Sunteți pe pagina 1din 24

TULPINI BACTERIENE NECESARE

SISTEMULUI DE AGRICULTUR PE
BAZ DE MULCI BIOACTIV IZOLATE
DIN ZONA DE SUD-EST A ROMNIEI
Florica CONSTANTINESCU1, Sorina DINU1, Oana SICUIA1, Roxana ZAMFIROPOL1
1 - Institutul de Cercetare-Dezvoltare pentru Protecia Plantelor

Proiect Makis : Sistem de agricultur


alternativ pe baz de mulci vegetal
bioactiv format din culturi verzi
OBIECTIVE:
1 Dezvoltarea unui sistem de agricultur alternativ prin
utilizarea mulciului vegetal bioactiv format din culturi verzi de
leguminoase (mazre, mzriche, lupin, sulfin alb) i din culturi
verzi de crucifere (rapi, mutar).
2 Diseminarea pe scar larg a sistemului de agricultur
alternativ, cu reliefarea rezultatelor clare i semnificativ
avantajoase pentru productorii agricoli.

Izolare
tulpini
Selecie
tulpini

Formulare
biomas

Biopreparate
inoculante pe baz de
bacterii din grupul
Rhizobium

Biopreparate destinate
formrii mulciului bioactiv,
pe baz de bacterii
sporulate din genul
Bacillus

Grupul Rhizobium
Bacterii simbionte

Fixatoare de azot
Asigura un aport de 100-300 kg
azot substanta activa/ha

Noduli pe radacina unei


plante leguminoase

Plant de mazre (Pisum sativum)

Bacteroizi n interiorul unui nodul

Tulpini specifice diferitelor culturi de


protecie n timpul iernii
Rhizobium leguminosarum bv. viciae
Mazre de iarna

Mzriche de toamn

Rhizobium lupini
Lupin

Biopreparate pe baz de Rhizobium


leguminosarum

Avantaje:
mbogirea cu azot a solului fr a
determina poluare;
Creterea fertilitii solului prin
mbunatirea structurii (producere EPZ);
Stimularea creterii plantelor datorit
producerii de fitohormoni.

Bacillus subtilis
Utilizat n combaterea biologic a
fitopatogenilor
Formeaz spori foarte rezisteni la
factorii de stress din mediu
Biopreparate existente pe piaa
mondiala
Epic (Gustafson, SUA)
Serenade (Agra Quest, UE, SUA)
Kodiak (Gustafson, SUA)
System (SIAPA, UE)

Avantajele biopreparatelor pe baz de


Bacillus subtilis n sistemul agricol propus
Creterea capacitii de mineralizare a
materialului vegetal
Diminuarea cantitii sporilor ciupercilor
fitopatogene de sol din mulci
Stimularea creterii plantelor prin producerea
de auxine sau gibereline
Asigurarea unor recolte sporite simultan cu
reducerea aplicrii pesticidelor

Izolarea de tulpini biologic active din


Brganul de sud si Dobrogea de sud
Probe de sol din culturi de crucifere,
leguminoase i
mirite.
Probe vegetale din plante de rapi.
356 tulpini bacteriene au fost analizate i
caracterizate n scopul seleciei

Selecia izolatelor bacteriene s-a realizat


pe baza urmtoarelor caracteristici:
-Capacitatea antagonist in vitro;
- Producerea de enzime:
proteaza,celulaza, amilaza, lactonaza;
-Mobilitatea izolatelor;
-Stimularea creterii plantelor;
-Producerea de hormoni de cretere (IAA) i
-Testarea inocuitii izolatelor.

Identificarea bacteriilor izolate


Teste biochimice i coloraia Gram
G-

Testul Biolog de degradare


oxidativ a diferitelor
substrate, cuplat cu baze de date
specifice.

Identificarea microorganismelor selectionate


pn la nivel de specie prin amplificarea 16s rADN
prin tehnica PCR.

G+

Selecia tulpinilor bacteriene


Activitatea antagonist s-a analizat in vitro fa de Fusarium spp.,
Alternaria spp, Botrytis spp., Sclerotinia sclerotiorum i Sclerotium
bataticola
Metoda culturilor duble

Metoda neprii punctiforme a mediului

Versus Sclerotium bataticola

Versus Alternaria spp.


