Sunteți pe pagina 1din 51

DIAGNOSTIC IN INFECTIA CU

HERPESVIRUSURI
Alfa-herpesvirusuri
Beta-herpesvirusuri
Gamma-herpesvirusuri

Subfamilia

Herpesvirusuri umane

Sediul latentei

Alfaherpesvirinae

Herpes simplex 1

Neuroni

(HSV1-facial) -HH1

Herpes simplex 2

(HSV2-genital) - HH2

Virus varicelozosterian (VZV) - HH3


Betaherpesvirinae

Virus

(CMV) -HHV5

citomegalic Limfocitul

Virus Herpetic uman 6 - HHV6


Virus Herpetic uman 7- HHV7

Gamaherpesvirinae

senzitivi din
rdcina posterioar
a nervilor spinali i
nucleii
senzitivi
ai
nervilor cranieni

Virus Epstein Barr


(EBV) - HHV4

HHV8 (asociat sarcomului Kaposi)

T,

monocite,
organe
solide
(plamni,
rinichi) +/- epiteliul
glandelor salivare

Limfocitul

endoteliu capilar

B,

Diagnostic in infectia cu
ALPHAHERPESVIRUSURI
orientare clinica
leziuni veziculare
HERPES SIMPLEX 1 (HSV1)
HERPES SIMPLEX 2 (HSV2)
VARICELO-ZOSTERIAN (VZV)

GINGIVOSTOMATITA
HERPETICA

HERPES GENITAL

PRODUSE PATOLOGICE
Lichid vezicular
Tampon conjunctival
Tampoane vaginale, lavajul cervicovaginal, tampon uretral
Recoltare recomandata in cazul
leziunilor active (50% sanse de izolare virala)

Directii de diagnostic
Izolare virala dg de electie
Diagnostic direct =
PCR
Imunofluorescenta directa

Diagnostic indirect - valoarea testelor


serologice

Sincitiu = celule balonizate, multinucleate


Incluzii acidofile = corpii Cowdry A

Reactia de
Imunofluorescenta
directa

ID
PP

test specific, reproductibil, ieftin

Amprenta se va usca bine:


pp. amprentat direct pe lama

Imersie in acetona la 2-8C timp de 10 minute


si uscare.

Reactivii trebuie sa fie la temp.camerei


Incubare cu anticorp fluorescent (30 min la 37 C)
Spalare
Citire la MO in lumina UV
Anticorpi monoclonali marcati cu

ITC fluoreceina sau


rhodamina anti epitopi specifici
de la nivelul anvelopei
-gp C si ICP35 (HSV1) =110-120kd
-polipeptide (HSV2) =78-82kd

ID

PP

PCR-metoda mai sensibila de


confirmare a dg. de infectie cu HSV
util mai ales in:
- detectia infectiei in excretia asimptomatica
- evaluarea riscului transmiterii HSV in cupluri
discordante
- eficienta supresiei replicarii virale in terapia
antivirala (encefalita herpetica)

Serologia singura nu este


considerata ca dg de confirmare
ci se alatura testelor de dg. direct.

Diagnostic in infectia cu
BETAHERPESVIRUSURI
CMV

Directii de diagnostic
Izolare virala pe culturi de fibroblaste diploide
umane / Shell vials (24h). Dupa 2 zile se poate
observa ECP / detecta antigene timpurii prin
RIF(pp: lavaj bronhoalveolar; LCR, biopsii tisulare;
sange pe anticoagulant, urina
IF direct pentru detectia atigenelor pp65 din
fractia limfocitara
PCR pentru ADN CMV din sange pe
anticoagulant, lichid amniotic
ELISA de captur pentru anticorpi anti CMV IgM;
ELISA cantitativa pentru evidentierea
seroconversiei in anticorpi anti CMV IgG pe probe
pereche de ser.

Shell vials

Cell culture

ECP CMV

RIF evidentierea Ag pp65 cu Ac antipp65


marcati fluorescent

Diagnostic serologic al infectiei


cu CMV la gravide
PRIMA TESTARE

Diagnostic in infectia cu
GAMAHERPESVIRUSURI
EBV
ELISA si IF
anticorpi anti capsidari IgM (anti VCA,
anti EA)
anticorpi anti nucleari (anti EBNA)
(pp=ser)
PCR pentru ADN EBV
(pp=biopsie tisulara, snge integral)

Diagnostic in infectia cu virusuri


herpetice

Diagnostic in infectia cu
herpesvirusuri
Alfa-herpesvirusuri
Beta-herpesvirusuri
Gamma-herpesvirusuri

HERPESVIRIDAE
ALPHAHERPESVIRINAE
HERPES SIMPLEX 1 (HSV1)
HERPES SIMPLEX 2 (HSV2)
VARICELO-ZOSTERIAN (VZV)

BETAHERPESVIRINAE
CITOMEGALIC (CMV)
HUMAN HERPESVIRUS 6 (HHV6)
HUMAN HERPESVIRUS 7 (HHV7)

GAMAHERPESVIRINAE
EPSTEIN BARR (EBV)
HUMAN HERPESVIRUS 8 (HHV8)-KAPOSI ASSOCIATED

Diagnostic in infectia cu
alfaherpesvirusuri
orientare clinica
leziuni veziculare
HSV 1
HSV 2

PRODUSE PATOLOGICE
Lichid vezicular
Tampon conjunctival
Tampoane vaginale, lavajul cervicovaginal, tampon uretral
Recoltare recomandata in cazul
leziunilor active (50% sanse de izolare virala)

