Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu

Cluj - Napoca
Facultatea de Farmacie
Disciplina de Metodologia Cercetrii tinifice

Streptomicina

Ardelean Alexandra Diana

Balea Valentina
Boncsina Hilda
Bora Ramona Maria
Bota Sorina Andrada

Cuprins
Introducere..................................................................................... 3
1.

ncadrare n clasa de substane medicamentoase................................4

2. Farmacopeile n care substana medicamentoas este oficinal (ca atare sau

n forme farmaceutice).......................................................................7
3.

Proprietile fizico-chimice...........................................................9

4. Proprieti farmacologice..............................................................10
a. Mecanism de aciune:...............................................................10
b.Farmacocinetic:.....................................................................11
c.Interaciuni medicamentoase:......................................................12
d.Indicaii i mod de administrare:..................................................12
e. Reacii adverse , contraindicaii i precauii:...................................15
5. Produse farmaceutice care conin substana medicamentoas ..................18
a. Regimul legal de eliberare din farmacie:........................................18
6. Caracterizarea analitic a substanei medicamentoase ...........................19
a. Metode volumetrice:.................................................................19
b. Metode spectrale.....................................................................19
1.Metode spectrofotometrice UV-VIS:............................................19
2. Metoda spectrometric IR.......................................................22
c. Metode cromatografice..............................................................22
1) Cromatografia pe strat subire(CSS)..........................................22
2) Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC)..................26
3) Gaz cromatografia (GC).........................................................30
d. Metode electroforetice...............................................................31
e. Metode termince......................................................................34
1. Analiza termogravimetric (TG)...............................................34
2 .Analiza calorimetric diferenial (DSC).....................................37
Concluzii generale..........................................................................38
Bibliografie.................................................................................. 39
2

Introducere

Streptomicina este un antibiotic din grupa aminglicozidelor; a fost

izolat pentru prima oar n 19 octombrie 1943 de ctre Albert Schatz de
la Rutgers University - The State University of New Jersey. Prima
molecul descoperit a fost una natural, extras din specii de
Streptomyces. Aceasta acioneaz asupra bateriilor gram-negative fiind
deosebit de important mai ales n combaterea tuberculozei.
Streptomicina este activ fa de micobacterii atipice (M.tuberculosis,
M. kansasii, M. avium) ct i fa de unii bacili Gram-negativ, coci Grampozitiv i Gram-negativ.
Se administreaz cel mai des injectabil, pe cale intramuscular, dar
exist i sub form de colir n combinaie cu alte antibiotice.
Streptomicina se folosete, asociat altor chimioterapice majore, n
schemele de terapie iniial a tuberculozei, i este considerat ca o
alternativ pentru etambutol n cadrul polichimioterapiei. Este indicat
mai ales la bolnavii cu forme severe de tuberculoz (meningit
tuberculoas sau boala diseminat) precum i n tratamentul infeciilor
rezistente la alte tuberculoase.
Deoarece este cunoscut cu un grad ridicat de toxicitate, mai ales la
administrare prelungit, streptomicina este folosit in prezent doar ca
antibiotic de rezerv, si numai in tratamentul tuberculozei.
Scopul acestui referat este caracterizarea streptomicinei din punct de
vedere al proprietailor fizico-chimice, farmacologice, precum i
prezentarea unele metode de analiz ale acestui antibiotic.

1. ncadrare n clasa de substane medicamentoase

Streptomicina face parte din clasa aminoglicozidelor.
Aminoglicozidele sunt antibiotice cu structur heterozidic,
constituite dintr-un aglicon (genin)de care se leag glicozidic un numr
variabil de oze. Moleculele aminoglicozidelor sunt polare i policationice.
Sunt denumite i aminozide.
Primele aminoglicozide descoperite au fost molecule naturale,
produse de specii de Streptomyces (streptomicina, neomicina,
kanamicina, tobramicina) sau Micronospora (gentamicina, sisomicina).
Ulterior, au fost dezvoltate aminoglicozide de semisintez (amikacina,
isepamicina, netilmicina, etc).
Dup natura agliconului, aminoglicozidele se clasific n:
-

aminoglicozide cu aglicon streptidinic (1,3-biguanidino-inozitol):

streptomicina, dihidrostreptomicina
aminoglicozide cu aglicon 2-dezoxistreptaminic:
diozide n 4,5: neomicine i
paromomicine
diozide
n
4,6:
kanamicine,
gentamicine i analogi

Ozele sunt n form furanic sau piranic. Tipurile de legare pot fi:
-

aglicon-oz-oz: streptomicina
oz-aglicon-oz:
aminoglicozide
cu
aglicon
2-dezoxistreptaminic{Ovidiu, 2013, Chimia i aciunea antibioticelor
antibacteriene}

Figura 1.
Figura 2.
D-Streptidina
2-Dezoxi-Streptamina
*Sursa:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/

Aminoglicozidele sunt mprite n 3 generaii, care difer prin

spectrul antibacterian, rezistena bacterian i toxicitate:

Generaia I aminoglicozide clasice naturale ( Streptomicina,

Kanamicina, Neomicina, Spectinomicina, Paromomicina);
Generaia II aminoglicozide biosintetice naturale (Gentamicina,
Tobramicina, Sisomicina);
Generaia III aminoglicozide semisintetice obinute prin
acilarea unor aminoglicozide din generaiile precedente
(Netilmicina,
Amikacina,
Dibekacina,
Sagamicina,
Episisomicina){Neagu, 2002, Aminoglicozidele- Actualizare i
reevaluare n practica medical modern}.

Streptomicina este un antibiotic natural, izolat din culturi de

Streptomyces griseus (Waskman, 1943). Se obine i n prezent prin
biosintez. Structura streptomicinei se ncadreaz n tipul aglicon-ozoz. Cele dou oze sunt L-streptoza i N-metil-L-glucozamina, care
formeaz streptobiozamina{Ovidiu, 2013, Chimia i aciunea
antibioticelor antibacteriene}.

Figura 3.
Streptomicina
*Sursa: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/

2. Farmacopeile n care substana medicamentoas este

oficinal (ca atare sau n forme farmaceutice)
Datorit caracterului bazic, streptomicina poate forma sruri. n
terapie se utilizeaz sulfatul de streptomicin{Ovidiu, 2013, Chimia i
aciunea antibioticelor antibacteriene}.

Figura 4.
Sulfatul de streptomicin
*Sursa:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/

Sulfatul de streptomicin este oficinal n:

Farmacopeea Romn ediia a X-a:

7

Sulfat de streptomicin (Streptomycini sulfas){, 1996,

***Farmacopeea Romn}
British Pharmacopeia 2009:
Streptomycin Sulphate
Streptomycin Injection
(Streptomycin Injection is a sterile solution of
Streptomycin Sulphate in Water for Injections. It is either
supplied as a ready-to-use solution or it is prepared by
dissolving Streptomycin Sulphate for Injection in Water for
Injections.
The injection complies with the requirements stated under
Parenteral Preparations and with the following
requirements){, 2009, ***Farmacopeea Britanic}.
European Pharmacopeia:
Streptomycin
Sulphate{,
2012,
***Farmacopeea
European}
U.S. Pharmacopeia
Streptomycin Sulfate
Streptomycin
Injection{,
2008,
***Farmacopeea
American}

3. Proprietile fizico-chimice
8

Descriere: Pulbere alb sau aproape alb, fr miros sau cu

miros caracteristic, gust slab amar, higroscopic.
Solubilitate: Foarte uor solubil in ap, insolubil n alcool,
chloroform i eter.
pH-ul solutiei: 4,5-7,0 (soluia A)
Punct de topire: 12C
Masa molecular: 581.57406 g/mol
Comportare fata de acizi si baze:
Conservare: n recipient nchise etan, ferit de lumin, la cel
mult 25C{, , https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov}.

