Nucleu celular

1. Caracteristicile generale ale nucleului (mrime, form, localizare).

2. Structura i funcia nucleului. Proteinele nucleare specifice.
3. Anvelopa nuclear. Organizarea molecular a complexului porului nuclear. Transportul
substanelor din nucleu i n interiorul nucleului.
4. Matricea nuclear: organizarea molecular i funcia.
5. Nucleolul i rolul su n biogeneza ribozomilor.
6. Cromatina: organizarea molecular. Eucromatina i heterocromatina.
7. Nivelele de compactizare a ADNlui.
8. Elemente ale cromozomilor metafazici.

1. Caracteristicile generale ale nucleului (mrime, form, localizare)

Fig.1 Poziia i conexiunile nucleului n celul

Nucleul este un compartiment celular care este prezent n toate celulele eucariote,
cu excepia eritrocitelor mature. De obicei, nucleul este situat n centrul celulei sau excentric i
are forma rotund sau oval (fig 1).
Cele mai multe celule au un singur nucleu, dar sunt celule cu dou sau mai multe nuclee.
Exemplu de celule polinucleate pot fi miofibrilele musculaturii striate, formate prin fuziunea
mioblatilor mononucleari. Dimensiunea nucleului poate varia de la 5 pn la 10 microni. De
obicei, nucleul ocup 10% din citoplasm. Un indicator important al funcionalitii celulei este
raportul nucleu-citoplasm, care este mai mare n celulele tinere i active.
Nucleul - este centrul de control, coordonare i monitorizare a funciilor vitale ale
celulelor eucariote. Ca centru informaional nucleul coordoneaz toate reaciile chimice de
desfurare a proceselor vitale prin controlul sintezei proteinelor-enzime celulare, iar organizarea
celulei - prin sinteza proteinelor structurale. n fluxul informaional, exist trei puncte cheie:
replicarea ADN, transcripia i translaia informaiei genetice. Replicarea i transcripia se
desfoar n nucleu, n timp ce translaia - n citoplasm.
n acest mod informaia genetic nscris n moleculele de ADN se realizeaz n procesul
de sintez a proteinelor i se transmite celulelor fiice n timpul diviziunii celulare.
2. Structura i funcia nucleului. Proteinele nucleare specifice.
Principalele elemente ale nucleului sunt:
- Anvelopa nuclear,
- Matricea nuclear,
- Nucleolii,
- Cromatina.

Fig.2 Structura nucleului

Funciile de baz:
- Depozitarea i pstrarea informaiei genetice (aproximativ 98% din ADN-ul celular)
- Controlul activitatii celulei prin reglarea realiztii informaiei genetice,
- Transmiterea informaiei genetice celulelor fiice.
Proteine nucleare specifice:
1) proteinele anvelopei nucleare:
- Nucleoporine: formarea porilor nucleari,
- Transportine: asigur transportul de substane din citoplasm n nucleu (importine) i din
nucleu n citoplasm (exportine);
2) proteinele matricei nucleare:
- Matrine - proteine structurale ale nucleoscheletului,
- SAP (scaffold asociated proteines) - asigur compactizarea ADNului n cromozomi,
- Nucleoplasmine - regleaz metabolismului si configuraia altor proteine;
- Lamine - proteine fibrilare ce fixseaz bulcele de cromatin i, indirect, regleaz
transcripia n nucleu;
3) Histonele sunt proteine cu proprieti bazice ce particip la compactizarea ADN-ului i
regleaz nespecific activitatea genei;
4) Nehistone:
- HMG (High Mobility Group) - o mica parte din proteinele nucleare non-histone cu
specifitate mare de unire la ADN;
- Enzimele de replicare, reparare, transcripie, i processing ;
- Proteine-situs specific e - cu rol de a recunoate anumite situsuri n ADN, i de a efectua
o varietate de funcii (plierea moleculei de ADN, originea replicrii, controlul
transcripiei genelor); Acestea includ proteinele "Helix-Turn-Helix i zinc finger.

