MECANISME MOLECULARE ALE VIRULENEI I PATOGENITII LA DROJDII

Genul Candida
Speciile din genul Candida sunt microorganisme chemoheterotrofe, cele mai multe specii se dezvolt
sub form de blastospori (celule capabile de nmugurire) ns unele specii pot tranzit de la forma unicelular de
blastospor la forme multicelulare numite pseudohife sau hife. nc din momentul naterii nou-nscuii intr n
contact cu diverse specii ale genului Candida care se gsesc la nivelul tractului vaginal al mamei. Din acest
moment o parte din microorganismele cu care nou-nscuii intr n contact colonizeaz cavitatea bucal, partea
superioar i inferioar a tractului gastrointestinal fcnd astfel parte din microbiota comensal a nounscutului.
Unele specii din genul Candida sunt potenial patogene, fiind avirulente n mod normal la persoanele
sntoase, dar n urma scderii imunitii gazdei, ele pot disemina la nivelul esuturilor adiacente provocand
infecii invasive care se pot generaliza (septicemii). Infeciile cu drojdii se pot instala n urma apariiei unor
dereglri la nivelul microbiotei astfel c tulpinile de drojdii pot trece de la faza de comensalism la parazitism
sau pot fi contactate din mediul extern, alimente, sol, ap etc.
Candidozele sunt infecii oportuniste, variind ca tablou clinic de la acute, subacute pn la cronice.
Infeciile pot fi localizate n diferite pri ale organismului: cavitate bucal, oro-faringe, tegument, vagin, spaii
interdigitale, unghii, plmni, tract gastrointestinal i uneori, pot deveni sistemice precum endocardit,
septicemia i meningit.
Pn n prezent au fost izolate din diferite tipuri de candidoze urmtoarele specii de drojdii: C. albicans,
C. krusei, C. guilliermondii, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. lusitaniae, C. kefyr, C. rugosa, C. famata, C.
inconspicua, C. catenulata, C. norvegensis, C. dubliniensis, C. lipolytica, C. zeylanoides, C. pelliculosa, C.
nivariensis, C. bracarensis i C. glabrata.
Cu toate c cea mai frecvent specie implicat n candidoze este C. albicans, n ultimii ani s-a observat o
cretere a frecvenei candidozelor datorate speciilor non-albicans cum ar fi C. glabrata, C. tropicalis, C. krusei,
C. dubliniensis i C. parapsilosis. Datele din literatur de specialitate prezint o frecven ridicat a speciei C.
glabrata n infeciile aprute ca urmare a creterii utilizrii medicaiei imunosupresoare. C. krusei este un agent
patogen frecvent ntlnit la pacieni cu boli maligne hematologice i la cei care au suferit transplanturi. C.
parapsilosis este frecvent izolat din hemoculturi pozitive ca urmare a ntroducerii diverselor dispozitive
medicale. C. tropicalis este unul dintre ageni cauzatori ai septicemiilor, ns au fost izolate i de la pacieni cu
leucemie i de la cei care au suferit transplant de mduv osoas. C. dubliniensis n asociaie cu ali ageni
patogeni este implicat n infeciile sistemice la pacienii cu SIDA.

Datorit faptului c tulpinile aparinnd specie C. albicans au fost cel mai des ntlnite n candidoze,
majoritatea studiilor de specialitate s-au axat pe caracterizarea acestei specii.
C. albicans face parte din microbiota comensal a tractului gastrointestinal i urogenital uman. n
condiii normale acest microorganism se afl n echilibru cu microbiota de la nivelul acestor regiuni i implicit
cu sistemul imunitar al gazdei. Starea fiziologic a gazdei reprezint un factor cheie, care st n general la baza
etiologiei candidozelor. Simplele modificri ale strii fiziologice a organismului pot conduce la perturbarea
echilibrului dintre microbiota comensal i gazd. Este o specie pleomorfic, astfel poate trece prin tranziii
reversibile morfologice de la blastospori la pseuodohife i hife adevrate.
La persoanele sntoase tulpinile de C. albicans determin n general apariia de infecii superficiale, n
timp ce la persoanele imunodeprimate pot aprea infecii invazive grave. Aproximativ 70% din femei sufer cel
puin o dat n via o candidoza vaginal, iar la 20% din cazuri infeciile sunt recurente.
Aderena, dimorfismul celular (blastospori, pseudohife, hife), secreia unor enzime hidrolitice
(proteinaze, fosfolipaze, lipaze, esteraze), capacitatea de formare a biofilmului, capacitatea de legare a Fe 3+ i
rezisten la substane antifungice se numr printre printre factorii de virulen studiai la speciile din genul
Candida.
Pentru a dezvolta un proces infecios speciile din genul Candida c orice alt agent patogen microbian,
trebuie s parcurg cteva etape obligatorii: (1) colonizarea esutului gazd, (2) achiziia de nutrieni i
multiplicarea (3) invadarea esuturilor adiacene, (4) diseminarea i capacitatea de a supravieui mecanismelor
de aprare ale gazdei.
n Europa, 17% din cazurile de infecii nosocomiale provocate de drojdii sunt contactate n cadrul
unitilor de terapie intensiv. Aproximativ 15% dintre pacienii care au suferit transplant de celule stem
hematopoietice i 20% dintre pacienii cu transplant pulmonar au suferit infecii micotice pe parcursul internrii.
Aproximativ 60% i respectiv 20% dintre pacienii cu SIDA au dezvoltat pneumonie i, respectiv, candidoz
esofagian. Datele de la sfritul anilor 1950 i nceputul anilor 1960 indic faptul c infeciile micotice
invazive au fost extrem de rare, chiar i n cazul pacienilor cu deficiene imunitare. n ultimele dou decenii
frecvena infeciilor micotice a crescut dramatic, c urmare a creterii numrului de proceduri invazive:
implanturi, transplanturi etc. Sistemul Naional de Supraveghere a Infeciilor Nosocomiale a raportat C.
albicans, c fiind al patrulea cel mai comun patogen izolat din infecii nosocomiale n Statele Unite ale
Americii. Peste 95% din totalul infeciilor fungice au fost asociate cu Candida albicans, Aspergillus fumigates
i Cryptococcus neoformans.
Tipuri de relaii ntre gazd i microorganisme
Trecerea de la comensalism la parazitism a microorganismelor autohtone depinde de statusul imunitar al
gazdei astfel componentele sistemului imunitar sunt cele care menin acest echilibru ntre celulele gazdei i
microorganismele patogene.