4. Proprieti farmacologice
a. Mecanism de aciune:
Streptomicina are un mecanism de aciune bactericid pe germeni
n curs de multiplicare. Fiind o aminoglicozida, actioneaza in mod identic
cu restul reprezentantilor din aceasta clasa, ptrunzd n celulele
bacteriene prin difuziune i transport activ. Acest transport activ implic
9

prezena oxigenului, ca urmare, bacteriile anaerobe se exclud din spectrul

de activitate al ntregii clase de aminoglicozide. Dup ptrunderea n
celul, streptomicina se fixeaz irevirsibil pe subunitile ribozomale 30S,
inhibnd astfel traducia ( mai exact cele trei etape de citire a informaiei
genetice de pe ARN mesager: iniierea, elongarea i translocarea) i
determinnd erori de traducie (ncorporare de aminoacizi eronai n
structura proteinelor).
Pot aprea mai multe mecanisme de rezisten la streptomicina :
o rezisten naturala apare n cazul bacteriilor anaerobe, iar n cazul
bacteriilor aerobe pot aparea rezistene ctigate plasmidic ca urmare a
modificrii activitii enzimatice a germenilor, care conduce la
transformarea ctorva funciuni chimice indinspensabile activitii
aminoglicozidelor. Reaciile enzimatice constau n: acetilarea grupelor
funcionale amino ale agliconului sau ozelor, fosforilarea grupelor
hidroxilice, adenilarea grupelor hidroxilice. Inactivarea enzimatic se
realizeaz n spaiul periplasmatic al celulei bacteriene.
Unele organisme gram-negative i Enterococcus sp determin
alterarea intei ribozomale cnd selecioneaz ntr-o singur etap mutani
cu rezisten nalt , un alt mecanism ar fi alterarea penetrabilitii n
bacterie prin mutaii n genele care codific lanul transportor : se
realizeaz impermeabilizarea membrane externe datorit scderii
transportului activ {Ovidiu, 2013, Chimia i aciunea antibioticelor
antibacteriene}.
b.Farmacocinetic:
Absorbia din tubul digestiv este neglijabil, datorit hidrofliei
accentuate a moleculei. n general streptomicina trece greu prin
membrane celulare,deci trece greu prin tubul digestiv n snge (data pe
cale oral) trece greu din snge n esuturi.
Pe cale oral streptomicina nu se absoarbe,dar nici nu e distrus de
sucurile digestive, ci se elimin intact, ca atare, prin fecale n procent de
98%, steriliznd n bun parte flora intestinului gros {Ovidiu, 2013,
Chimia i aciunea antibioticelor antibacteriene}.
Absorbia intramuscular a streptomicinei este variabil. La adulii cu
o funcie renala normal, o doza de 500mg streptomicin realizeaz
concentraii plasmatice de 5-20 mcg/mL la 1-2 ore dup administrare, iar
10

la o doza de 1 g se observa concentratii de 25-50 mcg/mL{, ,

Streptomycin}.
Cum era de asteptat, streptomicina este prezent n concentraii mari
n ser 5 minute dup adminstrarea unei singure doze intravenoase, dup
ce aceeai doz a fost administrat intramuscular. Totui apare tendina ca
s rmn mai mult timp o concentraie mai mare n cazul administrrii
intramusculare fa de cea intravenoas{BLUGGS, 1946, The
absorption`, distribution`, and excretion of streptomycin in man}.
Dup administrare intramuscular, aminoglicozidele difuzeaz n
compartimentele extracelulare, fr a ajunge n esuturile adipoase sau la
nivelul sistemului nervos central. Penetreaz bine n esutul renal, unde
prezint tendin de cumulare cu riscul apariiei toxicitii renale. Ca
urmare a reaciilor adverse renale, pe parcursul tratamentului sistemic cu
aminoglicozide, se recomand controlul concentraiilor serice
(monitorizare), adaptndu-se posologiile n funcie de valoarea
creatininei, mai ales la pacienii vrstnici sau n caz de insuficien renal.
Eliminarea se realizeaz prin filtrare gromerular, sub form
nemodificat. Timpul de njumtire este de circa 2-3 ore{Ovidiu, 2013,
Chimia i aciunea antibioticelor antibacteriene}.
c.Interaciuni medicamentoase:
Streptomicina, n primul rnd se evit a se asocia cu alte
antibiotice aminoglicozidice sau alte medicamente cu potenial nefrotoxic
i ototoxic pentru a evita creterea riscului de oto- i respectiv nefrotoxicitate prin mecanism de sinergie de potenare.
Potenialul oto/nefrotoxic poate fi crescut de asocierea
streptomicinei cu diuretice de ans care au efecte adverse similare
precum: furosemidul, acidul etacrinic, bumetanidul, iar n tratamentul
concomitent al streptomicinei cu aceste diuretice se recomand o
monitorizare a funciilor renale i deasemenea o monitorizare a auzului
mai ales n cazul grupelor de personae cu risc crescut precum nounscuii.
Dimenhidrinatul
i
alte
antiemetice
(difenhidramina,
clorfeniramin, prometazina, scopolamina, trimetobenzamid) pot masca
simptomele vestibulare asociate ototoxicitii indusa de streptomicin
(ameeli, tinitus sau vertij).
11