3. Anvelopa nuclear. Organizarea molecular a complexului porului nuclear.

Transportul substanelor din nucleu i n interiorul nucleului.
Coninutul nucleului este separat de citoplasm prin anvelopa nuclear, care const din
dou membrane i spaiu perinuclear. Membrana nuclear extern continu cu REr i are pe
suprafaa sa ribozomi. Membrana intern este n contact cu matricea nuclear. n locurile unde
membrana intern continu cu cea extern se formaz porii nucleari, iar spaiul dintre membrane
este numit perinuclear, are o grosime de 20-40 nm i comunic cu REr. Porii nucleari ocup
aproximativ 10% din suprafaa anvelopei nucleare.
De membrana intern sunt ataate proteinele fibrilare, care formeaz lamina nuclear.
Aceasta este format din proteine lamine (A, B i C) i ndeplinete urmtoarele funcii
importante:
- Menine integritatea i forma nucleului;
- Particip la dezintegrarea i reorganizarea anvelopei nucleare n timpul diviziunii celulare;
- Fixsaeaz fibrele de cromatin n interfaz;
- Formeaz complexul porilor nucleari.
O caracteristic a anvelopei nucleare este prezena porilor, pentru care numrul mediu
este n jur de 3000, dar depinde de tipul i vrsta celulelor. Porii sunt nconjurai de structuri mari
circulare numite complexul porilor. Se compune din 3 inele de proteine, fiecare coninnd 8
granule proteice. n centru este prezent granula central cu rol de diafragm fin. Porul
nuclear interacioneaz cu matricea nuclear prin intermediul unor filamente cu diametrul de 4-8
nm, care se termin cu o extremitate pe inelul intern.

Fig.3 Structura porului nuclear

Principala funcie a porilor nucleari este transportul substanelor n nucleu i din nucleu.
Din citoplasm n nucleu sunt importate proteinele matricei nucleare, fermenii care asigur
sinteza acizilor nucleici, proteinele histone, ribozomale. Pentru transportarea proteinelor prin
porul nuclear ele sunt dotate cu secvene semnal.
Din nucleu n citoplasm sunt exportate subunitile ribozomale, moleculele ARN
(ARNm, ARNt). Moleculele ARN sunt transportate formnd complexe cu proteinele. Secvenele
semnal pot fi situate att n proteine ct i n ARN. Acest tip de transport este activ i necesit
cheltueli energetice. ARN nuclear mic iese din nucleu n citoplazm, unde se cupleaz cu
4

proteine speciale, formnd splicesoma,care se ntoarce n nucleu pentru asigurarea splicengului (

nlturarea intronilor din preARNm ).
Lamina nuclear
Lamina nuclear ader la membrana intern a nucleului, e format dintr-o reia fibrilar,
interacioneaz cu structurile matricei nucleare i deasemenea cu componentele fibrilare a
complexului porului nuclear. Lamina intern mpreun cu complexul porului nuclear formeaz o
parte din scheletul nuclear, numit complexul lamin-por. Acest complex conine 2-3% din
cantitatea total de proteine nucleare. Este format din proteine nonhistone (95%), preponderent
acide. Pe suprafaa intern a complexului lamin-por se localizeaz nucleozid-3-fosfataza, care
se presupune c ar fi transportat ARN n citoplazm.
Lamina este compus din proteinele filamentelor intermediare, cu aceai orientaie,
numite lamine. n celulele umane ea se formeaz din lamina A,B i C. Lamina A se gsete n
celulele difereniate i unele cellule stem. Lamina B este n fiecare celul, lamina doar n
unele esuturi.

Lamina nuclear ndeplinete urmtoarele funcii:

menine integritatea i forma nucleului,
responsabil de dezintegrarea i reorganizarea anvelopei nucleare n procesul mitozei,
fixeaz filamentele/fibrele cromatinei n interfaz,
asigur localizarea i lucrul complexului porilor nucleari.

