Sunteți pe pagina 1din 45

Some scientists work so hard there

is no time left for serious thinking


Francis Crick

Reglajul genetic la eucariote


v Reglajul la nivelul transcrierii
Reglajul prin interferena ARN (RNA Silencing)

v Reglajul genetic la nivel translaional i posttranslaional


v Citodiferenierea i originea de noi gene
Poliploidia
Duplicaia
ADN importat
Diversitatea anticorpilor

Reglajul genetic la eucariote


Interferena ARN (RNA Silencing)
q Date recente indic faptul c exprimarea unor gene
poate fi suprimat prin RNA silencing, (fenomen
cunoscut i sub numele de interferena ARN) i
inactivarea posttranscripional a genei.
q Dei multe detalii ale acestui mecanism sunt nc
insuficient cunoscute, se pare c este frecvent ntlnit la
fungi, plante i animale.
q Se pare c pe aceast cale poate fi reglat n mod
artificial exprimarea genelor n organismele modificate
genetic.

Reglajul genetic la eucariote

v Interferena ARN este un mecanism prin care se controleaz care


gene sunt active i ct de active sunt ele.
v Dou tipuri de molecule mici de ARN joac rol n acest proces:
microARN (miRNA)
small interfering RNA (siRNA)

v Aceste molecule de ARN se pot lega de alte molecule specifice de


ARN (de ex. de ARNm) crora le influeneaz activitatea.

v Interferena ARN are roluri importante n protejarea celulelor (fa de


unele virusuri sau transpozoni) dar i n dezvoltare i exprimarea
genelor

Reglajul genetic la eucariote


qRNA silencing este iniiat de prezena unui ARN
bicatenar care poate aprea pe mai multe ci:
Prin transcrierea unor secvene invers repetate din
ADN ntr-o singur molecul de ARN care are poriuni
de baze ce complementare ce pot stabili puni de H
ntre ele.
Prin transcrierea simultan a dou molecule diferite
de ARN care sunt complementare una celeilalte i
stabilesc legturi prin puni de H.
Prin replicarea virusurilor cu ARN dublu-catenar.

Reglajul genetic la eucariote


q La Drosophila, o enzim numit Dicer taie i proceseaz
molecula dublu-catenar de ARN producnd poriuni
mici de ARN mono-catenar cu lungimi de la 21 la 25
nucleotide.
q Aceste small interfering RNAs (siRNAs) vor stabili
legturi prin puni de hidrogen cu secvene
complementare din ARNm i vor atrage un complex
ARN-proteine care taie ARNm aproximativ n mijlocul
siRNA legat.
q Dup tiere, ARNm este degradat mai departe.

Reglajul genetic la eucariote


q In nucleu, siRNA servete ca ghid pentru metilarea
secvenelor complementare din ADN, proces care
afecteaz transcrierea.
q Unele molecule de ARN produse prin tierea ARN
dublu-catenar se leag de secvene complementare n
regiunea 5 UTR a ARNm i blocheaz traducerea lor.
q Se crede c ARN silencing a evoluat ca un mijloc de
aprare mpotriva virusurilor cu ARN i a elementelor
transpozabile care utilizeaz un ARN intermediar.
q Msura n care el contribuie la reglarea exprimrii
genelor este nc neclar, dar s-au identificat efecte
fenotipice dramatice ca urmare a unor mutaii ce apar n
genele codificatoare ale unor enzime ce intervin n RNA
silencing.

Reglajul genetic la eucariote

Reglajul genetic la eucariote


Reglajul genetic la nivel translaional i
posttranslaional
v Ribozomii, aminoacil ARNt, factori de iniiere i factori de elongare
sunt cu toii necesari pentru tranducerea unei molecule de ARNm.
v Prezena i cantitatea acestor componente afecteaz rata traducerii
i deci influeneaz exprimarea genelor.
v Initierea traducerii unor ARNm este reglat de proteine care se
leag de poriunea 5 UTR a ARNm i inhib legarea de ribozomi.
v Aceast inhibare este similar cii prin care proteinele represoare
de la bacterii se leag de operatori i blocheaz transcrierea
genelor structurale.