Nefrotoxicitatea mai poate fi potenat n cazul asocierii

streptomicinei cu: aciclovir, amfotericina B, cisplatina, ciclosporine,
foscarnet, ganciclovir, salicilati, vancomicina. Asocierea cu cidofovir este
contraindicat i se recomand administrarea cidofovir-ului doar dup 7
zile de la oprirea tratamentuli cu streptomicin.
Cresc intensitata blocului neuromuscular: curarizante, anestezice
generale, miorelaxante centrale, sulfat de magneziu{, , ANM;, ,
Streptomycin}.
d.Indicaii i mod de administrare:
Spectrul de activitate al streptomicinei include: coci si bacili
gram pozitivi ( Streptococcus viridans, Staphylococcus aureus (MSSA) ,
Staphylococcus epidermidis, Bacillus antracis), Mycobacterium avium,
Mycobacterium avium complex (MAC), Mycobacterium bovis,
Mycobacterium intracellulare, Mycobacterium kansasii ,Mycobacterium
leprae ,Mycobacterium marinum, fiind bactericid pe Mycobacterium
tuberculosis i bacili gram negativi precum Pasteurella tularemia,
Yersinia pestis.
Indicaiile principale fiind: la administrare partenteral sub forma
de sulfat (intramuscular): tuberculoz n asocieri polichimioterapice,
tularemie, pest, endocardit bacterian produs de Streptococcus
viridans i de Enterococcus faecalis, septicemii n asociere cu peniciline;
la administrare oral, rar utilizat, n dizenterie, enterocolite, sau la
administrare locala n tratamentul infeciilor oculare{Ovidiu, 2013,
Chimia i aciunea antibioticelor antibacteriene}.
Pentru a evita dezvoltarea unei rezistene la streptomicin a
bacteriilor i implicit pentru a menine eficiena antibioticului, se
recomand ca streptomicina s se foloseasc doar pentru a trata infecii
care sunt dovedite a fi cauzate de bacterii.
Speciile de Enterococcus prezint n general rezisten la
concentraiile terapeutice de aminoglicozide, acestea fiind eficiente n
tratamentul infeciilor cu Enterococcus sp doar ntr-o terapie de asociere
sinergic potennd efectul penicilinelor sau a vancomicinei. Nivelul de
sinergism este dat de rezistena speciei de Enterococcus la
aminoglicozide{, , Streptomycin}.
Streptomicina se administreaz injectabil intramuscular profund.
Locul injeciilor trebuie alternat, iar concentraia soluiei injcetate nu
trebuie sa depaeasc 500 mg/ml.
12

n tratamentul infeciilor cu bacili gram negativi, n meningit

sau infecii ale tractului respirator precum pneumonia se uitilizeaza in
asociere cu alte antibiotice ( peniciline) iar doza recomandat pentru
aduli este de 1-2 g/ zi , administrate intramuscular la 6-12 ore. n
endocardita bacterian cu streptococi/enterococi, doza uzual este de
2g/zi, fractionat la 12 ore, timp de o sptmn i 1g/zi frac ionat la 12
ore pentru urmtoarea sptmn, n asociere cu penicilin.
Pentru tratamentul tuberculozei se recomand administrarea
intramusculara a 15mg/kg pe zi fr a depi 1 g/zi, zilnic sau de 2-3 ori
pe sptmn n asociere cu alte chimioterapice atituberculoase. Doza
maxim zilnic va fi redus la 500-700 mg la pacienii cu vrsta de peste
40 de ani i la cei cu greutate mai mica de 50 kg, datorit riscului crescut
de toxicitate. Dozele vor fi reduse i la pacienii cu insuficien renal, iar
concentraiile plasmatice a medicamentului vor fi monitorizate.
Pentru tratamentul tularemiei doza uzual este de 1-2 g /zi
fracionat la intervale de 12 ore timp de 7-10 zile, iar in cazul pestei doza
este de 2g/zi fractionat la 12 ore, tratamentul durnd minim 10 zile.
n alte infectii doza uzual la aduli este de 500 mg-1g /zi la intervale de
12 ore, pe cnd la copii doza este de 2-40 mg/kg corp pe zi, nu mai mult
de 1 g/ zi. n insuficien renal intervalele de administrare se mresc la
24, 48 de ore sau chiar mai mult, n funcie de gradul afectrii renale i
bineneles terapia n acest caz trebuie atent monitorizat{, ,
Streptomycin;, , ANM}.
Monitorizarea medicamentoas terapeutic
Factorii precum: greutatea pacientului, funcia renal a acestuia,
locul i tipul infeciei, susceptibilitatea organismului, trebuie luai n
considerare atunci cnd decidem modul si frecvena de administrare a
unui medicament. n cazul pacienilor supraponderali, pentru a determina
greutatea corespunztoare pentru calculele de dozare a medicamentului,
ar trebui utilizat urmtoarea ecuaie: [(greutatea corporala totalagreutatea corporala ideala) x 0.4] + greutatea corporala ideala. Chiar dac,
pn acum, calcului dozelor de administrare se bazeaz pe greutatea
corporala a pacientului, recent s-a accentuat rolul important i al
concentraiei serice de vrf. Spre exemplu: infeciile de tract urinar se
trateaz cu o concentraie seric de vrf mai mica, n timp ce, n cazul
infeciilor pulmonare este necesar o concentraie seric de vrf mult mai
13

mare pentru a realiza o penetrare adecvat a esutului i o aciune

bactericid. Individualizarea tratamentului lund n considerare acest
lucru duce la atingerea unei concentraii optime dependente de activitatea
bacteriei. Concentraiile serice ale streptomicinei ar trebui utilizate pentru
a ghida modificarea dozelor de administrare la prelungirea tratamentului
pentru a evita creterea riscului de toxicitate prin obtinerea unor
concentraii serice de vrf mai mari de 40-50 mcg/ml si concentraii serice
minime mai mari de 5 mcg/ml. Pentru ca potenialul toxic s fie minim,
streptomicina ar trebui sa nu realizeze concentraii serice minime mai
mari de 5mcg/ml{, , Streptomycin}.
Doze maxime admise
n cazul adulilor dozajul este foarte variabil, n cazul administrrii
intramusculare s-au utilizat doze chair mai mari de 4g/zi. Limita
terapeutic maxim recomandat este de 20 mg/kg/zi, iar n cazul copiilor
se recomand a nu se depi 2g/zi.{, , ANM}

e. Reactii adverse , contraindicatii i precauii:

Reacii adverse
Reaciile alergice sunt frecvente i se evideniaz ndeosebi prin
erupii cutanate, nsoite uneori de prurit, febr, adenopatie i eozinofilie.
Au fost semnalate cazuri rare de dermatit exfoliativ, oc anafilactic,
neutropenie, trombocitopenie i anemie aplastic.
Ototoxicitatea streptomicinei este relativ mic n comparaie cu a
altor aminoglicozide, dar riscul este mare n cazul tuberculozei care
presupune tratament prelungit. Antibioticul provoac predominant leziuni
vestibulare, care include simptome ca migrene, great/vrsturi i vertij.
Studiile arat c majoritatea persoanelor crora li se administreaz intre
1.8-2 g/zi, dup o perioad de 4 sptmani, dezvolt simptome de
ototoxicitate vestibular, cei mai predispui fiind vrstnicii i persoanele
cu probleme renale. Aceste simptome descoperite n stadiu incipient i
realiznd o discontinuitate n tratamentul cu streptomicin sunt reversibile
i dispar n 2-3 luni de la ntreruperea tratamentului.
14