4. Matricea nuclear: organizarea molecular i funciile

Conceptul de matrice nuclear a fost propus n 1975, pe baza experimentelor n care sa
artat c dup o procesare(prelucrare) specific a nucleului n el rmn proteine insolubile. Se
crede c aceste proteine sunt similare proteinelor citoscheletului celulei.
Matricea nuclear e format din dou pri:
1) Fracia labil e constituit din proteine solubile cu masa molecular mic, substane
neorganice i ap;
2) Matricea nuclear propriu zis, e constituit dintr-o reea de proteine insolubile cu
masa molecular mare nonhistone, fermeni, nucleoplasmine.
Proteinele non-histone - sunt o familie heterogen de proteine cu o greutate molecular
diferit, i cu caracteristici chimice tot diferite. Spre deosebire de histone, cele mai multe dintre
aceste proteine sunt bogate n triptofan; Acestea au capacitatea de a evolua pe scar larg,
trecnd rapid de la un statut funcional la altul. Enzimele nucleare catalizeaz n principal sinteza
ADN, ARN i procesingul.
Funciile matricei nucleare:
- Asigur forma, organizarea intern i stabilitatea nucleului interfazic;
- Particip la compactizarea cromatinei;
- Asigur procesele de replicare i transcripie.

Matricea nuclear poate schimba fluxul membranei nucleare, care este necesar pentru a
ndeplini funciile de baz ale matricei i n special transportul de subuniti a ribozomilor prin
complexul porilor. Matricea nuclear poate modifica structura cromatinei, care este important n
replicarea ADN-ului i transcrierea ARN (activarea i inactivarea genelor). In timpul mitozei,
95% din proteinele matricei nucleare sunt distribuite n citoplasm. n nucleul nou format dup
diviziune, n ansamblarea acestor proteine o importan major au procesele de glicozilare.
Scheletul n nucleol ndeplinete o funcie de sprijin n momentul depunerii subunitilor
ribozomale.
5. Nucleolul i rolul lui n biogeneza ribozomilor
Nucleolul este prezent n toate celulele eucariote, n afar de blastomeri, care nu au
biosintez proteic proprie (fig.4). E compus din: ADN 3%, ARN 7% i proteine 90%.
Nucleolul nu este delimitat de coninutul nucleului printr-o membran. Numrul i
mrimea nucleolilor depinde de perioada ciclului celular n care se afl celula (n celulele umane

teoretic pot fi pn la 10 nucleoli la nceputul interfazei i unul mare la sfrit). Nucleoli ocup
aproximativ 30% din volumul total al nucleului. Exist o corelaie ntre volumul nucleului i
nucleolului - volumul nucleo-nucleolar. Cu ct mai activ este celula, cu att mai mare este
acest raport.
Cu microscopul electronic n nucleol pot fi distincte 3 componente:
- Componenta granular, format din particule cu diametrul 15-20 nm, reprezentat de
precursorii ribozomali;
- Componenta fibrilar dens, format dintr-o mulime subiri de fibrile (5 nm), reprezentat
de ADN i ARN transcripi primari;
- Componenta amorf la periferia nucleolului.
Rolul primordial al nucleolului este sinteza ARN ribozomal i formarea precursorilor
ribozomali. n componena nucleolului se gsesc bucle mari de ADN, ce conin gene ARNr.
Aceste bucle poart denumirea de organizatori nucleolari i la om se gsesc pe cromozomii
(13, 14, 15, 21, 22 ), care controleaz formarea nucleolului la sfritul mitozei.
6

