7.

INSTRUMENTACIN
El Laboratorio Clnico es una herramienta primordial para el rea mdica, ya
que por medio de este se diagnostican diferentes patologas y adems se
realizan estudios para establecer el tipo de tratamiento que se debe administrar
al paciente, al igual que el seguimiento del mismo.
A principios del siglo XX, el mdico recurra, en raras ocasiones, a los
procedimientos del laboratorio para diagnosticar enfermedades; dos de las ms
frecuentes eran la diabetes y la nefritis. Y, en algunas ocasiones, acuda al
farmacutico para hacer las dosificaciones, por simples que stas fueran.
Alrededor de mediados de siglo, fue cuando los mdicos ya tienen ms
contacto con el laboratorio, al tener ms conocimientos tanto de las tcnicas
antiguas como de las nuevas que empiezan a surgir. An, cuando el mdico
sigue atendiendo a sus pacientes y al laboratorio, se ve desbordado por el
surgir de nuevos avances en los procedimientos del laboratorio. Esto y el tener
que atender a sus pacientes, prestndoles menos atencin, conlleva al mdico
a aleccionar a personas de su confianza para encargarse del laboratorio.
stas debern, aparte de encargarse del laboratorio, de renovar los
conocimientos con las nuevas tcnicas que empiezan a surgir; as como, el
funcionamiento y mantenimiento de los aparatos, que hacen que los
procedimientos del laboratorio se hagan con mayor rapidez y precisin.
De todos modos, el mdico sigue interpretando los resultados que les
proporciona el laboratorio. Si el mdico puede precisar el significado de los
anlisis con una mayor exactitud es posible gracias, en mayor o menor medida,
a los datos tanto fisiolgicos como patolgicos ofrecidos por el tcnico del
laboratorio y, estos resultados, conllevan al seguimiento de la enfermedad y de
su posible tratamiento.
Desde distintos puntos de vista, siempre, ha sido necesaria una seleccin. En
lugar de hacer comentarios breves con relacin a todo lo que se dice o hace en
un laboratorio, hemos credo ms importante elegir una serie de definiciones y
estudiarlas ms a fondo.
Finalmente, y para no alargar demasiado el asunto, cuando citamos uno o dos
mtodos para una misma investigacin, no significar que el resto sea de
menor importancia sino que son los que creemos que se dan con mayor
frecuencia en dicha investigacin.
Mobiliario, Materiales e Instrumentos del Laboratorio.
Muebles de un Laboratorio Bsico

Mesa: Su parte superior debe ser fcil de lavar y limpiar por si fuera manchada
o contaminada por productos sospechosos.
Taburete o Silla Regulable: Adaptable a las circunstancias variables del
trabajo.
Vitrina: Con su llave, para conservar los productos.
Armario: Conservar y clasificar las preparaciones, documentos, objetos
frgiles, etc.
Divn o Mesa de Reconocimiento: Necesaria para practicar, en buenas
condiciones, extracciones y punciones.
De forma general, tanto para muebles como el suelo o las paredes,
suprimiremos todo adorno y objeto intil.
Material de Uso en el Laboratorio
Dentro del laboratorio, podemos encontrar distintos tipos de materiales:
Material de Vidrio: ste se caracteriza por tener una resistencia qumica alta
frente al agua, cidos y bases. Pero, todos los vidrios pueden utilizarse en el
laboratorio? No, slo aquellos que estn caracterizados por su resistencia
qumica, mecnica (se puede realizar fuerza sobre ellos) y trmica (aguantan
cambios de temperatura). Dichos materiales no pueden someterse ni a
cambios bruscos de temperaturas ni de presin.

Material de Plstico: Se caracteriza por ser resistente a la rotura pero, el

inconveniente es que, pueden ser atacados por disolventes orgnicos, cidos
y bases fuertes. Tenemos dos tipos: 1) Uso mltiple: Probetas, matraces, etc.
2) Mono uso: Pipetas Pasteur, placas de Petri, etc.

Material de Porcelana: Este tipo de material es poco usado en los

laboratorios, a excepcin de cuando tengan que soportar altas temperaturas. El
material de porcelana que se usa en el laboratorio es el que est vidriado en el
centro, lo cual hace que las partculas no se adhieran a sus paredes.
Adems, encontramos que el material puede ser fungible (se puede reponer
fcilmente por tener un bajo coste: guantes, portaobjetos, pipetas, etc) e
inventariable (no se repone fcilmente, al tener un elevado coste: centrfuga,
estufa, etc).

