupra canalelor ionice reprezint o tem
ndelung studiat n electrofiziologie. Astfel, o serie de experimentatori
au pus n eviden o scdere a permeabilitii maxime pentru Na + la
acidifierea mediului extracelular, curbele de titrare indicnd un pK a
aparent ntre 4.6 i 5.4 la 0 mV n diverse preparate: noduri Ranvier la
amfibieni, muchi scheletici, axoni gigani de calmar sau Myxicola
(Woodhull 1973, Drouin & Neumcke 1974, Schauf & Davis 1976,
Campbell & Hille 1976, Mozhayeva et al. 1981-1982, Campbell 1982,
Begenisich & Danko 1983, etc.). innd cont de faptul c reaciile de
protonare-deprotonare n acest interval de valori pH sunt rapide, au
fost formulate cel puin trei ipoteze:
-

scderea pH poate afecta cinetica de gating a canalelor de Na+

scderea pH poate afecta conductana canalelor de Na + prin titrarea


unui numr mare de sarcini negative distribuite difuz la gura porului
(teoria potenialului de suprafa)

scderea pH poate afecta conductana canalelor de Na + prin titrarea


unui reziduu aminoacil esenial din peretele porului (teoria gruprii
acide).

Dei pentru canalele de Na+ voltage-gated prima ipotez a fost


infirmat (n 1980, Sigworth a artat prin analiza fluctuaiilor c
expunerea nodurilor Ranvier la pH 5.0 scade conductana unicanal la
40% din control), recent s-au descoperit diferite canale ionice care
funcioneaz ca senzori de pH, fiind activate la acidifierea mediului
extracelular. Din aceast categorie fac parte canalele numite ASIC
(acid sensing ion channels), care aparin familiei Deg/ENaC, larg

rspndite n sistemul nervos central, periferic, i n alte esuturi. Un


studiu recent de mutagenez (Baron et al. 2001) a identificat n
secvena ASIC2a un reziduu extracelular (His72) a crui transformare
abolete sensibilitatea la pH a canalului. Un alt exemplu este
receptorul vaniloid VR1, care integreaz diferii stimuli nocivi: cldur,
aciditate i compui vaniloizi. Jordt et al. (2000) au identificat un
reziduu din a treia regiune extracelular a subunitii VR1 (E648),
pentru care mutaiile punctiforme cu neutralizarea sarcinii (E648Q sau
E648A) reduc sensibilitatea la variaii de pH, fr a afecta activarea
prin cldur sau vaniloizi. Pentru un alt reziduu (E600), mutaiile cu
neutralizarea (E600N) sau inversarea sarcinii (E600K) duc la o activare
permanent a canalului i reduc efectul de potenare de ctre protoni a
stimulrii prin cldur sau compui vaniloizi, n timp ce mutaiile cu
conservarea
sinergism.

sarcinii

(E600D)

nu influeneaz

semnificativ

acest

Fig. 6.1 Activarea Kcsa la


reducerea pH implic o rotaie
de ansamblu a -helixurilor
transmembranare. Prin cuplarea
cu markeri de spin a reziduurilor
mutate n cistein, se pot
evidenia variaii de distan
(exprimat prin cuplajul spinspin) i de mobilitate (exprimat
prin
lrgimea
peakului
de
rezonan H0) (din Perozo et al.
1999).

Pentru canalul de K+ din Streptomyces lividans a crui structur 3D a


fost rezolvat (Kcsa), studii prin spectroscopie de rezonan electronic
paramagnetic ale mutanilor n care reziduurile TM1 i TM2 au fost
nlocuite pe rnd cu cistein pentru a lega MTS cu marker de spin, au
relevat c activarea canalului prin reducerea pH implic o micare de
ansamblu de rotaie a celor dou -helixuri, cu deschiderea orificiului
intern al porului (Perozo, Cortes & Cuello 1999). Prin aceast rotaie,
att cuplajul spin-spin ntre subuniti (dat de amplitudinea peakului
principal de rezonan), ce reflect distana ntre markeri, ct i
lrgimea rezonanei, ce reflect mobilitatea markerilor, prezint variaii
distincte pentru reziduurile de pe TM1 i TM2.
Revenind la studiile mai vechi pe canale de Na+ voltage-gated din
axonul gigant de calmar, putem sintetiza constatrile lor astfel: exist
trei efecte distincte ale reducerii pH extracelular asupra dependenei
de voltaj a conductanei de vrf pentru Na + (care la pH normal
urmeaz o distribuie Boltzmann):
-