Biogeneza ribozomilor: n nucleol are loc sinteza a trei fracii de ARNr (5,8S; 18S; 28S)
i stocarea precursorilor ribozomali. De pe ADN se transcrie un precursor - ARNr 45S, care este
procesat n trei fracii mai mici (28S; 18S; 5,8S). ARNr 5S este sintetizat n afara nucleolilor.
Moleculele de ARNr se asociaz cu proteine ribozomale sintetizate n citoplasm i importate n
nucleu. Particulele ribonucleoproteice (RNP) sunt transportate n citoplasm sub form de
subuniti ale ribozomilor (40S i 60S).
6. Cromatina: organizarea molecular. Eucromatina i heterocromatina.
Cromatina reprezint structura nucleoproteic localizat n nucleu i se caracterizeaz
prin forma extins i despiralizat a cromozomilor n interfaz.
Cromatina este compus din ADN, proteine histone, proteine nehistone i ARN. Astfel,
cromatina poate fi considerat o nucleoproteid n care proteinele histone i nehistone
interacioneaz att ntre ele, ct i cu ADN-ul.
Proteine histonice (40%) - polipeptide bazice, ce conin peste 22% aminoacizi bazici, n
special arginin i lizin. Exist cinci fracii de histone: H1, H2A, H2B, H3, H4 (tab. 6.1).
Proteinele histonice nu au specificitate de esut.
Tabel 1 Caracteristica proteinelor histone
Tipul de
Aminoacizii Numr
Masa
histon
predomina aminoacizi molecular
ni
H1
Lizina
215
21500
H2A
Leucina,
129
14000
lizina
H2B
Serina,
125
13775
prolina,
lizina
H3
Arginina,
135
15320
conine
cistein
H4
Arginina,
102
11280
lizina
Proteinele histone stabilizeaz dublul helix de ADN, inducnd o structur teriar nivel
elementar de organizare a ADN la eucariote. Din punct de vedere funcional ele represeaz
nespecific transcripia, mpiedicnd unirea ARN-polimerazei la ADN.
Proteinele nonhistone - proteine acide (20%) cu un coninut ridicat de aminoacizi acizi
(glutamic, aspartic). Proteinele nonhistone sunt foarte heterogene, au mobilitate mare, un rol
catalitic n metabolismul ADN i expresia genelor (polimeraze, ligaze, topoizomeraze, factori de
transcripie, i altele.). Acestea includ, de asemenea proteine specifice (SAP, zinc-finger) i
proteine ale axului cromozomial. Proteinele nonhistone se conin n cantiti mari n esuturile
active, n timp ce histonele prezint cantiti egale n toate esuturile.
ARN se conine n cromatin, fiind produsul transcripiei de pe ADN, n special
transcripii primari i snARN (de exemplu, ARN din componena primazei, telomerazei, etc.).
Cromatina se clasific n dou categorii (eucromatina i heterocromatina), care difer
dup: gradul de colorare, gradul de spiralizare i condensare, secvenele de ADN, momentul
replicarii i activitatea genetic.
7

Eucromatina reprezint regiunea cromatinei care conine gene structurale i este

poriunea funcional activ a ADN-ului, de pe care are loc transcripia. Aceasta este slab
condensat i, deci, se replic timpuriu, la nceputul perioadei S a interfazei.
Heterocromatina reprezint segmente de cromatin inactiv genetic, care nu se supune
transcripiei. Este mai puternic condensat i se replic tardiv n faza S. Se disting dou tipuri de
heterocromatin: constitutiv i facultativ. Heterocromatina facultativ reprezint secvene
care n anumite condiii se pot despiraliza i transforma n eucromatin. Heterocromatina
constitutiv conine ADN repetitiv sau satelit. Acest tip nu se transform niciodat n
eucromatin. Localizarea segmentelor heterocromatice n cromozomii omologi este identic.
7. Nivelurile de organizare a cromozomilor
mpachetarea ADN-ului ntr-un cromozom presupune existena ctorva nivele de
organizare sau condensare, fiecare fiind responsabil de un anumit grad de micorare a lungimii
ADN-ului. Nivelurile de compactizare a ADN-ului se deosebesc prin: gradul de condensare
ADN, diametrul fibrei de cromatin, mecanismul de formare, activitatea transcripional i
perioada ciclului celular.
Primul nivel nucleozomic este determinat de asamblarea ADN-ului cu histonele, ce formeaz
filamentul de cromatin (DNP) cu diametrul 11 nm (fig. 5).
Fiecare nucleozom const dintr-un miez histonic (core) format din: 8 proteine: 2H2A,
2H2B, 2H3, 2H4 i o secven de ADN cu o lungime de 146 pb. ADN-ul nfoar de ~2 ori
octamerul histonic, formnd un complex stabil nucleozomul. Fiecare nucleozom este separat
de secven linker ADN cu o lungime de 8-114 perechi de baze. Datorit nucleozomilor ADN se
scurteaz ~ de 6 ori, i are aspectul unui irag de mrgele. La acest nivel de transcripia este
posibil.