Reglajul genetic la eucariote


Reglajul genetic la nivel translaional i
posttranslaional
q Numeroase proteine eucariote sunt puternic modificate
dup traducere prin tieri selective i eliminarea
aminoacizilor de la capete, sau prin adugarea unor
grupri fosfat, carboxil, metil sau a carbohidratilor.
q Aceste modificri afecteaz transportul, funcia i
activitatea proteinelor i au capacitatea de a afecta
exprimarea genelor.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
v Multe dintre funciile noi, aprute pe parcursul
evoluiei au rezultat ca urmare a transformrii
continue a formei fr a fi nevoie de gene i
proteine complet noi.
v Pentru a produce ceva nou din punct de vedere
calitativ sunt ns necesare noi gene i proteine :
fotosinteza sau peretele celular la plante, proteine
contractile, noi tipuri de celule i esuturi, sistemul
imun, enzime digestive etc.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
vVechile funcii metabolice au trebuit s fie
meninute n timp ce unele noi erau dezvoltate.
vAceasta nseamn c vechile gene a trebuit s
fie pstrate pentru ca noi gene ce generau
funcii noi s poat evolua.
vDe unde a aprut ADN-ul pentru aceste noi
gene?

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Poliploidia
v Unul din procesele prin care a crescut cantitatea de ADN
a fost duplicaia ntregului genom prin poliploidizare.
v Faptul c poliploizii au jucat un rol major n evoluia
speciilor de plante este prezentat n figura urmtoare
care arat frecvena distribuiei numerelor haploide de
cromozomi printre speciile de plante dicotiledonate.
v La un numr de cromozomi de peste 12, numerele pare
sunt mult mai frecvente dect cele impare - o consecin
a unei frecvente poliploidii.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Duplicaia
v O a doua cale de cretere a cantitii de ADN o
reprezint duplicaia unor mici pri ale genomului.
v Astfel de duplicaii pot fi consecina:
Unei replicaii greite a ADN;
Unei inserii (de ctre un element transpozabil) a unei copii
a unei pri din genom la o alt locaie;
Unui crossing-over inegal.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Duplicaia
Dup apariia unui segment duplicat se poate ca:
1. Producia unui polipeptid s creasc.
2. Funcia general a secvenei originale s persiste n
noul ADN, dar pot aprea unele diferene ale
secvenelor prin acumularea de mutaii astfel nct vor
aprea variaii ale aceleiai proteine, care va putea
dobndi o structur molecular mai complex.
3. Noul segment va putea fi mult diferit de cel iniial i va
putea avea o funcie complet nou.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Duplicaia
v Un exemplu clasic pentru cel de al doilea caz l
reprezint setul de duplicaii al genelor rspunztoare de
producia hemoglobinei umane.
v Hemoglobina produs de adult este un tetramer ce
const din dou lanuri polipeptidice i dou , fiecare
avnd legat o molecul de hem.
v Gena ce codific lanul este situat pe cromozomul 16
iar gena pentru lanul este pe cromozomul 11.
v Cele dou lanuri sunt identice n proporie de peste 40%
n ce privete secvena de aminoacizi, o identitate care
indic n mod clar originea lor comun.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Duplicaia
v Tipuri diferite de hemoglobin sunt sintetizate i
funcioneaz n timpul dezvolttii ontogenetice.
v La embrionul uman, hemoglobina este produs n sacul
embrionar i este un tetramer alctuit din dou lanuri
(zeta) i dou (epsilon).
v Dup cca. trei luni de dezvoltare sinteza hemoglobinei
embrionare nceteaz (genele i devin inactive
transcripional) iar locul de sintez a hemoglobinei se
mut n ficat i splin
v Acum se vor produce dou forme de hemoglobin fetal
din lanuri (cte unul pentru fiecare form) i lanuri .