o deplasare spre dreapta (right voltage shift) a activrii cu 20-30 mV

o reducere a permeabilitii maxime, chiar la depolarizri mari

chiar la poteniale pozitive mari curba nu mai este plat, ci


pstreaz o anumit pant.

AM Woodhull a reuit s modeleze aceste efecte considernd un situs


de protonare aflat la distana relativ fa de exterior n cmpul
electric transmembranar. Atunci probabilitatea strii de conductan a
canalelor, p, este complementar ocupanei de ctre protoni a situsului
respectiv. Neglijnd competiia cu ali ioni, i notnd ratele de acces i
de prsire a situsului din/spre interior i exterior cu k1 i k-1, respectiv
k2 i k-2, obinem la echilibru:

k1 k2
k1 k2 k1 H o k 2 H

n continuare, exprimnd ratele n funcie de nlimea barierei de


energie liber (la care se adaug lucrul mecanic de deplasare a
protonilor n cmpul electric transmembranar pn n punctul de
maxim, considerat la jumtatea distanei de la exterior la situs - /2), i
presupunnd o barier energetic infinit la accesul dinspre interior,

pK a log

obinem:

k 1
log
k1

zeE

2 k BT pK 0 mV zeE
a
2.303k BT
zeE

2 k BT

b1 exp

b1 exp

Fig. 6.2 Efectele reducerii pH asupra dependenei de voltaj a permeabilitii


de vrf pentru Na+ ntr-un nod Ranvier: un shift spre poteniale mai pozitive,
reducerea amplitudinii platoului i apariia unei dependene de voltaj n faza de
platou. n dreapta, reprezentarea barierelor de energie pentru un situs de
protonare situat n interiorul porului, i aspectul dependenei de voltaj a
permeabilitii pentru diferite rapoarte ale nlimii barierelor extern i intern
(din Woodhull 1973).

Cu ajutorul acestui model simplu, Woodhull a obinut o fitare acurat a


datelor experimentale, i a reuit s exploreze efectele variaiei
parametrilor modelului. Astfel, creterea lui duce la o accentuare a
pantei dependenei de voltaj a lui p. Inversarea raportului barierelor
energetice de acces din interior i exterior (b2/b1), de exemplu de la
0.01 la 10, duce la inversarea dependenei de voltaj a lui p, deoarece
n al doilea caz situsul este mai uor accesibil dinspre interior, deci
protonarea lui este favorizat de depolarizare.

6.2 Ca2+
Efectele calciului, i, n general, ale cationilor divaleni, asupra
sistemelor excitabile reprezint un domeniu de studiu cu o ndelungat
istorie. n 1880 Sydney Ringer demonstra c prezena calciului este
absolut necesar pentru meninerea btilor cordului izolat de broasc.
Ulterior s-a dovedit c nivelul calciului liber intracitoplasmatic este

extrem de redus, aproximativ 10 -7 M (100 nM), iar creterea sa prin


activarea canalelor de Ca2+ din membrana celular sau a diferitelor
depozite intracelulare reprezint o cale de semnalizare. Rolul calciului
ca mesager secund intracelular nu poate fi nlocuit de ali ioni similari,
precum Mg2+ sau Ba2+. Ce se poate spune ns despre calciul
extracelular? Experimentele au artat c efectul su este stabilizator,
de reducere a excitabilitii neuromusculare, iar aceste aciuni sunt
comune cationilor divaleni. Dup punerea la punct a metodei voltage
clamp pe axonul gigant de calmar, Frankenhaeuser & Hodgkin (1957)
au studiat efectele reducerii concentraiei Ca 2+ extracelular asupra
dependenei

de

voltaj

cineticii

de

activare

inactivare

conductanelor de Na+ i K+. Ei au considerat dou explicaii posibile


ale rezultatelor lor:

modificarea potenialului de suprafa al membranei prin adsorbia


Ca2+ i neutralizarea reziduurilor negative, echivalent cu o

Fig. 6.3 Reducerea concentraiei externe de Ca 2+ duce la o deplasare a


dependenei de voltaj a conductanei de vrf de Na + spre valori mai
negative, ca i cum senzorii de voltaj ar simi o scdere a intensitii
cmpului electric transmembranar (din Frankenhaeuser & Hodgkin 1957).

