Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Introducere
1.1 Scurt istoric al studiilor asupra apoptozei
Moartea celular este un element necesar n decursul vieii unui
organism multicelular, ndeplinind numeroase funcii.
Prima descriere a apoptozei n decursul dezvoltrii embrionare a fost
realizat de Vogt1 n 1842, iar primul studiu integrativ care a propus
conceptul de apoptoz a fost realizat de ctre Kerr2 n 1972, care a
observat recurena fenomenului n timpul proliferrii celulare sau n situaii
patologice.
Numeroi cercettori au propus termeni diferii pentru a descrie
fenomenul, cum ar fi anoikis, degenerare, autoliz, cromatoliz, sinucidere
celular (vezi Majno i Jolis, 1995)3, fapt care se datoreaz modelelor
diferite de cercetare.
Dac nainte de precizarea terminologic termenul de necroz era
utilizat ca un termen general pentru a descrie toate tipurile de moarte
celular, astzi el este folosit cu un coninut limitat la dezintegrarea pasiv a
celulei, diferit de distrugerea voluntar, programat a acesteia. Pe parcursul
acestei lucrri voi folosi termenul de moarte celular programat (MCP)
ca fiind similar celui de apoptoz.
Analiza in vivo diferitelor tipuri de moarte celular non-necrotic a
artat existena unor trsturi comune, indiferent de originea celulei sau
stimulul utilizat.
Cu toate acestea, studiile in vitro au evideniat diferene n expresia
proceselor sau inexistena unor trsturi tipice n anumite cazuri. De pild,
cationice,
degradarea
fosfolipidelor
creterea
calciului
intracitoplasmatic. 4
Are loc prin urmare dilatarea reticulului endoplasmatic, degradarea
membranelor mitocondriale i modificarea activitii translaionale.
10
13
care e activat de
1.4.6 Nucleul
Trstura iniial o constituie condensarea periferica a cromatinei, iar
ulterior apare fragmentarea nucleului i dezintegrarea sa datorit degradrii
ADN i a proteinelor nucleare. 16
Caspazele 3 i 6 atac proteinele nucleare, cum ar fi lamine, proteinele
scaffold, si DFF 45 ( Inhibitor DNA fragmentating factor/ ICAD).
Nucleul este distrus i integrat n corpii apoptotici; un alt factor
implicat n apoptoz, AIF, declaaz apoptoza independent de caspaze i
determin condensarea parial a cromatinei.
10
17
11
Faza iniiatoare
Cuplarea liganzilor la receptori, alterarea semnalizrii prosupravieuire
din partea celulelor vecine sau incapacitatea reparrii ADN duc la declanare
apoptozei.1 Pentru un organism unicelular singura ans de a supravieui este
reapararea ADN lezat. La pluricelulare strategia este mai complex,
implicnd blocarea ciclului celular sau a creterii i apoptoza.
n cazul reparrii ADN celula trebuie s decid dac materialul
genetic a fost corect reparat sau nu. Dac nu, are loc blocarea ciclului celular
pn la repararea ADN, sau se declanaz distrugerea prin apoptoz sau
moarte replicativ.2
12
Transducia
mesajului
apoptotic
prin
intermediul
mesagerilor
(ceramid, DAG, IP3, kinaze) duce la activarea genelor apoptotice, mai ales a
celor bcl 2 sau ice.
Odat declanat, procesul este ireversibil. 3
III. Faza de execuie
Enzimele de tipul caspazelor sau factorii de genul AIF au rolul de a
degrada n mod direct organitele sau de a activa alte molecule cu rol efector.
Activarea endonucleazelor duce la degradarea ADN.4
fagocitoz
un
rol
fundamental
au
trombospondina,
fosfatidilserina i NANA. 5
3. Elemente implicate in apoptoza
3.1 Receptorii apoptotici
Atunci cnd celulele sunt lipsite de semnale extracelulare de
supravieuire, se declanaz apoptoza. Aceste semnale sunt produse de celule
identice (tip autocrin) sau diferite (tip paracrin).
Adesea apoptoza poate fi indus de ctre molecule efectoare exprimate
pe surafaa altor celule (NK) sau prin intermediul unor citokine.
13
16
17
3.2 Bcl 2
Este primul reglator mamalian care permite supravieuirea celulelor
hematopoietice citokin-dependente, n absena citokinei 1, in etapa Go insa .
18
19
recent c Bcl XL
se leag de poriunea
20
21
2.
3.
potenialului
transmembranar
se
realizeaz
prin
24
nu au capacitate enzimatic,
clivarea
1,2
, caspaz existent la
aminoterminal cu rol reglator, o subunitate mare (20 KDa) i una mic (10
KDa), iar activitatea implic procesri proteolitice ntre domenii, urmat de
ansamblarea subunitilor ntr-un heterodimer.
Prin cuplarea a doi dimeri rezult un tetramer cu dou situsuri active,
cu funcionare independent. 3
Domeniul aminoterminal, cu o dimensiune variabil, este implicat n
reglare, iar activare presupune recunoaterea a cel puin patru aminoacizi la
nivelul situsului de clivare, ceea ce este suficient.