Infeciile cauzate de specii ale genului Candida

Sistemul Naional de Supraveghere a infeciilor nosocomiale a raportat Candida sp., ca fiind al patrulea
cel mai comun patogen izolat din infecii nosocomiale n Statele Unite ale Americii.
Infeciile sistemice datorate drojdiilor cu potenial patogen au nceput s creasc n ultimii ani datorit
progreselor realizate n domeniul chirurgiei.
Datorit uurinei cu care se realizeaz trecerea de la comensalism la parazitism, exist un numr foarte
crescut de persoane care sunt afectate de infeciile cu Candida. Categoriile cele mai afectate sunt reprezentate
de: purttorii virusului HIV ( datorit imunitii sczute), persoanele care au suferit arsuri, transplant/implant,
intervenii chirurgicale, diabeticii, persoanele n vrst, copii, femeile nsrcinate.
n ciuda eficienei substanelor antifungice utilizate pentru combaterea unor astfel de infecii, apariia
fenomenelor de rezistena, toxicitatea ridicat i capacitatea de livrare sczut a medicamentului la locul int n
cazul infeciilor sistemice sunt cteva din problemele majore cu care se confrunt medicii n cazul tratrii
infeciilor cauzate de drojdii.

Factorii implicai n virulen i patogenitatea tulpinilor de drojdii aparinnd genului

Candida
Etapele procesului infecios
Prima etap a infeciei reprezentat de colonizare presupune n primul rnd aderarea la esutul epitelial
precum i achiziia de nutrieni importani n procesele metabolice i implicit n multiplicarea celular. Factorii
de virulen activai in procesul de colonizare sunt reprezentai de adezine i enzime hidrolitice.
Dup ce procesul de colonizare a avut loc, are loc iniierea procesului de infecie superficial, proces n
care sunt exprimate n continuare genele care codific pentru enzimele hidrolitice (care au rol n degradarea
proteinelor gazdei, inclusiv a mucinei, matrixul proteic extracelular, molecule ale sistemului imunitar,
proteinele endoteliilor celulare, etc.) i pentru dezvoltarea hifal (cu rol n penetrarea epiteliului).
n etapa de infecie profund, sunt exprimate n special enzimele implicate n blocarea aciunii unor
componente ale sistemului imunitar al gazdei. Blocarea presupune n general degradarea componentelor
sistemului imunitar dar i evitarea aciunii acestora (evadarea din celulele macrofage). n urma colaborrii
dintre aceti factori de virulen tulpinile de drojdii penetreaz esuturilor, invadeaz vasele de snge i
mpiedica aciunea sistemului imunitar. (Coccidioides are capacitatea de a lega la nivelul peretelui celular o
serie de componente ale celulei gazd pentru mpiedica aciunea Ac acestea cosiderandu-i self)
Ultima etap (diseminarea) a infeciei cu drojdii patogene se concretizeaz prin aderena la endotelii,
infecia altor esuturi ale gazdei (diseminarea), activarea procesului de coagulare i a cascadei de trombui. La
aceast ultim etap a procesului infecios particip toi factorii de virulenn: adezinele, enzimele hidrolitice i
dimorfismul celular.

