TA

L I N AG H E O RG H I E S E I
CA

TEHNICI
MICROSCOPICE
U T I L I Z AT E

N CRIMINALISTICA

LAT E X

Copyright 2015 Catalin AGHEORGHIESEI

editat cu LATEX
http://www.plasma.uaic.ro/didactica
Informaii de licena: aceasta carte poate fi liber distribuita pentru utilizarea n scop educaional.
Prima edit, ie 2013
Edit, ia a doua Ianuarie 2015

Cuprins

Introducere

1.1 Obiective generale

1.2 Cont, inutul cursului

1.3 Scurt istoric

Formarea imaginilor

11

2.1 Obiectul imaginea sa

11

2.2 Principiile opticii geometrice

2.3 Reflexia s, i refract, ia
2.4 Sisteme de marire

14
15

Microscoape utilizate n criminalistica

3.1 Microscopul compus

23

24

3.2 Microscop stereoscopic

28

3.3 Microscopul de comparat, ie

3.4 Microscop cu lumina polarizata

12

28
28

Caracterizarea imaginilor obt, inute prin instrumente optice

4.1 Absorbt, ia

32

4.2 Reflexia, refract, ia s, i dispersia

33

4.3 Teoria lui Abbe de formare a imaginilor

Glosar

43

33

31

Lista de figuri

2.1
2.2
2.3
2.4
2.5
2.6

Sistemul optic delimiteaza spat, iul obiect de spat, iul imagine

11
Tipuri de fascicule de lumina.
13
Drumul optic
13
Spectrul luminii vizibile
14
Reflexia s, i refract, ia luminii
14
Elementele dioptrului sferic: [AOP] axa optica principala; [AOS] axa
optica secundara; [O] centrul dioptrului sferic; [V] vrful dioptrului
sferic; [R] raza dioptrului sferic; [n1 , n2 ] indici de refract, ie pentru
mediile separate de suprafat, a dioptrului sferic
14
2.7 Lentile convexe
15
2.8 Lentile concave
15
2.9 Principalele marimi caracteristice lentilelor
15
2.10 Mersul razelor de lumina prin lentile.
16
2.11 Lentila convergenta, obiect situat la distant, a mai mare dect distant, a
focala.
17
2.12 Lentila convergenta, obiect situat n focarul obiect.
17
2.13 Lentila convergenta, obiect situat la distant, a mai mica dect distant, a
focala
17
2.14 Lentila divergenta.
17
2.15 Convent, ii de semn pentru dioptrul sferic.
18
2.16 Formulele lentilelor.
19
2.17 Formarea imaginii printr-o lupa
20
2.18 Formarea imaginii printr-un microscop optic.
21
3.1 Evolut, ia istorica a microscopului
23
3.2 Imagini ale gauncioarelor de polen de Floarea-Soarelui cu mariri de 40x,
100x s, i 400x.
25
3.3 Componentele microscopului compus
25
3.4 Mersul razelor de lumina prin microscopul compus.
27
3.5 Microscop drept.
27
3.6 Microscop inversat.
27
3.7 Microscop stereoscopic.
28
3.8 Microscop de comparat, ie.
29
3.9 Microscop cu lumina polarizata.
29
3.10 Analizorul (stnga) s, i polarizorul (2 imagini dreapta) componente ale
microscopului cu lumina polarizata.
29
3.11 Fibre vegetale colorate observate n lumina nepolarizata (stnga) respectiv polarizata (dreapta).
30
3.12 Imaginea unei fibre de poliester n lumina liniar polarizata.
30

3.13 Imaginea unei fibre de poliester n lumina eliptic polarizata.

3.14 Birefringent, a cristalului de calcit.
30

30

4.1 Mediu transparent s, i filtru ros, u.

32
4.2 Combinat, ii datorate absorbt, iei din spectrul luminii albe.
32
4.3 Imagini obt, inute pentru obiecte colorate diferit cnd sunt iluminate cu
radiat, ii de culori diferite.
32
33
4.4 Devierea controlata a radiat, iilor prin utilizarea uleiului de imersie.
4.5 Dispersia prin prisma optica.
33
4.6 Interferent, a undelor stat, ionare
34
4.7 Interferent, a n dispozitivul Young.
34
4.8 Difract, ia printr-o diafragma circulara.
35
4.9 Legatura dintre discul Airy s, i rezolut, ia optica.
35
4.10 Apertura numerica a unui obiectiv.
35
4.11 Legatura dintre discul Airy s, i apertura numerica.
36
4.12 Determinarea rezolut, iei spat, iale optime pentru sistemul optic format din
obiectiv s, i condensor.
37
4.13 Contrastul/culoarea.
38
4.14 Compararea tehnicilor de iluminare prin transmisie utilizate pentru a
genera contrast ntr-un es, antion de hrtie.
38
4.15 Comparat, ie iluminare n cmp ntunecat s, i n cmp luminos.
39
4.16 Detalii obt, inute n cmp ntunecat.
39

1 Introducere
Acest material este destinat tuturor celor interesat, i de Tehnicile microscopice utilizate n criminalistica s, i reprezinta o compilat, ie de texte prezentate
n cursul cu acelas, i nume prezentat n cadrul masterului de criminalistica
organizat la Universitatea Alexandru Ioan Cuza din Ias, i1 .
Cititorii interesat, i de aprofundarea s, i studiul avansat a tehnicilor microscopice pot consulta bibliografia prezentata la sfrs, itul materialului. Trebuie
precizat nsa ca aici ne vom ocupa mai mult de principiile de microscopie fara
a insista asupra unor cazuri specifice muncii expert, ilor criminalis, ti.

1.1

Obiective generale
Acest curs s, i propune sa pregateasca cursant, ii pentru:
nt, elegerea s, i aplicarea cunos, tint, elor privind conceptele de analiza prin
metodele oferite de tehnicile de microscopie optica, electronica, precum s, i
alte tehnici noi de analiza microscopica a suprafet, elor;
sa cunoasca s, i sa aplice cunos, tint, ele privind modul de pregatire a probelor
conform protocoalelor standard de analiza n criminalistica, prin metodele
oferite de tehnicile de microscopie;
sa-s, i nsus, easca s, i sa aplice cunos, tint, ele privind analiza comparativa s, i
analiza mezofazica a unor es, antioane, simulatoare de caz, n special prin
tehnicile de microscopie optica s, i electronica;
sa aiba capabilitatea de a cauta, prelucra s, i analiza informat, ii dintr-o varietate de surse bibliografice s, i sa ntocmeasca un raport de cercetare (constatare);
sa aiba idei noi privind protocoalelor experimentale de analiza;
sa posede abilitatea de a lucra n echipa pentru a rezolva probleme experimentale s, i tehnologice;
sa aiba capabilitatea sa formuleze critici cu privire la stadiul actual din
domeniu s, i aceea de a ntrevedea direct, ii noi de cercetare;
sa init, ieze s, i sa administreze cu succes proiecte personale s, i de grup;
sa aiba determinare s, i perseverent, a n realizarea sarcinilor primite s, i a
responsabilitat, ilor asumate.

www.uaic.ro

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

1.2

Cont, inutul cursului

Acest curs este structurat astfel:
Introducere: Scurt istoric al microscopiei optice; nceputurile folosirii
metodelor optice de analiza n Criminalistica.
Principii fundamentale n Optica: Proprietat, ile fizice ale luminii; Elemente
de optica geometrica; Formarea de imagini prin lentile.
Bazele Microscopiei Optice: Componentele principale ale unui microscop
optic; Obiective; Caracteristici (notaii); Clasificare.
Principii de funct, ionare: Iluminare Koehler; Teoria lui Abbe de formare a
imaginii; Rezolut, ie - criteriul Rayleigh; Drum optic; Dinamica formarii
imaginii.
Microscopie n lumina alba (cmp luminos): Microscopul de comparat, ie;
Microscopul stereoscopic; Microscopie n cmp ntunecat;
Microscopie n lumina polarizata: Proprietat, ile luminii polarizate; Microscopie n contrast de faza; Microscopie n contrast diferent, ial de interferena;
Microscopie de fluorescent, a integrala; Microscopie confocala;
Posibilitat, i de utilizare n analiza Criminalistica (analize de caz).