Motivul de recunoatere prezint o diversitate la nivelul diferitelor
caspaze, ceea ce explic probabil diversitatea funciilor. 4
Cu toate acestea, nu toate proteinele ce conin secvena de patru
aminoacizi sunt clivate, ceea ce constituie un argument pentru importana
structurilor tertiare i cuaternare.
Clivarea proteolitic nu numai c este specific, dar este i eficient
( kcat / Km > 106 M-1 S-1). Specificitatea extraordinar a caspazelor implic
faptul c proteoliza este extrem de selectiv, iar trsturile fundamentale ale
apoptozei (fragmentarea ADN, condensarea cromatinei, formarea corpilor
apoptotici) nu pot fi nelese fr o aprofundare a mecanismelor de
funcionare a caspazelor. Prima funcie a caspazelor este aceea de a inactiva
proteinele care protejaz celulele vii de apoptoz. n timpul apoptozei, I CAD
este inactivat de ctre caspaze, elibernd CAD 5. Pe de alt parte, CAD
eliberat n absena inhibitorului nu este funcional, ceea ce argumenteaz n
favoarea unor modificri cotranslaionale CAD - ICAD. 6
26
7,8
le
lipsesc
fragmentele
cu
funcie
catalitic. Aceste
proteine
29
30
33
4.
NF-kB si apoptoza 1
aciunea lui TNFR 1 prin legarea la TRAFs i TRADD i induce sinteza NFKB.
7. MODIFICARI NUCLEARE IN APOPTOZA
Dinamica nuclear este de obicei caracterizat ca fiind dominat de
condensarea periferic a cromatinei, fragmentarea ADN i formarea unor
corpi apoptotici care nglobeaz fragmente nucleare.
Cu toate acestea, apoptoza citoplasmatic decurge normal i n
celulele care au mutaii n genele implicate n dezintegrarea nucleului i n
cele anucleate.
n 1994 Schulze-Osthoff
34
TRASATURI STRUCTURALE
a) relatia condensare-apoptoza
S-a discutat mult timp despre relatia dintre condensarea cromatinei si
fragmentarea ADN. Prima etap observabil este condensarea cromatinei la
nivelul membranei celulare, ipotez sugerat de inelul dens ce apare n
microscopia electronic2, condensare care cuprinde ntreg nucleul, ulterior
acesta dezintegrndu-se i fiind nglobat n corpii apoptotici.
Caspazele 3 i 6 sunt implicate n activarea DFF 40 (CAD), clivarea
PARP, laminelor i a factorilor de ataare la structuri scaffold. 3
Clivarea laminelor are loc n urma activrii caspazei 6, iar mutanii cu
lamine neclivabile A i B prezint o ntrziere apreciabil n ceea ce privete
fragmentarea nuclear. Alte studii insa au demonstrat faptul ca unele celule
incubate cu proteinaza K prezint o clivare a laminei B, lucru care nu este
suficient totusi pentru a declana condensarea nuclear.
Ipoteza sugerata de alte studii este aceea c modificrile structurale
nucleare nu necesit digestia proteinelor structurale, ultimul proces doar
acompaniind evenimentul apoptotic, i c aceste schimbri se datoreaz unor
factori apoptotici nucleari activai prin caspaze (exceptnd AIF). 4
Dupa asemenea studii clivarea caspazic nu este necesar n
condensarea primar ns este esenial n separarea final a nucleului.
35
dei n faza iniial are loc o accelerare a replicrii ADN, ulterior acumularea
p 53 induce apoptoza. Acest proces este inhibat de ctre E1B 19 K care este
similar cu Bcl 2 i care probabil interacioneaz cu lamina nuclear.
36
CIDE N SI CIDE B
La vertebrate au fost descoperite dou noi familii de gene, Cide N i CIDE B
7
38
39
tipuri de situsuri senzitive sunt n aceleai regiuni, ocurena lor fiind de 177
180 pb. 3
Introducerea unor situsuri abazice n regiunea linker constituie o etap
intermediar n degradarea ADN, ceea ce sugereaza ipoteza ca clivarea
internucleozomal nu este universal.
Situsurile S1 hipersenzitive sunt asociate cu modificri n conformaia
ADN prin tranziii B Z, ceea ce produce afectarea torsiunii ADN i
modificri helicale, datorit introducerii unor repetiii de purine i guanidine
identice. Asemenea situsuri pot explica dispariia H1 n apoptoz. 4
d) ICAD
Au fost identificate pn acum dou forme de ICAD, L i S, care
difer prin lungime (331 respectiv 269 aminoacizi), si care sunt traduse de
pe dou ARNm diferite, produse prin splicing alternativ. 5
ICAD L este necesar pentru producerea unui CAD funcional, nu S
insa, facilitndu-i plierea corect. Probabil c ICAD S funcioneaz ca un
factor de reglare negativ a funciei chapperone a ICAD L, sau probabil c
ICAD L este translat preferenial n celule ce vor intra n apoptoz.
Liniile celulare din timocite DFF 45 deficiente sunt rezistente la
fragmentarea ADN n urma tratamentului cu dexametazon i au trsturi
distincte fa de tipul slbatic.
Au fost identificai mai muli factori cu funcie n apoptoza nuclear.
e) Acinus 6 este un precursor al unui factor de condensare nuclear,
clivarea lui la Asp 1093 de ctre caspaza 3 fiind un pas necesar dar
40
14