Dr.

Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

ORGANIZAREA MOLECULAR
A MEMBRANELOR CELULARE
De la molecule la o structur funcional

Membrana celular
Definiia
Ultrastructura care
separ celula de mediu
dar o i unete cu acesta

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

CONSIDERAII GENERALE ASUPRA

ORGANIZRII MOLECULARE A MEMBRANELOR

Ap:
Rezidiu uscat:

20-30%
70-80%

Substane minerale:
Substane organice:
Lipide:
Proteine:
Component glucidic:

~1%
~99%
40-50%
50-60%
1-10%

De ce puin ap?

Aranjarea componentelor chimice n biomembrane

conform modelului mozaic fluid
Singer SJ, Nicolson GL (1972) The fluid mosaic model of the structure of cell membranes. Science. 175: 720-731.

Imagini de mozaic
2

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Aranjarea componentelor chimice n biomembrane

conform modelului mozaic fluid
Singer SJ, Nicolson GL (1972) The fluid mosaic model of the structure of cell membranes. Science. 175: 720-731.

Funciile membranei celulare

1. Funcie de barier
2. Funcie metabolic

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Caracteristici fizice, chimice i

biologice ale membranelor celulare
Eterogenitate
Asimetrie
Fluiditate bidimensional
Cine i cum particip la asigurarea acestor caracteristici?
Care este semnificaia biologic a acestor caracteristici?

Eterogenitatea structural a
membranelor celulare
Lipide - peste 1000 de entiti moleculare
Clasificri
Clasificri ale lipidelor membranare
Clasificri ale proteinelor membranare
Clasificri ale componentei glucidice membranare

Conceptul logic de clasificare

Stabilirea criteriului/criteriilor

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Eterogenitate
Contribuia lipidelor (I)
Clasificri ale lipidelor:
1. n funcie de structura chimic global:
- fosfolipide
- colesterol
- glicolipide

70-75%;
20-25%;
1-10%.

Eterogenitate
Contribuia lipidelor (II)
Alte clasificri ale lipidelor:

Clasificarea fosfolipidelor:
1. n funcie de poliolul din structur:
- fosfogliceride (glicerofosfatide);
- fosfosfingozide (sfingofosfatide).
2. n funcie de X
X - colin fosfatidilcoline (PC);
20-25%
X - etanolamin fosfatidiletanolamine (PE); 20-25%
X - serin fosfatidilserine (PS);
20-25%
X - inozitol fosfatidilinozitoli (PI); 10-15%
X - hidrogen acizi fosfatidici (PA); ~1%

Alte fosfolipide:

sfingomieline (SM); 20-25%

cardiolipine: 1,3-difosfatidil-glicerine.
plasmalogeni
6

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Mai mult eterogenitate

la nivelul lipidelor
Contribuia acizilor grai
(a) n poziia 1 a glicerinei: un acid gras saturat (C14, C16, C18);
ordinea abundenei:C16 > C18 > C14.
(b) n poziia 2 a glicerinei: un acid gras nesaturat (C18:1, C18:2,
C18:3, C20:4)

Eterogenitate
Contribuia proteinelor
Clasificri ale proteinelor:
n funcie de poziia fa de bistrat
- periferice (extrinseci ) ~25%;

ectoproteine

- integrale (intrinseci) ~75%.

Proteinele extrinseci:
- ectoproteine;
- endoproteine.
?

endoproteine

protein
transmembranar

Proteinele intrinseci:
- transmembranare;
-?

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Eterogenitate
Caracteristicile fizico-chimice
ale proteinelor periferice
Extractibile cu soluii saline, sau ageni chelatori;
Au caracter hidrofil;
Dup extracie nu poart lipide asociate i i pastreaz
solubilitatea n ap;

Preluat din Molecular Biology of the Cell, editori: Bruce Alberts et all., ediia a III-a, 1994

Caracteristicile fizico-chimice
ale proteinelor transmembranare
- se pot extrage din structura membranelor numai cu detergeni;
- rmn asociate permanent cu lipide;
- sunt insolubile n ap;
- au caracter amfifil.
Definirea domeniilor structurale
ectodomenii

endodomenii
Preluat din Molecular Biology of the Cell, editori:
Bruce Alberts et all., ediia a III-a, 1994

domenii
transmembranare

1. ectodomeniu;
2. endodomeniu;
3. domeniu transmembranar.