Utensilios Bsicos de Laboratorio

Dentro de esta clasificacin, podemos encontrar los siguientes utensilios

bsicos:
Vaso de Precipitado: Un vaso de precipitados o vaso de precipitado es un
recipiente cilndrico de vidrio fino que se utiliza muy comnmente en el
laboratorio, sobre todo, para preparar o calentar sustancias y traspasar
lquidos. Son cilndricos con un fondo plano; se les encuentra de varias
capacidades, desde 1 ml hasta de varios litros. Normalmente son de vidrio o de
goma aqullos cuyo objetivo es contener gases o lquidos. Tienen
componentes de tefln u otros materiales resistentes a la corrosin.
Suelen estar graduados, pero esta graduacin es inexacta por la misma
naturaleza del artefacto; su forma regular facilita que pequeas variaciones en
la temperatura o incluso en el vertido pasen desapercibidas en la graduacin.
Es recomendable no utilizarlo para medir volmenes de sustancias, ya que es
un material que se somete a cambios bruscos de temperatura, lo que lo
descalibra y en consecuencia nos entrega una medida errnea de la sustancia.
Matraz Erlenmeyer: Consiste en un frasco de vidrio transparente de forma
cnica, de base ancha y alargada, cuello muy estrecho, con una abertura en el
extremo estrecho, generalmente prolongado con un cuello cilndrico. Se los
encuentra de diversas capacidades, colores y con algunas variaciones. Suelen
incluir unas pocas marcas para saber aproximadamente el volumen contenido.
Fue creado en el ao 1861 por el qumico Richard August Carl Emil Erlenmeyer
(1825-1909)
Embudos: Los embudos de laboratorio son embudos que forman parte del
equipamiento de laboratorio qumico. Su diseo ha sido modificado para
adaptarse a la funcionalidad concreta que desempean.
Hay muchos tipos diferentes de embudos que han sido adaptados para estas
aplicaciones especializadas:
Embudos planos, de diseo normal para operaciones bsicas.
Existen en varias dimensiones, con el cuello ms largo o ms corto.
Embudo de filtracin, de forma cnica y generalmente fabricados en vidrio.
Los modelos para filtrado en fro poseen un tubo de salida, pero los modelos
para filtracin en caliente estn hechos de vidrio pyrex y no poseen tubo de
salida.
Embudo Bchner, est fabricado en porcelana e incluyen una placa de vidrio
sinterizado o una base de porcelana perforada.
Estos se utilizan en la filtracin a baja presin con un matraz de Bchner o
kitasato, conectados a una bomba de vaco.

 Tubo de seguridad (en forma de flor de cardo), usado habitualmente para

aadir lquidos a un aparato o montaje de laboratorio.
Embudo de adicin o de goteo, que tiene una llave que permiten que el
lquido sea aadido a un frasco lentamente. Son cilndricos, frecuentemente
estn graduados y poseen en su base una junta de vidrio esmerilado estndar.
A menudo se suministra con un tubo paralelo estrecho que conecta las partes
superior e inferior, para igualar la presin.
Embudo de polvo, con un cuello ancho y corto, es ms apropiado para las
materias slidas, ya que no se obstruyen fcilmente.
Embudo de decantacin, en forma de pera, tienen un tapn en la boca
superior y un cuello corto, con una llave de paso para el vertido controlado de
lquidos. Estos se utilizan para decantar dos fluidos inmiscibles. Pueden estar
graduados, aunque esto no es muy comn. Se utilizan en la extraccin lquidolquido.
Embudo Hirsch, su forma es similar a la de los embudos normales, pero
contienen agujeros de vidrio sinterizado en la base para que las filtraciones
sean ms rpidas.
Embudo de filtracin en caliente, es un embudo menos frecuente, posee una
camisa exterior, y est rodeado de un fluido que se calienta.
Tubos de Ensayo: es el principal material que conlleva la preparacin de
soluciones o la toma de muestras que luego seran depositadas en este.

Frascos Lavadores: o tambin llamados picetas, Son recipientes de plstico

que se llenan generalmente con agua destilada.
Se les emplea fcilmente para enjuagar materiales previamente lavados,
completar volmenes de lquidos y lavar precipitados., para pasar estos del
papel de filtro a un vaso de precipitado o para efectuar lavados que precisen
hacerse con agua destilada.

Gradillas: Una gradilla es

una herramienta que forma
parte
del
material
de
laboratorio (qumica) y es
utilizada para sostener y
almacenar gran cantidad
de tubos de ensayo, de todos los dimetros y formas.
La gradilla es utilizada ms comnmente en laboratorios clnicos.
Su principal funcin es facilitar el manejo de los tubos de ensayo.
Normalmente es utilizado para sostener y almacenar este material. Este se
encuentra hecho de madera, plstico o metal; pero las ms comunes son las
de madera.
Tipos de Gradillas:

Gradillas rectangulares
Gradillas redondas
Gradillas varias
Gradillas en forma de "Z".

Varillas de Vidrio o Agitadores: Estn hechos de vidrio y se utilizan para

agitar o mover sustancias, es decir, facilitan la homogenizacin.

Material Especfico de Laboratorio:

Dentro del material especfico de laboratorio podemos encontrar los siguientes:

Porta Objetos: es una fina placa de cristal sobre el cual se disponen objetos
para su examen microscpico. Sus dimensiones tpicas son de 75 mm x 25
mm. El objeto a observar suele disponerse sobre este artefacto para despus
situarse en el microscopio y ser observado. En ocasiones puede cubrirse la
muestra con un cubreobjetos, una hoja de cristal ms fina y pequea.

Cubre Objetos: Un cubreobjetos es una fina hoja de material transparente de

planta cuadrada (normalmente 20mm x 20mm) o rectangular (de 20 mm x 40
mm habitualmente). Se coloca sobre un objeto que va a ser observado bajo
microscopio, el cual se suele encontrar sobre un portaobjetos. Sirve para: cubrir
los objetos que estn en el portaobjetos que a su vez est en un objeto llamado
microscopio o 'microscopius' en latn.

Placa de Petri: La placa de Petri, o cpsula de Petri, es un recipiente redondo,

de cristal o plstico, con una cubierta de la misma forma que la placa, pero algo
ms grande de dimetro, para que se pueda colocar encima y cerrar el
recipiente, aunque no de forma hermtica. Es parte de la coleccin conocida
como material de vidrio. Tiene uso de microbiologa.
Fue construida en el ao de1877 por el bacterilogo alemn Julius Richard
Petri cuando trabajaba como ayudante de Robert Koch, el premio Nobel
descubridor del bacilo de la tuberculosis.
Se utiliza en los laboratorios principalmente para el cultivo de bacterias, mohos
y otros microorganismos, solindose cubrir el fondo con distintos medios de
cultivo (por ejemplo agar) segn el microorganismo que se quiera cultivar.
Si se quieren observar colonias, durante el tiempo de incubacin del
microorganismo sembrado en la placa esta se mantiene boca abajo, es decir,

apoyada sobre la tapa. De este modo, el agar queda en la parte superior y al

condensarse el vapor de agua que generan los microorganismos por su
metabolismo, cae sobre la tapa, evitando que los microorganismos se diluyan,
mantenindose fijo al
sustrato.

