Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
La nivelul ntregului genom au fost identificate aproximativ 30-50000 de ori, iar repliconii au o
lungime de 2000kb.
Figura1. Particularitile secvenei de replicare
autonom la eucariote.
Originea replicrii ADNului nuclear conine secvene
consens recunoscute de factori reglatori ai ciclului
celular:
ACS (autonomously consensus sequence)
flancate de regiuni libere de histone, secvene
bogate n A/T - DUE( unwinding elements),
recunoscute de ORC (origin recognition
complex).
In perioada G1
ORC interacioneaz cu un complex MCM2-7
formnd pre-RC (complex prereplicativ cu
helicase inactive) ce reine replicarea pn n
perioada S;
n perioada S
complexul pre-RC interacioneaz cu CDK
(Cyclin-Dependent Kinases) ce activeaz
enzimele aparatului de replicare formnd
pre-IC (complex de iniiere a replicrii).
3. Etapele replicrii
Sinteza ADNului ncepe prin despiralizarea/denaturarea catenelor de ADN i formare a
ochiului de replicare. Fiecare caten reprezint o matri pentru catena nou format.
Despiralizarea este necesar pentru expunerea bazelor celor dou catene n aa mod ca noile baze
s le poat recunoate i s formeze perechea complementar. Sinteza decurge bidirecional: de
la fiecare punct de origine se formeaz dou furci replicative n direcii opuse fa de origine.
Replicarea necesit un complex proteic numit ORC care recunoate punctul de origine a
acesteia i o iniiaz. Proteina/proteinele de recunoatere se leag de ori i iniiaz despiralizarea
local a ADN n situsul DUE.
Complexul multifermentativ, numit replizoma, se mic de-a lungul ADN-ului i
efectueaz sinteza pe ambele catene ale ochiului replicativ. Replicarea ar putea fi vzut ca
creterea continu a noi catene de ADN n dublul helix. Este necesar de accentuat c:
Citirea matriei se efectueaz doar n direcia 3 5;
Sinteza catenei noi se efectueaz doar n direcia 53.
(5)
ADN- helicazele, sunt enzime care hidrolizeaz ATP, producnd ruperea legturilor de hidrogen dintre cele dou
catene parentale ADN;
ADN-topoizomerazele relaxeaz dublul helix, scade numtul de spire/ kpb:
4. Modele de replicare
4.1 Replicarea ADN-nuclear
este un proces foarte complex deoarece genomul nuclear este enorm, asociat cu
proteine, cu diferite nivele de compactizare;
se desfoar n condiii stricte numai n faza S a ciclului celular,
este multirepliconic ncepe n mai multe puncte de origine (ori), ce corespund unui
replicon- numit unitatea de replicare independent ADN;
telomerelor
Particularitile telomerelor:
Telomerii sunt secvene repetitive de ADN (TTAGGG)n localizate la terminaiile
cromozomilor la majoritatea organismelor eucariote, care asigur protecia i
stabilitatea cromozomilor.
Replicarea ADN la nivelul capetelor cromozomilor este incomplet: la captul 5
al catenei noi sintetizate exist o mic regiune nereplicat;
Telomeraza- enzima ce asigur replicarea ADN telomeric i repar telomerele.
Telomeraza este format din:
Revers-transcriptaza
telomerazic
TERT(complex proteic);
O molecul de ARN telomerazic TERC cu
lungimea de 451 n., ce include o scurt regiune
complementar cu repetiia telomeric: la om 5 CAAUCCCAAUC 3;
disckerina(DKS1) proteina ce asigur
foldingul i stabilitatea Revers-transcriptazei.
10
11
12
Perioada G1 Celula rezultat din mitoz motenete de la celula mam Cromosomi monocromatidieni, decondensai (cromatin);
Perioada S Celula primete semnale mitogene, se activeaz complexele de iniiere a replicrii
i se desfsoar REPLICAREA:
Multireplicon din mai muli ORI concomitent;
Asincron segmentele de eucromatin se replic mai precoce, cele de heterocromatin
spre sfritul perioadei S;
Cromozomii devin bicromatidieni cele dou cromatide surori conin cte o molecul
de ADN identice, ce rmn unite prin centromer pn n Anafaz.
Perioada G2 Celula cu cromozmi bicromatidieni, decondensai se pregtete pentru mitoz:
13
14
6. Reparaia ADN
Leziunile ADN-ului celular sunt frecvente i se produc n orice perioad a interfazei, n
timpul replicrii normale sau independent de ea. Defectele din ADN sunt supuse procesului de
reparare care scade probabilitatea de apariie a mutaiilor, iar acurateea replicarii este critic
pentru transmiterea informaiei genetice. n corpul uman secvena i structura ADN-ului sunt
deteriorate cu o rat de 10 000 1 000 000 leziuni moleculare / zi / celul 0,000165% din
genomul unei celule umane este afectat zilnic.
Repararea este proprietatea unic a moleculelor de ADN de a-i restabili structura
primar, iniial.
Repararea ADN este reprezentat de un complex enzimatic capabil:
S identifice greelile din ADN proteine de recunoatere;
S nlture fragmentul de ADN cu eroare - endonucleaze;
S sintetizeze un nou fragment ADN-polimeraza;
S integreze fragmentul n macromolecula de ADN bicatenar - ADN-ligaza.
Principiile de realizare a repararii ADN:
Matricial - una din catenele ADN este matri n timpul reparrii celeilalte catene de
ADN;
Complementar catenei matri.