Clasificare n funcie de numrul de treceri

prin bistratul lipidic:
1. unipas;
2. multipas.
Clasificare n funcie de orientarea lanului
polipeptidic fa de bistratul lipidic (poziia
captului amino-terminal):
1. tip I NH2 terminal n ectodomeniu;
2. tip II NH2 terminal n endodomeniu.
8

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Eterogenitate
Modaliti de structurare
a domeniului transmembranar

Preluat din Molecular Biology of the Cell, editori: Bruce Alberts et all., ediia a III-a, 1994

Eterogenitate
Contribuia componentei glucidice
Clasificri ale structurilor glucidice:
(?)
1. Glicolipide componenta glucidic pe lipid;
2. Glicoproteine componenta glucidic (oligozaharid) pe protein;
3. Proteoglicani componenta glucidic (polizaharid) pe protein.

Preluat din Molecular Biology of the Cell, editori: Bruce Alberts et all., ediia a III-a, 1994

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Eterogenitate
Compoziia glucidic a glicocalixului
Monozaharide componente: Glc, GlcNAc, Gal,
GalNAc, Man, Fuc, acizi sialici (SA)

Acid neuraminic

Acid N-acetil-neuraminic

Acid N-glicolil-neuraminic

Eterogenitate
Compoziia glucidic a glicocalixului
Glicolipidele: 1 lan oligozaharidic, neramificat
Glicoproteinele: mai multe lanuri oligozaharidice,
ramificate, inserate N-, sau O-glicozidic
Proteoglicanii: mai multe lanuri polizaharidice
neramificate (glicozaminoglicani)
Consideraii structurale asupra secvenei glucidice
Glucoza niciodat n poziie terminal
Acizii sialici ntotdeauna n poziie terminal

10

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Asimetrie
Contribuia lipidelor
Asimetria distribuiei lipidelor membranare
PC i SM foia extern a bistratului lipidic
PE, PS i PI foia intern a bistratului lipidic
Colesterolul echilibrat ntre cele dou foie
Glicolipidele foia extern a bistratului lipidic; exclusiv

Asimetrie
Contribuia proteinelor

Proteinele extrinseci
-Ectoproteine
-Endoproteine

Proteinele integrale
- Transmembranare
-?

11

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Asimetrie
Contribuia proteinelor
Citoscheletul asociat membranei
organizare spaial (eritrocit)

Preluat din Molecular Biology of the Cell, editori: Bruce Alberts et all., ediia a III-a, 1994

Asimetrie
Contribuia componentei glucidice

12

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Semnificaii biologice
Eterogenitate
Multitudine de componente multitudine de posibiliti de
aciune (diversitate de funcii)

Asimetrie
Fenomene diferite posibile pe cele dou fee
Disjungere sau solidaritate de aciune ntre cele dou fee

Fluiditatea bidimensional
Cum trebuie neleas?
Care este semnificaia biologic a acestei
caracteristici a biomembranelor?

13

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Fluiditate bidimensional
Starea fizic i dinamica bistratului lipidic
- Proprieti fluide manifestate bidimensional

Micrile lipidelor n cadrul bistratului

1. Micri intramoleculare
2. Micri intermoleculare

Fluiditate bidimensional
Micrile intramoleculare
1. Micri de rotaie

107-109 rotaii/s

2. Micri de flexie

106-108 flexii/s

14

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Fluiditate bidimensional
Micrile intermoleculare ale lipidelor
1. Micri de translaie ~107 schimbri direcie/s

2. Micri flip-flop

extrem de rare

Fluiditate bidimensional
Modularea fluiditii membranelor
Factori de modulare a fluiditii membranelor

Chimici

Fizici

- Intrinseci (reglare)
- Extrinseci

- Presiunea
- Temperatura

15

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Reglarea fluiditii membranelor

prin factori celulari intrinseci
Rolul acizilor grai nesaturai

Rolul colesterolului

Factori chimici extrinseci de

modulare/reglare a fluiditii
membranelor
Fiziologici
Patologici
Terapeutici

16

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Fluiditate bidimensional
Mobilitatea proteinelor membranare

Fluiditate bidimensional
Caracterul mezomorf al bistratului lipidic
Microdomenii de membran asocieri specifice, pe
considerente fizico-(bio)chimice ale unor componente
(macro)moleculare din organizarea membranelor, cu
suprafee de ordin micro/nano-metric, cu scopul
eficientizrii funcionrii acestora
Exemple: plute lipidice, caveole (vezicule plasmalemale)

17

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Eterogenitatea plutelor lipidice

Evideniat prin interpretarea rezultatelor diferitelor metode de obinere:
- diferii detergeni neionici
- sonicarea preparatelor de membrane i
analizarea fraciunii uoare
- analize imunocitochimice

