CICLUL KREBS

Ciclul Krebs (numit i ciclul acidului citric sau ciclul acizilor tricarboxilici, descris de ctre
Hans Krebs) reprezint calea de degradare oxidativ a acetil-CoA rezultat din catabolismul
glucozei, al acizilor grai i al unor aminoacizi; deci acest proces metabolic reprezint o cale final
comun pentru degradarea aerob a celor trei categorii de combustibili metabolici.
Reaciile ciclului Krebs au loc n mitocondrie, enzimele fiind localizate n matricea
mitocondrial, libere sau ataate de membrana mitocondrial intern.
1. Condensarea acetil-CoA cu oxalacetatul, cu formare de citrat.
Procesul debuteaz cu o condensare aldolic ntre acetil-CoA i oxalacetat: carbonul metilic
al acetil-CoA este legat la carbonul carbonilic al oxalacetatului; intermediar se formeaz citril-CoA,
care este hidrolizat rapid la citrat i coenzima A. Reacia este catalizat de citrat sintaz.

Hidroliza intermediarului tioesteric macroergic (citril-CoA) face ca reacia s fie puternic

exergonic, deci echilibrul su este net n favoarea citratului; acest fapt este esenial pentru
funcionarea ciclului Krebs, ntruct concentraia oxalacetatului n celul este redus.
2. Transformarea citratului n izocitrat.
Aconitaza catalizeaz un proces reversibil de deshidratare a citratului la cis-aconitat, urmat
de adiia apei la dubla legtur n aa fel nct se formeaz izocitratul. Dei citratul are o molecul
simetric, aconitaza reacioneaz cu acesta ntr-o manier asimetric (are un situs activ asimetric),
astfel nct cei 2 C care vor fi pierdui n etapele ulterioare nu deriv din acetil-CoA, ci din
oxalacetat (abia n rundele ulterioare ale ciclului Krebs se vor elimina cei 2 C ai acetil-CoA).

3. Conversia izocitratului n -cetoglutarat.

Izocitrat dehidrogenaza (ICDH) catalizeaz oxidarea izocitratului n prezen de NAD +, cu
formarea unui intermediar numit oxalo-succinat, care apoi se decarboxileaz la -cetoglutarat.

13

Exist dou izoenzime ale ICDH:

- ICDH - NAD+ dependent, care se gsete n mitocondrii i acioneaz n ciclul Krebs;
- ICDH - NADP+ dependent, care are localizare dubl (mitocondrial i citosolic) i care
are rol n generarea NADPH (ce va servi ca agent reductor n reacii anabolice reductive).
4. Decarboxilarea oxidativ a -cetoglutaratului la succinil-CoA.
Acest proces este catalizat de -cetoglutarat dehidrogenaz (KG-DH), care este un
complex enzimatic asemntor, din punct de vedere structural i funcional, cu piruvat
dehidrogenaza (este alctuit din 3 enzime i 5 coenzime: TPP, acid lipoic, coenzima A, FAD i
NAD+). n aceast reacie, energia liber degajat n procesul de oxidare este conservat sub forma
legturii tioesterice din succinil-CoA (legtur de tip macroergic: G pentru hidroliza succinilCoA este 8,6 kcal/mol).

5. Transformarea succinil-CoA n succinat.

n aceast reacie, energia eliberat prin scindarea legturii tioesterice din succinil-CoA este
utilizat pentru sinteza legturii fosfat-macroergice din GTP sau ATP. Reacia este catalizat de
succinat tiokinaza (succinil-CoA sintetaza), care are dou izoenzime:
- una specific pentru ADP (distribuit n toate esuturile);
- o alta specific pentru GDP (localizat n esuturile implicate n procesul gluconeogenezei,
care utilizeaz GTP n una din reaciile sale: ficat i rinichi).

Acesta reprezint un proces de fosforilare la nivel de substrat: energia eliberat prin

decarboxilarea oxidativ a -cetoglutaratului este conservat n legtura tioesteric a succinil-CoA,
fiind apoi utilizat pentru sinteza ATP din ADP i Pi.
GTP format n aceast reacie (sub aciunea succinat tiokinazei specifice pentru GDP) poate
ceda un fosfat ADP-ului, pentru a genera ATP, ntr-o reacie reversibil catalizat de nucleozid
difosfat kinaza: GTP + ADP
GDP + ATP.
6. Dehidrogenarea succinatului la fumarat.
Succinatul se dehidrogeneaz n prezena coenzimei FAD, sub aciunea succinat
dehidrogenazei, cu formarea acidului fumaric (izomerul trans). Aceast enzim este legat de
membrana mitocondrial intern i reprezint complexul II din lanul transportorilor de electroni.