Al doilea nivel solenoidul este

reprezentat de fibra de cromatin de 30 nm ce
rezult din superspiralizarea filamentului de
cromatin . Acest nivel de compactizare
scurteaz molecula de ADN de 40-60 ori
(fig.6) . Solenoidul reprezint o superspiral
de dreapta cu ase nucleozomi per tur (fig. 6.
B,C). Trecerea cromatinei de la nivelul I la II
i invers este determinat de modificrile
chimice ale histonei H1. Fosforilarea H1 se
asociaz cu superspiralizarea DNP, iar
defosforilarea H1 cu despiralizarea
solenoidului (fig. 6. A) . Acest mecanism este
important n reglarea activitii genelor.
Histona H1 este asociat att cu miezul
nucleozomic, ct i cu segmentul ADN linker
i are rol n stabilitatea nucleozomului. La
acest nivel se blochez transcripia.

Al treilea nivel- bucle (300 nm,700 nm) se formeaz prin asocierea ADN la ax
cromozomial (scaffold) prin intermediul unor
proteine acide SAP (Scaffold Associated Protein)
care recunosc secvene specifice de nucleotide din
diferite regiuni ale fibrei de cromatin (fig.7).
Proteinele SAP formeaz axul cromozomial de care
se fixeaz buclele. Trebuie de remarcat faptul c
lungimea buclelor variaz i se presupune c este
depinde de caracteristicile funcionale ale diferitelor
regiuni ale cromatinei. Transcrierea ADN-ului este
blocat la acest nivel.
Al patrulea nivel reprezint condensarea i plicaturarea buclelor ce duce la formarea
cromatidelor cromozomului metafazic. Fiecare cromatid are grosimea de la 700 la 900 nm.
Molecula ADN n cromosom se scurteaz de 10000 ori. Datorit proprietii cromatinei de a se
compactiza n nucleul celulei umane cu diametrul de 4 ncap 46 molecule de ADN cu
lungimea total de circa 2 m. Mecanismul de compactizre la acest nivel include fosforilarea
proteinei H1, dar i fosforilarea lamininei i disocierea anvelopei nucleare. Transcriptia la acest
nivel este imposibil.
Studiile recente au demonstrat rolul modificrilor chimice a histonelor n compactizarea
ADN-ului n cromozomi, i controlul activitii genelor:
Metilarea H3 (Lys4) - expresia activ a genei,
Metilarea H3 (Lys9) - atenuarea (ncetinirea) transcripiei,
Acetilarea histonelor - relaxarea cromatinei, transcripia,
9

Dezacetilarea histonelor - compactizarea cromatinei, blocarea transcripiei,

Fosforilarea H1 supercondensarea ADN,
Defosforilarea H1 decondensarea ADN.

8. Elementele cromozomului metafazic

Cromozomul metafazic este format din 2 cromatide surori identice unite prin centromer la
nivelul constriciei primare (fig. 8).
Centromerul este format din heterocromatin constitutiv, reprezint segmentul de unire a
cromatidelor surori prin intermediul proteinelor-coenzine i de asamblare a kinetocorilor.
Centromerul mparte cromozomul n dou brae: braul p - proximal,
mai scurt; braul q - distal, mai lung. Regiunea centromeric a
cromozomului este format din ADN i proteine specifice. ADN
centromeric conine secvene necodante, repetitive n tandem bogate n
perechi A/T.
Funciile centromerului:
- Meninerea celor dou cromatide surori pn la sfritul
anafazei mitozei;
- Locul formrii kinetocorilor;
- Recunoaterea cromozomilor omologi n meioz;
- Inreraciune cu microtubulii fusului de diviziune.
Telomerii reprezint complexe din ADN i proteine specializate care
formeaz capetele cromozomilor eucariotelor.
La eucariote
ADN
are
aceea pentru
de

structur liniar, de
a asigura protecia
exonucleaze
i
individualitatea
cromozomilor
(mpiedic
reanrajamentele cromozomice), exist telomerii - secvene localizate la capetele cromozomilor
eucariotelor. Regiunile telomerice conin secvene scurte repetate de ADN bogate n guanin i
citozin care formeaz o bucl prin legturi necomplementare de hidrogen (fig.9).

Funciile regiunilor telomerice:

mpiedic fuziunea cromozomilor

Asigur individualitatea i integritatea cromozomilor

Protecia cromozomilor de exonucleaze

Asigur conjugarea i recombinarea corect a cromozomilor

10