Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Tehnici de Separare Și Concetrare in Biotehnologii
Tehnici de Separare Și Concetrare in Biotehnologii
PENICILINEI G (BENZILPENICILINEI)
Penicilina G (benzilpenicilina) face parte din clasa antibioticelor, acestea fiind substan e
chimice organice produse de microorganisme care n cantiti foarte mici inhib dezvoltarea
microorganismelor patogene.
Cnd a descoperit Fleming penicilina, acesta a observat inhibarea creterii bacteriilor n
jurul unei culturi de mucegai, concluzionnd c mucegaiul eman o substan care omoar
bacterii i le inhib creterea n zon. A crescut o cultur pur i a descoperit c era mucegaiul
Penicillium, fiind cunoscut astzi ca Penicillium Notatum. ns chiar de la nceputul
cercetrilor penicilina era cel mai eficient medicament mpotriva bacteriilor gram-pozitive.
Dezvoltarea mucegaiului se realizeaz pe un mediu de cultur ct mai pur posibil ce are n
compoziia sa urmtorii constituieni:
-
extract de porumb, lactoz, glucoz, fin de soia, fenilacetamin, tiosulfat de sodiu, ap,
N H 4 N O 3 ,C aC O3 , K H 2 PO 4 , N a2 SO4, Z n S O4 , M n S O4 .
Este o substan cristalin, cu punct de topire 80C, solubil n ap i solventi organici, avnd
trei atomi de carbon asimetrici (C3, C5, C7). Produsul este utilizat sub forma de sruri de
sodium (Na) sau potasiu (K), fiind active bacteriostatic i bactericid fa de bacilli i coci
gram-pozitivi.
Desi este primul antibiotic introdus n terapeutic, pstreaz i astzi, cu toate progresele
antibioterapiei, o importan deosebit. Caracteristicile care confer Penicilinei G un loc
aparte ntre antibiotice sunt urmtoarele: aciune bactericid, spectru ngust, cuprinznd
2
germenii ntlnii n infeciile curente, toxicitate redus, permind administrarea unor doze
foarte mari.
Rezistena la penicilin se produce prin selecionarea unor mutan i care inactiveaz
antibioticul secretnd o enzim - penicilinaz - care desface inelul responsabil de activitatea
antimicrobian. Rezistena la penicilin se instaleaz lent, este foarte frecvent pentru
stafilococ i foarte rar -practic absent - n cazul streptococului i al treponemei. Apariia
rezistenei este favorizat de dozele sczute de antibiotic i este de obicei ncruciat ntre
diferite peniciline.
C aC O 3 , N H 4 N O3 ,N a2 SO4, K H 2 P O4 ,
Z n S O4 , M n S O4 , lactoz,
glucoz.
Mediul preparat astfel este sterilizat n instalaia de sterilizare cu menintor i coloan, prin
nclzire cu abur direct la 124-126C i meninere la aceast temperatur timp de 10-12
minute. n continuare, mediul este rcit la 60-65C i trimis cu aceast temperatur n
fermentatorul de regim, unde se va rci n continuare pn la 27C.
Fermentaia biochimic
Fermentaia biochimic este etapa urmtoare n fluxul tehnologic i fundamental a
procesului de biosintez i se realizeaz n trei trepte inoculator, intermediar i regim- care
corespund anumitor stadii de dezvoltare a microorganismelor. Astfel c:
-
glucoza este asimilat foarte rapid att pentru formarea materialului celular ct i pentru
furnizarea energiei necesare;
cerinele de oxigen sunt maxime n aceast perioad, iar activitatea respiratorie, degajat
prin eliberare de bioxid de carbon, este ridicat.
Faza de producere se caracterizeaz prin ncetinirea creterii nivelului, scderea consumului
aici lactoza este folosit lent de miceliu i furnizeaz energia necesar proceselor de
biosintez sau pentru formarea constituienilor celulari.
Faza autolitic corespunde stadiului n care microorganismul se epuizeaz ca urmare a
activitii metabolice prelungite, iar sursele de carbon din mediu sunt consumate.
-
Cum viteza de utilizare a hidrailor de carbon se nscrie n ordinea glucoz > acid lactic >
lactoz, rezult c n faza de cretere a masei celulare se consum glucoz, iar n perioada de
formare a penicilinei se consum lactoz. Prin urmare, mediul de cultur trebuie s asigure
necesarul de glucoz i lactoz pentru desfurarea normal a ntregului proces de biosintez.
Filtrarea soluiilor native
Lichidul de cultur obinut la fermentaie se separ de miceliu pe filtru tambur cu vid.
Soluia rezultat se trece printr-un rcitor tubular unde se rcete pn la 3-5 C i se
depoziteaz n rezervorul de ateptare, unde este trimis la extracie. Rcirea este necesar
pentru reducerea vitezei reaciilor de degradare a benzilpenicilinei.
Separarea i purificarea benzilpenicilinei
Datorit diluiilor foarte mari, separarea benzilpenicilinei se poate face, rentabil, numai prin
extracii repetate cu solveni.
Pentru separarea penicilinei prin extracie lichid-lichid au fost studiai muli solveni
organici, dar conform mai multor cercetri s-a dovedit c cel mai rentabil este acetatul de
butil.