Pipetas de VSG: Pipetas fabricadas en poliestireno con un comportamiento

equivalente al vidrio.
El sistema de CIERRE-CERO permite el llenado de la pipeta impidiendo que la
sangre supere el punto cero y evitando el vaciado total o parcial. Al quedar
automticamente sellado se convierte en un artculo de un solo uso.
Son pipetas para la determinacin de la velocidad de sedimentacin globular
(V.S.G) Mtodo de Westergreen.

Capilares: Sirven para tomar pequeas muestras de fluidos en el laboratorio.

Los capilares con heparina u otro anticoagulante, su aplicacin es tomar sangre
y una vez sellados, introducirlos a la centrfuga para microhematocrito para
determinar la cantidad de eritrocitos en sangre total.
Los que no tienen anticoagulante, sirven para medir el tiempo de coagulacin.

Cristalizador:
consiste en un
recipiente
de
vidrio de base
ancha y poca estatura. Su objetivo principal es cristalizar el soluto de una
solucin, por evaporacin del solvente. Tambin tiene otros usos, como tapa,
como contenedor, etc. El objetivo de la forma es que tenga una base ancha
para permitir una mayor evaporacin de sustancias. Tambin puede ser
utilizado para conservar, guardar insectos, hojas de rboles, etc. que tiene el
volumen de un 3.85 cm cbicos nada se puede ver en un microscopio al ver
estos podrs ver por medio de un cristal lo que t necesitas.

Asa de Siembra: es un instrumento de laboratorio tipo pinza que consta de

una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio y un filamento que
puede ser de nicromo, tungsteno o platino que termina o en aro o en punta.
Se emplea para transportar o arrastrar o trasvasar inculos (pequeo volumen
que contiene microorganismos en suspensin) desde la solucin de trabajo
tambin llamada solucin madre al medio de cultivo (slido o lquido) o de un
medio a otro (resiembra). Tambin sirve para la realizacin de frotis.
La cantidad de inculo que se trasvasa viene determinado por el dimetro del
aro final del filamento, que se encuentra calibrado y normalmente oscila entre
0,1 y 0,01 ml.

Hilo de Platino: se utiliza para transferir colonias de una placa a otra, sobre
todo, para inoculacin de medios slidos y semislidos en tubo (picadura). Hoy
da en la mayora de los laboratorios han sido reemplazados por matelial de
usar y tirar.

Cmara de Neubauer: es un instrumento utilizado en medicina y biologa para

realizar el recuento de clulas en un medio lquido, que puede ser un cultivo
celular, sangre, orina, lquido cefalorraqudeo, lquido sinovial, etc.

Esta cmara de contaje est adaptada al microscopio de campo claro o al de

contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas
ligeramente deprimidas y que en el fondo de las cuales se ha marcado con la
ayuda de un diamante una cuadrcula de dimensiones conocidas. Se cubre la
cmara con un cubrecmaras que se adhiere por simple tensin superficial.
Luego se introduce el lquido a contar, al que generalmente se ha sometido a
una dilucin previa con un diluyente, por capilaridad entre la cmara y el
cubrecmara; puesto que tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos
simultaneamente.
Para contar las clulas se observa el retculo al microscopio con el aumento
adecuado y se cuentan las celulas. Con base en la cantidad de clulas
contadas, conociendo el volumen de lquido que admite el campo del retculo,
se calcula la concentracin de clulas por unidad de volumen de la muestra
lquida inicial.
La frmula de valoracin del nmero de clulas (vlida universalmente) es la
siguiente: Partculas por l=(partculas contadas)/(superficie contada
(mm)profundidad de la cmara(mm) dilucin)

En el retculo central, la cmara de Neubauer posee un cuadrado primario que

contiene nueve cuadrados secundarios cada uno de ellos divididos a su vez en
16 cuadrados terciarios, el cuadrado central contiene 25 cuadrados, cada uno
de ellos dividido a su vez en 16 cuadrados cuaternarios. En los bordes de este
cuadrado central se cuentan los hemates, utilizando slo los cuadrados de los
bordes del terciario central y uno de los centrales. En los secundarios de los
bordes superiores e inferiores de la cmara se hace el recuento leucocitario.
Trpode: se utiliza cuando no se tiene el soporte universal para sostener
objetos con firmeza. Es ampliamente utilizado en varios experimentos. La
finalidad que cumple en el laboratorio es solo una, ya que su principal uso es
como herramienta de sostn a fin de evitar el movimiento. Sobre la plataforma

del trpode se coloca una malla metlica para que la llama no d directamente
sobre el vidrio y se difunda mejor el calor. El mechero se coloca debajo.

Esptula: Se utiliza para tomar pequeas cantidades de compuestos reactivos

que son bsicamente polvo. Se suele clasificar dentro del material de metal y
es comn encontrar en recetas tcnicas el trmino punta de esptula para
referirse a esa cantidad aproximadamente.

Lanceta: es un instrumento compuesto de una lmina aplanada, puntiaguda,

cortante en los dos bordes, de 3 cm de longitud y de dos plaquitas mviles, la
caja, que, replegadas, protegen la lmina. La lanceta sirve para la sangra, la
vacunacin, las escarificaciones, etc.