depolarizare (ipotez avansat de A.F. Huxley)


-

influenarea sarcinii echivalente de gating prin interaciunea cu


Ca2+.

Aceast teorie poate fi respins n forma ei extrem, i anume cea care


pretinde c ionii de Ca2+ reprezint ei nii particulele de gating. Dei
contraargumentul iniial se baza pe considerente energetice (distana
electric echivalent a blocului), ulterior au fost aduse noi infirmri
(discutate de Hille): identificarea sarcinilor de gating ca aparinnd
unor reziduuri de Arg i Lys din S4, persistena efectelor cinetice la
canale permeabile pentru Ca2+, cinetica rapid a blocrii de ctre Ca 2+
a canalelor de Na2+ (microsecunde) comparativ cu cinetica lor de

gating (milisecunde), i n fine, mutaiile care cresc sau scad afinitatea


pentru Ca2+ a filtrului de selectivitate cu mai multe ordine de mrime
(Heinemann et al 1992) nu influeneaz dependena de voltaj a
cineticii canalelor. Rmne ns valabil cealalt formulare, anume
posibilitatea

existenei

unei

interaciuni

ntre

Ca 2+

sarcinile

senzorului de voltaj.
nainte de a examina aceast direcie, s recapitulm pe scurt prima
teorie, cea a potenialului de suprafa. n forma sa cea mai simpl, ea
pretinde existena unei distribuii uniforme de sarcin pe suprafaa
membranei, i definete o densitate de sarcin de suprafa, .
Aceasta poate fi calculat pornind de la concentraiile relative ale
speciilor ionice cok la suprafaa membranei, deduse la rndul lor dintr-o
distribuie Boltzmann, n funcie de valoarea potenialului de suprafa

0 i de concentraiile n soluie (bulk), ck:


z e
cok ck exp k 0
k BT

n formularea iniial, aparinnd fizico-chimitilor americani Gouy


(1911) i Chapman (1913), relaia ntre densitatea de sarcin de
suprafa i concentraia ionic c ntr-un electrolit binar simetric este:
ze0

8k B T r 0 c sinh
2k B T
Grahame (1947) generalizeaz aceast ecuaie:

z e
2 2 r 0 k BT ck exp k 0 1
k BT
k

Dei o astfel de reprezentare funcioneaz corect n descrierea


efectelor de screening (ecranarea interaciunilor electrostatice ntre
gruprile polare ale fosfolipidelor de membran), care nu depind de
natura ionului, ci doar de sarcina sa, efectele de legare (binding)
trebuie s joace un rol important, deoarece influena calciului asupra

zeS

c
c KD

potenialului de suprafa este mult mai pronunat dect n cazul


ionilor monovaleni. Legarea poate fi cuantificat printr-o dezvoltare a
ecuaiei Grahame n modelul Gouy-Chapman-Stern, ce presupune o
distribuie neuniform a situsurilor de legare pe suprafaa membranei,
cu o densitate S. Putem exprima independent densitatea de sarcin de
suprafa n funcie de concentraia ionic printr-o izoterm de
adsorbie Langmuir:
Pentru bistraturi fosfolipidice, S are o valoare maxim de aproximativ
1/80 2, corespunztor ariei transversale medii per molecul de
fosfolipid. Astfel, considernd interaciunea cu un singur tip de ion,
potenialul de suprafa devine:

k BT
z 2e 2 S 2
c
0
ln 1

ze
2 r 0 k BT c K D 2

n cazul unei competiii ntre mai multe specii de ioni, constantele de


disociere aparente se modific:
K D* K D (1 [ I ] / K DI )

unde KDI reprezint constanta de disociere a cationului competitor.