Ototoxicitatea cohlear ce poate aprea n tratamentul cu

streptomicin are ca simptome incipiente tinitus i pierderea sensibilitii
auditive pentru frecvene nalte, simptome care pot fi ireversibile.
Prin meninerea concentraiilor serice n limite normale,
nefrotoxicitatea este redus. n cazul in care pacienii prezint factori de
risc precum : realizarea unor concentraii serice excesive, utilizarea
streptomicinei mpreuna cu alte substane cu potenial nefrotoxic, o durata
lung de tratament, administrarea unor doze mari de substan
medicamentoas, sau preexistena unei boli renale, streptomicina dezvolt
nefrotoxicitate. Aceasta este preluata de lizozomi n celulele din tubul
proximal i duce la necroz sau fibroz. Dac expunerea se continu, se
poate ajunge la fibroz intestinal,necroz tubular renal, acidoza
tubular renal. Cu toate acestea, daca terapia este ntrerupt n stadiu
incipient, disfunciile renale aparute datorita nefrotoxicitii
streptomicinei pot fi reversibile.
Manifestri toxice, mai rare, constau n scotoame (prin afectarea
nervului optic), parestezii - mai ales circumoral i la extremiti i alte
tulburri nevritice.
Injeciile cu streptomicin sunt dureroase. La locul de
administrare pot s apar durere, iritaii, abscese sterile{, , ANM;, ,
Streptomycin}.
n vederea reducerii toxicitii streptomicinei s-au propus o serie
de procedee:
a) Utilizarea pantotenatului de streptomicin
S-a propus utilizarea acestei sri, ntruct acidului pantotenic
protejeaz nervul auditiv fa de aciunea streptomicinei. La ora
actual s-a renunat la utilizarea acestei sri, ca urmare a activit ii
antibiotic inferioare sulfatului de streptomicin.
b) Asocierea cu vitamine
n scopul reducerii neurotoxicitii s-a recurs la o asociere cu
vitamine din complexul B ( B1, B2, B6), nicotinamid i cu unii
aminoacizi{Ovidiu, 2013, Chimia i aciunea antibioticelor
antibacteriene}.
Contraindicaii i precauii
Streptomicina nu trateaz infeciile virale (Ex: rceala comun).
Prescrierea streptomicinei n absena unei infecii bacteriene dovedite nu
15

o s aduc nici un beneficiu pacientului, ci dinpotriv, o s creasc riscul

de rezisten bacterian. Pacienii care iau tratamentul cu streptomicin
sunt sftuii s nu ntrerup mai devreme tratamentul chiar dac se simt
mai bine mai repede.
Aminoglicozidele asociate cu anestezice sau relaxante musculare
(tubocurarin, succinilcolin, decametoniu, sau la pacienii care au primit
transfuzii masive de snge cu anticoagulat-citrat) pot da paralizie
respiratorie, insuficien respiratorie sau depresie respiratorie.
Streptomicina trece bariera placentar realiznd concentraii
plasmatice la ft de 25-50% din concentraia plasmatic la mam, putnd
determina nefrotoxicitate i surditate bilateral ireversibil la copil.
Utilizarea acesteia n timpul sarcinii ar trebui evitat, acest tratament, n
timpul sarcinii, impune evaluarea raportului risc potenial fetal/beneficiu
matern . O precauie n utilizarea streptomicinei la femeile ce alpteaz
este necesar datorit faptului ca aceasta este excretat n concentraii
mici n laptele matern. Cu toate c pe cale gastro-intestinal se absoarbe
foarte puin, se cere o anumit precauie pentru a evita apariia unor
reacii adverse la copii.
Se evit adiministrarea streptomicine la pacienii cu
hipersensibilitate la alte aminoglicozide, furosemid, acid etacrinic,
manitol sau alte medicamente cu potenial nefrotoxic i ototoxic.
Aminoglicozidele sunt medicamente cu indice terapeutic mic, se
recomand monitorizarea concentraiei plasmatice a antibioticului, n
special la persoanele cu leziuni otice sau renale preeexistente, la vrstinci,
la persoanele crora li se administreaz doze mari de antibiotic, dar i n
situaiile caracterizate printr-un volum aparent de distribuie redus
(bolnavi cu arsuri ntinse, oc, febr etc.) sau mrit (ascit, obezitate).
La pacienii cu insuficien renala se recomand mrirea
intrevalului dintre dozele administrate, n funcie de gradul afectrii
funciei renale.
Pruden se recomand i n cazul administrrii pacienilor cu
botulism, miastenia gravis, bol Parkinson, hipocalcemie marcat,
deoarece n aceste situaii streptomicina crete riscul blocului
neuromuscular.
Datorit riscului de a produce reacii adverse vestibulare i
oculare (scotom), streptomicina poate influena in mod negativ
capacitatea de a conduce vehicule sau a folosi utilaje{, , Streptomycin;, ,
ANM}.
16

5. Produse farmaceutice
medicamentoas

care

conin

substana

n terapie se utilizeaz sulfatul de streptomicin.

a. Regimul legal de eliberare din farmacie:fcnd parte din clasa de
antibiotice, se elibereaz pe baz de prescripie medical

STREVITAL 1 g, pulbere pentru soluie injectabila

ProductorAntibiotice SA, Iai, Romnia
STREVITAL 5 g, pulbere pentru soluie injectabil
ProductorAntibiotice SA, Iai, Romnia
STREPTOMICINA SULFAT BP, 1g pulbere pentru soluie
injectabil
Productor Antibiotice SA, Iai, Romania{, , www.anm.ro/}
COLISOL, colir conine sulfat de streptomicina (0,625 g)
isulfacetamid sodic monohidrat(5 g la 100 ml soluie apoas)
Productor Biofarm SA, Bucureti, Romnia{Ovidiu, 2013,
Chimia i aciunea antibioticelor antibacteriene}

17

6. Caracterizarea analitic a substanei medicamentoase

a. Metode volumetrice:
Conform Farmacopeei romne ediia X sulfatul de streptomicin
se dozeaz printr-o metoda volumetric.
Tehnica de lucru: 0,1g sulfat de streptomicin se dizolv n ap i
se completeaz cu acelai solvent la 100 ml, ntr-un balon cotat. La 5 ml
soluie se adaug 5 ml hidroxid de sodiu (R) 0,2 mol/l, se nclzete n
baia de ap exact 10 min. Se rcete pe ghea exact 5 min. Se adaug 3
ml sulfat de amoniu-fer (III) (R) 15g/l n acid sulfuric 0,25 mol/l, se
completeaz cu ap la 25 ml, ntr-un balon cotat i se omogenizeaz prin
agitare (soluia-prob). Exact dup 20 min de la adugarea sulfatului de
amoniu-fer (III) se determin absorbana soluiei la 525 nm n cuve de 2
cm, folosind ca lichid de condensare o soluie obinut din aceiai reactivi
i n aceleai condiii cu soluia-prob.

b. Metode spectrale
1.Metode spectrofotometrice UV-VIS:
Spectrofotometria UV-VIS cuprinde metode de identificare i
dozare bazate pe absoria luminii de ctre cromoforii prezen i n
molecul. Domeniul ultraviolet este cuprins ntre 180-400 nm, iar
domeniul vizibil este cuprins ntre 380-780 nm n care absorb substanele
18

ce apar colorate ochiului uman.