Pinzas: Las pinzas de laboratorio son un tipo de sujecin ajustable,

generalmente de metal, que forma parte del equipamiento de laboratorio,
mediante la cual se pueden sustentar diferentes objetos de vidrio (embudos de
laboratorio, buretas...) o realizar montajes ms elaborados (aparato de
destilacin). Se sujetan mediante una doble nuez a un pie o soporte de

laboratorio o, en caso de montajes ms complejos (lnea de Schlenk), a una

armadura o rejilla fija.
Las pinzas de laboratorio tienen dos partes:
Un vstago o varilla cilndrica, que se conecta a un soporte o rejilla mediante
una doble nuez. Este acoplamiento proporciona la posibilidad de ajuste en el
soporte, tanto vertical como horizontalmente. Tambin puede hacerse girar un
cierto ngulo para facilitar el montaje del aparato.
Una pinza metlica con una estructura parecida a unas tenazas. Se compone
de dos brazos, que aprietan el cuello de los frascos u otros elementos de vidrio
con un tornillo especial que puede ajustarse manualmente. Cada brazo posee
en su cara interna un recubrimiento de PVC, corcho, fieltro o de plstico, con el
fin de evitar el contacto directo del vidrio con el metal, lo que podra provocar la
rotura del cristal.
Tipos de pinzas de laboratorio:

pinza de tres dedos

pinzas de madera o pinzas para tubos de ensayo
Pinzas de plstico
Pinzas Fischer
Pinzas para crisoles
Pinzas de diseccin

Hemograma: El
hemograma
es una prueba que sirve para orientarnos hacia el diagnstico de enfermedades
sospechadas por la exploracin fsica o por la historia clnica.
Permite detectar:

Anlisis cuantitativos de los hemates (anemias, policitemias).

Anlisis cualitativos de los hemates (hemates fragmentados por
comprometimiento de la micro circulacin, depranocitosis falciforme).
Anlisis morfolgicos de leucocitos que detectan diferentes patologas,
dependiendo de su variacin (virosis simple o maligna, leucemias).

Anlisis cualitativos y cuantitativos de plaquetas (identificacin de patologas

hemorrgicas:
prpuras).

Centrfuga:
rotacin

es

una

una

mquina que pone en

muestra

para acelerar por fuerza

centrfuga la decantacin o sedimentacin de sus componentes o fases

(generalmente una slida y una lquida), en funcin de su densidad. Existen
diversos tipos de estos, comnmente para objetivos especficos.
Una aplicacin tpica consiste en acelerar el proceso de sedimentacin,
dividiendo el plasma sanguneo y el suero sanguneo en un proceso de
anlisis de sangre.
Tambin se utiliza para determinar el hematocrito mediante una toma de
muestra

capilar. En este

caso la mquina utilizada

se

denomina

microcentrfuga.
Es muy usada en laboratorios de control de calidad, de fbricas que elaboran
zumos a base de ctricos, para controlar el nivel de pulpa fina de estos,
separando la pulpa fina del zumo exprimido.
Otra aplicacin de las centrfugas es la elaboracin de aceite de oliva. En ella
las aceitunas una vez molidas y batidas se introducen en una centrfuga
horizontal en la que se separa el aceite que es la fraccin menos pesada del
resto de componentes de la aceituna; agua, hueso, pulpa etc.

Agitador de tubos: Un agitador, a veces llamado mezclador, es un dispositivo

que se utiliza en los laboratorios de qumica y biologa para mezclar lquidos o
preparar disoluciones y suspensiones.
Un agitador tpico tiene una placa o superficie que oscila horizontalmente,
propulsado por un motor elctrico. Los lquidos que van a ser agitados estn
contenidos en vasos, tubos o matraces Erlenmeyer que se colocan sobre la
superficie vibrante o, a veces, en tubos de ensayo o viales que se insertan en
los agujeros de la placa.

Agitador vrtex: o mezclador de vrtice de la marca Whirlimixer, empleado

para mezcla de lquidos. Los agitadores magnticos y los agitadores estticos
son productos relacionados.
Un agitador tipo vrtex o mezclador de vrtice es un dispositivo simple que se
usa comnmente en los laboratorios para agitar pequeos tubos o frascos de
lquido. Se compone de un motor elctrico con el eje de transmisin orientado
verticalmente y unido a un trozo de goma o caucho montado en forma de copa,
ligeramente excntrico. A medida que el motor gira la pieza de caucho oscila
rpidamente en un movimiento circular. Cuando un tubo de ensayo o recipiente

adecuado se coloca en el soporte de goma (o toca su borde) el movimiento se

transmite al lquido en su interior y se crea un vrtice. La mayora de los
mezcladores de vrtice tienen una configuracin de velocidad variable y
pueden ser configurados para ejecutarse de forma continua, o para que
funcione slo cuando una dbil presin se aplica a la goma. Poseen unos pies
de ventosa en la base para evitar desplazamientos.

Bao Mara: son equipos de uso frecuente en el Laboratorio Clnico, ya que en

las reacciones qumicas la temperatura es un factor importante. Por regla
general se utilizarn 37C para reacciones enzimticas.
Estas tienen la funcin de llevar y mantener una muestra a una temperatura
especfica. En el laboratorio mdico tienen muchas aplicaciones tales como
activar procesos enzimticos o proporcionar condiciones ptimas para cultivos
(a 56C en serologa y en algunas pruebas a 100C para acelerar las
reacciones), se pueden clasificar por tamao en grande, medianos y pequeos.
Los baos de Mara, incluyen termostatos desde 25C hasta 100C, los ms
recientes traen incorporados, bombas de circulacin de agua que permiten
mantener la temperatura uniforme. Los baos de mara secos, son bloques de
calentamiento a temperaturas prefijadas incluidos dentro de equipos.

Nevera: las neveras sirven para preservar las muestras cuando no se procesan
inmediatamente al llegar al Laboratorio (2-8C). Los congeladores sirven para
conservar las cepas que luego nos servirn para compararlas con otras
muestras nuevas.