Directii de diagnostic
Izolare virala dg de electie
Diagnostic direct =
PCR
Imunofluorescenta directa

Diagnostic indirect - valoarea testelor


serologice

Izolare virala diag. de electie

DIAGNOSTIC DE ELECTIE
Izolare virala
-HSV 1 si 2: ECP apare la 2-3 zile cu raspandire rapida
-VVZ: ECP apare lent, focalizat cu raspandire in 1-2 saptamani

HEp2
HEK
NCI-H292
RD
MR-5
Culturi primare de rinichi de iepure
Culturi diploide de fibroblaste

Sincitiu = celule balonizate, multinucleate


Incluzii acidofile = corpii Cowdry A

Sanse crescute de izolare


-in primoinfectie
-in stadii incipiente vs. in cazul aparitiei
crustelor
-in cazul leziunilor veziculare fara
suprainfectie

Diagnostic direct

Reactia de
Imunofluorescenta
directa

ID
PP

test specific, reproductibil, ieftin

Amprenta se va usca bine:


pp. amprentat direct pe lama

Imersie in acetona la 2-8C timp de 10 minute


si uscare.

Reactivii trebuie sa fie la temp.camerei


Incubare cu anticorp fluorescent (30 min la 37 C)
Spalare
Citire la MO in lumina UV
Anticorpi monoclonali marcati cu

ITC fluoresceina sau


rhodamina anti epitopi specifici
de la nivelul anvelopei
-gp C si ICP35 (HSV1) =110-120kd
-polipeptide (HSV2) =78-82kd

ID
PP

Celule negative
Testul este
1. pozitiv daca pe lama sunt cel
putin 2 celule fluorescente
2. negativ daca sunt cel putin 20 de
celule fara fluorescenta
3. invalid daca nu sunt cel putin 20
de celule pe lama

IFD in celule epiteliale

PCR-metoda mai sensibila de


confirmare a dg. de infectie cu HSV
util mai ales in:
- detectia infectiei in excretia asimptomatica
- evaluarea riscului transmiterii HSV in cupluri
discordante
- eficienta supresiei replicarii virale in terapia
antivirala (encefalita herpetica)

Serologia singura nu este


considerata ca dg de confirmare
ci se alatura testelor de dg. direct.

Teste serologice specifice

Serologia singura nu este considerata ca dg de confirmare ci se alatura testelor de dg. direct.

Exista mai multe tipuri de teste EIA aprobate de FDA. Se utilizeaza in


urmatoarele cazuri:
In dg de infectie cu HSV-2 sau HSV-1 la pacientii simptomatici ce
prezinta culturi virale negative sau care nu au fost testati in
momentul evaluarii initiale.
Identifica infectia acuta sau latenta cu HSV-1 sau HSV-2 la pacientii
cu prezentare clinica atipica.
Se efectueaza la partenerii sexuali ai pacientilor cu dg. confirmat
pentru a determina o posibila infectie subclinica sau asimptomatica
Diagnosticarea femeilor insarcinate asimptomatice cu infectie HSV2 sau HSV-1 la nivel genital pentru a preveni riscul transmiterii
materno-fetale in momentul traversarii canalului de nastere
Determinarea tipului de HSV pentru semnificatie prognostica.
Recurentele sunt mai frecvente in cazul infectiei cu HSV-2 decat cu
HSV-1.

Diagnostic in infectia cu
betaherpesvirusuri
CMV

Transmiterea materno-fetala a
CMV
Prenatal- malformatii congenitale severe
(microcefalie, retard mental, anomalii
osoase)
Perinatal- boala cu incluzii citomegalice a
nou-nascutului( hepatosplenomegalie,
icter, anemie hemolitica)
Postnatal- infectie asimptomatica sau
asemanatoare mononucleozei

Directii de diagnostic
Izolare virala pe culturi de fibroblaste diploide
umane. Replicare lenta , ECP apare dupa 14-20
zile (citomegalie si incluzii intranucleare tipice in
ochi de bufnita). (pp: lavaj bronhoalveolar; LCR,
biopsii tisulare; sange pe anticoagulant, urina)
IF direct pentru detectia atigenelor pp65 din
fractia limfocitara
PCR pentru ADN CMV din sange pe
anticoagulant, lichid amniotic

ELISA de captur pentru anticorpi anti CMV IgM;


ELISA cantitativa pentru evidentierea
seroconversiei in anticorpi anti CMV IgG pe probe
pereche de ser.

ECP CMV

Diagnostic serologic al infectiei


cu CMV la gravide
PRIMA TESTARE

Diagnostic in infectia cu
gamaherpesvirusuri
EBV

EBV
EIA si IF
anticorpi anti capsidari IgM (anti VCA)
anticorpi anti nucleari (anti EBNA)
(pp=ser)
PCR pentru ADN EBV
(pp=biopsie tisulara, snge integral)

Precizati tipul de reactie reprezentata in sirurile de godeuri C, D, E si principiul tehnicii.


Pentru ce viroze tehnica aceasta este de electie si ce simptome clinice prezinta
pacientul?

Precizati tipul de reactie si infectiile virale care pot fi


diagnosticate cu aceasta.

Un pacient cu leziuni veziculare in buchet


dispuse la nivelul comisurii bucale - se
prezinta pentru diagnostic.
Precizati produsele patologice, reguli de
transport, metode de izolare virala si
tehnica optima de diagnostic rapid

Ce tip de ECP este prezentat in figura urmatoare: Precizati

virusurile care pot determina astfel de modificari