Curs 2 CACT

Testarea agenilor terapeutici noi

Selectarea combinaiilor pentru testarea lor ca posibile medicamente se poate
poate realiza prin:
- descoperire accidental studiindu-se alte proprieti ale compusului aa
cum a fost cazul cisplatinului;
- testarea unor compui naturali produi de microorganisme, plante sau insecte
pentru stabilirea activitii antifungice, antibiotice, antivirale sau antitumorale
(n prezena sau absena ionului metalic). n acest categorie se ncadreaz i
o serie de medicamente organice care se pot coordina la diveri ioni metalici
pentru mbuntirea activitii.
- modelarea pe calculator pentru proiectarea unor specii care pot
interaciona eficient cu un anumit receptor din organism cum sunt de
exemplu ADN-ul sau enzimele specifice.
Dup identificare unui compus activ sau a unei inte specifice se pot sintetiza
un numar mare de compui (sute sau chiar mii) cu structuri sau proprieti
asemntoare care poart denumirea de analogi din generaia a doua sau a
treia ai medicamentului iniial.
Utilizarea unui compus anorganic n scopuri medicale necesit stabilirea
caracteristicile fizico-chimice n stare solid i soluie apoas precum i
stabilirea condiiilor de sintez pentru obinerea speciei cu randament mare
i pre de cost sczut. De asemenea trebuie stabilit modul n care compusul
se poate aduce ntr-o form cu puritate avansat, deoarece n unele cazuri
materiile prime sau speciile intermediare pot s prezinte toxicitate.
nainte ca un medicament nou s se testeze pe oameni trebuie efectuate
studii preclinice. Acestea presupun testarea in vitro (n general n cutii Petri
folosind culturi celulare sau de microorganisme). Cei mai activi compui
sunt apoi testai in vivo pe probe animale. Un compus care este candidat
pentru a fi medicament este testat pe cel puin dou specii diferite de animale
(o roztoare i o neroztoare) deoarece compuii chimici nu afecteaz mereu
n acelai mod speciile diferite. De exemplu cisplatinul a fost testat att pe
oareci ct i pe cini. Pe animale se efectueaz o testare pe termen scurt i
una pe termen lung. Testarea pe termen scurt dureaz dou sptmni pn
la trei luni i are rolul a stabili metabolismul i toxicitatea speciei candidate
pentru medicament. Testarea pe termen lung dureaz de la cteva sptmni
pn la civa ani i are rolul de a stabili dac folosirea pe termen ndelungat
a substanei poate conduce la cancer sau la malformaii congenitale.

Studiile clinice cuprind n mod normal trei etape de testare cu excepia unor
medicamente care sunt plasate ntr-un proces de testare accelerat (pentru
tratament cancer i SIDA).
Faza nti a studiilor clinice reprezint prima dat cnd medicamentul nou
este testat pe oameni reprezentai n general de voluntari sntoi i uneori
de pacieni (de ex. n studiile clinice pe cisplatin). Scopul acestor studii este
acela de a determina metabolismul, relaiile structur-activitate, mecanismul
de aciune i efectele secundare ale medicamentului asupra oamenilor. Dac
este posibil studiile n faza nti determin eficacitatea i doza care limiteaz
toxicitatea pentru un medicament potenial pe un numr mic de pacieni
(2080).
A doua faz a testelor clinice stabilete eficacitatea medicamentului pentru
tratamentul pacienilor care prezint o boal sau afeciune specific precum
i descoperirea efectelor secundare comune pe termen scurt sau a riscurilor.
Acesta implic de obicei mai muli subieci (de ordinul sutelor) i necesit
timp ndelungat pentru obinerea unor date statistice corespunztoare.
Studiile clinice n faza 3 furnizeaz mai multe informaii despre eficacitatea
i sigurana medicamentului i permit extrapolarea rezultatelor studiilor
clinice la populaie. Aceste studii implic cteva sute pn chiar la cteva
mii de persoane. A treia etap a testelor clinice poate stabili deasemenea
eficacitatea n combinaie cu alte specii aa cum decurge chemoterapia
multor forme de cancer. Pentru evaluarea eficacitii reale a medicamentelor,
trebuie studiat cu atenie i modul de administrare.
Procesul de dezvoltare i testare a unui medicament nou este foarte lung,
poate dura cel puin 8 ani, incluznd i studiile iniiale de sintez, purificare
i testele pe animale.
Medicamente anorganice antitumorale
Una din cele mai cunoscute utilizri a unor combinaii complexe pentru
tratamentul unor boli este cea a combinaiilor complexe ale platinei n
tratamentul anumitor forme de cancer.
Cancerul este una dentre primele trei boli care duce anual la moartea a sute
de oameni n ntreaga lume i reprezint o boal dificil de tratat. Aceasta
deoarece este greu (dac nu chiar imposibil) de gsit un medicament care s
fie nu numai efectiv dar s aib i o toxicitate redus n corpul uman.
Atenia special acordat studierii combinaiilor complexe ale platinei ca
poteniale medicamente anticancerigene s-a datorat succesului obinut n
domeniu prin utilizarea cisplatinului.