Introducere
Reziduurile antibiotice n produsele alimentare sunt foarte
duntoare pentru fiinele umane. Determinarea reziduurilor de
antibiotice se bazeaz n mare msur pe disponibilitatea de tehnici
analitice adecvate. n prezent, exist o nevoie pentru detectarea
antibioticelor n produsele alimentare. n aceast lucrare, un prim pas este
sinteza de nanoparticule de aur (AuNPs), folosind violet pirocatechin
(PCV), ca agent reductor. Detectarea colorimetric este foarte sensibil
i selectiv pentru mai multe antibiotice precum sulfat de kanamicin
mono (KA), sulfat de neomicin (NE), sulfat de streptomicin (ST) i
sulfat de bleomicin. Prin urmare, prezena KA, NE, ST i BL ar influena
sinteza AuNPs, care a putut fi observat cu ochiul liber sau cu un
spectrofotometru UV-Vis. Metoda propus poate fi aplicat cu succes
pentru detectarea antibioticelor n produse lactate lichide.
Prezena sulfatului de streptomicin influeneaz sinteza AuNPs,
inclusiv culoarea i starea de AuNPs, care ar putea fi utilizat pentru a
detecta substratul antibiotic cu ochiul liber sau cu un spectrofotometru
UV-Vis.
Antibioticele sunt substane chimice produse de un microorganism
care au capacitatea, n soluii diluate, de a inhiba dezvoltarea unor alte
organisme. De la descoperirea lor, ele au reprezentat o parte esen ial a
medicina uman i veterinar pentru tratamentul bolilor infecioase
produse de bacterii. Prezena antibioticelor n lapte ridic mai multe
probleme care se refer la sntatea public, precum i la starea de
sntate a animalelor. n afar de sntatea consumatorilor, prezen a
antibioticelor poate afecta, de asemenea, procesul de fermentaie care
rezult n pierderi economice. n concluzie, reziduurile de antibiotice din
produsele alimentare sunt controlate i limitele de reziduuri maxime
(LMR) sunt stabilite de mai multe organizaii naionale i internaionale.
Recent, nanoparticulele de aur (AuNPs) au atras atenia considerabil
datorit proprietilor lor fizico-chimice interesante. Una dintre cele mai
importante proprieti este rezonana plasmatic de suprafa (LSPR) care
absorbe puternic, cu coeficieni ridicai de extincie (~ 3 x 10-11 M-1 cm19

1), n intervalul de lungimi de und vizibil. Pe baza acestei propriet i

unice, culoarea de AuNPs poate varia de la vin rosu la albastru.

Partea experimental
Spectrele au fost nregistrate cu un spectrofotometru UV-2550
(Shimadzu, Japonia) la temperatura ambiant (20 2 C) cu cuve de
polistiren de unic folosin. Laptele lichid cumprat de la supermarket a
fost tratat n prealabil n conformitate cu procedura general. n primul
rnd, 5 ml de 61 mM acid tricloracetic i 35 ml de 4,9 M soluie de
metanol s-au adugat la 5 g de lapte lichid pentru a elimina proteinele,
apoi amestecul a fost centrifugat la 10.000 rpm timp de 10 min dup 15
min de iradiere sonora si 10 min de agitare , iar supernatantul a fost filtrat,
apoi filtratul a fost concentrat pe un evaporator rotativ la 10 ml i se
filtreaz printr-o membran microporoas 0,45 pm pentru a obine proba.
Procedura de experiment a fost urmtoarea: 30 pL de 1,0 x 10-2 M
HAuCl4, 20 pl 1,0 x 10-4 M DTAB i 20 pL de diferite concentra ii de
antibiotice sau eantioane de lapte ptate cu soluii standard care conin
antibiotice au fost adugate n 1850 pl pH tampon 7,0 PB. 80 pL 2,0 x
10-3 M PCV a fost adugat la amestecul de mai sus. Ultima solu ie mixt
a constat n 2,0 ml de 1,0 x 10-4 M HAuCl4, 1,0 x 10-6 M DTAB, 8,0 x
10-5 M PCV i diferite concentraii de antibiotice au fost scuturate timp
de 30 s i a fost lsat s reacioneze n continuare timp de 20 min la
temperatura camerei. Dup aceea, s-au nregistrat spectrele de absorbie i
fotografii ale soluiei.
Rezultate i discuii
20

Avnd n vedere c PCV (violet de pirocatechin) are substraturi

antibiotice (KA, NE, ST i BL) i OH fenolic, NH2, NH pot exista
interaciuni de hidrogen ntre PCV i aceste antibiotice, adic, atunci cnd
KA , nE, ST i BL sunt introduse n sistemul de sintez, formarea de
AuNPs ar putea fi influenat i culoarea soluiei s-ar schimba, prin
urmare, o detectare colorimetric de antibiotice ar putea fi realizat n
timpul formrii AuNPs.
Concluzie
Sinteza de AuNPs a fost realizat la temperatura camerei prin
amestecarea AuCl4- cu PCV. Cnd KA, NE, ST i BL au fost introduse n
sistemul de sintez, formarea de AuNPs a fost influenat i culoarea
soluiei s-a schimbat, prin urmare, o detectare colorimetric pentru
antibiotice ar putea fi realizat n timpul formrii AuNPs. Substan ele
coexistente inclusiv fenilalanin, alanin, glicerol, glucoza, Mg2 +, Ca2
+, Na +, K +, CO32-, SO42-, NO3-, Cl i Br nu a afectat determinarea
antibioticelor{Zhang, 2013, Highly sensitive and selective colorimetric
sensing of antibiotics in milk}.
2. Metoda spectrometric IR
Principalul obiectiv al Spectroscopiei IR const n determinarea
gruprilor funcionale ale probei analizate. Grupele funcionale absorb
radiaii IR la frecvene caracteristice. Spectroscopia IR este o metod
uzual n elucidarea structurii i identificarea unui compus chimic.
Radiaiile din spectrul electromagnetic sunt adesea clasificate n
functie de lungimea de und. Radiaiile ce apar la valori mici ale
lungimilor de und sunt adesea considerate periculoase (raze gamma, raze
X, UV). Radiaia IR acoper domeniul electromagnetic cuprins ntre 0,8200 m.
Exist trei zone sau regiuni spectrale n IR i anume:
-IR ,,apropiat (0,8-2,5 m)
-IR ,,mediu (2,5-25 m)
-IR ,,ndeprtat (>25 m).
Detecia se bazeaz pe absorbia unor radiaii din acest domeniu
i mai puin pe reflexie. Absorbiile n IR sunt att de caracteristice pentru
unele grupri funcionale, legturi i uniti structurale, nct spectru IR
21

poate fi considerat ca o ,,amprent a moleculei studiate, ceea ce uureaz

deducerea unor detalii de structur i recunoaterea lor{, , Generaliti
despre spectroscopia IR}.