Mecanismele posibile de producere a erorilor n moleculele de ADN
erori de replicare a ADN, prin mperecheri greite (mismatch) a nucleotidelor n
catena nou sintetizat.
leziuni provocate n ADN de factori mutageni exogeni sau endogeni (fizici sau chimici
sau biologici)
- dezaminare,
- depurinare,
- demetilare.
Leziunile la nivelul ADNului pot apare:
la nivelul structurii primare a moleculei de ADN prin
modificarea chimic a bazelor azotate (dezaminarea, oxidarea, etc.);
nmerecherea incorect a bazelor azotate;
depurinizarea nucleotidelor.
la nivelul structurii secundare a moleculei de ADN
afecteaz mpachetarea ADN-ului cu histone;
ruperea catenelor de ADN (cu rearanjarea incorect a fragmentelor, deleii,
inserii).
6.1 FACTORI CE INDUC LEZIUNI LA NIVELUL ADNului:
Factori endogeni:
replicarea eronat a ADN-ului;
transpozonii (inserii n regiunile codificatoare sau reglatoare ale genelor);
speciile reactive de oxigen generate prin procesele oxidative normale
respiraie, generare ATP.
Factori exogeni:
Ageni chimici reactivi (modificarea bazelor azotate, mperechere greit);
Analogi de baze (mperechere greit);
Ageni de intercalare (mperechere greit);
radiaia UV (200 400 nm) emise de soare sau din surse antropice (apariia
dimerilor pirimidinici);
15
In structura normal a ADNului bazele azotate se afl sub forma tautomeric: keto sau
amino. In unele condiii, care se ntalnesc mai rar acestea pot trece in formele enol i imino, prin
deplasarea unui proton (H+) ce pot forma mperecheri greite: C-A (forma rar), T-G (forma
rar).
Alchilarea bazelor poate induce mperecherea greit a bazelor
Agenii de intercalare (proflavina, acridin-oranj) se intercaleaz ntre perechile de baze
i mimeaz dispunerea acestora. In stare intercalat agenii de intercalare favorizeaz deleiile
sau inseriile.
Razele ultraviolete pot induce formarea dimerilor de T (2 baze de pe aceeai caten
formeaz legturi covalente). Aceste legturi pot fi de tip C5-C6 cu formare de structur de tip
ciclobutil sau pot fi de tip C4-C6.
16
Modificarea bazelor poate avea loc prin reacii de dezaminarea a altor baze. Dezaminarea C are
ca rezultat formarea U. Uracilul poate forma legturi de H cu A, iar la replicarea ulterioar a
ADN pe catena nou sintetizat in locul G va fi A. In unele cazuri (forma ionizat a U) poate
forma legturi de H si cu G. Dezaminarea 5-metil citozinei (se presupune c 5-metil-C particip
la inactivarea genelor) va avea ca rezultat o T.
Erorile datorate replicrii (introduse de ADN polimeraz) sunt rare, 1 la 100 mln
pb.Toate organismele posed mecanisme de reparare a ADN. Mitocondria nu posed mecanisme
de reparare a ADN, acest fapt explic rata mare a erorilor n ADNmt.
17
Mecanismele de reparare (MMR, BER, NER) difer prin inta lor dar modul de aciune
este asemntor (implicnd multiple gene i enzime mutator); Enzimele de reparare
sunt codificate de anumite gene (MSH, MLH, PMS) numite i gene mutator
Mutaiile acestor gene predispoziie la cancer.
Figura 20. Mecanisme de reparaie a leziunilor din ADN i factorii proteici specifici fiecrui tip de reparaie
concordant cu tipul defecturlui. Abrevieri: AGT, O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase; ATM, ataxia
telangiectasia mutated; BER, base excision repair; DR, direct repair; GG-NER, global genome NER; HR,
homologous recombination; 06MeG, O6-methylguanine; MMR, mismatch repair; NER, nucleotide excision
repair; NHEJ, non-homologous end joining.
Etapele reparaiei:
recunoaterea defectului din molecula de ADN (biomarcatori specifici erorii);
excizia fragmentului de ADN modificat (endonucleaza)
ndeprtarea i degradarea fragmentului (helicaza, exonucleaza)
refacerea, sinteza secvenei normale (ADN polimeraze) = reparare
legarea secvenei sintetizate n catena reparat ( ADN ligaza)
18
Leziunile la nivelul unei singure catenei de ADN sunt reparate pe baza informatiei de pe catena
complementar prin aciunea unor mecanisme de excizie-reparaie, ce taie secvena cu defect i
resintetizeaz poriunea de ADN dup principiul complementaritaii.
19
B. prin excizia i inseria uneia sau a mai multor nucleotide - nucleotide excision
repair (NER) repar defectele ce afecteaz una sau mai multe nucleotide prin:
Recunoaterea defectului din molecula de
ADN (dimerului) de ctre un factor de recunoatere
specific defectului.
Clivarea catenei de ADN cu defect de ctre
endonucleaze;
nlturarea fragmentului de 24-32 de
nucleotide ce conine defectul cu ajutorul helicazei;
Completarea golului cu un dNTPuri
complementare catenei intacte de o ADN
polimeraz specific;
Integrarea fragmentului sintetizat n catena
reparat de o ADN ligaz.
Figura 23. Reparaia NER.
20
Figura 24. Abbrevieri: cis-Pt and MMC, cisplatin and mitomycin C, respectively (both DNA-cross-linking agents); (64)PP
and CPD, 64 photoproduct and cyclobutane pyrimidine dimer, respectively (both induced by UV light); BER and NER,
base- and nucleotide-excision repair, respectively; HR, homologous recombination; EJ, end joining.
21