1.3

Scurt istoric
Microscopul este simbolul universal al s, tiint, ei prin reprezentarea abilitat, ii
de a explora lumea dincolo de percept, iile bazate pe simt, uri.
Microscopul optic: Instrument optic folosit pentru observarea obiectelor
mici marite de circa 2000 de ori s, i se pot distinge detalii de ordinul miimilor
de milimetru. Puterea de marire microscopului depinde de tipul respectiv, cea
mai mare fiind a microscopului electronic.
Microscopul a fost inventat n 1590 de catre Zacharias Janssen (Olanda)
dar se pare ca existau astfel de instrumente optice mai vechi, denumirea de
microscop a fost data n 1624 de Johann Faber (sau Giovanni Faber) naturalist
(doctor) papal.
Microscopul electronic instrument analog microscopului optic, n care rolul
razelor de lumina este ndeplinit de un fascicul de electroni care traverseaza
mai multe lentile electronice; poate mari imaginea obiectelor pna la un milion
de ori, permit, nd distingerea detaliilor de ordinul ngstrmilor (1010 m).
Microscopia este tehnica care foloses, te microscopul ca principal instrument
s, i care descrie modul n care se obt, in imaginile obiectelor foarte mici. Microscopia descrie relat, ia ntre obiect s, i imaginea sa prin sistemul optic/electronic
al microscopului. Presupune folosirea unor procedee specifice domeniului de
aplicabilitate (n acest caz n criminalistica).
Microscopul n criminalistica este utilizat pentru analiza probelor n/de tip:
Arta, Analiza fotografica, Amprente
Benzi, Chimie, Droguri
Gloant, e, Hrtie, nscrisuri

introducere

Fibre, Fire de par,

Lemn, Materiale de construct, ie, Minerale
Polen, Polimeri, Praf
Sticla, Sol, Ser, Urme de unelte

2 Formarea imaginilor
Formarea imaginilor printr-un instrument optic (implicit printr-un microscop) se datoreaza propagarii luminii prin componentele optice ale instrumentului (oglinzi, prisme, lentile etc.). Analiza imaginilor obt, inute prin
instrumentele optice se va face as, adar plecnd de la principiile s, i legile de propagare a luminii prin componentele optice (studiate de optica) dar va depinde
s, i de as, ezarea geometrica a acestor componente (de geometrie). Ne aflam
astfel in cadrul opticii geometrice: studiaza propagarea luminii prin diferite
medii sau prin suprafet, ele de separare ale acestora, fara a lua n considerare
natura ondulatorie sau corpusculara a luminii.
Obiectele formeaza imagini prin intermediul instrumentelor optice. n
optica geometrica vom gasi relat, ii care leaga obiectul de imaginea sa (v.
Figura 2.1).
Figura 2.1: Sistemul optic delimiteaza
spat, iul obiect de spat, iul imagine

Sistem optic S
pa
iu

Sp
a

iu

ob

ie

ct

direcia de propagare a luminii

2.1

im
ag

in

Obiectul imaginea sa
Obiecte optice sunt considerate orice obiecte, vizibile sau nu cu ochiul
liber, care formeaza imagini prin intermediul sistemelor optice. n optica
aceste obiecte sunt considerate a fi formate din puncte geometrice.
O clasificare simpla privind obiectele optice presupune ca acestea sunt
considerate:
obiecte luminoase surse directe de lumina;
obiecte neluminoase vizibile n prezent, a obiectelor luminoase
Un obiect luminos sau neluminos este vizibil doar daca este o diferent, a de
stralucire sau culoare ntre acesta s, i mediul care l nconjoara. Diferent, a de
stralucire sau culoare ntre punctele unei imagini formate de un obiect pe
retina este cunoscuta sub numele de contrast.

12

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

Imaginea obt, inuta privind prin microscop, fotografie, film sau televiziune
trebuie sa fie o reprezentare fidela punct cu punct a obiectului (referitor n
primul rnd la stralucire, culoare etc.). Ochiul uman percepe doar stralucirea
s, i culoarea, creierul interpreteaza stralucirea relativa s, i culorile punctelor de
lumina de pe retina s, i face o judecata ca fiind marimea, forma, localizarea s, i
pozit, ia obiectului real. Ceea ce vedem nu este o reprezentare perfecta a lumii
fizice deoarece:
ochiul nu e perfect
vazul este limitat de factori fizici (obiecte ndepartate/apropiate, ntunecate/stralucitoare, nu emit n vizibil
factori psihologici (se poate pacali us, or simt, ul vazului)
Apar o mult, ime de ntrebari privind informat, iile pe care le primim prin
intermediul imaginilor:
1. Cum obt, inem (primim) informat, iile corecte despre mediul nconjurator?
2. Care este natura s, i validitatea informat, iei?
3. Care este relat, ia ntre percept, ia noastra s, i lumea reala?
4. Care este natura s, i validitatea informat, iilor obt, inute cu ajutorul instrumentelor care extind limitele simt, urilor?
Pentru a putea raspunde trebuiesc definite o serie de principii s, i demonstrate
o serie de legi legate de formarea imaginilor prin instrumentele optice. Sau dezvoltat teorii despre sursele, propagarea s, i percept, ia luminii. O teorie
interesanta dar care s-a extins n istorie a fost dezvoltata de Aristotel, Euclid
n Grecia antica s, i a dainuit pna la Isaac Newton n Renas, tere: Lumina
izvoras, te din ochi s, i pipaie obiectele din jur..

Principiile opticii geometrice

2.2

Pentru studiul formarii imaginilor printr-un microscop vom da cteva

definit, ii:
Definit, ie 2.1. Fasciculul de lumina ca fiind o port, iune din spat, iu marginit prin
care lumina se propaga;.
Definit, ie 2.2. Raza de lumina poate fi definita ca fiind un fascicul paralel de
lumina de grosime aproape nula (foarte subt, ire);
n optica geometrica fasciculele de lumina (raze de lumina) sunt clasificate
n:
Fascicule de raze omocentrice (au un punct comun): convergente sau
divergente;
Fascicule de raze paralele: razele de lumina nu se intersecteaza
Pricipiu 2.1. Principiul propagarii rectilinii a luminii: ntr-un mediu omogen
s, i izotrop lumina se propaga n linie dreapta pna la ntlnirea unui obstacol
sau a unui alt mediu.

formarea imaginilor

Figura 2.2: Tipuri de fascicule de lumina.

Fascicul

Fascicul

Fascicul

omocentric
divergent

omocentric
convergent

paralel

13

Pricipiu 2.2. Principiul independent, ei propagarii razelor luminoase: razele luminoase necoerente care se ntlnesc ntr-un punct nu se influent, eaza reciproc,
pastrndu-s, i fiecare direct, ia init, iala de propagare.
Pricipiu 2.3. Principiul reversibilitat, ii drumului razelor: O raza de lumina
care parcurge un sistem optic ntr-un sens, va parcurge sistemul pe acelas, i
drum optic daca este dirijata n sens invers.
Pricipiu 2.4. Principiul lui Fermat: Drumul optic parcurs de o raza luminoasa
ntre doua puncte este un extremum n raport cu oricare alt drum posibil ntre
acele puncte. Acest extrem este de obicei un minim.
Pricipiu 2.5. Teorema MalusDupin: Daca din mediul obiect (aflat naintea
sistemului optic) pornes, te un fascicul de raze normale la suprafat, a echifaza
, dupa parcurgerea sistemului optic (prin reflexii s, i refract, ii), razele din
fasciculul emergent sunt normale la suprafat, a echifaza imagine 0 . Drumurile
optice pentru fiecare raza dintre cele doua suprafet, e echifaza sunt egale.
ntr-un mediu omogen s, i izotrop viteza de propagare a luminii este constata
s, i se poate defini:
Definit, ie 2.3. Indicele de refract, ie n
n=

(2.1)

c0
c

unde c0 este viteza luminii n vid

(2.2)

c0 3 108 m/s = 300000km/s

iar c este viteza de propagare a luminii n acel mediu.

Indicele de refract, ie este supraunitar n > 1.
Definit, ie 2.4. Drumul optic, se noteaza cu ( L), este produsul dintre indicele
de refract, ie n s, i lungimea geometrica a drumului parcurs de raza luminoasa
L0
(2.3)

( L ) = n L0

Indicele de refract, ie a unui mediu de propagare depinde de:

Temperatura
Lungimea de unda a radiat, iei luminoase (notata cu )
Undele luminoase din domeniul vizibil au lungimi de unda cuprinse ntre
380nm (violet) s, i 700nm (ros, u)(v. Figura 2.4).

drum optic (L)=nL0

L0
Figura 2.3: Drumul optic

14

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

Figura 2.4: Spectrul luminii vizibile

2.3
2.3.1

Reflexia s, i refract, ia
Reflexia luminii
Definit, ie 2.5. Reflexia luminii este fenomenul de ntoarcere (part, iala) a undei
(razei) luminoase n mediul din care provine cnd ntlnes, te suprafat, a de
separare dintre doua medii optice diferite. (Figura 2.5)
Legile reflexiei:
Legea 2.1. Raza incidenta, raza reflectata s, i normala n punctul de incident, a
la suprafat, a de separare dintre cele doua medii se afla n acelas, i plan.
Legea 2.2. Unghiul de incident, a (i1 ) este egal cu unghiul de reflexie (i10 )
(2.4)