14

7. Hidratarea fumaratului la malat.

Fumaraza (fumarat hidrataza) catalizeaz o reacie de hidratare a fumaratului; enzima are o
stereospecificitate ridicat: acioneaz numai asupra izomerului trans (acidul fumaric), nu
acioneaz asupra izomerului cis (acidul maleic).

8. Dehidrogenarea malatului la oxalacetat.

Malat dehidrogenaza catalizeaz reacia de dehidrogenare, n prezen de NAD +, a
malatului, cu regenerarea oxalacetatului. n condiii standard, echilibrul reaciei este net spre
formarea malatului (G = 7,1 kcal/mol). n condiiile din celula vie, oxalacetatul este ndeprtat
continuu din reacie prin angajare n reacia citrat sintazei dintr-o nou rund a ciclului Krebs; n
consecin, concentraia oxalacetatului este meninut la valori foarte sczute, ceea ce duce la
direcionarea reaciei malat dehidrogenazei spre formarea oxalacetatului.

Rezultatul net pentru o rund a ciclului Krebs:

- o molecul de acetil-CoA intr n ciclu i 2 molecule de CO2 sunt eliberate;
- o molecul de oxalacetat este utilizat pentru a forma citrat (n prima reacie a ciclului) i o
molecul de oxalacetat este regenerat (n ultima reacie) aceasta poate ncepe o nou rund de
reacii;
- n consecin, o molecul de oxalacetat poate asigura oxidarea unui numr considerabil de
molecule de acetil-CoA, ntruct se regenereaz la finalul fiecrei runde a ciclului (s-ar putea
considera c oxalacetatul are un rol catalitic n cadrul ciclului Krebs); ntr-adevr, oxalacetatul se
gsete n celul n concentraii mici, dar aceste cantiti mici de oxalacetat pot asigura degradarea
unor cantiti mari de acetil-CoA.
Rolurile ciclului Krebs
Ciclul Krebs are un rol central n cadrul metabolismului, care nu se limiteaz doar la
oxidarea acetil-CoA; el este un proces amfibolic, avnd caracter dublu: catabolic i anabolic.
1. Latura catabolic a ciclului Krebs const n degradarea acetil-CoA, cu generare de ATP.
Exist 4 reacii de oxidare n ciclul Krebs (3 NAD +-dependente i una FAD-dependent);
energia liber degajat n aceste reacii este conservat sub forma a 3 molecule de NADH i a unei
15

molecule de FADH2; aceste coenzime reduse vor transfera echivalenii reductori n lanul
respirator, cuplat cu fosforilarea ADP => sintez de ATP (3 molecule pentru fiecare molecul de
NADH i 2 molecule pentru FADH2, deci n total 11 molecule de ATP sintetizate n procesul
fosforilrii oxidative).
n reacia succinat tiokinazei se sintetizeaz 1 molecul de ATP prin fosforilare la nivel de
substrat.
Bilanul energetic global al ciclului Krebs este, deci, de 12 molecule de ATP.

2. Latura anabolic a ciclului Krebs const n faptul c unii intermediari ai si servesc ca

precursori pentru o varietate larg de produi, n cadrul unor procese de biosintez.
Rol n gluconeogenez: toi intermediarii ciclului Krebs pot fi folosii la sinteza de
glucoz; dup transformarea n oxalacetat, ei se pot angaja n procesul gluconeogenezei. Scheletele
de C ale multor aminoacizi pot fi utilizate pentru sinteza de glucoz dup transformare n diveri
intermediari ai ciclului Krebs.

16

 -cetoglutaratul i oxalacetatul se transform, prin reacii de transaminare, n glutamat i

aspartat; aceti aminoacizi vor servi ulterior la sinteza altor aminoacizi, precum i la sinteza
nucleotidelor purinice i pirimidinice.
Succinil-CoA este utilizat la sinteza hemului, gruparea prostetic a hemoproteinelor
(hemoglobin, mioglobin, citocromi).
Citratul joac rol de transportor al radicalului acetil (din componena acetil-CoA
provenit din degradarea glucozei) din mitocondrie n citoplasm, n vederea participrii la
biosinteza acizilor grai.
Etapele degradrii totale a glucozei
n anaerobioz, molecula de glucoz este degradat parial (pn la lactat), cu generarea a
2 molecule de ATP.
n aerobioz, glucoza este degradat total, la CO2 i H2O, cu implicarea mai multor
procese:
I. Glicoliza pn la piruvat, urmat de decarboxilarea oxidativ a piruvatului la acetil-CoA.
II. Oxidarea acetil-CoA la CO2 n ciclul Krebs, cu conservarea energiei eliberate sub forma
coenzimelor reduse NADH i FADH2.
III. Oxidarea coenzimelor reduse n lanul respirator, cuplat cu sinteza de ATP (procesul
fosforilrii oxidative).