Virulena mediat de componente ale peretelui celular

Noiunea de aderen n microbiologie, constituie un concept de o importan fundamental, datorit
faptului ca mecanismele de fixare reprezint prima etap necesar majoritii microorganismelor patogene
pentru a dezvolta un proces infecios.
Colonizarea
Celulele drojdiilor prezint dou nveliuri, i anume, perete celular i membran plasmatic. Aceste
dou structuri, dei sunt diferite din punct de vedere fizic, chimic i arhitectural ele ndeplinesc funcii
asemntoare sau complementare. Proprietile protectoare, reglatoare (selective) i informaionale sunt
rezultatul unei cooperri funcionale ntre aceste dou structuri de suprafa.
Dei pn n prezent au fost deja identificate un numr semnificativ de molecule de la nivelul peretelui
celular care reprezint interfaa de comunicare cu celulele gazdei, totui mecanismele de legare la diferite tipuri
de celule nu sunt pe deplin elucidate. Peretele celular al tulpinilor de C. albicans este alctuit din trei
componente principale: glucanul (lanuri (1,3) i (1,4) de glucoz) mananul (manan proteine cu grad ridicat
de glicozilare) i chitin (polimer liniar de (1,4)-N-acetil glucozamin). Componentele secundare ale peretelui
celular sunt reprezentate de: fosfolipomanan, acid sialic, ditirozina i posibil chitosan.
n urma studiilor de microscopie electronic s-a constat faptul c peretele celular este constituit dintr-un
strat fibrilar extern format din mananproteine i dintr-o matrice pe baza de chitin i glucan legate covalent, care
ofer celulei rigiditate i rezisten crescut.
Capacitatea de legare la o gam larg de substraturi ofer tulpinilor aparinnd genului Candida
posibilitatea de a ocupa diverse nie ecologice i implicit de a coloniza diferite tipuri de esuturi.
Dintre moleculele implicate n aderena la diferite substraturi fac parte adezinele celulare, care sunt
eseniale n procesul de colonizare i de formare a biofilmelor i implicit n virulen i patogenitate.
Adezinele identificate la C. albicans includ moleculele care se leag la nivelul organismului gazd att
de componente serice: fragmente ale sistemul complement C3b, C3d, fibrinogen i de componente ale matricei
extracelulare a celulelor epiteliale precum: laminina, fibronectin, mucin etc.
Capacitatea de aderen n cazul drojdiilor este dependent de forma morfologic a celulelor. Astfel s-a
constatat c celulele n stare hifala ader de cinci ori mai mult dect cele n faz de blastospori. Factorii care
contribuie la creterea aderenei formelor hifale includ schimbri calitative ale adezinelor prin modificarea
gradului de exprimarea unor adezine specifice.
Biofilmele (comuniti de celule aderate la un substrat i ncorporate ntr-o matrice extracelular) apar n
urma tendinei normale de ataare a microorganismelor pe suprafee biotice (diferite tipuri de celule) sau
abiotice (suprafee minerale, polimeri sintetici). Microorganismele din cadrul biofilmului prezint un fenotip
modificat, n ceea ce privete rata de cretere i de transcriere a genelor.
Este bine cunoscut faptul ca speciile genului Candida au capacitatea de a forma biofilme care pot
contribui la creterea patogenitii tulpinilor prin dezvoltarea rezistenei la compui antifungici. Aceste

microorganisme sunt capabile s dezvolte structuri complexe de tipul biofilmelor pe suprafaa implanturilor
medicale i astfel s se protejeze de aciunea agenilor antifungici.
Formarea i structura biofilmelor candidale sunt influenate de suprafaa de contact, factorii din mediu,
morfologia celular precum i specia implicat n dezvoltarea biofilmelor. Natura chimic a suprafeei de
contact influeneaz magnitudinea formrii biofilmului. Factorii din mediu pot influena formarea de biofilm,
prezena unui nivel crescut de glucoz n mediu, temperatura, pH-ul etc. n funcie de specia, structura
biofilmului este diferit astfel s-a observat c speciile C. parapsilosis, C. pseudotropicalis, C. glabrata dezvolt
biofilme slabe pe structuri din policlorur de vinil comparativ cu biofilmele dezvoltate de C. albicans. Dei
exist puine studii n acest sens, s-a observat existena unei variabiliti la nivel de tulpin n procesul de
formare al biofilmelor.
Capacitate tulpinilor de drojdii de a forma biofilme joac un rol important n dezvoltarea unor infecii, n
special la nivelul dispozitivelor medicale. Dezvoltarea chirurgiei plastice a permis utilizarea unui numr ridicat
i variat de biomateriale n scopul implantrii lor la nivelul organismului uman (catetere, proteze, implanturi
dentare, implanturi contraceptive, valve, aparate auditive). O parte din aceste biomateriale au o importan
vital n funcionarea normal a unor organe (valve cardiace, defibrilatoare, implantul ventricular) sau pot
ndeplini funcii auxiliare (contracepie, mrirea snilor, schimbarea culorii ochilor). Utilizarea tot mai frecven
a acestor materiale (implanturi) a condus la o cretere a numrului de infecii cauzate de specii ale genului
Candida.
Cel puin jumtate din infeciile nosocomiale sunt asociate cu implanturile medicale. Colonizarea
acestor biomateriale poate conduce la infecii sistemice sau la funcionarea defectuoas a acestor implanturi, n
final fiind necesar de cele mai multe ori ndeprtarea lor. Dei ndeprtarea acestor implanturi poate fi de cele
mai multe ori dificil, totui, tehnic este practicat datorit refractabilitii microorganismelor asociate
biomaterialului la diferii compui antimicrobieni.
O alt problem major o reprezint creterea rezistenei la substane antifungice a microorganismelor
din cadrul biofilmului, ca urmare a formrii unui strat polizaharidic extern care mpiedica ptrunderea
antifungicului n interiorul biofilmului. S-a constatat ca n cazul tulpinilor de C. albicans rezistena poate crete
de la 30 pn la 2000 de ori la aciunea unor substanelor antifungice (fluconazol, amfotericina B, intraconazol
i ketoconazol) comparativ cu rezistena celulelor planctonice la aceste substane antifungice. Acest fenomen
este ntlnit i la speciile non-albicans. Mecanismele de rezisten la substanele de acest gen includ n primul
rnd blocarea penetrrii biofilmului de ctre substana antifungic dar i ncetinirea creterii celulelor
acompaniat de modificri ale structurii peretelui celular.
Utiliznd modele in vitro i in vivo s-a constatat faptul c formarea biofilemlor implic parcurgerea unor
etape succesive. Prima etap este reprezentat de aderarea tulpinilor de drojdii la substrat. Dup aceast faz are
loc proliferarea celulelor de drojdii i formarea unor straturi de celule. Studiile de microscopie au evideniat la
nivelul biofilmului existenta celor trei forme morfologice, reprezentate de blastospori, pseudohife i hife.