Aa cum au recunoscut Frankenhaeuser i Hodgkin, teoria potenialului


de suprafa explic doar parial rezultatele experimentale. Astfel,
dependena de voltaj a conductanei maxime de Na + i de K+ sunt
ambele decalate cu aproximativ 15 mV prin scderea de 5 ori a
activitii Ca2+ extracelular (de la 112 mM la 22 mM i respectiv la 4.4
mM), ceea ce era de ateptat, deoarece variaia intensitii cmpului
electric transmembranar produs prin modificarea potenialului de
suprafa ar trebui s afecteze n aceeai msur senzorii de voltaj ai
canalelor de Na+ i de K+. Acelai decalaj (voltage shift) se
nregistreaz i pentru potenialul prag de activare, un parametru mai
uor de msurat experimental. Hagiwara & Takahashi (1967) au folosit
acest parametru pentru a studia efectul diferiilor cationi divaleni i
trivaleni asupra membranei fibrei musculare de barnaclu (mic
crustaceu marin din subclasa Cirripede), gsind urmtoarea secven a

afinitilor

de

legare:

La3+,

UO22+>Zn2+,

Co2+,

Fe2+>Mn2+>Ni2+>Ca2+>Mg2+, Sr2+. n schimb, efectele asupra inactivrii


sunt mai complexe, reducerea Ca2+ producnd, n afar de decalaj, i o
scdere aparent a sarcinii echivalente de gating a inactivrii, i o
mrire considerabil a constantelor de timp de inactivare.

Fig. 6.4 Efectele La3+ asupra


dependenei de voltaj a ratei
de deschidere (a), ratei de
nchidere (b) i fraciunii de
canale de Na+ deschise, pe o
linie de celule pituitare de
obolan (GH3). Efectele nu
pot fi explicate integral prin
teoria
potenialului
de
suprafa (din Armstrong &
Cota 1990).

Inadecvarea teoriei potenialului de suprafa n a explica rezultatele


experimentelor cu cationi di- i trivaleni a fost relevat n special de
Clay M. Armstrong, ntr-o serie de studii. Astfel, n 1982 Gilly &
Armstrong arat c Zn2+, Cd2+ i Hg2+ ncetinesc constanta de timp de
activare a curenilor ionici de Na+ i K+, precum i constanta de timp a
curenilor de gating de activare, n schimb au o influen redus asupra
constantei de timp de nchidere a curenilor ionici i a celor de gating.
Ulterior, Armstrong & Cota (1990, 1999) arat c La 3+ decaleaz
dependena de voltaj a ratelor de deschidere i nchidere ale canalelor
de Na+ din celule pituitare de mamifere (linia GH3) proporional cu
logaritmul concentraiei. Variaia ratei de nchidere chiar i schimb
semnul la concentraii sczute, efect ce nu poate fi explicat prin teoria
potenialului de suprafa. n plus, la concentraii mari apare un efect
de blocare. ntr-un studiu foarte elegant asupra curenilor ionici i de
gating ai canalelor de Na+ din axonul gigant de calmar, Armstrong
(1999)

arat

rata

de

nchidere

(msurat

prin

fitarea

monoexponenial a curenilor de gating) variaz foarte puin n funcie

de nivelul Ca2+ extracelular (ntre 10 i 100 mM), atunci cnd accesul


Ca2+ n por este mpiedicat de STX; n schimb, cnd accesul Ca 2+ n por
este liber rata de nchidere (msurat prin fitarea curenilor ionici)
crete n proporie logaritmic

cu concentraia de Ca 2+ i cu

negativarea voltajului. Astfel, blocarea de ctre Ca 2+ pare s fie absolut


necesar pentru nchiderea canalelor de Na+.
n concluzie, teoria potenialului de suprafa trebuie s sufere
modificri substaniale pentru a reui s explice particularitile
relevate experimental. Evident, viitorul aparine metodelor de calculare
a potenialului local mai degrab dect a potenialului de suprafa, de
exemplu

cu

ajutorul

ecuaiei

Poisson-Boltzmann

linearizate,

momentul n care structura canalelor ionice dependente de voltaj va fi


cunoscut la nivel de rezoluie atomic.