Versus Fusarium graminearum

Producerea de enzime
56.1s

Us1

MB2

FL400

Proteaz

Celulaz
(tulpinile 56.1s; 53, 54, 55)

Amilaz
(tulpina 56.1s)

Producerea de enzime
Lactonaz

Quorum sensing
CV026

Ps33

Fl400

Testarea mobilitii
56.1s

PCL1764

Mobilitatea de migrare la suprafaa agarului (swimming)

Mobilitatea de agregare (swarming)

Tulpini selectate
FL400 Paenibacillus graminis
izolat din rizosfer de gru
Enzime produse: proteaza, amilaza, lactonaza.
Produce metabolii antifungici - antagonist fa de toate
ciupercile de sol studiate.
Mobilitate: de migrare si de agregare.
Stimuleaz creterea plantelor de tomate i de fasole
Stimuleaz formarea nodozitailor pe rdcini de plante
leguminoase.
Identificat pe baza 16s rADN.

56.1s - Brevibacillus laterosporus


izolat din sol
Enzime produse: proteaza, amilaza, lactonaza.
Produce metabolii antifungici - antagonist fa de toate
ciupercile de sol studiate.
Mobilitate: de migrare i de agregare.
Stimuleaz creterea plantelor de tomate.
Identificat pe baza 16s rADN.

Us1 Bacillus marisflavi


izolat din rizosfera de usturoi
Enzime produse: proteaza, amilaza, lactonaza.
Producere de metabolii antifungici.
Mobilitate: de migrare i de agregare.
Stimuleaz creterea plantelor de tomate.

Identificat pe baza 16s rADN.

Biotestarea in vitro a efectului fitostimulator


asupra plantulelor de gru
Spor de cretere al
rdcinilor, fa de martor,
cuprins ntre 9,28% i
25,77%.
Martor

Varianta FL400 (107 ufc/ml)

Seminte de gru germinate dupa 72 ore de la


inoculare cu tulpina de Paenibacillus graminis
FL400 vs. Martor

Lungimea radacinilor (mm)

Testarea in vivo a izolatelor bacteriene


selecionate n ceea ce privete stimularea
creterii plantelor de tomate
250
200

a
ab

ab ab

ab
bc

150
100

Varianta tratat cu tulpina FL400

50
0

Var. tratata cu tulpina 56.1s

Mt neinoculat

Testarea in vivo a tulpinilor bacteriene selecionate pe


plante de mzriche de toamn
Bloc randomizat cu 4 variante in 4
repetitii:
V1= Martor nebacterizat
V2= Tratament la samanta cu B49b
V3= Tratament la samanta cu FL400
V4= Tratament la samanta cu B49b
+FL400
Experien cu plante de Vicia villosa n cmpul
I.C.D.P.P. (foto O. Sicuia, ianuarie 2010)

B49b - Bacillus subtilis


FL400 Paenibacillus graminis

Producerea de fitohormoni auxinici (IAAacid indolil 3-acetic)


Cod tulpini/
Varianta de
cretere
Crescute
fr
triptofan
Crescute cu
triptofan

56.1s

FL400

Us1

Sp s2

Mzb1

0,150
(6
ug/ml)*
0,208
(8,32
ug/ml)

0,166
(6,64
ug/ml)
0,210
(8,4
ug/ml)

0,156
(6,24
ug/ml)
0,197
(7,88
ug/ml)

0,156
(6,24
ug/ml)
0,191
(7,64
ug/ml)

0,143
(5,76
ug/ml)
0,195
(7,34
ug/ml)

Producerea de IAA (acid indolil 3 acetic) n prezena sau absena triptofanului.


*Valorile reprezinta cantitatea de IAA n g/ml n supernatantul culturii dupa 8
zile de cretere a bacteriilor n mediul nutrient broth suplimentat sau nu cu
triptofan (100 g/ml).

Testarea inocuitii izolatelor


selecionate
Se determin cu ajutorul
biotestului de inocuitate pe baz
de larve de Galleria mellonela.

Inocularea larvelor cu
suspensii bacteriene n
concentraie de 102 ufc/ml i
106 ufc/ml

Concluzii
Au fost selecionate 3 tulpini de microorganisme cu activitate
biologic ridicat care au provenit din Baraganul de sud.
Tulpinile sunt depuse la autoriti de depozit internaional i
sunt n curs de brevetare.
Pe baza acestor tulpini vor fi produse biopreparate bacteriene
destinate sistemului de agricultur pe baz de mulci bioactiv.