2.3.2

i1 = i10

Refract, ia luminii
Definit, ie 2.6. Refracia luminii este fenomenul de schimbare a direct, iei de
propagare a luminii la ntlnirea suprafet, ei de separare dintre doua medii
optice diferite, prin patrunderea luminii n mediul respectiv. (Figura 2.5)
Legile refract, iei:

za

normala

ra

inc
ide

Legea 2.3. Raza incidenta, raza refractata s, i normala n punctul de incident, a

la suprafat, a de separare dintre cele doua medii se afla n acelas, i plan.
Legea 2.4. Legea Snellius-Descartes:

nt

i1 i1

(2.5)

raza

n1
n2

Observat, ii:

c
refra

i2

n1 sin i1 = n2 sin i2

tat
Figura 2.5: Reflexia s, i refract, ia luminii

Suprafat, a de separat, ie dintre doua medii transparente cu indici de refract, ie

diferit, i se numes, te dioptru (v. Figura 2.6)
Daca suprafat, a de separat, ie este sferica atunci dioptrul este numit dioptru
sferic; daca suprafat, a este plana atunci dioptrul este numit dioptru plan;
Dioptrul sferic se caracterizeaza prin urmatoarele elemente:
Vrful dioptrului V (polul calotei sferice)
Centrul de curbura O este centrul sferei din care face parte suprafat, a
sferica

AO

Axa optica principala: dreapta VO care trece prin vrf s, i centru

S

Axa optica secundara: orice dreapta care trece prin centrul optic

n1
n2

R
AOP
V

Figura 2.6: Elementele dioptrului sferic:

[AOP] axa optica principala; [AOS] axa
optica secundara; [O] centrul dioptrului
sferic; [V] vrful dioptrului sferic; [R]
raza dioptrului sferic; [n1 , n2 ] indici
de refract, ie pentru mediile separate de
suprafat, a dioptrului sferic

Reflexia s, i refract, ia sunt fenomenele care stau la baza construct, iei instrumentelor optice: oglinzi, prisme optice, lentile, obiective, oculare, microscoape, lunete etc.

formarea imaginilor

2.4

15

Sisteme de marire
Pentru a putea observa mai multe detalii a unui obiect (fie obiect microscopic, fie obiect foarte ndepartat) trebuie utilizat un sistem optic de marire.
Sistemele optice de marire pot fi clasificate n:
sisteme simple: oglinda, proiector, lupa
sisteme compuse: microscop, luneta
Sistemele de marire compuse cont, in o serie de sisteme simple: de regula mai
multe lentile, diafragme, oglinzi etc.
Definit, ie 2.7. Lentilele sunt sisteme optice transparente formate prin alaturarea
a doi dioptri.
Dupa diversele tipuri de dioptri alaturat, i lentilele sunt caracterizate astfel:
lentile biconvexe (a), plan-convexe (b) s, i menisc convex (c);
lentile biconcave (d), plan-concave (e) s, i menisc concav (f);

Figura 2.7: Lentile convexe

obiect

F1

f2>0
x2>0

x1<0

d
e
Figura 2.8: Lentile concave

{
F1
O

F2

f1>0

Principale caracteristici ale lentilelor subt, iri:

Centrul optic al lentilei O;
Focarul imagine F2 s, i focarul obiect F1 ;
Distant, a focala obiect: f 1 = F1 O;
distant, a focala imagine f 2 = F2 O;

2.4.1

f2<0
imagine

obiect

F2

imagine

f1<0

Imagini prin lentile

Pentru a construi imaginile obiectelor prin lentile t, inem cont de cteva
considerente geometrice ce provin din aproximat, ia paraxiala a razelor de
lumina s, i din legile de propagare a razelor de lumina prin sistemele optice. n
aproximat, ia paraxiala razele de lumina care formeaza imaginile se propaga
foarte aproape de axa optica a sistemului (formeaza unghiuri mici cu axa
optica < 5o ).

Figura 2.9: Principalele marimi caracteristice lentilelor

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

O imagine a unui obiect este considerata imagine clara daca fiecarui punct
de pe obiect i corespunde un punct imagine s, i numai unul. Punctele imagine
se vor forma la intersect, ia a cel put, in 2 raze luminoase (sau la prelungirea
acestora)
Pentru construct, ia geometrica a imaginilor prin lentile consideram propagarea urmatoarelor raze luminoase:
Orice raza paralela cu axa optica principala dupa lentila va trece prin focarul
imagine (raza sau prelungirea ei)
Orice raza luminoasa care trece prin focarul obiect dupa lentila va deveni
paralela cu axa optica;

obiect

F2

imagine

obiect

F1
O

F1
O

imagine

F2

Figura 2.10: Mersul razelor de lumina prin lentile.

F2

F1

imagine

F2

F1

obiect

F1

obiect

F2

imagine

F1

imagine

F2

imagine

obiect

Orice raza care trece prin centrul lentilei se va propaga fara a fi deviata

obiect

16

formarea imaginilor

2.4.2

17

Construct, ia imaginilor prin lentila convergenta

Daca obiectul este situat fat, a de lentila la o distant, a mai mare dect distant, a
focala obiect (v. Figura 2.11) atunci imaginea va fi:
reala (poate fi proiectata pe un ecran);
rasturnata;
mai mica sau mai mare dect obiectul
Daca obiectul este situat n focarul obiect (v. Figura 2.12) atunci imaginea
va fi:
reala dar nelocalizata (se formeaza la infinit);

F2

O
F1

Figura 2.11: Lentila convergenta, obiect situat la distant, a

mai mare dect distant, a focala.

rasturnata;
F2

egala ca marime cu obiectul

Daca obiectul este situat fat, a de lentila la o distant, a mai mica dect distant, a
focala obiect (v. Figura 2.13) atunci imaginea va fi:
virtuala (nu poate fi proiectata pe un ecran);

F1

Figura 2.12: Lentila convergenta,

obiect situat n focarul obiect.

dreapta;
mai mare dect obiectul (n acest caz lentila este denumita lupa)

2.4.3

Construct, ia imaginilor prin lentila divergenta

Indiferent daca obiectul este situat fat, a de lentila la o distant, a mai mica sau
mai mare dect distant, a focala obiect (v. Figura 2.14) atunci imaginea va fi:

F2

O
F1

Figura 2.13: Lentila convergenta, obiect situat la distant, a

mai mica dect distant, a focala

virtuala (nu poate fi proiectata pe un ecran);

dreapta;
O

mai mica dect obiectul.

F1

F2

2.4.4

Complemente matematice
Definit, ie 2.8. Stigmatismul este proprietatea unui sistem optic de a forma
pentru fiecare punct al unui obiect o imagine care este tot un punct s, i numai
unul.
Altfel spus sistemele optice care formeaza imagini clare sunt sisteme care
au proprietatea de sigmatism.
n cele ce urmeaza vom considera sistemele optice prezentate anterior
(dioptrul sferic, lentile) ca fiind sisteme stigmatice. O condit, ie pentru a asigura
stigmatismul este ca razele de lumina sa fie paraxiale, adica sa fie aproape
paralele cu axa optica: fac unghiuri mici cu axa optica (mai mici dect 5o )
Convent, ii de semn:
Toate distant, ele pna la punctele obiect s, i imagine vor fi masurate fat, a de
vrful V al dioptrului sau fat, a de centrul lentilei. Se considera distant, e pozitive daca masuratoarea se face n sensul propagarii radiat, iilor s, i negative
daca masuratoarea se face n sens opus propagarii razei de lumina;

Figura 2.14: Lentila divergenta.

18

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

unghiurile se vor masura fat, a de axa optica s, i vor fi considerate pozitive

daca raza se rotes, te spre axa optica n sens trigonometric (antiorar) s, i
negativ daca rotat, ia se face n sens antitrigonometric (orar)

Figura 2.15: Convent, ii de

semn pentru dioptrul sferic.

n1
+y1
AOP

-1

2
O

V
-x1

2.4.5

n2

-y2

+x2

Formule dioptru
Legea 2.5. Prima relat, ie (sau relat, ia punctelor conjugate)
(2.6)

n2
n
n n1
1 = 2
x2
x1
R

Legea 2.6. A doua relat, ie (marirea liniara transversala)

(2.7)

x n
y2
= 2 1
y1
x1 n2

Pentru a afla pozit, ia focarului imagine: n relat, ia (2.6) se considera ca

o raza provine de la un obiect as, ezat la infinit (raza va fi paralela cu axa
optica principala) s, i dupa ce trece prin dioptru va ajunge n focar (matematic
x1 s, i x2 = f 2 ):
(2.8)

f2 =

n2 R
n2 n1

Analog pentru pozit, ia focarului obiect: n relat, ia (2.6) se considera ca o

raza provine de la un obiect as, ezat n focarul obiect ce trece prin dioptru va
ajunge paralela cu axa optica principala (matematic x2 s, i x1 = f 1 ):
(2.9)

f1 =

n1 R
n2 n1

nct formula punctelor conjugate (2.6) se poate rescrie

(2.10)

2.4.6

f2
f
+ 1 =1
x2
x1

Formule lentile
Legea 2.7. Formula fundamentala a lentilelor subt, iri:


1
1
1
1
(2.11)

= ( n 1)

x2
x1
R1
R2
Legea 2.8. Formula maririi liniare transversale pentru lentile:
(2.12)

y2
x
= 2
y1
x1

formarea imaginilor

F2

F1

f2>0
x2>0

x1<0

imagine

f1<0

obiect

Figura 2.16: Formulele lentilelor.