Urmtoarea etap const n maturare biofilmului prin formarea unei matrici extracelulare format din
carbohidrai, proteine, hexozamine, fosfor i acid uronic, dar i din celule ale organismului gazd i diveri
compui produi de acestea cum ar fi glicoproteinele i acizii nucleici. Compoziia matricei este diferit de la o
specie la alt, fiind influenat de situsul formrii biofilmului i respectiv de nutrienii disponibili n apropierea
locului de formare a biofilmului. Ultima etap const n desprinderea celulelor din cadrul biofilmului i trecerea
n snge, aceast etap fiind asociat cu dezvoltarea septicemiei.
Studiile realizate n ultimii ani au avut drept scop nelegerea mecanismelor genetice implicate n
dezvoltarea biofilmelor, acestea oferind o nou perspectiv asupra rolului lor n interaciunea gazd patogen,
rezisten la compui cu aciune antifungic i comunicarea intercelular. S-a constatat ca exopolizaharidele de
la nivelul biofimelor produse de specia C. albicans sunt bogate n resturi de (1,3)-glucan, fiind astfel propus
chiar diagnosticarea pe baza detectrii prezenei resturilor de (1,3)-glucan n snge.
S-a observat o scdere a viabilitii celulelor de drojdii din cadrul biofilmelor n urma tratamentului cu
diferii compui din clasa echinocadinelor.
Au fost emise o serie de ipoteze conform crora n formarea biofimului sunt implicate o serie de
proteine de la nivelul peretelui celular i unele molecule cu rol n semnalizare. Factorul de transcripie Bcr1,
care este implicat n reglarea expresiei genelor Als1, Als3 i Hwp1, se pare c joac un rol important n procesul
de formare a biofilmului. Pe lng genele codificatoare de adezine au fost identificate o serie de alte gene
implicate n procesul de filamentatie care ar contribui la dezvoltarea biofilmului.
S-a constatat de asemenea c unele molecule implicate n comunicarea intercelular microbian, prin
intermediul moleculelor de semnalizare (quorum sensing) intervin i n formarea biofilmelor. Un exemplu este
farnesolul, compus implicat n semnalizarea intercelular a celulelor de drojdii n timpul creterii care are rol n
inhibarea trecerii celulelor de drojdii de la forma de blastospori la forma de hife. Expunerea biofilmelor la
farnesol este urmat de o reducere a capacitii tulpinilor de drojdii de a forma biofilme.
Hidrofobicitatea Studiile recente au artat c hidrobobicitate faciliteaz legarea celulelor de drojdii la
nivelul diferitelor tipuri de esuturi ale gazdei i mpiedica procesul de fagocitare.
S-a observat ca n cadrul specie C. albicans exist tulpini cu grad diferit de hidrofobicitate, acesta fiind
influenat de fosfomanaproteinele de la nivelul peretelui celular respectiv de legturi fosfodiesterice dintre
resturile de -1,2-manoza i N-glican. Unii cercettori susin faptul c gradul de hidrofobicitate este corelat cu
lungimea oligozaharidului de la nivelul manaproteinelor.
Morfogenez
Un atribut important n virulena speciilor din genul Candida este reprezentat de capacitatea acestora de
a comuta ntre formele de blastospori i cele filamentoase ca rspuns la diferii factori de mediu. Forma
filamentoas este cea mai virulent i are un rol important n procesele de aderen i invazie la celulele
epiteliale umane. Studiile actuale au artat c tulpinile mutante de C. albicans care nu pot trece de la forma de