6.3 Anestezicele locale state-dependent binding


La

fel

ca

cazul

majoritii

compuilor

farmacologici

activi,

anestezicele locale au fost utilizate n practica medical cu mult nainte


de a li se cunoate mecanismul de aciune. Sigmund Freud, discipol al

lui Ernst von Brcke la Universitatea din Viena, i ulterior al psihiatrului


Fig. 6.5 Efectul reducerii Ca2+ extracelular asupra cineticii curenilor de gating
ai canalelor de Na+ din axonul gigant de calmar este neglijabil (A). n schimb, n
absena STX, constanta de timp a nchiderii crete semnificativ la reducerea de
10 ori a concentraiei de Ca2+ (C, D) (din Armstrong 1999).

Theodore Meynert i al profesorului de medicin intern Hermann

Nothnagel, studiaz n anii 1880 aciunea farmacologic a cocainei. Cu


toate succesele obinute de prietenul su Carl Koller n chirurgia
oftalmologic,

administrarea

general

s-a

dovedit

dezastruoas

datorit dependenei fa de drog, ducnd la moartea unui alt prieten


apropiat, Ernst Fleischl von Marxow. Aceste insuccese au zdruncinat
ncrederea lui Freud n medicina somatic i au afectat reputaia sa
ca practician, ceea ce l-a determinat s aleag calea psihanalizei.
Ulterior, problema dependenei avea s fie rezolvat prin sinteza unor
compui nrudii, precum lidocaina (xilina), procaina, benzocaina,
tetracaina, etc. Anestezicele locale sunt folosite fie pentru blocarea
trunchiurilor sau terminaiilor nervoase din piele sau mucoase, fie ca
antiaritmice ventriculare. Datorit liposolubilitii, ele traverseaz
direct membranele celulare pentru a ajunge la locul de aciune. La pH
acid (caracteristic esuturilor inflamate) ele trec n forma protonat,
pentru care membrana este impermeabil. La nceputul anilor 1970,
sub impulsul descoperirilor lui Armstrong despre aciunea aminelor
cuaternare asupra canalelor de K+ i a modelului de open channel
block, s-a dovedit c analogii sintetici cu sarcin permanent ai
anestezicelor locale, de exemplu QX-314, acioneaz ntr-un mod
similar asupra canalelor de Na+ axonale atunci cnd sunt aplicai
intracelular

(Frazier

et

al.

1970,

Strichartz

1973).

prezena

anestezicului, stimulii de depolarizare aplicai succesiv elicit cureni


din ce n ce mai mici, fenomen denumit use-dependent block sau
phasic block. Strichartz a explicat acest fenomen printr-un model de
state-dependent binding, i anume open channel block, n care
moleculele blocantului nu pot ajunge la situsul de legare dect dinspre
interior i n starea deschis a canalului. ntruct exist i o
dependen de voltaj a blocului (distana electric echivalent dinspre
interior fiind = 0.6), nseamn c porile canalului se afl la interior, i
dincolo de ele exist un vestibul cu perei hidrofobi suficient de larg
pentru a acomoda anestezicul. Ulterior s-a constatat c use-dependent

Fig. 6.6 Situsul de legare al


anestezicelor locale, situat n
vestibulul intern al canalelor de
Na+
voltaj-dependente.
Compuii
cu
sarcin
permanent (de exemplu QX314) ptrund numai dinspre
interior, n timp ce compuii
hidrofobi trec i prin pereii
laterali. Situsul este accesibil
pentru protoni din exterior.