Focarul imagine a lentilei subt, iri:

(2.13)

f2 =

( n 1)

1


1
R1

1
R2

1
R2

 = f

Focarul obiect:
(2.14)

f1 =

( n 1)

1


1
R1

 = f

Definim convergent, a unei lentile:

(2.15)

2.4.7

C=

1
f

Caracteristici instrumente optice

Marirea liniara transversala: raportul dintre marimea imaginii y2 s, i marimea
obiectului y1
(2.16)

y2
y1

Puterea: raportul dintre tangenta unghiului sub care se vede prin instrument
un obiect 2 s, i marimea obiectului y2
(2.17)

P=

tan 2
y2

Grosismentul determina marirea unghiulara a instrumentului optic s, i este

definit ca fiind raportul ntre tangentele unghiurilor sub care se vede obiectul
prin instrument 2 s, i fara instrument 1 :
(2.18)

G=

tan 2
tan 1

Puterea separatoare reprezinta capacitatea de a forma imagini distincte a

doua puncte vecine s, i poate fi definita prin:
distant, a minima ntre doua puncte ce formeaza puncte distincte prin instrumentul optic (pe imagine se disting 2 puncte) putere separatoare
liniara;
unghiul minim ntre 2 raze de lumina care formeaza prin instrumentul optic
imagini distincte putere separatoare unghiulara

19

20

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

Pentru instrumentele optice la care imaginea este privita cu ochiul liber

o marime importanta este distant, a optima de citire notata cu care pentru
ochiul normal (emetrop) este = 0, 25m = 25cm s, i este distant, a ntre ochi
s, i punctul proxim. Pentru toate obiectele situate la distant, a mai mare dect
acest punct ochiul necesita acomodare pna la aproximativ 6m unde se afla
punctul remotum. Ochiul normal nu poate forma imagini clare daca obiectul
observat este situat la mai put, in de 25cm de ochi. Trebuie remarcat aici faptul
ca aceasta distant, a depinde de la subiect la subiect s, i mai mult tinerii pot
focaliza la distant, e mai mici de pna la 125mm (de aproximativ 2x mai mica)
nct aces, tia practic maresc cu ajutorul ochiului de 2x fat, a de adult, i deoarece
imaginea acopera o mai mare parte a retinei.

2.4.8

Lupa
Lupa este un instrument optic simplu convergent alcatuit dintr-o lentila
sau un grup de lentile care au o distant, a focala de ordinul centimetrilor.

Figura 2.17: Formarea

imaginii printr-o lupa

y2

y1

x1

F1

F2

O
M
a

Obiectul care formeaza imaginea prin lupa este as, ezat ntre focarul obiect F1
s, i lentila (v. Figura 2.17). Imaginea va fi virtuala, dreapta s, i mai mare dect
obiectul. Pentru observarea imaginii ochiul este plasat n imediata apropiere a
lentilei (punctul M) la o distant, a a de lentila s, i la = 25cm distant, a optima
de observare. De obicei obiectul este situat ct mai aproape de focarul F1
astfel nct x1 f . Prin urmare puterea lupei va fi:
(2.19)

P=

1
1
tan 2
y /x
= 1 1 =

y2
y1
x1
f

n concluzie: puterea lupei este egala cu convergent, a ei. As, adar pentru a
realiza o lupa cu putere ct mai mare va trebui sa se utilizeze o lentila (sau un
grup de lentile) cu convergent, a ct mai mare. Acest lucru presupune utilizarea
unor lentile a caror dioptri au raze de curbura mici ceea ce mics, oreaza mult
suprafat, a lentilei. Drept consecint, a puterea optica a lupelor nu depas, es, te 100
de dioptrii iar puterea separatoare este de aproximativ 3m = 3 106 m.
Pentru observarea obiectelor cu dimensiuni mai mici trebuie utilizat un alt
sistem de marire: microscopul optic.

2.4.9

Microscopul optic
Microscopul optic cont, ine 2 part, i optice numite obiectiv s, i ocular (v. Figura 2.18). Obiectivul este partea optica cea mai apropiata de obiect s, i for-

formarea imaginilor

21

meaza imagine reala, rasturnata s, i mai mare dect obiectul n spat, iul dintre
obiectiv s, i ocular (imaginea A0 B0 ). Aceasta imagine are rol de obiect pentru
lentila ocular care se comporta ca o lupa formnd n final imaginea virtuala,
rasturnata mai mare dect obiectul (imaginea A00 B00 ).
Imaginea formata
Figura 2.18: Formarea imaginii printr-un
microscop optic.

prin microscop des, i marita se afla situata destul de departe fat, a de ocular (Oc)
nct ochiul (practic lipit de ocular) va privi aceasta imagine neacomodat.
Astfel razele de lumina emergente sunt aproape paralele iar raza B00 F20 va face
cu axa optica a sistemului unghiul 2 aproximativ egal cu unghiul format
de raza B00 O cu axa optica. As, adar tan 2 y10 / f 2 iar puterea optica a
microscopului va fi:
(2.20)

P=

y0
tan 2
1
y1
y1 f 2

s, i cum imaginea y10 se formeaza foarte aproape de focarul F2 ca s, i n cazul

lupei practic F10 A0 e cu e distant, a dintre cele doua focare F10 s, i F2 . Distant, a
e se numes, te interval optic s, i pentru unele microscoape este stabilita de catre
utilizator prin operat, ia de punere la punct a microscopului (se deplaseaza
ocularul sau obiectivul pna cnd se observa clar imaginea marita a obiectului).
Astfel puterea optica a microscopului va deveni:
P

(2.21)

e
f1 f2

n concluzie puterea optica a microscopului este cu att mai mare cu ct

este mai mare intervalul optic sau convergent, a obiectivului 1/ f 1 respectiv a
ocularului 1/ f 2 .
Grosismentul microscopului definit de relat, ia (2.18) este:
(2.22)

G=

y0
tan 2
P
= 1

tan 1
f 2 y1
4

unde am t, inut cont ca pentru un ochi normal delta = 0, 25m = 1/4m. n

practica microscoapele au mai multe obiective s, i oculare care se pot combina
pentru a se obt, ine puteri diferite.

3 Microscoape utilizate n criminalistica

Primele metode de examinare a probelor fizice, n laboratoarele de criminalistica, s-au bazat aproape exclusiv pe microscopie pentru a studia structura
s, i funct, iile materiei. Microscoapele utilizate n criminalistica nu difera cu
nimic fat, a de aparatele utilizate n cercetare. Diferent, a consta n protocolul
utilizat pentru prelevarea probei, obt, inerea imaginii pe microscop s, i eventual
fotografierea sau nregistrarea video a imaginilor.
Primele microscoape utilizate constau doar n alaturarea celor doua lentile
convexe s, i fixarea lor la distant, a corespunzatoare ntr-un tub analog cu cel utilizat pentru lunete. Mai apoi au fost realizate monturi fixe s, i s-au adaugat sursele
de lumina, diafragmele, filtrele, polarizorii s, i aparatul fotografic. Pe masura
ce tehnica s-a dezvoltat s-a ajuns la utilizarea microscoapelor electronice cu
baleiaj (v. Figura 3.1).

Istoricul microscopiei optice

O lista a diferitelor tipuri de microscoape este prezentata mai jos:

Microscop optic compus
Microscop optic stereoscopic
Microscop de comparat, ie
Microscop n lumina polarizata
Microscop n fluorescent, a

Figura13
3.1: Evolut, ia istorica a microscopului

24

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

Microscop electronic de baleaj (SEM & TEM)

Microspectrofotometru
Pentru a alege tehnica de microscopie convenabila pentru analiza criminalistica
trebuie sa raspundem la urmatoarele ntrebari:
1. Ce tip de proba urmeaza sa fie studiata?
2. De ce marire este nevoie?
3. Dorit, i sa pregatit, i proba n as, a fel ca rezultatul sa conduca la evident, ierea
anumitor aspecte (detalii)?
1. Ce tip de proba urmeaza sa fie studiata?
Probe diferite au proprietai fizice diferite intent, ia este sa se observe aproape
orice cu ajutorul microscopului! De exemplu: sngele este structural foarte
diferit fat, a de un diamant al unui inel s, i prin urmare difera tehnica de contrast folosita pentru observare. As, adar cerint, ele unui microbiolog pentru un
microscop vor fi foarte diferite fat, a de cele ale unui producator de bijuterii!
2. De ce marire este nevoie?
Celulele ros, ii din snge au 6-8m n diametru o dimensiune mica! Vet, i
avea nevoie de o marire de minimum 400x pentru a vedea celule ros, ii din
snge, dar daca dorii sa vizualizat, i celulele ros, ii n detaliu, atunci vei avea
nevoie de o marire mai mare. n plus, proba de snge va trebui sa fie pregatita
pe o lamela de sticla, astfel nct sa poata fi vazute detaliile pe care le dorit, i.
Un inel cu diamant are aproximativ 1,5 cm n dimensiune s, i poate fi vazut cu
ochiul liber. Un producator de bijuterii, poate vedea toate detaliile complicate
ale inelului cu o marire de 10x-20x.
3. Dorit, i sa pregatit, i proba n as, a fel ca sa fie evident, iate anumite aspecte?
Cnd se as, eaza un diamant ntr-un inel, bijutierul trebuie sa plaseze cu grija
piatra pret, ioasa. Pentru aceasta este nevoie de vedere 3D deoarece acest lucru
ofera percept, ia adncimii, care ajuta la coordonarea mna-ochi.
Des, i celulele ros, ii din snge sunt prea mici, se dores, te observarea diferitelor
aspecte. Acest lucru ar putea implica modalitat, i diferite de pregatire a probei
de snge s, i/sau tehnici diferite de iluminare: cmp ntunecat sau iluminare n
contrast de faza.