17

 Bilanul energetic al degradrii totale, aerobe, a moleculei de glucoz:

1. Glucoz piruvat (glicoliza):
- reaciile de fosforilare la nivel de substrat 2 ATP
- reacia gliceraldehid-3-P dehidrogenazei: 2 x NADH 2 x 3 ATP = 6 ATP n procesul
fosforilrii oxidative
=> bilan al glicolizei desfurate n condiii aerobe: 2 + 6 = 8 ATP.
2. Piruvat acetil-CoA (reacia piruvat dehidrogenazei):
- 2 x NADH 2 x 3 ATP = 6 ATP n procesul fosforilrii oxidative.
3. Acetil-CoA 2 CO2 (ciclul Krebs):
- 2 x 12 ATP = 24 ATP.
Total: 8 + 6 + 24 = 38 ATP.
Realiznd o comparaie ntre bilanul energetic al degradrii anaerobe a glucozei, prin
glicoliz la lactat (2 ATP) i bilanul degradrii totale aerobe (38 ATP), se observ c degradarea
aerob permite eliberarea ntregii cantiti de energie liber coninut n molecula de glucoz i
conservarea acesteia sub form de ATP, deci are o eficien energetic mult mai mare n comparaie
cu degradarea anaerob, care elibereaz doar aproximativ 5% din energia moleculei de glucoz.

n concluzie, n celule exist dou ci de sintez a ATP-ului:

n condiii aerobe, cea mai mare parte a ATP-ului se produce n procesul fosforilrii
oxidative: aceasta este calea major, dpdv cantitativ, de sintez a ATP-ului n celul;
n condiii anaerobe, fosforilarea oxidativ nu poate avea loc singura posibilitate de
generare a ATP-ului este fosforilarea la nivel de substrat (deci aceast cale, minor dpdv
cantitativ, devine foarte important n condiii de anaerobioz).

18

Reacii anaplerotice
Sunt reacii care au rolul de a aproviziona ciclul Krebs cu intermediari care au fost
ndeprtai din acest proces pentru reacii biosintetice (n limba greac ana nseamn din nou,
iar pliro nseamn a umple, a completa). n condiii normale, ntre procesele care ndeprteaz
unii compui din ciclul Krebs i cele care reintroduc aceti compui napoi n ciclu exist un
echilibru, astfel nct concentraiile intermediarilor din aceast cale metabolic rmn relativ
constante. Depleia unora din intermediarii ciclului Krebs nu ar mai permite funcionarea sa optim.
1. Piruvat carboxilaza catalizeaz principala reacie anaplerotic, ce duce la generarea de
oxalacetat necesar pentru angajarea acetil-CoA spre degradare n ciclul Krebs.

Reacia de carboxilare a piruvatului se realizeaz cu participarea biotinei (o vitamin

hidrosolubil) n calitate de coenzim. Piruvat carboxilaza este activat alosteric de acetil-CoA
(enzima are o activitate foarte redus n absena acestui modulator); astfel, pe msur ce acetil-CoA
se formeaz din piruvat (deci din glucoz), ea asigur automat propria sa degradare n ciclul Krebs
prin formarea de oxalacetat.
Scderea concentraiei oricrui intermediar al ciclului Krebs va duce la acumularea de
acetil-CoA aceasta va activa piruvat carboxilaza va crete producia de oxalacetat, ceea ce va
permite angajarea unor cantiti sporite de acetil-CoA n ciclul Krebs.
2. Malic enzima catalizeaz carboxilarea reductiv a piruvatului, n prezen de NADPH, cu
formare de malat.

Atunci cnd se desfoar de la malat spre piruvat, reacia genereaz NADPH, care este
donor de echivaleni reductori pentru reacii de biosintez reductiv.
3. Oxidarea glutamatului sub aciunea glutamat dehidrogenazei duce la formarea de cetoglutarat.
Glutamat + NAD+ + H2O -cetoglutarat + NADH+H+ + NH3
REGLAREA CICLULUI KREBS
Viteza de desfurare a ciclului acizilor tricarboxilici depinde de urmtorii factori:
1. Disponibilitatea de substrate: acetil-CoA i oxalacetat.
19