Microscopio ptico: Un microscopio ptico es un microscopio basado en

lentes pticos. Tambin se le conoce como microscopio de luz, (que utiliza luz o
"fotones") o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato suele
asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Los microscopios de
Leeuwenhoek constaban de una nica lente pequea y convexa, montada
sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a
examinar (la muestra o espcimen). Este uso de una nica lente convexa se
conoce como microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros
aparatos pticos.

8. PROCESAMIENTOS DE DATOS

En todo laboratorio cuya lnea de trabajo est encaminada a la utilizacin de

tcnicas de diagnstico, es inevitable realizar un complejo proceso de
manipulacin y anlisis de datos en el cual se involucra gran cantidad de
informacin que debe ser procesada para obtener el resultado final en cada
uno de los mltiples ensayos a los cuales se enfrenta el analista diariamente.
El proceso de operaciones de clculo, toma de decisiones, anlisis de datos e
interpretacin de resultados puede hacerse engorroso, si no se dispone de una
herramienta que facilite estas operaciones y ms si se trata de laboratorios
vinculados a pesquisajes masivos y vigilancia epidemiolgica, en los cuales se
manipulan diariamente una cantidad considerable de muestras. En estos casos
la presencia de un sistema de procesamiento que permita enfrentar el excesivo
volumen de trabajo en que se incurre por concepto de documentacin de un
gran nmero de pacientes y pruebas as como el clculo e interpretacin de un
volumen igual o mayor de muestras, permite una disminucin considerable de
la cantidad de errores operativos por estas causas.
La importancia de realizar un procesamiento de datos adecuados es descrita
por Dudley y Edwards esbozando adems los principios que deben seguirse
para los inmunoensayos. Con el desarrollo de las ciencias mdicas y
biolgicas, juegua un papel cada da ms importante el desarrollo y aplicacin
de estos procedimientos estadsticos y matemticos ofrecidos mediante un
sistema que ofrezcan la posibilidad de una mejor interpretacin de resultados y
faciliten enfrentar el volumen de trabajo en el laboratorio de diagnstico. El
desarrollo y aplicacin de los algoritmos de clculos apropiados determinan hoy
en da, en la mayora de los casos, la utilidad de una prueba diagnstica
cualquiera y posibilita una interpretacin adecuada dentro de un nmero
considerable de variables y posibilidades de error.

MATERIALES Y MTODOS

Tipos de ensayos de la Tecnologa SUMA.

Los inmunoensayos pueden clasificarse segn la forma de ofrecer los

resultados en cualitativos (cuando el resultado emitido se expresa en forma
cualitativa por ejemplo positivo, negativo) y cuantitativos (cuando el resultado
se expresa como un valor de una magnitud fsica, por ejemplo 50 mu/L).
Caractersticas generales del sistema.

Diseado para satisfacer las necesidades del laboratorio de diagnstico;

incluido el control de la calidad del ensayo. Aporta la informacin necesaria
para que se pueda realizar el control interno y externo tributando al sistema
para el control de la calidad tambin de Tecnologa SUMA.
Procesamiento de datos.

Se analizan los valores de fluorescencia resultado de la lectura de los pozos de

reaccin de una placa donde se depositan volmenes 10 microlitros. El rango
de fluorescencia se encuentra entre 0 - 210 UF. Al trabajar con
ultramicrovolmenes se necesita el desarrollo de algoritmos propios que
incluyan diferentes validaciones antes de ofrecer el resultado final.
Ensayos cuantitativos.

Estos ensayos tienen como rasgo distintivo que el resultado se expresa como
un valor de una magnitud fsica. Obtener el resultado final est marcado por la
presencia de los siguientes elementos:
Validacin de la curva estndar o curva de calibracin

Seis calibradores de concentracin conocida que se sitan por duplicado

ocupando las doce primeras posiciones en la placa de reaccin; se utilizan para
construir una curva donde se interpolan los valores de fluorescencia de las
muestras y se obtienen su correspondiente valor de concentracin, el cual se
utiliza para interpretar el resultado. Estos doce calibradores son analizados. Si
no resulta satisfactorio el anlisis, se considera que la curva no es vlida y se
rechaza el ensayo.
Generalidades del mtodo de validacin de la curva en los
ensayos cuantitativos.

1. Obtener los mnimos y mximos para cada duplicado de fluorescencia de cada

calibrador de la curva estndar. 2. Obtener la media de los duplicados de
fluorescencia de cada calibrador de la curva estndar. 3. Calcular el coeficiente
de variacin de los duplicados de fluorescencia de cada calibrador de la curva
estndar. 4. Verificar que las medias de los puntos sean todas diferentes de
cero. 5. Analizar comportamiento de los duplicados de fluorescencia del primer
punto de la curva de calibracin con respecto a su sucesor. 6. Analizar el
comportamiento de los valores mnimos y mximos de los cinco puntos
restantes de la curva de calibracin, evaluando el comportamiento de los
duplicados del punto con relacin a su antecesor y su sucesor. 7. Calcular la
media para cada punto teniendo en cuenta los valores mnimos y mximos
reasignados segn evaluacin anterior. 8. Analizar el comportamiento de los
valores mximos de los duplicados de fluorescencia de los puntos de la curva
de calibracin desde el punto 2 hasta el punto 6 con respecto al valor medio de
su punto antecesor. 9. Determinar para la concentracin de cada estndar su
correspondiente valor medio de fluorescencia y proceder con la construccin de
la curva de calibracin utilizando el mtodo de ajuste apropiado.
Mtodos de ajuste para obtener la curva para los ensayos
cuantitativos.