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Duplicaia
v Fiecare tip de lan (G i A) este codificat de o alt
gen.
v Acest tip de hemoglobin a fost denumit hemoglobin
fetal produs pn aproape de natere cnd sinteza
celor dou tipuri de lanuri nceteaz.
v n etapa urmtoare mduva hematogen devine locul
principal al sintezei de hemoglobin.
v Aici se produce hemoglobina adultului, un tetramer
alctuit n cea mai mare parte din lanuri 22 (1/40
molecule de hemoglobin au structura 2 2).

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene

Duplicaia
v Lanurile polipeptidice i sunt identice n proporie de
73 de procente.
v Mai mult chiar, gena pentru lanurile este situat n
apropierea celei pentru lanurile pe cromozomul 11 i
are o structur introniexoni identic.
v Aceast modificare, pe parcursul dezvoltrii, n ce
privete sinteza globinelor poate fi observat n figura ce
urmeaz.

Reglajul genetic la eucariote

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Procentul de similaritate n secvenele de amino acizi din
lanurile globinelor umane

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Duplicaia
v Distribuia cromozomial a familiei de gene pentru lanurile ale
globinelor pe cromozomul 16 i a familiei de gene pentru lanurile
pe cromosomul 11 la om
v Structura genelor este reprezentat prin bare negre (exoni) i bare
colorate (introni).

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Duplicaia
v Lanurile , , i aparin toate aceluiai grup denumit
-like.
v Ele au secvene similare de aminoacizi i sunt
codificate de gene cu o structur identic de introni exoni i care sunt localizate, toate, ntr-o poriune de
cca. 60 kb din ADNul cromozomului 11.
v Lanurile i aparin grupului denumit -like i sunt
codificate de gene prezente ntr-o poriune de cca. 40
kb pe cromozomul 16.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Duplicaia
v De asemenea, n figura precedent se poate observa c
att pe cromozomul 11 ct i pe cromozomul 16 exist
pseudogene, notate i .
v Aceste pseudogene sunt copii duplicate ale genelor care
nu au dobndit noi funcii ci au acumulat mutaii
ntmpltoare care le-au fcut nefuncionale.
v Este remarcabil faptul c ordinea genelor pe fiecare
cromozom este aceeai cu ordinea apariiei lanurilor
globinelor pe parcursul dezvoltrii.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene

Duplicaia
vProducerea de diferite tipuri de hemoglobin pe
parcursul
dezvoltrii
embrionare
implic
activarea i inactivarea succesiv a unor gene
ntr-o secven bine stabilit.

vAcest proces implic un reglaj genetic sofisticat.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Duplicaia
v In ce privete hemoglobina, ADNul duplicat codific o
nou protein care ndeplinete o funcie strns nrudit
cu funcia proteinei codificat de gena original.
v Prin duplicarea ADN pot aprea gene cu funcii foarte
diferite comparativ cu genele iniiale.
v Un exemplu al unui astfel de caz este prezentat n
figura ce urmeaz.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Omologia structural ntre gena pentru lizozim la gini i
gena pentru -lactalbumin la mamifere

Exonii sunt reprezentai de bare verde nchis iar intronii prin bare
verde deschis. Este indicat n figur secvena de nucleotide la
nceputul i sfritul fiecrui intron iar numerele se refer la
lungimea fiecrui segment.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
Duplicaia
v Psrile i mamiferele, ca i alte organisme eucariote,
au o gen ce codific lizozimul, o enzim cu rol protector
care lizeaz peretele celulei bacteriene.
v Aceast gen a suferit o duplicaie la mamifere rezultnd
o alt secven care codific o protein complet diferit,
ce nu are funcie enzimatic, -lactalbumina, un
component nutriional din lapte.
v Gena duplicat are aceeai structur de introni - exoni
ca i cea a genei pentru lizozim, a crei structur de
patru exoni i trei introni sugereaz o duplicaie multipl
mai timpurie ce ar fi avut loc pe parcursul procesului
evolutiv de apariie a genei pentru lizozim.