blastospor la cea de hifa sunt incapabile s penetreze stratul epitelial uman. Studiile recente au evideniat o
cretere a supraexpresiei unor gene cunoscute ca fiind implicate n virulen la celulele n stare hifala.
n urma tranziiei morfologice au loc schimbri la nivelul compoziiei peretelui celular. O astfel de
schimbare implic o cretere de cinci ori mai mare a nivelului de chitin la formele filamentate fa de celulele
normale. De asemenea s-a observat o cretere a legturilor (1,2)- dintre manoz la nivelul celulelor capabile de
nmugurire. Modificrile de la nivelul paretelui celular care apar n urma tranziiei de la forma capabil de
nmugurire la cea hifala permite celulei de drojdii s reziste aciunii moleculelor sistemului imunitar. S-a
observat c receptorul dectin-1 de la nivelul macrofagelor specializat n legarea microorganismelor patogene, se
leag de celulele de drojdii prin formarea de legturi cu (1,3)-glucanul la nivelul peretelui celular al drojdiilor.
n urma realizrii legturilor tulpina de drojdie este recunoscut de ctre macrofage i fagocitat. n cazul
celulelor de drojdii, (1,3)-glucanul este protejat fa de celulele sistemului imunitar printr-un strat extern de
mananoproteine, cu excepia locurilor de unde s-au desprins mugurii de drojdie, acestea rmnnd expuse la
aciunea macrofagelor. Astfel receptorul dectin-1 se leag doar la nivelul celulelor capabile de nmugurire, iar
celulele sub forma de hife nu sunt recunoscute i fagocitate de ctre macrofage. Studiile recente realizate pe C.
albicans au artat c cu odat cu progresia infeciei are loc o expunere a stratului de glucan de la nivelul
peretelui celular.
n urma studiului expresiei unor gene implicate n sinteza proteinelor de la nivelul peretelui celular s-a
constatat c aceste sunt reglate diferit n cele dou tipuri de celule.
Compuii/Enzimele implicate n virulena celulelor de drojdii
O serie de enzime hidrolitice secretate de speciile din genul Candida joac un rol foarte important n procesul
infecios. Invazia celulelor gazd de ctre microorganismele patogene determin penetrarea i distrugerea
nveliului celular extern. Acest proces de transmigraie este mediat cel mai probabil de ctre stadiul morfologic
al celulei de Candida precum i de ctre enzimele pe care aceste microorganisme le pot secreta. Fosfolipidele i
proteinele reprezint constituenii majori ai nveliului celulelor gazdei. Din acest motiv enzimele capabile s
degradeze aceste tipuri de constitueni, cum sunt proteinazele i fosfolipazele sunt implicate n procesul de
degradare a membranei celulare n timpul invaziei celulelor gazdei. Prin clivarea fosfolipidelor membranare,
este destabilizat structura membranei i are loc liza celular.
Pn n prezent au fost identificate doar o parte din enzimele secretate de speciile genului Candida,
odat cu identificarea i atribuirea funciilor acestora putndu-se aprecia pe deplin importana i rolul acestora
n patogenitate.
Aspartil proteinazele Proteinazele scindeaz legturile peptidice de la nivelul proteinelor i n funcie de
mecanismul catalitic acestea sunt clasificate n serin, cistein i aspartil proteinaze. Aspartil proteinazele sunt
cele mai studiate n ceea ce privete implicarea lor n virulen i patogenitatea microorganismelor. Dintre
speciile genului Candida, C. albicans prezint cele mai multe aspartil proteinaze, respectiv 10 codificate de

