UNIVERSIDAD POLITCNICA SALESIANA

INGENIERA EN BIOTECNOLOGA DE LOS

RECURSOS NATURALES

MICROBIOLOGA

DIFERENTES TINCIONES UTILIZADAS EN LA

MICROBIOLOGA PARA LOGRAR UNA
IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN DEL
MUNDO PROCARIOTA

VANESSA GARZN C.

TERCERO A

Tincin es el proceso por el cual las molculas de un colorante se adsorben a

una superficie. (Santambrosio, 2009)
El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles
de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste
entre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el
contraste entre la clula y el medio que la rodea es la utilizacin de colorantes.
Estos pueden emplearse tambin para localizar estructuras especficas en la
clula o para distinguir entre tipos diferentes de clulas.
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna
afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados
con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan
con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales
como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Otros colorantes son
molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los
constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas,
mientras que otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles. Los
colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos de la clula,
usndose a menudo para revelar la localizacin de depsitos de grasa. Existen
diversos tipos de tinciones que nos permiten observar microorganismos los
cuales son:
Tincin de Gram
Esta tincin desarrollada por el doctor Christian Gram en 1884, esta tincin
permite, de acuerdo con la estructura y grosor de la pared bacteriana, agrupar
las bacterias en Gram positivas y en Gram negativas. Las Gram positivas
poseen una capa gruesa de peptidoglicn y carecen de una membrana
externa.
Algunas bacterias se clasifican como Gram variables, pues simultneamente
presentan tincin de Gram positivas y de Gram negativas. (Rodrguez,
Gamboa, Hernndez, & Garca, 2005)
La tincin de Gram se basa en colocar como colorante primario cristal violeta,
el cual tiene afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana.
Posteriormente, se coloca lugol, el cual sirve como mordiente e impide la salida
del cristal violeta por la formacin de un complejo cristal violeta yodo que satura
los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. En seguida, se coloca
una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra
los poros de la misma, tambin destruye la membrana externa de las bacterias
Gram negativas debido a que sta es soluble a la accin de solventes
orgnicos, como la mezcla de alcohol-acetona. (Lpez, y otros, 2014)

Figura 1. Procedimiento de la Tincin Gram (Totora, Fuke & Case, 2007).

Tincin de Ziehl Neelsen

Algunas bacterias, especialmente del gnero Mycobacterium, no se tien
fcilmente con los procedimientos usuales. Las micobacterias, a pesar de ser
filogenticamente Gram positivas, presentan una capa externa con grandes
cantidades de materiales lipdicos, cidos miclicos, por lo que su pared es
hidrofbica. Por esta razn repelen el agua y son impermeables a los
colorantes y otros compuestos qumicos en solucin acuosa. La tincin de
cido de resistencia se denomina as por la naturaleza qumica del decolorante,
el cual es mucho ms fuerte que el utilizado en la tincin de Gram. (Rodrguez,
Gamboa, Hernndez, & Garca, 2005)
La tincin se basa en colocar carbol-fucsina y calentar la preparacin
ligeramente para solubilizar las ceras, lpidos y otros cidos grasos de la pared
celular para que permita el paso libre del colorante, el cual tiene una enorme
afinidad por los cidos miclicos presentes en la pared. Al enfriar con agua, los
componentes de la pared vuelven a solidificar, resistiendo la accin abrasiva
del alcohol-cido, y el azul de metileno se utiliza como contratincin. Las
muestras clnicas tiles para su uso son mltiples, como el lquido
cefalorraqudeo, lquido pleural, lquido sinovial, lquido pericrdico, biopsias
para cultivo, abscesos, aspirados, crecimiento de colonias aisladas en medios
de cultivo, expectoraciones, aspirados endotraqueales y lavados
bronquioalveolares. Una tincin positiva es aqulla en la que se observan
bacilos cido-alcohol resistente, los cuales son de color rojo fucsia. (Lpez, y
otros, 2014)

Figura 2. Tincin Bacterias acido-alcohol resistentes. (Totora, Fuke & Case, 2007).