Caracteristici compoziionale
generale ale plutelor lipidice
colesterolul de 3-5 ori mai abundent dect n restul membranei
i reprezint 33-50% din totalul lipidelor la acest nivel
sfingolipidele (SM i glicolipidele) sunt mbogite i reprezint
30-35% dintre lipidele din plute
glicerofosfolipidele sunt srac reprezentate (n comparaie cu
restul membranei); 30% pentru PC + PE
lipidele specifice foiei interne a bistratului (PS, PI) sunt slab
reprezentate la nivelul plutelor
n foia intern de la nivelul plutelor, lipidele conin preferenial
acizi grai saturai; asta ar putea realiza necesarul de rigiditate
corespunztor celei a foiei externe, unde sfingolipidele sunt
bogat reprezentate
anumite proteine (acilate, ancorate prin glicofosfatidilinozitol)
18

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Dinamicitatea membranelor
- semnificaie biologic Componentele membranei se pot ntlni mai
uor
Componentele membranei se pot asocia
selectiv n funcie de context
Se creaz microdomeniile de membran, cu o
dinamic permanent
Rezultatul: funcionarea componentelor i a
membranelor n ansamblu se eficientizeaz i
se diversific

Dinamicitatea i
maleabilitatea membranei

19

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Funciile membranelor
Barier
Implicaiile metabolice ale funciilor membranei
Funcia de barier: absolut versus selectiv
Funciile metabolice: responsabilitatea proteinelor,
dar implic i celelalte componente, exploatnd n
mod divers i nuanat organizarea molecular

Rolurile lipidelor membranare

1. Rol structural asigur funcia de barier;
2. Roluri metabolice:
(i) Recunoatere i semnalizare intercelular (glicolipide)
(ii) Semnalizarea prin aciunea fosfolipazelor
- Fosfolipaza A1 (PLA1) elimin AG din poziia 1 a glicerinei;
- Fosfolipaza A2 (PLA2) elimin AG din poziia 2 a glicerinei;

C
A1

D
A2
B

- Fosfolipaza B (PLB) elimin ambii AG simultan;

- Fosfolipaza C (PLC) taie ntre glicerin i fosfat;
- Fosfolipaza D (PLD) scoate componenta X

20

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Acidul arahidonic
surs de molecule implicate n semnalizare
(i) prostaglandine
1. Calea ciclooxigenazei:

(ii) prostacicline
(iii) tromboxani

2. Calea lipooxigenazei:

leucotriene

Cascada fosfoinozitidelor
fosfatidilinozitol (PI)
PI kinaz

ATP
ADP

fosfatidilinozitol-4-fosfat (PIP)
PIP kinaz

ATP
ADP

fosfatidilinozitol-4,5-bisfosfat (PIP2)
fosfolipaz C

(specific pentru fosfoinozitide PLC-)

diacilglicerol (DAG)

inozitol-1,4,5-trisfosfat (IP3)

21

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Rolul proteinelor membranare

Asigur funciile metabolice ale membranelor, dar au i
rol structural.
Funcii ale proteinelor membranare:
Transport prin membran (canale, pompe, conexoni);
Transport cu membran (clatrin, caveolin);
Receptori de semnale (hormoni, factori de cretere,
citokine, chemokine);
Molecule de adeziune (integrine, caderine);
Enzime (metaloproteinaze de matrice extracelular,
fosfolipaze, adenilat-ciclaz);
Proteine de semnalizare (proteine adaptoare, proteine
platform);
Proteine structurale (spectrin, ankirin).

Rolul componentei glucidice

membranare
Rol de protecie a membranei
Particip la sarcina electric negativ a suprafeei
celulare (semnificaia biologic?)
Necesare, dar nu neaprat suficiente funcionrii
receptorilor
Particip la fenomene de recunoatere celular:
Purttoarele antigenelor de grup sanguin
Extravazarea leucocitelor
Fertilizarea (fuzionarea spermatozoidului cu ovocitul)

22

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Rezumat

membranele: ultrastructuri eterogene, asimetrice, dinamice

microdomenii de membran; domenii de membran

Perspectiva obinut prin cunoaterea

membranei celulare?

23

Dr. Mircea Leabu: Organizarea molecular a membranelor i semnificaia acesteia

(iconografia cursului pentru studenii de la medicin)

Ira H. Pastan i Mark C. Willingham

Journey to the Center of the Cell:

Role of the Receptosome
Science, 214, 504-509 (1981)

24