3.1

Microscopul compus
Microscoapele simple au doar un singur set de lentile n timp ce microscopul compus poseda sisteme de lentile grupate n obiectiv s, i ocular. Marirea
maxima va fi data de produsul maririlor corespunzatoare celor doua componente. microscopul compus are o marire uzuala cuprinsa ntre 40x s, i 450x
dar s-a obt, inut valoarea maxima record de 1000x (n practica marirea maxima
fiind 650-700x n funct, ie de ocularele s, i obiectivele utilizate). n Figura 3.2
sunt prezentate imagini ale gauncioarelor de polen de Floarea-Soarelui cu
mariri de 40x, 100x s, i 400x.
Componentele microscopului compus sunt prezentate n Figura 3.3 pentru
cazul n care se foloses, te un singur ocular (microscopul se va numi monocular)
dar nu difera cu nimic de cazul utilizarii a doua oculare cnd aceeas, i imagine
este privita prin doua oculare diferite (microscop binocular) foarte utilizat

microscoape utilizate n criminalistic a

Figura 3.2: Imagini ale gauncioarelor

de polen de Floarea-Soarelui
cu mariri de 40x, 100x s, i 400x.

Figura 3.3: Componentele microscopului compus

ocular

Monocular
suport pentru
obiective
(ecran)

tub de observare

bra

(ocular)
obiective
(imagine plan
intermadiar)

(obiectiv)
(proba)

masa pentru
probe

controler coaxial
mas probe
reglaj grosier

lentile condensor

(condensor)

diafragma irisului

(imagine virtual)

sursa de lumin

asiu

reglaj fin

25

26

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

astazi.
Mersul razelor de lumina printr-un astfel de microscop este
reprezentat n Figura 3.4

microscoape utilizate n criminalistic a

27
Monocular

suport pentr
obiective
(ecran)

3.1.1

Terminologie

(ocular)
obiective

Principalii termeni care sunt considerat, i n cazul compararii performant, elor

microscoapelor compuse sunt:
Sursa cmpului de iluminare - iluminare prin transmise
Sursa de epi-iluminare - iluminare prin reflexie

(imagine plan
intermadiar)

(obiectiv)
(proba)
(condensor)

masa pentru
probe

lentile conden
diafragma

Diafragma irisului
Parfocal
Monocular Binocular
Adncimea cmpului vizual

(imagine virtual)

Figura 3.4: Mersul razelor de lumina prin microscopul compus.

Largimea cmpului vizual

toate aceste caracteristici sunt trecute pe fis, a tehnica ce nsot, es, te microscopul.
n funct, ie de pozit, ia surselor cmpului de iluminare s, i epi-iluminare s-au
realizat microscoape cu vizualizare de deasupra probei (microscop drept)
respectiv cu vizualizare pe dedesubtul probei (microscop inversat).
Astfel
Figura 3.5: Microscop drept.

n cazul microscopului drept (v. Figura 3.5) sursa cmpului de iluminare este
o sursa de iluminare prin transmisie s, i situata n partea de jos a microscopului
iar sursa de epi-iluminare este sursa prin reflexie s, i situata n partea de sus.
Figura 3.6: Microscop inversat.

sursa de lu

asiu

28

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

Microscopul inversat (v. Figura 3.6) prezinta sursa cmpului de iluminare prin
transmisie n partea de sus iar sursa de epi-iluminare prin reflexie n partea de
jos.

3.2

Microscop stereoscopic
Microscopul stereoscopic este cel mai utilizat n criminalistica (v. Figura 3.7) avnd un domeniu de marire 10125x. Des, i marirea acestui microscop nu este foarte mare acest tip de microscop are un cmp de vedere larg
s, i adncime mare de focalizare (sunt imagini 3D) ceea ce permite utilizarea
acestuia pentru eliminarea artefactelor voluminoase s, i concentrarea studiilor
urmatoare doar asupra zonelor de interes criminalistic.
Nu trebuie

Figura 3.7: Microscop stereoscopic.

confundat microscopul stereoscopic cu cel binocular numai pentru faptul ca

se utilizeaza ambii ochi pentru privirea imaginii formate. Microscopul stereoscopic formeaza doua imagini distincte pentru cei doi ochi spre deosebire de
microscopul binocular la care pe fiecare ochi este proiectata aceeas, i imagine.
Imaginea stereoscopica este interpretata ca fiind imagine 3D de catre creierul
omului care face analiza, orice fotografie obis, nuita facuta prin microscopul
stereoscopic fiind totus, i o imagine 2D.

3.3

Microscopul de comparat, ie
Microscopul de comparat, ie (v. Figura 3.7) este un alt exemplu ce microscop
foarte utilizat n criminalistica ce permite compararea probei cu un model de
laborator. Este format practic din doua microscoape compuse independente
care formeaza imagini alaturate sau suprapuse n acelas, i cmp vizual. Acest
tip de microscop este utilizat n special pentru compararea urmelor lasate de
diferite unelte pe diferite tipuri de materiale sau n cazul analizei tuburilor de
cartus, ce provin de la diferite arme de acelas, i calibru.

3.4

Microscop cu lumina polarizata

Microscop cu lumina polarizata este un microscop compus n care se
utilizeaza o lumina polarizata pentru cres, terea contrastului s, i evident, ierea

microscoape utilizate n criminalistic a

29

Figura 3.8: Microscop de comparat, ie.

(tuburi de observare)

Figura 3.9: Microscop cu lumina polarizata.

(tuburi intermediare)

(ocular)

(cadru)

(lentile Bertrand)
(analizor)

(buton pentru
pornire/oprire)

(mas rotativ)

(control pentru reglarea

intensitii lmpii)

(condensor)
(polarizor)
(lentil de focalizare)

(buton pentru
reglarea focalizrii)

(lamp de halogen
cu tungsten)
(asiu)

Microscopie n lumin polarizat

unor caracteristici speciale ale probelor analizate.

Schema constructiva a
microscopului cu lumina polarizata este prezentata n Figura 3.9. Aici trebuie
remarcate 2 componente ale acestui tip de microscop care cont, in polarizori
numite peAnalizor
scurt: Analizor respectiv polarizor (v.Polarizor
Figura 3.10).
(tub intermediar)

(controler pentru
lentilele Bertrand)

(vernier gradat
pentru orientarea
polarizorului)
(compensator plat)

(fata lentilei)

(lentile Bertrand)
(polarizor)

(controler
polarizor)

(controlul numeric
al aperturii)

(controlerul de (polarizor)
orientare
a polarizorului)

(apertura
diafragmei)

Polarizorul este componenta care transforma lumina nepolarizata de la

29
sursa n lumina polarizata liniar prin introducerea unui material polarizor n
fascicul (aici este un abuz de limbaj pentru ca un acelas, i cuvnt polarizor
este utilizat pentru materialul care realizeaza polarizarea luminii s, i a ntregii
componente nsa un material polarizor este cont, inut s, i de catre analizor).
Analizorul este componenta care cont, ine deasemenea un material polarizor
s, i care plasata sub diferite unghiuri fat, a de polarizor determina o variat, ie a
intensitat, ii fasciculului de lumina s, i obt, inerea practic a contrastului imaginii
n microscopia cu lumina polarizata. Analizorul nlaturat din drumul optic permite obt, inerea imaginii n lumina polarizata s, i da probei culoarea adevarata.

Figura 3.10: Analizorul (stnga) s, i polarizorul (2 imagini dreapta) componente ale

microscopului cu lumina polarizata.