En los ensayos cuantitativos se ofrece mediante el software la posibilidad de

realizar el ajuste de la curva por los mtodos que a continuacin se describen:
1. Interpolacin lineal. 2. Interpolacin semilogartmica. Interpolacin lineal:
Ajuste de la curva de fluorescencia (Y) concentracin (X) mediante tramos de
rectas. Considerando X[i] = Concentracin y Y[i] = Fluorescencia de los puntos

donde i=1..6, para los puntos 1 y 2 de la curva la ecuacin se define como Y =

MX + B donde M=(Y[2]-Y[1])/(X[2]-X[1]). Interpolacin semilogartmica: Ajuste
de la curva de fluorescencia (Y) logaritmo de la concentracin (X).
Clculo de la dispersin:

Se calcula determinando primero el valor absoluto resultado de la diferencia de

los dos valores de fluorescencia dividido entre la media. ED=F1-F2 /
((F1+F2)/2). Si ED>0.2 entonces la muestra debe ser repetida. ED>0.2: 20% de
diferencia entre ambos duplicados. Determina la presencia de malos
duplicados para los puntos de la curva estndar.
Validacin del control del ensayo.

Calibrador (SC) que se sita por duplicado, inmediatamente despus de la

curva de calibracin. Su valor medio de concentracin debe encontrarse dentro
de los lmites mnimos y mximos en valores de concentracin para el ensayo
de lo contrario se considera fuera de rango y se rechaza el ensayo.
Validacin de las muestras.

Se sitan por duplicado posterior al control del ensayo. Son analizadas si

resulta satisfactorio el anlisis de la curva estndar y el control del ensayo. Si
resulta satisfactoria la validacin de la muestra se procede a interpretar el
resultado de la misma; por lo que en una misma placa pueden existir muestras
con un resultado asociado y muestras que deben repetirse pues no cumplieron
con los requisitos necesarios para ser interpretadas. De esta manera el
software tiene en cuenta: 1. ED > 0,2 Repetir la muestra. 2. Concentracin del
punto mayor que el ltimo punto de la curva.

Interpretacin del resultado.

Se interpreta el resultado de cada muestra si cumplieron con las condiciones

de validacin. Segn el ensayo y los requisitos para la interpretacin del
resultado se asigna el mismo, el cual est directamente relacionado con el
diagnstico.
Ensayos cualitativos.

El resultado se expresa en forma cualitativa (positivo, negativo). Utilizan

controles de tipo N (Negativo), P (Positivo) y B (Blanco). Se ubican dos blancos

(B1,B2) seguidos de dos controles positivos(P1,P2) y de dos controles

negativos(N1,N2). Se procede con la evaluacin de los controles y si es
satisfactoria se analizan las muestras para ofrecer el resultado correspondiente
a cada una de ellas.
Evaluacin de los controles.

El sistema lleva a cabo la eliminacin de los controles con valores aberrantes

de fluorescencia. Los controles no vlidos son excluidos. Son vlidos los
controles que cumplan que: a) Al menos uno de los blancos debe tener un valor
de fluorescencia menor de 10 unidades. b) Al menos uno de los negativos debe
tener un valor de fluorescencia que no supere en ms de 10 unidades a la
media del blanco. c) Al menos un control positivo debe tener un valor de
fluorescencia entre 60 y 180 unidades. d) Siendo P el suero control positivo
vlido con menor fluorescencia, NN la media de los sueros negativos vlidos y
BB la media de los blancos, debe cumplirse que: (NN-BB)/(P-BB) < 0,1 Si estas
condiciones no se cumplen se rechaza el ensayo y no se ofrece resultado para
las muestras.
Procedimiento de clculo.

Concluida satisfactoriamente la evaluacin de los controles del ensayo se

procede al clculo del nivel de corte a partir del cual se determinar las
positividad de las muestras. El nivel de corte en unidades de fluorescencia (NC)
para las muestras de suero o sangre en papel de filtro se expresa como:
NC = 0.300 x (P-BB) + BB
BL = 0.255 x (P-BB) + BB
Interpretacin de los resultados.

a) Para las muestras analizadas de forma simple. Siendo F el

valor de fluorescencia de una muestra y NC el nivel de corte calculado para el
ensayo:
Si F >= NC POSITIVA
Si BL <= F < NC BL
Si F < BL NEGATIVA
Las muestras se consideran en el umbral de positividad (BL) cuando sus
resultados se encuentran en una zona comprendida entre el nivel de corte y un
15 % por debajo del mismo.
b) Para las muestras analizadas por duplicado.

Tanto para ensayos cuantitativos como cualitativos se han planteado las

generalidades para la evaluacin y anlisis de los mismos, pero la tecnologa
SUMA incluye otros ensayos que necesitan procedimientos diferentes a los
descritos que tambin se incluyen en el sistema.
Software.
Enfrentar la diversidad de problemas de diagnstico mediante un sistema
integral, que constituya una va rpida y eficiente para cubrir un amplio rango
de aplicaciones diversas, es hoy en da una de las metas ms ambiciosas que
se presentan para quienes desarrollan los instrumentos de inmunoensayos y es
tambin la solucin ideal para quienes se enfrentan diariamente al trabajo del
laboratorio de diagnstico. Bajo estas premisas, el SRS ha sido diseado sobre
la base de mdulos que implementan y dan respuesta a los diferentes
requerimientos para el trabajo en los laboratorios que utilizan la tecnologa.
9. ETAPA ANALTICA

Control de
equipos

instrumentos y

Para garantizar la calidad analtica se debe verificar, controlar y registrar los

volmenes de dispensacin de los equipos. Las micropipetas deben estar
calibradas y verificadas en balanzas que se encuentran debidamente
calibradas. El laboratorio puede verificar localmente sus micropipetas, para ello
requiere de una balanza analtica de sensibilidad de 1x10-4 gr y la tabla de
conversin de la densidad del H2O a diferentes temperaturas, siendo 1.0 g/ml a
15C (la precisin y exactitud de las micropipetas debe ser inferior a 1 % de
CV). Las micropipetas nuevas deben estar acompaadas de un certificado de
calibracin vigente.