c. Metode cromatografice
1) Cromatografia pe strat subire(CSS)
Cromatografia este o metod fizico-chimic de separare a unor
substane dintr-un amestec , intr-un sistem constituit dintr-o faz
staionar si o faz mobil care se deplaseaz intr-o direcie dat.Metoda
cromatografic se bazeaz pe un proces de migrare dinamica diferentiala
a substantelor din amestecul respectiv ca urmare a unor diferente de
adsorbtie , repartitie , solubilitate , presiune de vapori, marimea moleculei
etc.
Metoda cromatografic se bazeaz pe repartiia diferit a
componentelor unui amestec ntre o faz mobile i una staionar, avnd
ca urmare deplasarea, cu viteza diferit a componentelor purtate de ctre
faza mobil de-a lungul fazei staionare
Cromatografia pe strat subire este o tehnic simpl ca aparatur,
care ne ofer posibiliti multiple de separare. Aceast tehnic se mai
numete i cromatografie plan. n ultimul deceniu s-au inregistrat
progrese nsemnate att n privina fazelor staionare ct i a perfecionrii
aparaturii de msurare. Aceast dezvoltare a permis obinerea unor limite
de detecie de ordinul g si chiar a pg n cazul unor compui adecvai.
n cazul cromatografiei pe strat subire nu exist ngrdiri n
privina utilizrii unor solveni ca elueni ce absorb n UV (de exemplu:
toluen, acetona, acetat de etil etc.) i care prezint selectiviti bune ntr-o
serie de separri. De asemenea nu exist limitri n privina utilizrii unor
reactivi pentru detecie sau identificare.
Cromatografia pe strat subire este o tehnic foarte rspndit
datorit simplitii ei i posibilitii de analizare a unor amestecuri
complexe din punct de vedere calitativ i cantitativ avnd nevoie de:
22

Plci cromatografice din sticl sau alte materiale de

lungimi i limi variabile acoperite cu un strat subire de
adsorbant de puritate cromatografic(silicagel, celuloza
microcristalina, oxid de aluminiu) la care se pot adauga
lianti(sulfat de calciu, amidon ) sau ageni fluoresceni.
Vase cromatografice din sticl cu posibiliatea nchiderii
etane ,de mrimi variabile pentru a asigura meninerea
plcilor n poziie aproape vertical
Micropipete
Microseringi
Alte dispozitive

Soluiile se aplic pe placa cromatografic n pete circulare,

distana ntre ele s fie de cel puin 1.5cm, linia de start trebuie s fie
situat la 2cm de marginea plcii iar punerea in eviden a petelor de pe
cromatograma se efectueaz prin examinarea acestora ca atare sau dup
tratare cu reactivi potrivii n lumina vizibil sau n lumina ultraviolet.

Pentru identificarea substanelor se compar pe aceeai

cromatogram valoarea Rf a petei obinute cu soluia-proba cu valoarea
Rf a petei obinute cu soluia-etalon.Valoarea Rf=a/b, unde:

a= distana parcurs de substana de la linia de start

pn n centrul petei
b= distana parcurs de developant de la linia de
start pn la fontul developantului{, 1996,
***Farmacopeea Romn}.
23

Separarea unor aminoglicozide prin cromatografie n strat subire

Introducere
n analiza antibioticelor aminoglicozidice, metodele CSS pot fi
utilizate n vederea separrii analitului dintr-o matrice farmaceutic, la
identificrii analitului, sau pentru controlul impuritilor.
n acest studiu s-a propus realizarea unei metode HPTLC unice,
care s permit separarea i identificarea simultan a unor aminoglicozide
din probe de substane farmaceutice active i din produse farmaceutice.
Material i metod
S-au utilizat plci cromatografice HPTLC de dimensiunile 10x10
cm, de tipul HPTLC silica gel 60, respective HPTLC silica gel F254
(Merck, Germania). Aplicarea benzilor s-a realizat cu ajutorul
aplicatorului semiautomat Camag Linomat 5 (Camag, Germania),
prevzut cu sering Hamilton de 500 L (Camag, Germania).
Vizualizarea n UV s-a realizat la 254 nm.
Soluia injectabil de gentamicin 80 mg/2 mL a fost achiziionat
de pe piaa farmaceutic local.
S-a utilizat o faz mobil format din 1-butanol, metanol, acid
acetic glacial i ap purificat 1:1:1:2. Soluiile de referin au avut
concentraia 5 mg aminoglicozid/mL ap:metanol 4:1.
Soluiile prob de gentamicin au fost preparate prin dizolvarea
substanelor active sau diluarea soluiilor injectabile la o concentraie de 2
mg/mL folosind un amestec ap:metanol 4:1.
Soluiile de analizat au fost aplicate cu ajutorul aplicatorului
semiautomat Camag Linomat 5. S-au aplicat cte 4 L din fiecare soluie,
cu o vitez de 2 L/minut.
Plcile cromatografice au fost lsate s migreze 7 cm. Plcile au
fost vizualizate la lumina UV la 254 nm, apoi au fost pulverizate cu o
soluie de ninhidrin i expuse timp de 15 minute la 105C.
Rezultate
Decelarea antibioticelor aminoglicozidice la lumin UV pe plcile
HPTLC fluorescente de tipul silica gel F254 nu a fost posibil. Ca
urmare, vizualizarea spoturilor s-a realizat dup pulverizare cu soluie de
24

ninhidrin i expunere la cldur. Spoturile cromatografice datorate

diferitelor fracii aminoglicozidice s-au colorat n galben-brun-crmiziu.
Spotul corespunztor amikacinei, de culoare galben-brun a avut
valoarea Rf de 0,42. Pentru gentamicin s-au obinut trei spoturi
cu valori Rf 0,19 (spot galben-brun), 0,31
(spot galben-brun), respectiv 0,37 (spot crmiziu).
Spoturile obinute pentru neomicin au avut valori Rf de 0,18
(spot galben), 0,27 (spot galben-crmiziu), respective 0,35 (spot brun).
Metoda a fost utilizat la identificrii amikacinei i neomicinei din
substane farmaceutice active, respectiv a gentamicinei din substane
farmaceutice active i soluii injectabile{Szaniszlo, 2013, Studiu Analitic
al unor Antibiotice}.

2) Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC)

Metod de analiz calitativ utilizat in biochimie i chimie
analitica pentru separarea, identificarea i cuantificarea compuilor.
HPLC folosete o coloan ncrcat cu diferite materiale (faza
staionar), o pomp ce mpinge faza(ele) mobil(e) prin coloana i un
detector care arat timpurile de retenie ale moleculelor. Timpul de
retenie depinde de interaciunea dintre faza staionar, moleculele de
analizat i solvenii utilizai.
Cromatograful de lichide de inalt performan este compus din:

sistem de pompare
sistem de injecie
coloana cromatografic
detector
sistem de nregistrare

Faza mobil este furnizat de unul sau mai multe rezervoare,

circul prin coloana cromatografic cu un debit constant , sub efectul unei
presiuni i apoi trece prin detector.Temperatura coloanei cromatografice
se menine constant n timpul determinrii i n majoritatea cazurilor este
25