30

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

Daca se intercaleaza n drumul optic analizorul s, i se rotes, te pna la crearea

condit, iei de extinct, ie (polarizorul s, i analizorul vor avea direct, iile de transmisie
n cruce) vom obt, ine imaginea probei cu o culoare de interferent, a .
mbunatat, irea contrastului n cazul microscopiei n lumina polarizata se
obt, ine as, adar prin intensificarea culorilor chiar daca aceste nu sunt culorile
naturale adevarate ale contrastului
cont, inutului probelor
respective.
n plus se vor obt, ine
mbuntirea
probei
prin
imagini
cu
contrast
diferit
prin
utilizarea
diferitelor
tipuri
de lumina polarizata:
intensificarea culorilor
liniar polarizata sau eliptic/circular polarizata.

Microscopie n lumin polarizat

Ex: Fibre vegetale colorate

Figura 3.11: Fibre vegetale colorate
observate n lumina nepolarizata
(stnga) respectiv polarizata (dreapta).

31

colorate;

Figura 3.12: Imaginea unei fibre de

poliester n lumina liniar polarizata.

Figura 3.13: Imaginea unei fibre de

poliester n lumina eliptic polarizata.

Figura 3.14: Birefringent, a

cristalului de calcit.

lumina polarizata

Acest lucru este observat us, or n imaginile prezentate n Figurile 3.11,

3.12 s, i 3.13. Se remarca diferent, a att ntre imaginile pentru tipurile de fibre
(vegetale s, i sintetice) dar s, i modul n care este crescut contrastul n lumina
polarizata.
Microscopia n lumina polarizata este utilizata pentru analiza medicolegala a fibrelor naturale/articiciale dar s, i pentru analiza medico-legala a unor
substant, e cristaline din sol de exemplu deoarece unele componente acestor
substant, e prezinta fenomenul de birefringent, a adica fenomenul de refract, ie
atunci cnd lumina trece prin aceste substant, e depinde de polarizarea luminii
incidente. Practic se obt, in doua raze de refract, ie n funct, ie de polarizarea
luminii (o raza se numes, te raza ordinara s, i alta raza extraordinara). Exemplu:
cristalul de calcit prezinta un astfel de fenomen (v. Figura 3.14).

4 Caracterizarea imaginilor obt, inute prin

instrumente optice
Atunci cnd sunt studiate imaginile obt, inute prin instrumentele optice
trebuie sa se analizeze o serie de fenomene fizice care concura la formarea
imaginii. Fara a avea pretent, ia ca vom face un tratat complet privind formarea
imaginilor vom studia n acest capitol o serie de astfel de fenomene fizice.
Pentru aprofundarea acestui subiect recomand doua resurse on-line foarte
simple s, i bine informate: Nikon MicroscopyU1 s, i Optical microscopy primer2 .
Parte din materialul care urmeaza este bazat pe informat, iile cuprinse n aceste
site-uri.
Prezentam mai jos o enumerare sumara a fenomenelor fizice ale luminii
care au consecint, e asupra formarii imaginilor:
Absorbt, ia Cnd lumina trece printr-un mediu optic transparent intensitatea se
reduce in funct, ie de culoare absorbita. Astfel, absorbt, ia selectiva a luminii
albe produce lumina colorata.
Reflexia Fenomenul de ntoarcere a luminii n mediul din care a provenit,
atunci cnd ntlnes, te suprafat, a de separare dintre doua medii cu densitat, i
optice diferite.
Refract, ia Schimbarea direct, iei de propagare a luminii la trecerea dintr-un
mediu transparent n altul cu densitate optica diferita (indice de refract, ie
diferit). O raza provenita dintr-un mediu mai put, in dens va fi deviata fat, a
de normala la suprafat, a de separat, ie dintre cele doua medii, deviat, ia este
cu att mai mare cu ct radiat, ia este de lungime de unda mai mica.
Dispersia Separarea luminii n componentele spectrale, cu lungimi de unda
constitutive, atunci cnd strabate un mediu optic transparent modificarea
indicelui de refract, ie cu lungimea de unda.
Difract, ia Devierea de la propagarea rectilinie a unei unde luminoase atunci
cnd ntlnes, te un obstacol cu dimensiunea de ordinul lungimii de unda
a radiat, iei (fenomenul de ocolire a obstacolelor). Cu ct lungimea de
unda este mai mica n raport cu dimensiunea fantei/obstacolului, cu att
fenomenul se manifesta mai put, in.
Interferent, a reprezinta fenomenul de suprapunere a doua sau mai multe unde
care se ntlnesc ntr-un punct din spat, iu.

1
2

www.microscopyu.com
micro.magnet.fsu.edu/primer/

32

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

4.1

Absorbt, ia
Atunci cnd radiat, ia optica trece printr-un mediu intensitatea ei scade dupa
o lege exponent, iala:
Legea 4.1.
I = I0 exp[e() x ]

(4.1)

Mediu transparent

Filtru rou
Figura 4.1: Mediu transparent s, i filtru ros, u.

Figura 4.2: Combinat, ii datorate

absorbt, iei din spectrul luminii albe.

numita legea absorbt, ie sau legea Lambert-Beer. n relat, ia (4.1) I0 este

intensitatea radiat, iei optice nainte de stratul absorbant, I este intensitatea
radiat, iei dupa ce a parcurs o distant, a x prin stratul absorbant, e este o marime
ce depinde de tipul de material absorbant s, i de lungimea de unda (culoarea)
a radiat, iilor incidente.
Aplicat, iile directe a absorbt, iei sunt reprezentate cel mai bine de filtrele
utilizate n optica. Ele se bazeaza pe absorbt, ia selectiva a anumitor culori din
spectrul luminii albe.
De exemplu: pentru un filtru ros, u din spectrul luminii albe sunt absorbite radiat, iile optice corespunzatoare culorilor verde, albastru, violet (v. Figura!4.1).
n Figura 4.2 sunt reprezentate combinat, iile de radiat, ii optice absorbite din
lumina alba pentru ca radiat, ia ce trece de filtru sa fie de o anumita culoare
(coloana 1). De exemplu: pentru obt, inerea culorii verzi se absoarbe ros, u s, i
albastru.
Combinaiidatorateabsorbiei
Culoarea n lumia alb

Culoarea luminii absorbite

rou

albastru

verde

albastru

rou
rou

verde

verde

galben

albastru

albastru
verde

green

negru

rou
rou

verde

gri

roz

verde

purpuriu

cyan

albastru
albastru
6

Figura 4.3: Imagini obt, inute pentru

obiecte colorate diferit cnd sunt iluminate cu radiat, ii de culori diferite.

Atunci cnd privim anumite imagini obt, inute prin trecerea radiat, iilor prin
instrumente optice este important ce lungime de unda (culoare) au radiat, iile
respective ceea ce poate determina obt, inerea de imagini colorate diferit, cu
contrast diferit (v. Figura 4.3).

caracterizarea imaginilor obt, inute prin instrumente optice

4.2

33

Reflexia, refract, ia s, i dispersia

Fenomenele de reflexie s, i refract, ie au fost studiate s, i n capitolul anterior
unde au fost prezentate legile reflexiei s, i refract, iei (v. relat, iile (2.4) pentru
legea reflexiei respectiv relat, ia (2.5) pentru refract, ie).
Reflexia s, i refract, ia sunt fenomene fizice optice ce apar ntotdeauna mpreuna la suprafat, a de separat, ie dintre doua medii optice diferite (cu indici de
refract, ie diferit, i). Refract, ia este fenomenul principal care permite radiat, iilor
optice care trec printr-o lentila sa fie deviate controlat pentru a se realiza
convergent, a sau divergent, a fasciculelor (v. lentile convergente sau divergente
studiate n capitolul anterior).
n cazul microscopiei optice refract, ia s, i reflexia permite realizarea devierii razelor de lumina n mod controlat prin alegerea convenabila a mediilor
transparente ntre obiectul studiat s, i obiectivul microscopului.
Figura 4.4: Devierea controlata a radiat, iilor
prin utilizarea uleiului de imersie.

n cazul fenomenului de dispersie datorita variat, iei indicelui de refract, ie cu

lungimea de unda (culoarea) radiat, iei optice se vor obt, ine unghiuri de refract, ie
Consecinealefenomenuluiderefracie
diferite pentru culori diferite.
Dispersia luminii
Cel mai cunoscut experiment n care este pusa n evident, a dispersia consta
rac
n trecerea radiat, iei albe printr-o prisma. Aici are loc refract, ia pe cele doua
suprafet, e de separat, ie ale prismei s, i radiat, ia emergenta va fi colorata n componentele radiat, iei incidente (v. Figura 4.5).
Radiat, iile de lungimi de unda mici sunt deviate mai mult dect cele de
lungimi de unda mari.
Radiaiile
sunt4.5:
deviate
avnd ca rezultat
Figura
Dispersia
prin separarea
prisma culorilor
optica.
fenomenul de dispersie a luminii.
Roul este cel mai puin refractat, iar violetul cel mai mult.