Reglajul genetic la eucariote


Citodiferenierea i originea de noi gene
ADN importat
v Duplicaiile ADN nu reprezint singura surs de ADN nou
care s stea la baza apariiei de noi funcii; ADNul poate
fi, de asemenea, importat.
v n mod repetat, pe parcursul evoluiei, n genomuri a fost
importat ADN din surse externe prin alte mecanisme
dect reproducerea sexuat.
v ADNul ce poate fi inserat ntr-un cromozom poate proveni
dintr-un alt cromozom sau chiar de la alte specii.
v In unele cazuri, gene de la organisme total nenrudite pot
fi ncorporate n celul devenind o parte funcional a
genomului acesteia.

Reglajul genetic la eucariote


Diversitatea anticorpilor
v Toate vertebratele au sistem imun care le ofer protecie
mpotriva agenilor infecioi precum: virusuri, bacterii,
fungi sau protozoare.
v Sistemul imun poate deosebi moleculele
organismului (non-self) de cele proprii (self).

strine

v Orice substan care determin un rspuns imun a fost


denumit antigen (generator de anticorpi).
v Celulele responsabile de specificitatea rspunsului imun
sunt limfocitele T i B.

Reglajul genetic la eucariote


Diversitatea anticorpilor
v Limfocitele B se dezvolt n mduva hematogen a
adultului.
v Ele secret aticorpi - proteine specializate denumite i
imunoglobuline.
v In timpul dezvoltrii, fiecare limfocit B va produce un tip
de anticorp ce va putea reaciona doar cu un singur tip
de antigen.
v Un limfocit B recunoate un antigen deoarece, n timpul
maturrii, a produs un anticorp care este ataat de
membrana extern i care funcioneaz ca o molecul
receptoare.

Reglajul genetic la eucariote


Diversitatea anticorpilor
v Cnd un antigen vine n contact cu un limfocit B care are
anticorpul corespunztor, acel tip de limfocit B va prolifera
genernd o populaie celular din care toate celulele vor
produce acelai anticorp (selecie clonal).
v Este important de precizat c o anume celul produce un
singur tip de anticorpi.
v Toi anticorpii produi de de un anumit limfocit B sunt
identici adic, au aceleai tip de lanuri polipeptidice i
leag acelai tip de antigeni.
v Gndindu-ne la organism ca ntreg, pot fi produse
milioane de tipuri diferite de anticorpi care difer ca
secven de aminoacizi i ca situs de legare a antigenului.

Reglajul genetic la eucariote


Diversitatea anticorpilor
v n esen, molecula de imunoglobulina este o protein
tetrameric n forma literei Y compus din dou lanuri
polipeptidice grele H (heavy) i dou uoare L (light)
inute mpreun de legturi covalente S-S (puni
disulfurice) dar i de alte tipuri de legturi.
v Fiecare din cele dou brae ale anticorpului are un situs
de legare a antigenului.
v Cele dou alnuri H ale unui anticorp, ca i cele dou
lanuri L sunt identice deci cele dou situsuri de legare a
anticorpilor vor fi identice.
v Regiunea balamalei permite celor dou brae s se
mite n spaiu, fapt ce faciliteaz reacia antigenanticorp.

Reglajul genetic la eucariote


Diversitatea anticorpilor
Diagrama unei imunoglobuline (Ig)G (monomer)

Diversitatea anticorpilor
Diagrama unei imunoglobuline (Ig)G (monomer)

Reglajul genetic la eucariote


Diversitatea anticorpilor
v La mamifere se produc cinci clase de anticorpi: IgA, IgD,
IgE, IgG i IgM.
v Ele au lanuri H diferite: (alfa), (delta), (gama),
(epsilon) i (miu).
v Exist doar dou tipuri de lanuri L: (kapa) i (lambda).
v Ambele tipuri de lanuri L se gasesc la toate clasele de
anticorpi dar un anume anticorp are fie dou lanuri
identice fie dou lanuri identice.
v Fiecare lan polipeptidic al unui anticorp este organizat n
domenii de cca. 110 aminoacizi.