gene SAP notate de la 1 la 10. n cazul speciilor non-albicans au fost identificate pn n prezent 8 gene SAP
(serin aspartil proteinaze) la specia C. dubliniensis toate cu excepia genelor SAP 5 i 6. C. tropicalis prezint
patru gene SAP, iar C. tropicalis doar trei gene. La C. glabrata au fost evideniate multiple gene ortoloage cu
aspartil proteinazele-GPI de la S. cerevisiae, ns activitatea extracelular este redus. n ceea ce privete
aspartil proteinazele la alte specii ale genului Candida nu exist date pn n prezent.
Proteazele joac un rol important n achiziia de nutrieni prin scindarea complexelor proteice n peptide.
S-a constatat c fiecare aspartil proteinaza prezint o anumit specificitate. Un astfel de exemplu este aspartil
proteinaza Sap2 care este implicat n degradarea mucoasei, respectiv a mucinei i proteinelor de la nivelul
matrixului extracelular.
Aspartil proteinazele sunt implicate i n alte etape ale procesului infecios precum invazia i aprarea
fa de moleculele sistemului imunitar prin scindarea unor molecule precum: imunoglobulina A, lactoferina
salivar, a2-macroglobulina, cistatin A i a altor molecule ale sistemului complement.
Fosfolipazele Fosfolipazele sunt reprezentate de enzime capabile s hidrolizeze una sau mai multe
legturi esterice de la nivelul glicerofosfolipidelor. Fosfolipidele sunt prezente la un spectru larg de ageni
patogeni: bacterii, fungi i protozoare. n funcie de tipul/inta/nivelul de fosfolipid acestea se mpart n 4 clase
notate de la A la D. Activitatea fosfolipazica este evideniat prin cultivarea tulpinilor de drojdii pe mediu cu
adaos de glbenu de ou. Activitatea fosfolipazica a fost evideniat atta la specia C. albicans, ct i la diferite
specii non-albicans precum C. glabrata, C. parapsilosis, C. tropicalis, C. lusitaniae i C. krusei.
Se pare c dintre cele patru familii, doar cele din familia B sunt secretate n afar celulei, acestea fiind
exprimate de celulele aflate att n stare de blastospori, ct i n stare hifala. Fosfolipaza PlB1 prezint o
activitate extracelular ridicat i joac un rol important n virulen. Astfel, inactivarea genei conduce la
atenuarea infeciilor sistemice dar datele sunt nc insuficiente. Blocarea acestor enzime conduce la scderea
capacitii celulelor de drojdii de a penetra membrane plasmatic.
Lipazele Ca i n cazul esterazelor, lipazele sunt implicate n hidroliza unor esteri de mono, di i
triacilglicerol sau chiar a unor fosfolipide. n cazul speciei C. albicans lipazele sunt codificate de genele LIP
notate de la 1 la 10. O parte din aceste gene au fost identificate i la alte specii cu potenial patogen din genul
Candida. Gena LIP10 a fost identificat la speciile C. tropicalis, C. parapsilosis i C. krusei, ns nu i la C.
glabrata. n ceea ce privete structura lipazelor s-a evideniat prezena unei regiuni conservate bogat n resturi
de cistein.
n ceea ce privete rolul pe care lipazele l joac n procesul infecios exist pn la ora actual o serie de
ipoteze conform crora lipazele sunt implicate n procesul de formare a biofilmelor, rezistena la macrofage,
degradarea epiteliilor, degradarea lipidelor cu scopul achiziionrii de nutrieni, capacitatea de aderare la nivelul
esutului gazd i liza altor microorganism.
Expresia acestor gene a fost evideniat n timpul tranziiei de la forma de blastospori la forma de hife
ns nu se tie exact dac aceste enzime sunt asociate cu modificri morfologice. Studiile in vivo au demonstrat

o reducere semnificativ a virulenei unei tulpini de C. albicans care nu exprim gena LIP8 n cazul unei infecii
intraperitoneal. Lipazele produse de specia C. albicans, prezint citotoxicitate ridicat asupra macrofagelor i
hepatocitelor, determinnd o acumulare a lipidelor n interiorul celulei.
DN-aze Capacitatea unor tulpini patogene de a sintetiza DN-aze ajut celula s lupte mpotriva
Neutrophil extracellular traps (NETs) produse de leucocite. Neutrofilele sunt prima linie de aprare mpotriva
infeciilor, sunt cunoscute la ora actual trei strategii de omorre a patogenilor invadatori: prin fagocitare,
eliberarea unor compui cu aciune antimicrobian, n 2004 o nou metod a fost identificat respectiv formarea
unor molecule: NETs, aceste sunt molecule extracelulare alctuite din ADN i proteine care au capacitatea de a
lega i distruge microorganismele.
Hemolizinele Studii anterioare au stabilit c hemolizinele sunt importante n procesul infecios, acestea
au rol de a acumula fierul din organism dar i diferii nutrieni important n metabolismul celular. n cazul
speciilor din genul Candida, activitatea hemolitic este datorat aciunii unor enzime hidrolitice, cum ar fi
proteaze, lipaze, fosfolipaze, esterazele, i fosfatazele. Spre deosebire de ali patogeni bacterieni unde activitatea
hemolitic este corelat cu eliberarea unor toxine (S. aureus).
Proteinele de legare a fierului
Capacitatea de a legare a fierul reprezint un caracter important n dezvoltarea procesului infecios, fiind
evideniat la o serie larg de microorganisme patogene. Fierul este un element vital n metabolismul celulelor
drojdii, acesta fiind utilizat att n funcionarea unor enzime (cofactor enzimatic) fiind un component cheie n
procesul de respiraie (de la nivelul catenei transportoare de electroni) i n procesele de aprare fa de speciile
reactive de oxigen. Celulele microbiene trebuie s competiioneze pentru ionii de Fe cu unii constitueni celulari
ca: feritin, hemosiderin, gruparea hem i unele glicoproteine extracelulare, precum i cu trasferina (TF) din
snge i limf, lactoferina din PMN. Una dintre strategiile adoptate de microorganismele patogene pt obinerea
fierului este de a elibera molecule cu rol de liganzi de Fe3 +, care au rol de a lega fierul de la nivelul proteinelor
gazd, urmat de preluarea acestora cu ajutorul unor receptori specifici
Un rol important n legarea fierului l are proteina Als3 de la nivelul peretelui celular, care face parte din
categoria proteinelor glicozilfosfatidilinozitol dependente. Alte proteine implicate n legarea fierului sunt rbt5,
constatndu-se c inactivarea genei conduce la diminuarea capacitii tulpinii de C. albicans de a prelua Fe de la
nivelul hemoglobinei. O parte din aceste proteine sunt implicate i n procesele de aderen i de formare a
biofilmului.
Alte enzime implicate n patogenitate
Pe lng enzimele prezentate anterior exist i alte tipuri mai puin cunoscute care joac un rol important
n procesul infecios, printre care: fosfatazele (Pho100, Pho112, Pho113), glucoamilazele (Gca1, Sga1) i -Ncetilhexoaminidazele (Hex1). S-a observat o cretere a expresiei genei GCA1 n timpul unei infecii orale a unor
oareci, iar anularea activitii enzimei hex1 a condus la o reducere a patogenicitii tulpinii, n urma infectrii

