Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Interaciuni hidrofobe
Originea
Reprezentarea schematic
Atracia dintre sarcini opuse
- NH3 OOC Distribuirea hidrogenului
>NH-----O=C<
ntre atomi electronegativi
- + (N, O)
Fluctuaiile n nori electronici
din jurul moleculelor
polarizeaz atomii nvecinai
Gruprile hidrofobe
interacioneaz nefavorabil cu
apa i au tendina s se
mpacheteze mpreun
pentru a exclude moleculele
de ap. De asemenea, atracia
implic i forele Van der
Waals.
n plus, aceste interaciuni sunt operaionale numai pe distane foarte mici (1 sau chiar mai puin),
ceea ce se traduce prin complementaritatea dintre un determinant antigenic (epitop) i un situs de legare
a unui anticorp (principiul cheie-broasc), care asigur apropierea celor dou specii reactante pn la
o distan care s depeasc intensitatea acestor interaciuni.
k2
AgAc
fraciunea legat
n orice moment, o parte din reactanii liberi se combin cu o constant de viteza kA, pentru formarea
complexului imunologic. n alceai timp, o fraciune din complex se disociaz, cu o constant de vitez
Kd , dnd antigen liber i anticorp liber. Reacia se desfoar pn la atingerea echilubrului, moment
care corespunde invariablitii cantitilor de antigen prezente n fraciunea liber i n cea legat.
Constanta de afinitate, K, care exprim cantitatea de antigen liber necesar pentru ocuparea a jumtate
dintre poziiile de legtur ale unui anticorp, permite estimarea intesitii imunointeraciunilor. Valorile
constantei de afinitate sunt cuprinse, n general, ntre 5x104 i 1023 moli/L, fiind date de reaciile:
K=
ka
kd
[ AgAc]
[ Ag ] [ Ac ]
,unde Ka reprezint constanta vitezei de formare a complexului imunologic, Kd este constanta vitezei de
disociere a complexului AgAc, iar [Ag], [Ac] si [AgAc] sunt concentraiile antigenului, anticorpului i
respectiv complexului lor n soluie.
Viteza de formare a complecilor antigen anticorp depinde de viteza de difuzie a celor dou molecule
n soluie. Viteza de disociere a unui imunocomplex este dependent de tria interaciunii
(complementaritate + legturi necovalente).
n acest context, afinitatea unui anticorp poate fi descris ca o proprietate termodinamic indicatoare a
probabilitii ca epitopul i anticorpul s fie asociai ntr-un complex. Afinitatea este msurat ntre un
determinant antigenic i situs de legare a unui anticorp. n condiiile n care n molecula unui anticorp
exist 2 sau mai multe centre de legare, interaciunile imunochimice pot fi exprimate i prin intermediul
aviditii , care i pune amprenta asupra afinitii. Alturi de aviditate, la afinitatea unui anticorp
contribuie i valena sa (exprimat prin numrul de situsuri antigenice), valena antigenei i modificrile
conformaionale care se produc n anticorp sau antigen n timpul formrii unei legturi. Astfel, un
antigen cu mai muli epitopi care se repet va interaciona mult mai puternic cu un anticorp dect cu
acelai antigen care nu posed epitopi repetabili. n plus, interaciunea dintre acelai antigen i un
anticorp IgM (valen mai mare) este mult mai intens dect cu o imunoglobulin IgG cu aceeai centri
de legare. Aviditatea nu este o proprietate termodinamic, ea fiind deosebit de util pentru o descriere
din punct de vedere funcional, n anumite condiii de testare. Datorit acestui fapt, se prefer
caracterizarea activitii i concentraiei unui anticorp dintr-o prob biologic prin intermediul titrului
su.
Exist i cazuri n care anticorpii indui de un antigen pot reaciona ncruciat cu o gen nenrudit.
Reactivitatea ncruciat a anticorpilor se manifest atunci cnd:
Modul n care diversitatea molecular a anticorpilor, datorat organizrii la nivel genetic, este transpus
n specificitatea antigenelor la nivel molecular a fost intens studiat, att din punct de vedere structural,
ct i funcional. Cunoaterea aprofundat a relaiei dintre structur i funcie este indispensabil n
eforturile de adaptare raional a anticorpilor la necesiti specifice.
Polimerii astfel obinui prezint anumite caracteristici atractive, ntre care se remarc: abilitatea de a fi
preparai i utilizai n solveni organici, capacitatea de a-i pstra, pe perioade lungi de timp, potenialul
de recunoatere molecular prin conservare n stare uscat i stabilitatea termic pn la temperaturi de
125 C. n plus, dac polimerizarea se efectueaz n prezena unei molecule ablon corespunztoare,
ei pot fi uor adaptai la substraturi noi.
Polimerii cu amprent molecular sunt aplicabili ntr-o varietate de configuraii : polimeri compaci,
granule sferice (obinute prin polimerizarea prin precipitare, cu diametre sub 200 nm i excelente
proprieti de recunoatere pentru diferite molecule int) sau membrane. Un format corespunztor al
polimerilor cu amprent molecular trebuie s fie selectat nainte de aplicarea materialului imprimat.
n acest context, polimerii cu amprent molecular sunt considerai, n prezent, materiale accesibile,
complementare i/sau alternative la receptorii biologici
Legturi covalente
Interaciuni
Legturi de hidrogen
Interaciuni Van der Waals hidrofobe
Interaciuni de tip eteri coroan / ciclodexterine
Legturi metal ligand
Fore ionice
Efectul de imprimare molecular este maximalizat atunci cnd ablonul interacioneaz cu mai multe
centre de legare, iar interaciunile implicate au determinare direcional sau spaial
Solvenii cu utilizare tipic pentru acest tip de imprimare molecular sunt cloroformul,
acetonitrilul i dimetilsulfoxidul. Solventul ndeplinete dublu rol : mediu de polimerizare i
favorizarea crerii unei structuri poroase n polimerul rezultant.