Reglajul genetic la eucariote


La om, cele cinci clase de imunoglobuline, denumite
i izotipuri (IgG, IgM, IgA, IgD i IgE), difer ntre ele
prin propieti fizico-chimice i serologice i prin
secvena de aminoacizi din regiunile constante.

Reglajul genetic la eucariote


Diversitatea anticorpilor
v Domeniile N-terminale ale lanurilor H i L au secvene
variabile de aminoacizi i reprezint situsurile de legare
a antigenului.
v Ele au fost denumite regiuni variabile sau regiuni V,
notate VH n cazul lanurilor grele i VL n cazul lanurilor
uoare.
v Restul secvenelor de la ambele tipuri de lanuri sunt
constante la toi anticorpii i sunt simbolizate cu litera C
(CH i respectiv CL).

Reglajul genetic la eucariote


Diversitatea anticorpilor
v Prin urmare producerea de anticorpi implic sinteza unor
lanuri polipeptidice din care unele poriuni variaz de la
molecul la molecul iar alte poriuni sunt constante.
v Se estimeaz c la mamifere se produc cca. 106 -108
tipuri diferite de anticorpi.
v Cum fiecare anticorp const dintr-un tip de lanuri L i un
tip de lanuri H, teoretic ar fi nevoie de 103-104 tipuri
diferite de lanuri L i tot attea de H.
v Desigur asta ar nsemna ca doar pentru anticorpi s
existe mai multe gene dect conine ntregul genom
uman.

Reglajul genetic la eucariote


Diversitatea anticorpilor
v Cum poate
anticorpilor?

fi

generat

diversitatea

observat

v Rspunsul const n aceea c diversitatea lanurilor H i


L deriv din rearanjamente specifice ale ADN care se
produc n timpul formrii i maturrii limfocitelor B.
v Aceste rearanjamente implic unirea unor segmente
genice diferite (n linia germinal) pentru a forma o gen
(n celula matur) ce va fi transcris pentru a da natere
unui lan al unei imunoglobuline.
v Procesul a fost denumit recombinare somatic.

Reglajul genetic la eucariote


Organizarea n genom a genelor pentru
imunoglobulinele umane

Locusul pentru lanul uor (cromozomul 2)

Locusul pentru lanul uor (cromozomul 22)

Locusul pentru lanul greu (cromozomul 14)

Producerea lanurilor L
v Procesul are loc prin rearanjamente genice ce genereaz lanuri L
functionale.
v Prin recombinarea ntre segmentele de gen V1 i J3 este creat o regiune
codificatoare complet VL.
v Splicingul transcriptului primar V1-J3-Ck genereaz un ARNm n care the
regiunile V i C sunt contigue.

Reglajul genetic la eucariote

Producerea lanurilor H
v Procesul are loc prin rearanjamente genice ce genereaz lanuri H
functionale.
v Prin recombinarea ntre segmentele de gen V2, D3 i J4, este creat o
regiune codificatoare complet VH.
v Splicing transcriptului primar V2-D3-J4-C genereaz un ARNm n care
regiunile V i C sunt contigue.

Reglajul genetic la eucariote


Diversitatea anticorpilor
v Este important de precizat faptul c fiecare tip de limfocit
B exprim un singur produs genic recombinat i
funcional pentru lanurile L i H.
v Formarea cu succes a unei fuziuni V-J (sau V-D-J pentru
locusul H) face imposibil ca alte elemente V i J s fie
rearanjate pe acelai cromozom.
v De asemenea, genele V de pe cellalt cromozom
parental sunt silenioase.
v Acest proces de excluziune face ca un singur limfocit B
s exprime o singur combinaie VH-VL.