Las puntas para micropipetas han de considerarse como un insumo nico,

desechable.
En el caso de equipos de coagulacin, sean stos propios o en cualquier
condicin de convenio cliente-proveedor, su mantencin preventiva y reparativa
debe ser llevada de acuerdo a las recomendaciones del fabricante con
registros documentados y demostrables de cada una de las intervenciones
realizadas en l. Se mantiene un registro histrico de las mantenciones, as
como de la descripcin del problema que genera la mal funcin.
Sistema de gestin de calidad

Exigellevar registro deloscontroles delequipo, temperaturas de incubadores de

muestras-reactivos, volmenes de dispensacin y tiempos de incubacin.
Se debe mantener registro para la gestin de los reactivos, plasma control,
plasma calibrador en torno a cambios o variaciones:
a) En marcas, proveedores
b) En sus lotes
c) Fecha de solicitud
d) Fecha y conformidad de la recepcin en el laboratorio
e) Fecha de elaboracin
f) Fecha de expiracin
g) Periodo de uso (inicio y trmino)
h) Registro de almacenamiento y control de temperaturas
i) Otros antecedentes.
Control de calidad interno

Es recomendable proyectar las adquisiciones con los proveedores de material

control y reactivos con lotes que abarquen un periodo de por lo menos 1 ao.
Se recomienda el uso de material control comercial liofilizado en dos niveles e
integrados en cada corrida analtica.
El material de control liofilizado debe reconstituirse de acuerdo a las
especificaciones del fabricante, en trminos generales indican: reconstituir con
agua destilada grado reactivo, dejar el reactivo en reposo entre 15 y 30
minutos, en la mitad del tiempo invertir slo en una oportunidad para incluir el
liofilizado remanente en la tapa.
El volumen de agua para la reconstitucin debe ser medido con micropipetas
controladas. En el caso de no contar con micropipetas se puede usar
alternativamente pipeta de doble aforo de 1 mL.
El material de control reconstitudo y sin alicuotar es estable a 4C por 72 hrs.
En el caso de alicuotar utilice tubos eppendorf o criotubos con el volumen
suficiente para uso diario, en ste ltimo caso almacenar a -20C con

estabilidad por 10 das. Para descongelar utilizar bao mara a 37 C por 3 a 5

minutos.
Para el clculo de los lmites de control se sugiere utilizar el modelo N20 u
otros similares, acto seguido aplicar un mtodo para exclusin de aberrantes.
Definidos los lmites de control estos deben ser presentados a travs de un
mtodo grfico como por ejemplo: grficos de LeveyJennings.
Graficar los resultados de cada control y corrida analtica, manteniendo registro
de la evaluacin diaria e histrica del CCI.
La evaluacin del resultado obtenido en una corrida analtica en el CCI
permitir optar por una decisin precautoria o de rechazo de acuerdo a las
reglas de Westgard definidas e implementadas en cada laboratorio y para cada
prueba en particular. El anlisis de los resultados permite la validacin de una
corrida analtica y el seguimiento de la fiabilidad metrolgica a travs de la
imprecisin analtica.
El seguimiento de la variabilidad en las mediciones de las muestras a travs del
CCI se realiza a travs del clculo del coeficiente de variacin (CV).
Corresponde a uno de los estimadores de variabilidad y expresa la imprecisin
de los resultados frente al uso de reactivos e instrumentos (volmenes de
dispensacin, sistema de lectura, temperaturas de incubacin
etc.). Es aceptable que el CV intralaboratorio para el TP y TTPA sea menor de
5 % para un mismo lote de control normal o anormal.
Control de calidad externo

El laboratorio debe participar de un programa de evaluacin externa de la

calidad que debera proporcionar, en lo posible, muestras semejantes a las de
pacientes. La direccin del laboratorio debe hacer seguimiento de los
resultados y participar en la implementacin de acciones correctivas, cuando
no se cumpla el criterio de control.
Se recomienda considerar las siguientes actividades y buenas prcticas en el
establecimiento de un sistema de control de calidad externo para los mtodos
cuantitativos:
Establecer y documentar polticas y procedimientos referidos al control de
calidad externo.
Asignar las responsabilidades en el monitoreo y revisin de los resultados de
control.
Seleccionar los programas externos en base a criterios estandarizados.
Establecer requisitos de calidad en base a la informacin disponible.
Mantener los registros de los resultados de control, de las correcciones
realizadas y de las acciones correctivas implementadas.
Analizar los resultados de las evaluaciones oportunamente para la aplicacin
de acciones de mejora y registro de las mismas.
Es recomendable adems mantener registros de cambio de lote de reactivos
de plasma valorado, plasma calibrador, controles de equipos, temperaturas de