4.3

Teoria lui Abbe de formare a imaginilor

Fizicianul german Abbe a realizat prima teorie completa privind formarea
imaginilor prin instrumentele optice. El a considerat ca: Imaginea formata
printr-un sistem optic este efectul interferent, ei unor fenomene de difract, ie.
As, adar formarea imaginilor sunt determinate de interferent, a radiat, iilor optice
care trec prin sistemul optic dar s, i de modul n care apare difract, ia acestor
radiat, ii atunci cnd ntlnesc obstacole de ordinul lungimii de unda. Este
necesar sa se studieze aceste fenomene pentru nt, elegerea completa a formarii
imaginilor.

Ernst Karl Abbe

23 ianuarie 1840, Eisenach
14 ianuarie 1905, Jena

34

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

4.3.1

Interferent, a
Interferent, a este un fenomen specific undelor care consta n suprapunerea
a 2 sau mai multe unde ntr-o regiune din spat, iul n care se propaga. Acest
fenomen determina valoare intensitat, ii luminoase n acel punct dar cea mai
interesanta manifestare se obt, ine n cazul n care undele care se compun au
aceeas, i frecvent, a (lungime de unda) (unde monocromatice) s, i sunt coerente
(adica este o diferent, a de faza constanta ntre ele). Fenomenul de interferent, a
n acest caz este numit interferent, a stat, ionara. n acest ultim caz ntr-un punct
din spat, iu se poate obt, ine prin interferent, a stat, ionara o intensitate luminoasa
mai mare sau chiar se poate obt, ine o valoare minima (la limita zero).
n

Figura 4.6: Interferent, a undelor stat, ionare

Figura 4.7: Interferent, a

n dispozitivul Young.

4.3.2

figura 4.6 sunt ilustrate doua cazuri de interferent, a limita a 2 unde stat, ionare
A s, i B ntre care exista o diferent, a de faza ce duce la cres, terea intensitat, ii
(interferent, a constructiva) sau la scaderea intensitat, ii (interferent, a destructiva).
Pentru a ne asigura ca radiat, iile care interfera au o diferent, a de faza constanta
ntre ele se utilizeaza de obicei o metoda de mpart, ire a fasciculului de lumina
n doua unde care parcurg drumuri optice diferite (altfel spus ele provin din
aceeas, i sursa init, iala dar parcurg drumuri optice diferite). Se obt, in astfel
dispozitive numite interferometre.
Un astfel de dispozitiv este s, i dispozitivul lui Young care consta n plasarea
n fat, a unui fascicul de unde cuasiparalel a unui material opac n care sau practicat doua fante dreptunghiulare paralele (v. Figura 4.7) Fiecare din
fantele respective pot fi considerate a fi noi surse de unde luminoase iar n
spat, iul de dupa ele se va forma as, a numita figura de interferent, a care poate fi
descrisa ca zone luminoase (cu interferent, a constructiva) alternnd cu zone
ntunecate (cu interferent, a destructiva). Practic n loc sa obt, inem doar doua
imagini luminoase (corespunzatoare celor 2 fante) se obt, in mai multe astfel de
imagini (numarul lor depinde de ct de coerenta s, i monocromatica este radiat, ia
incidenta dar s, i de dimensiunea fantelor fiind cu att mai multe cu ct fantele
sunt mai mici) ca s, i cum lumina are direct, ii preferent, iale de propagare.
Concomitent cu fenomenul de interferent, a apare aici s, i fenomenul de difract, ie.

Difract, ia luminii
Difract, ia este un alt fenomen caracteristic undelor (s, i n particular undelor
luminoase) care consta n ocolirea aparenta a marginilor obstacolelor opace
ntlnite de aceste unde. Altfel spus obiectele opace nu au o umbra net definita

caracterizarea imaginilor obt, inute prin instrumente optice

35

ci apare s, i o zona luminoasa n imediata vecinatate a umbrei care este cu att

mai us, or de observat cu ct dimensiunile obiectelor care produc difract, ia sunt
mai mici (de ordinul lungimii de unda). Fenomenul de difract, ie este studiat n
special n cazul obiectelor de tip fante dreptunghiulare sau circulare. Pentru
ca n microscopie se utilizeaza fante circulare vom studia n cele ce urmeaza
doar difract, ia prin fanta circulara.
Vom considera ca lumina provenita de la o sursa punctuala trece printr-o
diafragma circulara (diafragma poate fi un ochi sau un obiectiv). Imaginea
obt, inuta n urma difract, iei consta ntr-un cu intensitate luminoasa foarte mare
centrat pe imaginea diafragmei circulare nconjurat de cercuri concentrice
luminoase mult mai put, in intense (v.!Figura 4.8).
Profilul 3D de distribut, ie a intensitat, ii luminoase se numes, te Discul lui
Airy (sau point spread function, PSF funct, ia de mpras, tiere a unui punct).
Dimensiunea discurilor Airy determina dimensiunea punctelor fizice de pe
imaginile formate ntr-un sistem optic (n particular printr-un microscop).
Aceasta marime determina rezolut, ia optica a sistemului optic.

4.3.3

Rezolut, ia
Figura 4.8: Difract, ia printro diafragma circulara.

Cum rezolut, ia optica este capacitatea unui sistem optic de a distinge 2

puncte luminoase ca fiind separate atunci cu ct discurile Airy a doua puncte
luminoase nvecinate sunt mai mici cu att rezolut, ia spat, iala este mai buna.
Daca discurile Airy sunt mari cele doua puncte luminoase nu se vad separat
n timp ce daca discurile Airy sunt mici cele doua puncte luminoase se vad
separat (v. Figura 4.9).

Figura 4.9: Legatura dintre discul Airy s, i

rezolut, ia optica.

Aperturanumeric(N.A.)
Cres, terea rezolut, iei unui sistem optic este legata direct de modul n care
reus, im sa obt, inem un disc Airy mai mic. Acest lucru se poate face prin utilizarea unui obiectiv cu apertura numerica mare sau cu marire mare. Apertura
numerica este legata de modul n care se poate face focalizarea radiat, iei optice
printr-un sistem convergent (v. Figura 4.10).

A = 2

Conul de lumin

N.A.= n x
n = indi

(4.2)

NA = n sin

unde NA=apertura numerica (din engl. Numerical Aperture) n indicele de

refract, ie a mediului prin care se propaga radiat, ia s, i este jumatatea unghiului

Figura 4.10: Apertura numerica a unui

obiectiv.

21

36

tehnici microscopice utilizate n criminalistic a

de deschidere data de focalizarea radiat, iei la nivelul obiectivului.

Gasim

Figura 4.11: Legatura dintre discul Airy s, i apertura numerica.

as, adar s, i o legatura ntre rezolut, ia optica, discul Airy s, i Apertura numerica
(v. Figura 4.11): NA=mica, discuri Airy mari s, i implicit rezolut, ie optica mica
iar pentru NA=mare discurile Airy sunt mici s, i rezolut, ia optica mare.
O alta marime care intervine n caracterizarea imaginilor prin instrumente
optice este s, i rezolut, ia spat, iala. Aceasta marime este determinata de criteriul
lui Rayleigh: doua puncte luminoase se considera distincte daca:
Discul Airy a primului punct luminos se suprapune peste primul ordin de
difract, ie al celui de al doilea punct luminos (determinat de primul cerc
luminos al discului Airy);
Cele 2 puncte luminoase se considera la o distant, a d egala cu raza discului
Airy.
Criteriul (limita) Rayleigh este utilizat pentru a defini cel mai bine puterea de
rezolut, ie (sau puterea separatoare) a unui obiectiv.
Definit, ie 4.1. Puterea de separare (de rezolut, ie) caracterizeaza capacitatea
unui instrument optic sau a unui material fotosensibil de a forma imagini
distincte s, i clare pentru 2 puncte foarte apropiate ale obiectului.
Puterea de rezolut, ie a unui obiectiv este strns legata de sistemul format
din obiectiv s, i condensor (prin care este focalizata lumina pe obiectiv). Cele
doua elemente din microscop sunt caracterizate fiecare de apertura numerica
notate NA obiectiv respectiv NA condensor . Se disting as, adar 2 cazuri:
NA condensor > NA obiectiv de unde se calculeaza distant, a minima n
mum:
0, 61
(4.3)
d=
NA obiectiv
cu 0,61 un factor ce depinde de geometria de cercuri.
iar pentru NA condensor NA obiectiv
(4.4)

d=

1, 22
NA obiectiv + NA condensor

Formulele de mai sus se utilizeaza pentru calculul distant, ei separatorii d ce

determina puterea de rezolut, ie a sistemului optic (v. Figura 4.12).

caracterizarea imaginilor obt, inute prin instrumente optice

Figura 4.12: Determinarea rezolut, iei

spat, iale optime pentru sistemul optic format din obiectiv s, i condensor.