Aplicarea polimerizrii cu imprimare molecular necovalent la raporturi molare diferite ntre
monomeri conduce la materiae capabile de legare selectiv a pesticidelor, a unor hormoni
steroizii vegetali sau a unor medicamente.
Imprimarea semicovalent
Este o tehnic hibirid ingenioas care combin cele mai atractive caracteristici ale celorlalte
dou metode. Molecula amprent este legat de monomerul funcional printr-un distanier de
sacrificiu (de exemplu un ester carbonat). Polmerizarea este urmat de clivajul esterului, n
urma cruia se degaj dioxid de carbon i rezult un monomer capabil s formeze un centru
necovalent de recunoatere.
Se presupune c formarea complexului amprent monomer se produce prin intermediul
funcionalitilor selectate ale moleculelor corespunztoare.
De dat relativ recent, prin obinerea unor noi monomeri specifici pentru o amprent dat, s-au
deschis noi perspective n imprimarea molecular. Atingerea acestui deziderat presupune
modificarea monomerilor existeni sau prepararea unor entiti complet noi, n scopul realizrii
unei asociaii n mai multe puncte cu molecula amprent. Creterea triei i specificitii
caracteristic complecilor de acest tip ar trebui s se reflecte n afinitatea/aviditatea mai nalt a
polimerilor cu amprent molecular.
Dup formarea complecilor amprent-monomer, n amestecul de polimerizare se adaug un
azo-iniiator (de regul, azo N, N-bis-izobutironitrilul). Polimerizarea radicalic este iniiat
prn homoliz fotochimic prin radiaii ultraviolete (0 15 C). S-a constatat c polimerii cu
amprent molecular obinui prin fotopolimerizare la temperaturi joase (0 C) manifest
proprieti mbuntite de recunoatere molecular. S-au omis ipoteze conform crora
complecii amprent monomer sunt mai stabili la temperaturi mai joase, astfel nct n
polimerii rezultai imprimrile sunt mai omogene i mai bine definite.
Dupa polmerizare care dureaz ntre 10 i 24 de ore, polimerul este supus unei prelucrri
suplimentare care vizeaz contraextracia moleculei ablon. Succesul utilizrii polimerilor cu
amprent molecular depinde, n mare msur, de reuita acestei etape. n cazurile tipice,
extracia se efectueaz n amestecuri de solveni protici i acizi (de exemplu metanol cu acid
acetic 10 %). Aceste amestecuri suprim interaciunile formatoare de legturi i extrag, aproape
cantitativ, amprenta din miezul polimeric. Principalele proceduri experimentale utilizate sunt
extracia Soxhlet, splarea intensiv sau splarea alternativ acido-bazic. ndeprtarea
ablonului este esenial din dou puncte de vedere :
- cu ct este mai cantitativ, cu att mai mare numrul de centre active relevate n polimerii cu
amprent molecular
- amprenta remanent n polimerii cu amprent molecular poate sngera. ntr-un asemenea
caz, chiar i o cantitate minim de ablon (adugat manual n prob), poate influena
semnificativ rezultatele unei analize. O souie elegant a acestei probleme const n utilizarea, n
timpul polimerizrii, a unui ablon fictiv (analog al analitului). Scurgerea ablonului fictiv,
eventual aprut pe parcursul unei asemenea proceduri, nu interfer n analiz, ci se constituie
ntr-o etap de separare a 2 molecule analoage.
O variant preparativ o reprezint polimerizarea in situ a amestecurilor de imprimare
molecular, de exemplu n tuburi digestive sigilate, cnd se obin retele polimerice, rigide i nalt
reticulate, care prezint o structur macroporoas.
Prin metode alternative de polimerizare (n suspensie, n dispersie, n microgranule) se pot
obine particule sferice de mrime determinat.
O nou metod de sintez a polimerilor cu amprent molecular este metoda epitopului, care se
bazeaz pe utilizarea ca amprent a unui compus, a crui structur reprezint un fragment
constituitiv al unei molecule mai mari.
Polimerii cu amprent molecular pot fi obinui i sub forma unor membrane subiri i stabile
care pot fi utilizare direct n senzori. Membranele pe baz de polimeri cu amprent molecular
pot fi obinute prin tehnici cum ar fi :
- polimerizarea pe suprafaa unui filtru de sticl
- precipitarea prin inversie de faze
- evaporarea solventului
- generarea unor membrane de tip film pe cursoare de sticl
- depunere prin pulverizare i piroliza unor amestecuri de polifurfurilalcool/polietilenglicol pe
suporturi macroporoase.
Exist toate premizele ca imprimarea molecular s devin o cale neted ctre o producie
eficienta i simpl (direct) de senzori. Din punct de vedere virtual, poate fi imprimat orice
substan cu mas molecular mic. Recent, s-a realizat detectarea cu senzori pe baz de
polimeri cu amprent molecular a unor entiti mai mari de tipul proteinelor, bacteriilor i a
celulelor vii, fapt care a sporit considerabil aplicabilitatea i perspectivele imprimrii
moleculare.