block produs de anestezicele liposolubile este tranzitoriu, deci ele pot


prsi situsul direct prin pereii laterali ai porului (aa-numita cale
hidrofob). Interesant, situsul de legare este accesibil pentru protonii
din exterior, nu i pentru cei din interior, deoarece scderea pH-ului
extracelular duce la protonarea moleculei de anestezic, ceea ce face ca
ea s nu mai poat prsi situsul (Cahalan & Almers 1979, Shapiro
1977). n plus, ionii de Na+ din exterior pot ndeprta blocul, fraciunea
de canale blocate crescnd la scderea [Na +] extracelular sau la
aplicarea TTX.
Interferenele anestezicului local cu mecanismele de gating ale
canalului sunt multiple: afinitatea situsului de legare este dependent
de stare, iar legarea anestezicului modific ratele cinetice ale
canalului. Explicaia ar fi accea c anestezicul se leag mai puternic
atunci cnd poarta de inactivare este nchis, deci hiperpolarizarea cu
deschiderea porii poate duce la ndeprtarea sa. Existena mai multor
stri cu afiniti i rate de legare diferite poart numele de modelul
receptorului modulat (Hille 1977), similar cu variaia dependent de
conformaie a afinitilor de legare ale enzimelor allosterice (Monod et
al 1965).
Anestezicele locale acioneaz i asupra receptorilor nicotinici de ACh,
tot dup un model de state-dependent binding, blocndu-i n stare
deschis i prevenind nchiderea lor. Acesta a fost primul efect blocant
evideniat direct prin metoda patch clamp (Neher & Steinbach 1978).
n acest caz, anestezicul local acioneaz numai dinspre exterior,
ptrunznd la o distan electric = 0.5 0.8. Acesta pare a fi modul
de aciune al leptocurarelor, precum D-tubocurarina. De aceea, putem

presupune c poarta receptorilor nicotinici se afl la exterior, iar filtrul


de selectivitate la interior. n segmentul transmembranar M2 au fost
identificate un numr de reziduuri care particip la situsul de legare al
anestezicelor locale.

6.4 Blocani direci ai porului dependena de voltaj a blocului


O problem la fel de important n plan teoretic este efectul blocant al
unor ioni. De exemplu, canalele de Ca2+ sunt blocate de Mn2+, Co2+ sau
Ni2+ aplicai extracelular, iar canalele de K+ de TEA+, Cs+, Na+ i Ba2+
intracelular.
O nregistrare patch clamp de mare acuratee a blocrii canalelor de K +
de tip inward rectifier, care prezint deschideri lungi peste 1 s la
poteniale negative, de ctre Cs+ extern, arat c frecvena blocrilor
crete cu gradul de hiperpolarizare, dnd un aspect de flickering
opening (Fukushima 1982). Diferii ioni produc durate medii diferite ale
blocului, fapt verificat n canalele de K + de tip delayed rectifier cu Na +
sau Cs+ intracelular (Hille 1975, French & Wells 1977). Blocul prezint
i n acest caz o dependen de voltaj, fiind intensificat la depolarizare,
ns la depolarizri mari scade din nou, ca i cum ionii blocani ar
acumula suficient energie pentru a penetra regiunea ngust a
porului.

Fig. 6.7 Ionii de Cs+ extracelulari produc


un bloc dependent de voltaj al canalelor
de K+ de tip inward rectifier, dnd un
aspect de flickering curenilor singlechannel (din Fukushima 1982).

Pentru unele canale, ncercarea de a aplica modelul Woodhull pentru a


exprima dependena de voltaj rezult n distane electrice echivalente
mai mari dect 1, iar curba doz-rspuns are o pant mai mare dect
cea prezis n cazul aciunii unui singur ion. Aceste date sugereaz
existena unor situsuri de blocare multiple, corespunznd situsurilor
multiple de legare a ionilor permeani de-a lungul porului n canalele
multi-ion, prezise de Hodgkin & Keynes (1955).
Experimentele lui Neyton & Miller (1988) au relevat un caz interesant
n blocarea canalelor de K+ de mare conductan activate de Ca2+ BK
K(Ca) de ctre Ba2+ intern. Lucrnd la diferite combinaii ale
concentraiilor K+ extra- i intracelular, ei au relevat existena a 4
situsuri

de

legare

K+

care

faciliteaz

blocarea

sau

mpiedic/faciliteaz deblocarea, la distane electrice de 0.7, 0.6


(situsul blocant), 0.5 i 0.15 fa de exterior. Dup descifrarea structurii
3D a Kcsa, aceste situsuri au fost identificate: dou situsuri n interiorul