temperatura camerei.Sistemul de detectare folosit trebuie s permit

determinarea cantitilor de component prezente n circuit i se bazeaz pe
spectrofotometrie de absorbie , refractometrie diferenial, fluorimetrie ,
combustie sau metode electrochimice. Soluiile folosite trebuie s fie
lipsite de particule solide n suspensie{, 1996, ***Farmacopeea Romn}.
O metod direct HPLC pentru a estima streptomicina din
serul uman
n acest scop, s-a implementat i optimizat o tehnic direct cu
faz invers HPLC pentru a identifica i a estima streptomicina (STP) i
streptidina (STD) n serul de la pacienii tratai cu streptomicin.
Toate criteriile pentru validarea metodei au fost implementate n
curbele standard de ser a voluntarilor sntoi netratai prin adugare
crescatoare a concentraiei de ambii compui i determinarea lor ntr-un
extract acid tricloracetic deproteinizat.
S-a descoperit c recuperarea streptomicinei i a streptidinei a fost
mai mare de 91.5%.Precizia pe parcursul unei zile i ntre zile a fost de
9.7%, respectiv 10.6%.Eroarea relativ adeterminarilor pe parcursul unei
zile sau ntre zile este cuprins ntre 8-9,3% pentru ambele componente
din serul uman.
Studiile efectuate pe pacieni includ cinci persoane de sex
masculin tratai de la 35-90 zile cu 1 g / zi de streptomicin, prezentnd
afeciuni la urechea intern de la uoar pn la sever, n ale cror ser
streptidina a fost mereu prezenta i ar putea fi separate cu succes de la
streptomicin. Prin urmare, metoda validat folosit poate fi un
instrument valoros pentru a msura i urmri aceti compui n ser la
pacienii tratai cu streptomicin.
Echipamente i condiii HPLC
Sistemul cromatografic const ntr-o pomp Waters 600E (Waters
Assoc., Molford, MA, Statele Unite ale Americii), echipat cu un
autosampler Waters 717plus i un detector PDA Ape 996.
26

Coloana analitic este o coloan Prodigy ODS3 cu faza inversa,

5M, 250mm x 4,6mm (Phenomenex, Torrance, CA,STATELE UNITE
ALE AMERICII). Debitul in coloan a fost meninut la 1,3 ml / min.
Temperatura coloanei a fost stabilit la 25 C ( 0,10).Lungimea de und
a detectorului a fost de 200 0,2 nm. La finalizarea analizei de zi cu zi,
coloana a fost splat cu un amestec de acetonitril:ap (65:35).
Faza mobil pentru msurarea STP i STD a coninut tampon (20
mM 1-hexansulfonat de sodiu i 25 mM fosfat bazic de sodiu, pH 6,0,
solvent A) i acetonitril (solventB) (85:15, v / v). Soluia de pH a fost
ajustat cu acid fosforic Acid (85%) i filtrata printr-un filtru de 0,22mm
(Millipore Corp.,Bedford, MA) nainte de utilizare.
Separarea i estimarea streptomicinei i streptidinei n serul
uman
Probele de ser au fost obinute de la pacien ii tratati cu STP,
furnizati de Departamentul de tuberculoza din cadrul Institutului National
de Boli respiratorii, Mexic, i de la voluntari sntosi netrata i, furnizai
de un laborator de analize medicale certificat clinic.
Pacienii i voluntarii au avut vrste cuprinse ntre 25 i 55 de ani.
Procedura de extracie
Extracia a fost implementat la serul provenit de la voluntarii
sntoi la care creterea concentraiilor de STP s-a facut de la 10 g/mL la
80g/mL sau n cazul administrrii de STD creterea s-a facut de la
2g/mL la 16g/mL.
Acestea au fost deproteinizate prin adugare de acid tricloracetic
20% (TCA,120 L / ml de ser). Supernatantul a fost separat de precipitat
prin centrifugare la 14000 rpm timp de 40 min. Un volum de 20 L din
fiecare soluie a fost injectat i analizat pentru 9 min.
Validarea metodei

27

Cu autorul tehnicii HPLC s-au separat satisfctor STD de

STPdintr-un amestec de doi compui. Timpii de retenie au fost de
aproximativ4.01 0,17 min pentru STD i 6,10 0,45 min pentru STP
(Fig. 1){Granados, 2007, A direct HPLC method to estimate streptomycin
and its putative ototoxic derivative`, streptidine`, in blood serum:
Application to streptomycin-treated humans}.

Figura 1.
Diferenierea streptomicinei de streptidin
Determinarea amikacinei (aminoglicozid) din materii prime i
soluii injectabile prin cromatografie de lichide
Introducere
Literatura de specialitate prezint pentru analiza antibioticelor
aminoglicozidice o serie de metode bazate pe separare HPLC i detecie
UV-Vis precedate de derivatizare pre-coloan.
Complexitatea proceselor de derivatizare fac ns aceste metode
greu de reprodus, iar cantitile mari de reactivi de derivatizare utilizai
pot duce la interferene i probleme n ceea ce privete specificitatea. n
vederea rezolvrii acestor neajunsuri mi-am propus realizarea unei
metode analitice HPLC-UV-Vis folosind ca agent de derivatizare 2,428

dinitro-1-fluoro-benzen, care s permit determinarea cantitativ a

amikacinei din substane farmaceutice i soluii injectabile.
De asemenea, n vederea obinerii unei metode cu specificitate i
reproductibilitate crescut, mi-am propus reducerea cantitii de agent de
derivatizare fa de datele ntlnite n literatura de specialitate.
Material i metod
Sistemul cromatografic utilizat a fost de tipul Waters 2695
(Waters, SUA), cuplat cu detector Waters 996 Photodiode Array Detector
(Waters, SUA).
Separarea a avut loc n gradient, timpul de rulare a fost de 35
minute. Ca faz mobil A s-a utilizat ap purificat:acid acetic
glacial=300:1, iar ca faz mobil B acetonitril:acid acetic glacial=300:1.
Coloan cromatografic a fost de tipul octadecilsilan, 250 mm X 4,6 mm,
diametrul particulelor 5 m (Xterra, Waters, SUA). Debitul a fost de
1mL/min. Detecia a fost realizat la 354 nm cu ajutorul detectorului cu
ir de fotodiode.
Rezultate
n cadrul studiului a fost realizat o metod HPLC-UV Vis, care
permite dozarea amikacinei dup derivatizare folosind 2,4-dinitro-1fluoro-benzen. Metoda utilizeaz o cantitate de agent de derivatizare mult
redus fa de metodele descrise n literatura de specialitate, mbunt ind
astfel parametrii de performan a metodei. Metoda a fost validat,
prezint liniaritate pe domeniul 80-120 g/mL (r=0,99925). Regsirea
medie a fost ntre 99,55 - 100,58%.
Limita de detecie i limita de cuantificare au fost 1,6 g/mL i 4,8
g/mL.
Metoda realizat permite determinarea cantitativ a amikacinei
din substane farmaceutice active i din preparate farmaceutice
parenterale.
Se preteaz de asemenea la studiul stabilitii soluiilor parenterale
de amikacin.{Szaniszlo, 2013, Studiu Analitic al unor Antibiotice}

29

3) Gaz cromatografia (GC)

Cromatografia de gaze este o metod fizico-chimic de separare
cromatografic n care faza mobil este un gaz (gaz purttor) iar faza
staionar este un solid sau un lichid repartizat uniform pe pereii unei
coloane capilare.Faza staionar se afl ntr-o coloan cromatografic
confecionat de obicei din sticl sau oel inoxidabil.Faza mobil se
deplaseaz continuu prin coloana iar la ieire gazul purttor trece prin
detector.
Cromatograful de gaze este compus din:

sursa de gaz
camera de evaporare
coloana cromatografic
termostatul
detectorul
sistemul de nregistrare

Gazul purttor se deplaseaz cu o vitez constant prin camera de

evaporare, preia proba de analizat i o introduce n coloana
cromatografic unde se realizeaz separerea componentelor.La ieirea din
coloana cromatografica, gazul purttor trece impreuna cu componentele
separate prin detector , care emite un semnal electric proporional cu
concentraia componentei din faza gazoas.Detectorul este conectat la
sistemul de nregistrare iar rezultatele se prezint sub forma unui grafic
semnal-timp.Deoarece probele de analizat dizolvate ntr-un solvent
trebuie s fie aduse n stare de vapori, camera de evaporare este nclzit
la o temperatura suficient de ridicat pentru a asigura o evaporare rapid
fr a produce o degradare termic a probelor.