Atunci cnd, n urma degradrii glucozei (sau a altor substrate energogene), se formeaz
cantiti mari de acetil-CoA, activitatea ciclului Krebs va fi crescut.
2. Disponibilitatea de NAD+ (n forma oxidat); aceasta, la rndul su, depinde de
reoxidarea NADH (format n cele trei reacii de dehidrogenare) n lanul respirator; viteza de
desfurare a lanului respirator depinde de disponibilitatea de ADP, deci de starea energetic a
celulei:
- stare energetic joas (tradus prin [ATP] i [ADP] ) disponibilitatea mare de ADP
va duce la creterea vitezei fosforilrii oxidative accelerarea oxidrii NADH n lanul respirator
=> creterea cantitii de NAD+ n forma oxidat aceasta va permite creterea vitezei ciclului
Krebs;
- stare energetic ridicat (tradus prin [ATP] i [ADP] ) scderea disponibilitii ADP
va duce la scderea vitezei fosforilrii oxidative ncetinirea oxidrii NADH n lanul respirator
=> disponibilitii de NAD+ n forma oxidat scderea vitezei ciclului Krebs.
3. Activitatea celor trei enzime care catalizeaz reaciile exergonice din cadrul ciclului
Krebs: citrat sintaza, izocitrat dehidrogenaza, -cetoglutarat dehidrogenaza.
Enzima

Modulatori pozitivi

Citrat sintaza

ADP

Izocitrat dehidrogenaza

ADP

Modulatori negativi
ATP
NADH
Citrat
ATP
NADH
Succinil-CoA
NADH

-cetoglutarat dehidrogenaza

a) Citrat sintaza - este modulat alosteric:

- pozitiv de ctre ADP;
- negativ de ctre ATP, NADH i citrat.
b) Izocitrat dehidrogenaza - este cel mai important punct de control al ciclului acizilor
tricarboxilici (etapa limitant de vitez). Aceast enzim este modulat alosteric:
- pozitiv de ctre ADP;
- negativ de ctre ATP i NADH.
c) -cetoglutarat dehidrogenaza - este inhibat alosteric de ctre succinil-CoA i NADH
(produi de reacie).
Existena unor cantiti mari de ATP n celul semnific satisfacerea necesitilor energetice
ale celulei ATP determin scderea vitezei de desfurare a ciclului Krebs prin inhibarea
alosteric a dou dintre enzimele supuse controlului metabolic.
Concentraii mari de ADP n celul semnific depleia rezervelor de ATP ADP determin
accelerarea ciclului Krebs prin activarea a dou dintre enzime, n felul acesta generndu-se noi
cantiti de ATP.
Acumularea de NADH (produs al reaciilor catalizate de izocitrat dehidrogenaza i cetoglutarat dehidrogenaza) duce la inhibarea activitii acestor dou enzime, precum i a citrat
sintazei.
Acumularea de citrat (produs de reacie al citrat sintazei) i de succinil-CoA (produs de
reacie al -cetoglutarat dehidrogenazei) determin inhibiia feed-back a celor dou enzime.

20

SISTEME DE TRANSPORT AL ECHIVALENILOR REDUCTORI

DIN CITOSOL N MITOCONDRIE
n condiii aerobe, NADH-ul format n reacia gliceraldehid-3-P dehidrogenazei din glicoliz
(proces citosolic) este reoxidat n lanul respirator mitocondrial. n acest scop, NADH trebuie s
treac din citoplasm n mitocondrie, ns membrana mitocondrial intern este impermeabil
pentru NADH. Din acest motiv, sunt necesare sisteme de transport al echivalenilor reductori din
NADH citosolic spre matricea mitocondrial pe o cale indirect, cu ajutorul aa-numitelor navete.
Funcionarea acestor sisteme de transfer se bazeaz pe existena unor dehidrogenaze cu
localizare dubl, citosolic i mitocondrial.
1. Naveta malatului (funcioneaz n ficat i miocard):

- NADH reduce oxalacetatul la malat sub aciunea malat dehidrogenazei (MDH) citosolice;
- malatul este transportat n mitocondrie cu ajutorul transportorului malat/-cetoglutarat;
- n matrice, malatul este oxidat la oxalacetat, echivalenii reductori fiind transferai pe
+
NAD sub aciunea MDH mitocondriale NADH format va fi oxidat n lanul respirator
generarea a 3 molecule de ATP;
- oxalacetatul se ntoarce n citosol sub form de aspartat (format printr-o reacie de
transaminare).
2. Naveta glicerol-fosfatului (funcioneaz n muchiul scheletic i creier):
- NADH reduce dihidroxiaceton-fosfatul la glicerol-3-P sub aciunea glicerol-3-P
dehidrogenazei citosolice (NAD+-dependent);
- o glicerol-3-P dehidrogenaz (FAD-dependent) legat de faa extern a membranei
mitocondriale interne transfer echivalenii reductori de pe glicerol-3-P pe FAD, cu formare de
FADH2; ulterior acetia sunt transferai pe coenzima Q din lanul respirator, n final generndu-se 2
molecule de ATP.

21

22