Descoperirea activitii antitumorale a cisplatinului

Cu toate c s-au testat foarte multe combinaii complexe ale platinei i a
altor metale reprezentative i tranziionale, numai una dintre aceste specii se
utilizeaz
ca medicament pe scar larg i anume cisdiclorodiamminplatina(II) cunoscut ca cisplatin. Acest medicament a fost
introdus pentru tratamentul tumorilor aparatului genitaro-urinar n 1978 i se
utilizeaz n combinaie cu 1-4 alte medicamente antitumorale organice
pentru tratamentul cancerului testicular, ovarian, a celui localizat la gt i
cap dar s-a observat c rspund la tratament i cancerele pulmonare i
cervicale. n cazul cancerului testicular vindecarea s-a observat la 90% din
pacieni.
Activitatea combinaiilor complexe ale platinei a fost descoperit accidental
n 1965 de ctre Barnett Rosemberg (biofizician de la Universitatea
Michigan) i colaboratori prin studierea efectul curentului electric asupra
unei culturi de Escherichia Coli. Rosenberg a condus un experiment pentru a
studia efectul curentului electric asupra diviziunii celulare, deoarece el a
crezut c forma fusiform a celulelor eucariote observat microscopic n
timpul diviziunii celulare se aseamn cu liniile de cmp electric dintre dou
puncte ncrcate cu sarcini opuse.
Rosenberg mpreun cu Loretta VanCamp au trecut un curent alternativ prin
doi electrozi de Pt imersai ntr-un mediu de celule ntr-un mediu de cretere
celular (au folosit bacteria E. coli care nu se caracterizeaz prin
dezvoltare fusiform). n locul diviziunii normale de form cilindric
(baghet) la mai multe bacterii celulele au avut o form filamentoas
(cretere sub form de spaghete) i replicarea a fost stopat. Acest
experiment a avut ca rezultat o cretere filamentoas de 300 de ori mai mare
comparativ cu una normal pentru Escherichia Coli care n mod normal are
o lungime de 2-5 microni.
Cu ajutorul chimitilor anorganicieni s-a stabilit c acest efect este
determinat de aciunea combinat a anionilor clorur, amoniacului,
curentului electric i electrodului de platin, studii ulterioare artnd c este
necesar i lumina pentru ca reacia s aib loc.
Pt(electrod)

electroliza

[PtCl6]

NH4

[PtCl4(NH3)2]

Cu toate acestea, produsul initial, [PtCl6]2- are activitate antibacterian i nu

promoveaz creterea filamentoas la fel ca i izomerii cis- i trans[PtCl4(NH3)2]. Ca intermediar n formarea [Pt(IV)Cl4(NH3)2] apare
[Pt(II)Cl2(NH3)2]. Ca urmare s-au testat izomerii cis- i trans- ai acestei
3