Fig.
6.8
Experimente
asupra
blocrii de ctre Ba2+ a canalelor de
K+ activate de Ca2+ - BK(Ca)
ncorporate n bistraturi artificiale.
Diferena de potenial de +40 mV
favorizeaz prsirea de ctre Ba2+
a situsului blocant spre exterior,
ns creterea concentraiei K+ la
exterior duce la ocuparea altor
situsuri
de-a
lungul
cii
de
permeaie, ducnd la imobilizarea
prelungit a Ba2+ i eliminarea sa
spre interior. n aceste condiii,
creterea concentraiei de K+ la
interior prelungete blocul, relevnd
un nou situs interior (din Neyton &
Miller 1988).

filtrului de selectivitate, situsul blocant pentru Ba + la intrarea intern a


filtrului, i nc un situs pentru K+ n vestibulul intern.
Referine
Armstrong CM. 1999. Distinguishing surface effects of calcium ion from
pore-occupancy effects in Na+ channels. Proc Natl Acad Sci U S A
96(7):4158-63.
Armstrong CM, Cota G. 1990. Modification of sodium channel gating by
lanthanum. Some effects that cannot be explained by surface
charge theory. J Gen Physiol 96(6):1129-40.
Baron A, Schaefer L, Lingueglia E, Champigny G, Lazdunski M. 2001.
Zn2+ and H+ are coactivators of acid-sensing ion channels. J Biol
Chem 276(38):35361-7.
Ermakov YA, Averbakh AZ, Yusipovich AI, Sukharev S. 2001. Dipole
potentials indicate restructuring of the membrane interface
induced by gadolinium and beryllium ions. Biophysical Journal
80(4):1851-62.
Frankenhaeuser B, Hodgkin AL. 1957. The action of calcium on the
electrical properties of squid axons. The Journal of Physiology
137:218-244.

Fukushima Y. 1982. Blocking kinetics of the anomalous potassium


rectifier of tunicate egg studied by single channel recording. J
Physiol 331:311-31.
Grahame DC. 1947. The electrical double layer and the theory of
electrocapillarity. Chem Rev 41:441-501.
Hagiwara S, Takahashi K. 1967. Surface density of calcium ions and
calcium spikes in the barnacle muscle fiber membrane. Journal of
General Physiology 50(3):583-601.
Heinemann SH, Terlau H, Stuhmer W, Imoto K, Numa S. 1992. Calcium
channel characteristics conferred on the sodium channel by
single mutations. Nature 356(6368):441-3.
Hille B. 1977. Local anesthetics: hydrophilic and hydrophobic pathways
for the drug-receptor reaction. J Gen Physiol 69(4):497-515.
Hille B. 2001. Ionic channels of excitable membranes. Sunderland, MA:
Sinauer Associates. 814 p. ill p.
Hodgkin AL, Keynes RD. 1955. The potassium permeability of a giant
nerve fiber. J Physiol 128:61-88.
Jordt SE, Tominaga M, Julius D. 2000. Acid potentiation of the capsaicin
receptor determined by a key extracellular site. Proc Natl Acad
Sci U S A 97(14):8134-9.
Monod J, Wyman J, Changeux JP. 1965. On the nature of allosteric
transitions: a plausible model. J Mol Biol 12:88-118.
Neher E, Steinbach JH. 1978. Local anaesthetics transiently block
currents through single acetylcholine-receptor channels. J Physiol
277:153-76.
Neyton J, Miller C. 1988. Discrete Ba2+ block as a probe of ion
occupancy and pore structure in the high-conductance Ca2+
-activated K+ channel. J Gen Physiol 92(5):569-86.
Perozo E, Cortes DM, Cuello LG. 1999. Structural rearrangements
underlying K+-channel activation gating. Science 285(5424):738.
Ringer S. 1883. A further contribution regarding the influence of the
different constituents of the blood on the contraction of the
heart. J Physiol 4:29-42.
Sigworth FJ. 1980. The conductance of sodium channels under
conditions of reduced current at the node of Ranvier. J Physiol
307:131-42.
Woodhull AM. 1973. Ionic blockage of sodium channels in nerve. J Gen
Physiol 61(6):687-708.