Tincin negativa
Es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se dejan sin teir
pero se colorea un cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es
el perfil de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un
material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que
simplemente rodea las clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin
de partculas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble
en agua). La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste
de las clulas en microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la
presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas. (AcuaNatura,
2013)
La tincin negativa fue desarrollada originalmente para microscopia de luz con
el fi n de rodear y delinear las bacterias no teidas u otros materiales
biolgicos. (Lpez, y otros, 2014)

Figura 3. Tincin Negativa. (Totora, Fuke, & Case, 2007)

Tincin diferencial (Coloracin de endosporas)

Las endosporas bacterianas pueden distinguirse en las preparaciones
microscpicas sin previa coloracin debido a la gran refringencia de su
protoplasma, que las diferencia de las clulas vegetativas. En las
preparaciones teidas por mtodos comunes, las endosporas no se colorean
debido a la resistencia que ofrece su gruesa cubierta a la impregnacin por los
colorantes habituales utilizados en la coloracin de Gram y azul de metileno,
permaneciendo incolora rodeada por la parte coloreada (vegetativa) de la
bacteria. No obstante, es posible lograr la tincin de las endosporas por medio
de mtodos especiales en los que se emplea el calor como mordiente.
(Granados & Villaverde, 2003)
Las endosporas, debido a las caractersticas de sus envolturas no se tien con
procedimientos habituales. El mtodo ms empleado es el de Schaeffer-Fulton
donde la suspensin de microorganismos se tie en caliente con el colorante
verde de malaquita, un colorante soluble en agua por cuya razn no se utiliza
habitualmente en tinciones convencionales. El calor modifica la permeabilidad
de las endosporas y permite la entrada del colorante a travs de las capas
externas. A continuacin, el lavado con abundante agua produce la
decoloracin de las formas vegetativas as como de los extremos de las
bacterias esporuladas, que se tien por ltimo con un colorante de contraste, la
safranina. (Reynoso, Magnoli, Barros, & Demo, 2015)
Ciertos gneros de bacterias como Bacilus, Clostridium, Desulfotomaculum y
Sporosarcina, producen endosporas. (Olivas, 2001)

Figura 4. Tincin de Endosporas. (Totora, Fuke, & Case, 2007)

Tincin diferencial (Tincin de flagelos)

Los flagelos bacterianos son estructuras de locomocin demasiado pequeas
para ser vistas con un microscopio ptico sin tincin. (Totora, Fuke, & Case,
2007)
La tincin de flagelos es muy difcil ya que son organelos demasiado pequeos
que estn por debajo del lmite de visin, de tal manera que para teirlos y
observarlos es necesario usar productos llamados mordientes, cuya funcin es
fijar y favorecer el depsito de colorante aumentando el tamao de los flagelos.
(Echandi, 1967)
Se usa un mordiente para aumentar los dimetros de los flagelos hasta que
puedan visualizarse por microscopia cuando se tia con carbolfucsina. (Totora,
Fuke, & Case, 2007)

Figura 5. Tincin de Flagelos. (Totora, Fuke, & Case, 2007)

CONCLUSIN
Las tinciones son herramientas fundamentales, actuales y de uso universal que
facilitan la identificacin de las caractersticas morfolgicas propias de los
diversos grupos de microrganismos.
Al existir una amplia gama de tinciones, permite al investigador elegir el mtodo
ms adecuado segn este orientada su investigacin, y de esta manera
obtener resultados ms precisos y seguros.
Dentro de las tinciones ms utilizadas, podemos destacar que la tincin Gram
es la que posee mayor aceptacin por parte de los investigadores ya que es

ms til porque permite clasificar a las bacterias en dos grandes grupos:

grampositivas y gramnegativas, lo que facilita la identificacin de estructuras
determinadas.

Bibliografa
AcuaNatura. (29 de Enero de 2013). Obtenido de
http://www.acuanatura.com/cursosonline/tecnicasdetincion/tecnicasdetin
cion.pdf
Echandi, E. (1967). Manual de Laboratorio para Fitopatologa General. Lima:
Editorial IICA.
Granados, R., & Villaverde, M. C. (2003). Microbiologa Tomo I Bacteriologa.
Caractersticas y clasificacin bacteriana. Virologa. Caractersticas y
tcnicas bioqumicas. Madrid: Ediciones Paraninfo, S.A.
Lpez, L., Hernndez, M., Coln, C., Ortega, S., Cern, G., & Franco, R. (10 de
Noviembre de 2014). Las tinciones bsicas en el laboratorio de
microbiologa. Investigacin en Discapacidad , 12. Obtenido de
http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
Olivas, E. (2001). Manual de Laboratorio de Microbiologa Bsica. Mxico:
Editorial Universidad Autnima Ciudad de Jurez.
Reynoso, M., Magnoli, C., Barros, G., & Demo, M. (2015). Manual de
microbiologa general. Ro Cuarto: UniRo Editora.
Rodrguez, E., Gamboa, M. d., Hernndez, F., & Garca, J. (2005).
Bacteriologa General: Principios y prcticas de laboratorio. Costa Rica:
Editorial Universidad de Costa Rica.
Santambrosio, E. (2009). Tincin y Observacin de Microorganismos .
Argentina: Universidad Tcnica Nacional-Facultad Regional Rosario.
Totora, J., Fuke, R., & Case, C. (2007). Introduccin a la Microbiologa. Buenos
Aires: Editorial Panamericana.