414

tiv Mayer i respectiv Bertrand.

Apariia unor precipitate abundente poate indica prezena alcaloizilor,baze alcaloidice
cuaternare i a aminelor oxidate.
Pentru confirmarea prezenei alcaloizilor extractul apos acid rmas se adduce ntr-o plnie de
separare. Se adaug ammoniac conc. ( R) (pH=8-10) dup care se agit n cantiti mici de eter
sau chloroform. Se separ cele dou soluii : extractul eteric sau cloroformic i soluia apoas
alcalin.
n extractul eteric sau cloroformic se identific alcaloizii dup procedeul descris anterior, iar
n soluia apoas alcalin dup acidulare se identific bazele alcalidice cuaternare i aminele
oxidate.
Identificarea bazelor alcaloidice cuaternare prin CSS: adsorbant silicagel G Merck; faza
mobil (developant): n-propanol-amoniac-ap (4:22, v/v); revelare cu reactive Dragendorff
(R )-pulveritare.
14.2.1.5. Identificarea aminoacizilor
5 ml extract se evapor ntr-o capsul la sec. Reziduul se reia cu 1,5 ml ap la cald, se
filtreaz ntr-o eprubet i se adaug 10 picturi soluie acetonic de ninhidrin 1%. Se nclzete
ntr-o baie de ap la fierbere 20-25 min.
Apariia unei culori violete sau albastru-violet indic prezena aminoacizilor.
Identificarea aminoacizilor prin CSS: adsorbant silicagel; faza mobil: n-butanol-acid aceticap (40:10:50 v/v); revelare cu o soluie acetonic de ninhidrin 1% pulverizare.
14.2.2.2. Reacii efectuate n extractul alcoolic hidrolizat
25 ml extract alcoolic se aduce ntr-un balon cu refrigerent ascendent i i se adaug 15 ml acid
clorhidric 10%, apoi se fierbe la reflux timpt de 30 min. Se distileaz alcoolul ntr-un aparat
adecvat. Soluia apoas acid care adeseori devine opalescent, se aduce ntr-o plnie de separare
i se agit repetat cu eter (3x15 ml). Prin separare rezult:
- extractul eteric care se deshidrateaz cu sulfat de sodiu anhidru
- soluia apoas acid.
14.2.2.1. Extractul eteric (40 ml). n acesta se pot identifica urmtoarele grupe de principii
active: antracenozide, cumarine, glicozide sterolice i triterpenice (prin reacii caracteristice
agliconilor obinui n urma hidrolizei).
14.2.2.1.1. Identificarea antracenozidelor: 3 ml extract eteric se aduc ntr-o eprubet, se adaug
1 ml amoniac 25% i se agit. Dac soluia alcalin se coloreaz n rou-viiniu snt prezeni
emodolii (agliconii antracenozidelor).
14.2.2.1.2. Identificarea cumarinelor: 5 ml extract eteric se evapor ntr-o capsul de porelan
pe baia de ap (la ni). Reziduul se dizolv n 2 ml de ap distilat fierbinte. Dup rcire soluia
se mparte n 2 eprubete. Una din eprubete servete ca prob martor. n cealalt eprubet se
adaug 0,5 ml amoniac 10%. Ambele eprubete se examineaz n U.V. Apariia unei fluorescene
(albastre, verzi sau violete) mai intens la soluia alcalinizat, indic prezena cumarinelor.
Prin reacia Feigl-Frehden-Anger se poate pune n eviden lactona hexatomic din structura
cumarinelor, procedndu-se astfel: extractele apoase cercetate la U.V. se aduc ntr-o capsul, se
adaug 3-5 picturi sol. 0,5 N de clorhidrat de hidroxilamin i hidroxid de potasiu 10%, pn la
pH=8-9. Se concentreaz pe baie de nisip (la ni). Reziduul se dizolv n acid clorhidric 10%
adugat pn la pH 3-4 la care se adiioneaz 1-2 picturi sol. Clorur feric 3% ( R). Prezena

414

derivailor lactonici determin apariia unei coloraii violete fugace.

14.2.2.1.3. Identificarea glicozidelor sterolice (heterozide cardiotonice, saponozide).
14.2.2.1.3.1. Heterozidele cardiotonice se identific cu ajutorul reaciilor care pun n eviden:
nucleul sterolic, lactona penta- sau hexatomic i ozele specifice.
-Nucleul sterolic se evideniaz cu ajutorul reaciei Liebermann-Bourchard(v. 14.1.2.).
-Lactona pentaatomic nesaturat caracteristic glicozidelor cardenolidice se pune n eviden
cu ajutorul reaciei Kedde; 10 ml extract eteric se evapor ntr-o capsul pe baia de ap. Reziduul
se dizolv n 1-2 ml metanol, se adaug 1-2 ml sol. Alcoolic de hidroxid de potasiu 1 N i 3-4
picturi sol. 1% de acid 3,5 dinitrobenzoic (R ). Prin nclzire se obine o coloraie violet
fugace.
n acelai scop se pot folosi i reactivii: Baljet (2,4,5-trinitrofenol n mediu alcalin), Legal,
(nitroprusiat de sodiu n mediu alcalin), Raymond (m-dinitrobenzen n mediu alcalin) care dau
reacii de culoare.
-Partea glucidica se identific cu ajutorul reaciei Keller-Kiliani i reaciei Pesez (xanthydrol,sol.
1%) caracteristic 2-desoxiozilor.
Identificarea prin CSS v.generaliti heterozide cardiotonice (vol.1)
14.2.2.1.3.2. Identificarea saponinelor sterolice i triterpenice
Pentru nucleul sterolic sau triterpenic se efectueaz reacia Liebarmann-burchard.
Pentru sterolii nesaturai se efectueaz testul Salkowski (cu acid sulfuric conc.). Apariia unei
coloraii roii viinii la limita celor 2 lichide (inel) indic prezena sterolilor nesaturai.
Saponinele se identific prin proba de spumefiere i de hemoliz folosind sol apoas rezultat
prin dizolvare reziduului obinut prin concentrarea extractului alcoolic nehidrolizat.
14.2.2.1.4. Identificarea flavonozidelor: 5 ml extraxt eteric se evapor ntr-o capsul de porelan
pe baia de ap.Reziduul se dizolv n 2 ml metanol 50% la cald.Soluia de culoare galben se
aduce ntr-o eprubet, se adaug 2-3 buci de span de magneziu i 10 picturi HCl (c).Apariia
unei coloraii roii sau portocalii,indic prezena agliconilor flavonozidelor.Culoarea roie este
caracteristic flavonolilor,iar cea portocalie flavonelor.
Identificarea flavonozidelor se poate face i n extractul alcoolic nehidrolizat, astfel se evapor 3
ml extract ntr-o capsul,pe baia de ap. Dac reziduul este verde, se tritureaz de mai multe ori
cu eter de petrol (3x12 ml) pentru extracia clorofilei i a rezinelor. Reziduul astfel purificat se
dizolv n 2 ml metanol 50% i se execut reacia Shibata.
14.2.2.1.5 Identificarea proantocianidolilor (leucoantrocianilor): la 5 ml extract alcoolic se
adaug 0,5 ml HCl (c) i se nclzete 5 min. Dac apare o culoare rpie care la pH=7 trece n
violet, iar n mediul alcalin n albastru sau verde, snt prezente antocianozidele.
n cazul n care sol apoas acid conine un precipitat rou brun a crui culoare se menine i n
mediul alcalin este posibil s existe taninuri catechice (v.14.2.1.1.).