unor oareci. Activitatea hemolitic a tulpinilor de drojdii este asociat cu eliberarea unor enzime hidrolitice:
lipaze fosfolipaze, proteinaze etc.
Rezistena la substane antifungice
Frecvena infeciilor micotice sistemice a crescut n ultimele decenii datorit utilizrii substanelor
antibacteriene cu spectru larg, a imunosupresoarelor, introducerea diferitelor dispozitive medicale. n ciuda
eficienei substanelor antifungice utilizate pentru combaterea unor astfel de infecii, apariia fenomenelor de
rezistena, toxicitatea lor ridicat i capacitatea sczut a medicamentului de a ajunge la situsul int, rmn n
continuare probleme majore n combaterea infeciilor sistemice.
Funcie de modul i de inta de aciune a substanelor antifungice acestea pot fi mprite n fungicide cu
aciune local i cu aciune sistemic. Antifungicele sunt substane active fa de o serie de fungi i drojdii
patogene, avnd un spectru de activitate larg sau ngust. Printre cele mai utilizate n clinic se numr compui
din clasa azolilor, cum ar fi fluconazolul i itraconazolul.
Antifungicele cuprnd cinci clase majore: azolii, polienele, alilaminele, morfolinele i echinocandinele.
Polienele (amfotericina B, nistatinul, natamicinul, candicin etc)
Azolii:- imidazoli (ketoconazolul, clotrimazolul, miconazolul )
- triazoli (fluconazol, voriconazol, posaconazol, itraconazol)
- tiazoli (abafuginul)
Alilamine (terbinafina, amorolfina, butenafina)
Morfoline (amorolfine)
Echinocandine (caspofungin, micafungin, anidulafungin)
Altele: 5-fluorocitozina, acidul benzoic
Fluconazolul
Din clasa azolilor, fluconazolul este cel mai bine tolerat de organismul uman. Spre deosebire de ali
compui din aceast clas, fluconazolul este metabolizat ntr-o proporie foarte mic de celulele gazdei. Mai
mult de 90% din doza administrat este eliminat n urin, iar aproximativ 90% se regsete sub forma iniial
i 10% sub form de metabolii inactivi. Un studiu clinic realizat pe 40 de copii cu septicemie cauzat de specii
din genul Candida, crora li s-a administrat fluconazol 6mg/kg/zi a evideniat o cretere a creatininei serice
doar la doi dintre ei, ns tratamentul a putut fi continuat.
Ca mecanism de aciune compuii azolici au capacitatea de a inhiba sinteza ergosterolului, un
component important al membranei plasmatice care are rol n fluidizarea i n permeabilizarea membranei.
Fluconazolul blocheaz activitatea lanosterol-14-demetilazei dependent de citocromul P450. Prin inhibarea
acestei enzime se stopeaz conversia de la lanosterol la ergosterol. n consecin, permeabilitatea membranei
plasmatice este alterat, iar celula de drojdii moare. De-a lungul timpului specia C. albicans a dezvoltat o serie
de mecanisme de rezisten:

1. Supraexprimarea enzimei lanosterol-14demetilaza codificat de gena ERG11

2. Alterarea intei de aciune a fluconazolului respectiv enzima lanosterol-14-demetilaza (ERG11) prin
scderea afinitii de legare a fluconazolului la enzima. S-a constatat c apariia unei mutaii punctiforme la
nivelul genei ERG11 induce o scdere a afinitii de legare la fluconazol.
3. Supraexprimarea unor gene implicate n sinteza unor pompe de eflux (genele CDR-Candida drug
resistance, MDR-multidrug resistance)
4. Activarea unor molecule de stres care induc o cretere a viabilitii celulare.
Alte gene care sunt implicate n procesul de rezisten sunt factorii de transcriere, att ai pompelor de
eflux (PDR1- Pleiotropic Drug Resistance) dar i ai cii de biosintez a ergosterolului (UPC2). Astfel deletia
genei UPC2 conduce la creterea sensibilitii la fluconazol i ketoconazol, iar supraexprimarea genei conduce
la creterea rezistenei la azoli. i alte componente din structura membranei celulare sunt implicate n rezistena
la azoli. Sfingolipidele sunt componente majoritare ale membranei celulare i care joac un rol important n
meninerea funciilor membranei plasmatice. Dac se produce o deletie care genereaz un dezechilibru la
nivelul concentraiei de sfiingolipide de la suprafaa membranei are loc i o scdere a activitii pompelor de
eflux i implicit o scdere a rezistenei la azoli. n general rezistena la fluconazol este asociat i cu rezistena
la ali compui din clasa azolilor, precum: itraconazol, voriconazol i posaconazol.
Terbinafina
Terbinafina este un compus sintetic, utilizat n special n tratarea infeciilor cutanate. Este utilizat n
combaterea infeciilor produse de specii din genul Candida rezistente la compui azolici.
Terbinafina inhib aciunea squalen epoxidazei, o enzim implicat n formarea ergosterolului,
principalul sterol de la nivelul membranei plasmatice. Pierderii activitii enzimei induce o acumulare a
scualenului la nivelul membranei plasmatice care mpiedica funcionarea corect a membranei plasmatice. Nu
au fost raportate pn acum specii de Candida rezistente la terbinafina.
Caspofunginul
Echinocandinele au o activitate fungicid mpotriva speciilor de Candida, fiind active inclusiv asupra
izolatelor triazol-rezistente i activitate fungistatic asupra speciilor din genul Aspergillus.
n studiile clinice, caspofunginul a demonstrat eficien n tratarea candidemiei, candidozei esofagiene i
a neutropeniei febrile (scderea numrului de granulocite neoutrofile apare n urma tratamentului citostatic).
Micafunginul a demonstrat eficacitatea n tratarea infeciilor dezvoltate n urma transplantului de celule stem
hematopoietice i n tratamentul candidozei esofagiene. Gradul de toxicitate i rata de interaciune cu alte
medicamente sunt destul de sczute comparativ cu alte substane antifungice, reprezentnd de aceea o opiune
atractiv n tratamentul infeciilor micotice invazive. Costul ridicat de producie limiteaz utilizarea acestora n
tratarea infeciilor primare.
Caspofunginul este un derivat semisintetic al pneumocandinului B0, un lipopeptid obinut n urma
proceselor de fermentaie utiliznd Glarea lozoyensis. Caspofunginul inhib sinteza -(1,3)-D-glucanului de la

nivelul peretelui celular. Acioneaz rapid asupra speciilor de Candida, n schimb s-a constatat c speciile C.
parapsilosis i C. krusei sunt mai puin sensibile.

Figura 1 (a) inta de aciune a compuilor cu aciune antifungic la specia C. albicans (b) Mecanismul de
rezisten dezvoltat de specia C. albicans
5-fluorocitozina este un compus sintetic, utilizat n tratarea infeciilor profunde uneori n asociere cu
amfotericina B. Mai puin de 1% din doza administrat este metabolizat de celulele umane, iar 90% este
eliminat n urin.

5-fluorocitozina este transportat n interiorul celulei sensibile cu ajutorul unei citozin permeaze. n
interiorul celulei, 5-fluorocitozina este convertit de citozin dezaminaza n 5- fluorouracil care este ncorporat
n moleculele de ARN n locul uracilului aprnd astfel anomalii n sinteza proteic (Figura 1). De asemenea se
pare c 5-fluorocitozina blocheaz activitatea enzimei timidilat sintaza implicat n sinteza moleculelor de
ADN. Peste 10% din speciile de C. albicans i peste 20% din speciile C. tropicalis prezint rezisten la 5fluorocitozina. Rezistena este asociat cu pierderea enzimei uridin monofosfat pirofosforilaza.
Amfotericina B
Amfotericina B este o poliena macrociclica produs de Streptomyces nodosus. Este utilizat n tratarea
infeciilor profunde. Dezavantajul major l reprezint nefrotoxicitatea ridicat datorit capacitii mari de a se
leag i de sterolii de la nivelul membranei celulelor mamaliene. Pentru a scdea toxicitatea medicamentului s-a
adugat o component lipidic. Mecanismul de aciune al amfotericinei B asupra celulelor de drojdii este
reprezentat de inducerea unei depolarizri a membranei plasmatice ca urmare a legrii de ergosterolul de la
nivelul membranei plasmatice. Odat cu depolarizarea membranei plasmatice are loc formarea unor pori la
nivelul membranei, care permit efluxul constituenilor celulari i implicit este indus moartea celular.
Rezistena la amfotericina B din cadrul genului Candida este asociat cu o reducerea a concentraiei de
ergosterol de la nivelul membranei plasmatice (Figura 1). Deficiena de ergosterol a fost asociat cu o mutaie
de tip missense aprut la nivelul genei ERG6. Genele ERG6 i ERG11 sunt implicate n adugarea de
lanosterol i eburicol la nivelul membranei celulare n locul ergosterolului.