combinaii complexe a Pt(II) i s-a observat c doar izomerul cis induce

cretere filamentoas. Ulterior Rosenberg a artat c numai izomerul cis[Pt(II)Cl2(NH3)2] i nu trans-[Pt(II)Cl2(NH3)2] poate preveni creterea
celulelor canceroase in vivo.
Testele efectuate pe animale (sarcomul S 180 implantat la oareci albi
elveieni) au confirmat faptul c cisplatinul are aciune antitumoral i dup
multe ncercri s-a introdus n tratamentul unor forme de cancer.
Dup ce n 1970 cisplatinul a trecut de prima faz a testrilor s-a observat c
acesta prezint o marcant toxicitate gastrointestinal i renal, efecte care
au determinat diminuarea interesului pentru acesta. Prin administrarea
ctorva litri de ap srat pacientului, naintea tratamentului cu cisplatin, se
diminueaz efectul acestuia asupra rinichilor. Ca urmare, n prezent,
cisplatinul se administreaz sub form de soluie salin ntr-o doz de 20120 mg/m2 de suprafa a corpului/zi, timp de 3-4 sptmni. Din cantitatea
de cisplatin administrat aproximativ 30-70% se elimin prin urin. Uneori
s-a observat c organismele dezvolt rezisten la acest tratament.
Chimia cisplatinului
Cisplatinul este instabil n ap (timp de via 2,5 h la 37 C) i pentru
administrare ca medicament antitumoral este condiionat sub form de
soluie salin pentru prevenirea acvatizrii (hidrolizei).

2+

Cl

H3N

H2O

OH2

H3N

Pt

H2O

H3N

Pt

Pt
-

Cl

Cl

OH2

H3N

H3N

Cl

Cl

k = 7,6x10-5 s-1

H3N

OH2

k = 2,3x10-4 s-1
pKa = 5,5

pKa = 6,6

OH

H3N

OH

H3N

Pt

Pt

H3N

Cl

H3N

OH2

pKa = 7,3

OH

H3N
Pt
H3N

OH

Prin injectarea intravenoas a cisplatinului, acesta ajunge n plasma

sanguin, mediu cu pH 7,4 i o concentraie a Cl de aprox 104 mM, condiii
n care anionii Cl labili nu disociaz foarte mult i ca urmare dicloro i
cloro-hidroxo speciile reprezint n aceste condiii speciile majoritare pentru
cisplatin. Prin difuzie pasiv aceaste combinaii complexe neutre ajung n
nucleul celular unde concentraia Cl scade drastic ajungnd la aproximativ
4- 20 mM i n aceste condiii ncepe reacia de hidroliz care duce la o
concentraie mare de hidroxo i acva specii. Deoarece apa este mai labil
dect anionii Cl i HO nseamn c speciile care conin apa coordinat sunt
foarte active i reacioneaz cu biomolecule de tipul ARN-ului, ADN-ului i
proteinelor cu substituirea apei i formarea de combinaii complexe prin
intermediul unor leziuni mono- sau bifuncionale pe aceste biomolecule.

Material suplimentar
Cancerul reprezint o boal complex caracterizat prin proliferarea
necontrolat a celulelor. n funcie de tipul de esut afectat se cunosc:
- carcinoame sunt cele mai ntlnite tumori (80-90% din cazuri) care au
originea n esutul epitelial, inclusiv pielea i sistemele care nvelesc i
delimiteaz organele i conexiunile dintre acestea. Exemple: cancerul de sn,
plmn i colon;
- sarcoamele care se localizeaz la esutul conectiv ca oase, tendoane,
cartilaje, muchi i grsime;
- leucemiile care cuprind toate tipurile de cancere care nu se ncadreaz n
celelalte dou tipuri. Leucemiile se dezvolt la nivelul mduvei osoase i a
sistemului limfatic, unde se produce sngele.

Cultura de E. Coli normal (A) i crescut n cmp electric (B)

Tabelul 1. Distribuia speciilor cisplatinului de tip cloro, acva i hidroxo n medii

caracterizate prin concentraii mici i mari de anioni clorur
[Cl]/mM
104
(plasm)
4
(citoplasm)

Cl, Cl
0,67

Cl, OH
0,26

Cl, H2O
0,04

H2O, H2O
0,0001

OH, H2O
0,009

OH, OH
0,012

0,03

0,30

0,05

0,003

0,28

0,35