reactivos, volmenes de dispensacin, tiempos de incubacin, tiempo de

adquisicin y registro del cumplimiento de las reglas de Westgard a modo de
establecer la trazabilidad de stos con los resultados del PEEC.
Se recomienda analizar en conjunto los datos del control de calidad interno y
externo utilizando las OPSpecs Charts. C. Anlisis de muestra y variabilidad de
las mediciones
Las determinaciones con resultados no esperados respecto a las mediciones
histricas o resultados anormalmente patolgicos, debern repetirse
verificando antes la calidad de la muestra y los resultados del control de la
corrida analtica que corresponda al resultado en cuestin. En el caso de repetir
la determinacin la diferencia entre los duplicados no debe superar el 5% del
primer valor obtenido.
Si verifica un resultado anormalmente alto (valor crtico) aplicar los
procedimientos definidos internamente por cada laboratorio para la
comunicacin y validacin de valores crticos.
En la actualidad no se recomienda el uso de mtodos manuales (tubo
inclinado) para las pruebas de coagulacin por la dificultad en su
estandarizacin y menor rendimiento en cuanto a reproducibilidad y veracidad
comparado con los mtodos ampliamente disponibles en la actualidad.
El sistema INR est basado en una relacin matemtica entre el cuociente del
TP obtenido con la prueba de la tromboplastina y la preparacin de referencia
internacional (PRI) usando un mtodo manual para la deteccin del cogulo.
Sin embargo, el uso de equipos automatizados, han incorporado nuevas
variables a la medicin (volumen, estabilidad elctrica, temperatura, etc.) lo
cual exige mayor control sobre el equipo.
En cuanto a la correccin del anticoagulante respecto del hematocrito, los
resultados de pruebas de coagulacin pueden ser afectados, por la variacin
de la proporcin anticoagulante / hematocrito. Cuando el hematocrito sea
superior a 55% se sugiere corregir el volumen de anticoagulante mediante un
nomograma. En ste caso se sugiere obtener una nueva muestra modificando
el volumen del anticoagulante citrato de sodio de acuerdo a la siguiente
frmula:
V de anticoagulante (mL) = 100 hematocrito paciente (%) x V sangre de la muestra
595 hematocrito paciente (%)

Actualmente no existe evidencia suficiente para corregir el volumen del

anticoagulante para pruebas de coagulacin en los casos de anemias severas
(hematocrito <20%).
La Curva decalibracin de TP (Semi-logartmica) permite extrapolar los
resultados en segundos del TP en porcentajes de actividad de protrombina,
adems define el valor 100% de actividad (media geomtrica del tiempo en
segundos) para calcular el INR.

En el caso de los pacientes monitorizados con Tratamiento Anticoagulante Oral

(TAC) se debe usar el International Sensitivity Index (ISI) de la tromboplastina
tisular comercial, idealmente corresponder al mtodo y modelo de equipo.
ISI
INR = TP paciente (seg)
TP media geomtrica (seg)

Se ha corroborado que el ISI proporcionado por las marcas de tromboplastinas

an siendo stas especficas para el mtodo y modelo del equipo, no siempre
satisfacen la realidad instrumental del laboratorio. Para ello se recomienda
realizar el clculo del ISI local.
Es recomendable la utilizacin de tromboplastinas cuyos ISI no sean superior a
1,4.
Considerando que el valor de INR es calculado por la elevacin del cociente de
los tiempos de tromboplastinas al ISI, deduce que el CV del INR est
relacionado con el CV del cuociente del TP y al valor del ISI. Se puede concluir
entonces que si el valor del ISI es constante se obtiene la siguiente frmula: CV
de INR = ISI x CV del TP. Esto indica que la precisin puede ser mejorada
usando reactivos con ISI bajo.

ETAPA POST-ANALTICA

El
informe

de

resultados debe ser revisado antes de emitirlo,

verificando si existen valores histricos o condiciones del paciente asociadas a
tratamiento o enfermedad que puedan explicar los resultados obtenidos,
adems verificar la trazabilidad de la informacin.
La realizacin de la validacin y firma del informe de resultados de exmenes
de coagulacin deber ser realizada por un profesional calificado con
formacin, experiencia y entrenamiento en pruebas de coagulacin.
El informe de resultados deber contener la informacin de acuerdo al
reglamento de laboratorios clnicos vigente (1), adicionalmente puede contener
los siguientes datos:
a) Identificacin del laboratorio que emite el informe,
b) Nombre completo del paciente,

c) RUT,
d) Edad,
e) Fecha de nacimiento,
f) Gnero,
g) Procedencia,
h) Mdico tratante,
i) Fecha y hora de la obtencin de la muestra,
j) Fecha y hora de la recepcin de la muestra,
k) Tipo de muestra,
l) Nombre de las prestaciones realizadas
m) Valores de referencia segn gnero y edad
n) Mtodo utilizado (ELISA, cromognico, nefelomtrico, coagulomtrico).
o) Fecha y hora de validacin e informe de resultados,
p) Nombre y firma profesional que informa y del profesional que lo valida.

Las solicitudes de exmenes y los resultados deben estar almacenados y

disponibles, de acuerdo al Decreto supremo 20/2012 Reglamento de
Laboratorios Clnicos o por el Decreto N 161 de 1982 Reglamento de

Hospitales y Clnicas, segn corresponda.

Los laboratorios informatizados deben mantener restriccin o niveles de acceso
segregado para el personal que asegure respaldo, resguardo y confidencialidad

de la informacin.
El informe de valores crticos debe estar de acuerdo a los procedimientos que
establezca cada institucin, manteniendo un sistema de registro, notificacin
manual o automtica. La definicin de los valores crticos se debe establecer
de comn acuerdo entre los profesionales del laboratorio y los diferentes
servicios clnicos. A modo de recomendacin es considerado un valor crtico

para TP < de 25% de actividad y TTPA > a 180 segundos.

Los resultados con actividad de protrombina superior a 100% se recomienda no
ajustar o limitar a ese valor, est establecida que la media de 12,0 segundos o
100%

de

actividad

abarca

el

promedio

de

la

curva

de

Gauss

(hiperprotrombinemias congnitas y adquiridas).

La seroteca se presenta como una necesidad en laboratorios que almacenan
contramuestras. Los requerimientos del equipamiento fro exigen control
peridico de temperatura y mantencin preventiva del sistema de refrigeracin.
La disposicin transitoria o final de las muestras biolgicas requiere de un

sistema de eliminacin local e institucional. El material biolgico deber ser

tratado para su descontaminacin y entregado a una empresa especialista
certificada para su tratamiento final.

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