Benzilpenicilina se separ din soluia nativ, prin extracie cu acetat de butil, n 3 stadii,
apoi se purific prin decolorare i cristalizare.
n stadiul I de extracie are loc trecerea penicilinei din soluia nativ n acetatul de butil la
un pH de 2-2,5. Extracia se realizeaz n extractoare centrifugale n contracurent tip
Podbielniak.
n stadiul II de extracie, care se realizeaz n acelai timp de extractor, are loc trecerea
penicilinei din acetat de butil n soluie apoas de fosfat disodic i carbonat de sodiu (1,251,3) raport la pH de 7-7,2.
n stadiul III de extracie , soluia apoas este tratat cu H 2 S O4 4-6% pn la un pH de 2-2,5
apoi se amestec cu acetat de butil n raport de 1:1,3-1,5.
Dup separarea fazelor se obine o soluie de penicilin n acetat de butil cu concetra ia de
60-80 000 UI/mL care se supune procesului de uscare n vederea cristalizrii penicilinelor.
Pentru ndeprtarea apei soluia de acetat de butil se trece ntr-un vas cu serpentin unde se
rcete pn la -10 sau -12C, cnd apa ngheat formeaz cristale fine care se filtreaz pe
druck-filtru. Soluia filtrat se trece peste sulfat de sodiu anhidru pentru desvrirea uscrii
dup care, prin tratare cu soluia alcoolic de acetat de potasiu 30%, cristalizeaz penicilina
potasic. Penicilina cristalizat se filtrez i se spal pe filtru cu butanol pentru ndeprtarea
acetatului de butil i apoi cu cloroform sau eter pentru ndeprtarea butanolului. Uscarea
benzilpenicilinei potasice se face sub un uor vid la 50-60C timp de 4-5 ore.
Penicilina G se separ sub form de sare deoarece sub aceast form este mult mai stabil
dect acidul liber.
Extract de porumb
Lactoz
Glucoz
Fin de soia
Sruri nutritive
Ap
RECEPIE MATERIALE
6
AMBALARE/DEPOZITARE
FERMENTAIE
REEXTRACIE
EXTRACIE
FILTRARE
SPLARE
RCIRE
USCARE143221
STERILIZARE
Miceliu
Filtrat 2121
AERRafinat
UZAT
ABUR
ABUR
AER
Acid fenilacetic
Agent antispumant
Penicillium crysogenum
CRISTALIZARE
Solveni reziduali
Butanol
Legend
- etapele procesului tehnologic pentru obinerea Penicilinei G
- materiale intrate
- materiale ieite
7
- proces biochimic
- proces de separare
- proces de concetrare
- proces de purificate primar
- proces de purificare avansat
obinerea Penicilinei G
Filtrarea solu iilor native
Filtrarea lichidelor de fermentaie care conin mas celular cu caracter fibros (culturi
de fungi din clasa Penicillium ) este o operaie relativ uoar, miceliul necolmatnd materialul
filtrant i desprinzndu-se uor de pe acesta.
La nivel de operare industrial se recomand filtrele rotative cu vid (filtrele Oliver)
deoarece:
8
Extracia i reextracia
Extracia reprezint operaia de separare a componenilor unui amestec lichid sau solid
pe baza diferenei de solubilitate a acestora ntr-unul sau mai muli solveni. Dac amestecul
supus separrii este lichid, operaia este de extracie lichid-lichid, iar pentru solid, extracie
solid-lichid. Atunci cnd procesul are loc prin intermediul operaiilor fizice, extracia este
fizic, iar atunci cnd intervin reacii chimice, extracia este reactiv.
9
solutului)
3.separarea celor dou faze rezultate (extractul-faza solventului care
conine solutul, rafinatul-soluia iniiala epuizat)
3)
2.
carcas
3.
lagre
4.
curea de tranmisie
5.
foaie metalic spiralat
perforat
6.
conducte de distribuie a
fazelor
7.
conduct pentru lichidele de
splare i curare
8.
tuuri de alimentare i
evacuare
11
Uscarea
Uscarea este o opera ie prin care se ndeprteaz umiditatea dintr-un
material cu ajutorul energiei termice. Termenul de uscare se mai utilizeaz i
n cazul ndeprtrii unui component n stare lichid sau de vapori dintr-un
gaz sau dintr-un amestec lichid.
Uscatoarele se pot clasifica n func ie de mai multe criterii:
1) dup regimul de fuc ionare pot fi:
- continue
- discontinue
2) dup presiunea de lucru pot func iona:
- la presiune atmosferic
- la vid
3) dup procedeul de uscare pot fi:
- cu agent termic gazos
- cu nclzirea materialului
4) dup sensul de circula ie a solidului i a gazului pot fi n :
- echicurent,
- contracurent,
- curent mixt
- curent ncruci at
5) din punct de vedere constructive sunt:
-usctoare cu strat fix,
-cu strat mobil,
-cu strat fluidizat,
-cu pulverizare,
13
-de contact
Penicilina G precipitat se filtreaz pe filtrul Nuce i se usuc n usctor
dulap la 35-45C sub vid de 100-225 mmHg, timp de 16-20 ore.
de
15
flux
tehnologic
pentru
ob inerea
Concluzii
n cadrul acestui proiect am constatat c pentru a obine Penicilina G printrun proces biotehnologic este necesar utilizarea anumitor materii prime i
16
BIBLIOGRAFIE
17
18