OK
4.3.4

Contrast/culoare
Contrastul este numarul de nuane gasite ntr-o imagine. O imagine cu
contrast ridicat va avea doar doua nuane, negru s, i alb. Mai multe nuant, e,
contrast mai puin, dar mai multe informaii. Culoarea este, de asemenea,
considerata o forma de contrast (v. Figura 4.13).
Imaginile formate n diferite tipuri de microscoape pot releva diverse
amanunte (sau elimina artefacte) daca se pot obt, ine contraste diferite. Se
utilizeaza mai multe metode de marire a contrastului:
Iluminare n cmp luminos (Bright Field)
Iluminare n cmp ntunecat (Dark Field)
Intensificarea culorilor
Folosirea filtrelor
Microscopie n lumina polarizata
Contrast de faza
Contrast interferent, ial
Microscopie de fluorescent, a
Iluminare oblica
Prin modificarea temperaturii probei
Microscopie optica de baleiaj ce folosesc lasere
O parte din aceste metode vor fi descrie n cele ce urmeaza.
Iluminare n cmp luminos se obt, ine o imagine ntunecata pe un fond luminos
contrastul n es, antion fiind cauzat de diferent, a de absorbant, a a componentelor
luminii transmisa prin zonele de densitat, i optice diferite ale probei. Caracteristici:

Prea aproape!

37

Contrastul este numrul de nuane gsite ntr-o imagine.

O imagine cu contrast ridicat va avea doar dou nuane, negru i
alb.
Mai tehnici
multe nuante,
contrast
mai n
puin,
dar maiamulte informaii.
38
microscopice
utilizate
criminalistic
Culoarea este, de asemenea, considerat o form de contrast.

Iluminare Contrast
n cmp
luminos
datorat absorbiei luminii
(Bright Field)

Figura 4.13: Contrastul/culoarea.

Performane

Contrast datorat difraciei luminii

faz) de microscopie optic i prin
Microscopia n cmp luminos este(contrast
o tehnicde
standard
urmare mrirea este limitat de puterea de rezoluie posibil, dependent de
lungimea de und a componentelor luminii vizibile.
Contrast datorat interferenei luminii
Cu ct lungime de und este mai
mic cu
att rezoluia este mai mare!
(contrast
interferenial)

Contrast sczut n cazul probelor care au aceeai absorban pentru toate

componentele acesteia.
cmp luminos

lumin polarizat cmp ntunecat contrast de faz

Figura 4.14: Compararea tehnicilor de

iluminare prin transmisie utilizate pentru a
genera contrast ntr-un es, antion de hrtie.

Compararea tehnicilor de iluminare prin transmisie utilizate pentru a genera contrast ntr-un
4
eantion de hrtie

iluminarea probei este prin transmisie (proba este iluminata de jos s, i observata de sus sau invers n cazul microscopului optic inversat);
are mai multe lentile obiectiv;
sistem optic (microscop) parfocal ramne aproximativ focalizat atunci
cnd este schimbata marirea (cnd obiectivele sunt schimbate ntre ele);
marirea totala este produsul de mariri a lentilelor ocular s, i lentilelor obiectiv.
Avantajul metodei: nu necesita componente suplimentare, fat, a de configurarea
unui microscop optic obis, nuit! Microscopia n cmp luminos este o tehnica
standard de microscopie optica s, i prin urmare marirea este limitata de puterea
de rezolut, ie posibila, dependenta de lungimea de unda a componentelor luminii
vizibile. Cu ct lungime de unda este mai mica cu att rezoluia este mai mare!
Contrast scazut n cazul probelor care au aceeas, i absorbant, a pentru toate
componentele radiat, iei de iluminare.
Pentru a cres, te contrastul n cazul cmpului luminos s ncearca mbunatat, irea
imaginii prin:
Mics, orarea/marirea intensitat, ii luminii, prin intermediul diafragmei iris.
Observarea probelor folosind tehnica n imersie, folosind obiective de
imersie n apa sau ulei s, i respectiv apa/uleiuri de imersie adecvate cu
pretent, iile analizei. Daca uleiul de imersie are indicele de refract, ie egal cu
cel al lamelei ce acopera proba se va mbunatat, i rezoluia!
Utilizarea de metode de colorare a probelor;
Utilizarea filtrelor de culoare (de obicei albastru);
Utilizarea filtrelor de polarizare a luminii pentru a evidenia caracteristici
care nu sunt vizibile n lumina alba.
Iluminarea n cmp ntunecat se realizeaza realizat prin iluminarea probei cu
raze de lumina care nu vor fi colectate de lentila obiectiv s, i prin urmare nu vor
face parte din imagine. Are aspectul clasic al unui ntuneric fundal aproape

caracterizarea imaginilor obt, inute prin instrumente optice

negru, cu obiecte luminoase. Un disc special blocheaza razele, provenite de la

sursa de iluminare pe direct, ia axei optice a microscopului, permit, nd trecerea
luminii numai printr-un inel exterior. Lentila condensor concentreaza lumina
spre proba. Lumina intra n eantion, cele mai multe raze sunt transmise
direct, n timp ce unele sunt mpras, tiate de eantion. Lumina mpras, tiata
(difuza) intra n lentila obiectiv, n timp ce lumina transmisa direct nu este
colectata. Numai lumina difuza (undele difractate de ordinul nti s, i cele de
ordin superior) participa la formarea imaginii, n timp ce lumina transmisa
direct (undele difractate de ordinul zero) lipsesc.
Pentru a se asigura ca razele care provin de la condensor cad ct mai oblic
posibil pe proba, trebuie sa se ridice condensorul ct mai sus sub proba s, i
diafragma obiectiv sa fie deschisa la capacitate maxima. Astfel se lucreaza n
imersie cu apa sau ulei ntre condensor s, i lamela de sticla ce acopera proba.
Datorita refract, iei, la trecerea din lamela razele de lumina vor fi deviate la
unghiuri mai mari dect cele de incident, a , daca lamela are indicele de refract, ie
mai mare dect cel al apei/uleiului. Apa este folosita pentru mai mult confort
iar imersia n ulei este folosita pentru o rezolut, ie mai buna.
Iluminare
cmp
ntunecat
(Dark
Microscopia nn
camp
ntunecat
este cea mai
potrivitaField)
pentru contururi
revelatoare s, i margini (limitate de obiecte). Este mai puin utila pentru detalii
Microscopia in camp intunecat este cea mai potrivit pentru contururi
revelatoare
din
celule,decu
excepia
cazului
n care
exista o mult, ime
revelatoare interne
i margini
(limitate
obiecte).
Este
mai puin
util pentru
revelatoare
din ntr-un
celule, cu
excepia
cazului
n care exist
dedetalii
organite
foarte interne
refractile
citosol
relativ
transparent.
Cuoct razele
mulime de organite foarte refractile ntr-un citosol relativ transparent.
deCulumin
a cad mai oblic pe proba cu att este mai us, or uor
detectarea
prezent, ei
ct razele de lumin cad mai oblic pe prob cu att mai
este de
obiectelor
foarte mici.
a detecta prezena
obiectelor foarte mici.

Figura 4.15: Comparat, ie iluminare n cmp

ntunecat s, i n cmp luminos.

Figura 4.16: Detalii obt, inute n cmp

ntunecat.

cmp luminos

cmp ntunecat
11

39

caracterizarea imaginilor obt, inute prin instrumente optice

41

Glosar

Analizor, 29
Apertura
numerica, 35
Aproximat, ia
paraxiala, 15
Birefringent, a , 30
Cmp
ntunecat, 38
luminos, 37
Contrast, 37
definit, ie, 11
Convergent, a , 19
Criteriul
Rayleigh, 36
Difract, ia
luminii, 34
Dioptru, 14
Discul Airy, 35
Distant, a
focala, 15
Drum
optic, 13

Indice
de refract, ie, 13
Interferent, a
constructiva, 34
destructiva, 34
Interferent, a, 34
interval
optic, 21
Legea
absorbt, iei, 32
Lambert-Beer, 32
Lentile
concave, 15
convexe, 15
definit, ie, 15
Lungime
de unda, 13
Lupa, 20

Fascicul
de lumina, 12
Filtru
selectiv, 32
Focar
imagine, 15, 18
obiect, 15, 18
Formarea
imaginilor, 33

Mrire
liniara, 19
Marire
liniara, 18
Microscop
drept, 27
electronic, 8
inversat, 28
optic, 8, 20
stereoscopic, 28
Microscopie
definit, ie, 8
Microscopul
cu lumina polarizata, 28
de comparat, ie, 28

Grosisment, 19
microscop, 21

Ochi
emetrop, 19

Optica
geometrica, 11
Polarizor, 29
Punct
proxim, 19
Putere
optica, 19
separatoare, 19
separatorie liniara, 19
separatorie unghiulara, 19
Puterea
de rezolut, ie, 36
lupei, 20
microscop, 21
Raza
de lumina, 12
Reflexia, 31, 33
luminii, 14
Refract, ia, 31, 33
luminii, 14
Rezolut, ia
spat, iala, 36
Spat, iul
imagine, 11
obiect, 11
Stigmatism, 17
Teoria
Abbe, 33
Unde
coerente, 34
Viteza
luminii, 13