30

d. Metode electroforetice
Electroforeza este o metod fizic de analiz, care se bazeaz pe
migrarea particulelor ncrcate electric, dizolvate sau dispersate ntr-o
soluie de electrolit si supuse aciunii unui cmp electric.
Mobilitatea electroforetic a unei particule este viteza de deplasare
n metri pe secund a particulei supuse aciunii unui cmp electric de un
volt pe metru i se exprim n metrii ptrai pe volt i pe secund. Aceasta
este o constanta fizic care variaz n funcie de anumii factori care
depind de partcul (natura, mrimea, forma, sarcina electric, gradul de
disociere etc.)
m= m=mobilitatea electroforetic a unei particule(n metri ptrai
pe volt/secund)
d=distana de migrare a unei particule in timpul t (n metri)
t= timpul de migrare al particulei (n secunde)
E=gradientul de potenial (n voli pe metru)
Migrarea particulelor n cmpul electric se produce spre polul de
sens opus sarcinii electrice a particulelor respective, deci cele cu sarcin
pozitiv migreaz spre catod, iar cele cu sarcin negativ spre anod.
La punctul izoelectric nu are loc migrare electroforetic.
n timpul unei analize electroforetice particulele migreaz n
medii poroase (acetat de celuloz- foi,hrtie de filtru pentru electroforez,
agaroz-gel, agar-gel) impregate cu soluie de electrolit.
Soluia de electrolit trebuie aleas n aa fel nct s fie inert din
punct de vedere chimic cu substana analizat.Fora ionic trebuie aleas
in relaie cu tensiunea aplicat i cu timpul de lucru.
Pentru a analiza o substan cu ajutorul electroforezei avem
nevoie de un generator de curent continuu, o camer de electroforez cu
31

dou compartimente separate,anodic i catodic, n care se afl doi

electrozi de platin i n care se pune soluia de electrolit i un
densitometru prevzut cu un nregistrator de absorban i un integrator.
Tehnica de lucru:
o Materialul poros se impregneaz cu soluia de electrolit i se a eaz n
camera de electroforz, n aa fel nct s fie n contact continuu cu
soluia de electrolit.
o Soluia de analizat se aplic pe materialul poros sub form de band, iar
generatorul de curent se pune n funciune prin aplicarea la borne a unei
tensiuni potrivite.
o Dup expirarea timpul de analiz, se ntrerupe curentul se scoate
materialul poros din camera de electroforez, se usuc i se trateaz cu
reactivul potrivit pentru a pune n eviden petele.
o Dozarea se poate efectua direct, prin nregistrare cu ajutorul unui
densitometru sau dup eluarea fraciunilor separate, prin determinarea
absorbanelor soluiilor obinute{, 1996, ***Farmacopeea Romn}.
Aceast metod de analiz a fost folosit cu succes n cadrul unui
studiu realizat n Polonia pentru a determina cantitatea de streptomicin n
glbenuul de ou. Streptomicina este folosit i pentru uz veterinar.
Utilizat pe cale oral este puin absorbit, fiind eliminat ntr-o cantitate
mare prin fecale, dar folosit parenteral intramuscular prezint riscuri
crescute pentru consumatori. Este necesar s se respecte o period de 30
de zile de la ntreruperea tratamentului pn la punerea pe pia a
animalului tratat sau a produselor obtinute de la acesta, n cazul n care se
administreaz parenteral, si o perioad de doar 5 zile n cazul n care este
administrare oral.
Analizele au fost efectuate pe un capilar de silicagel fr strat
protector, folosind o soluie tampon de dihidrifosfat de sodiu 30 mM, acid
boric 5 mM i tetraborat de sodium 5 mM. Unul dintre principalele
avantaje ale acestei metode este aceea c se pot folosi solu ii apoase de
tampon, aceasta fcnd posibil detecia UV la lungimi de und mici.
32

Detecia s-a realizat la lungimea de und de 200 nm, folosind aparatul de

electroforez Beckman P/ACE 2100. Durata total de analiz a fost de 7
minute.
Aceast metod ofer numeroase avantaje, printre care:
simplicitatea n prepararea probelor, timpul scurt de analiz (mai puin de
10 minute) i costuri sczute{Kowalski, 1999, Determination of
streptomycin in eggs yolk by capillary electrophoresis}.
e. Metode termince
1. Analiza termogravimetric (TG)
Termogravimetria se bazeaz pe msurarea masei de substan n
funcie de temperatur, n timp ce aceasta este nclzit sau rcit cu o
vitez controlat sau meninut la anumit temperatur pentru o anumit
perioad de timp.Rezultatele obinute sunt evaluate cu ajutorul unei curb
gravimetrice.
Aparatul utilizat pentru metoda termogravimetric este compus
dintr-un creuzet inert n care este introdus substana i este ataat la o
microbalan iar n jurul lui se afl un cuptor (aceste poate fi aezat n
locuri diferite n funcie de punctul de echilibru( figura 1 ).
Cuptorul poate fi mai jos (A), mai sus (C) sau n jurul bra ului
lateral al echilibrului(B). Figura D reprezint un sistem de cuplare la
distan care utilizeaz cuplajul magnetic i asigur c atmosfera n jurul
probei este complet separat de mecanismul de echilibru. In figura D este
prezentat balana cu arc, o versiune mai depasit, iar in figura E este
prezentat un sistem care are un cuptor dublu i sistem de creuzet pentru a
reduce efectele de flotabilitate.
n momentul evalurii rezultatelor, pe curba gravimetric pot
aprea variaii ca urmare a:
o Evaporrii componentelor volatile (uscare, desorbie, adsorbie a
gazelor, pierderea apei de cristalizare)
33

o Oxidare a metalelor n aer sau oxigen

o Descompunerea oxidativ a componentelor organice n aer sau oxigen
o Descompunera termic ntr-o atmosfer inert cu formarea produselor
gazoase (de exemplu, n cazul compuilor organici, acest proces este
cunoscut sub numele de piroliz sau carbonizare).
o Reacii chimice eterogene n care un reactant este preluat din atmosfera
purjat. Se pot aduga aici i reaciile n care un produs este degajat, cum
este n cazul reaciilor de decarboxilare sau condensare.
o Preluarea sau pierderea de ap ntr-un experiment care se desfoar n
atmosfer cu umiditate controlat{, ,
http://termoanalitic.wordpress.com/4-termogravimetrie-tg/}.
Caracterizarea unor aminoglicozide prin analiz termic
Introducere
Antibioticele aminoglicozidice reprezint structuri complexe, labile,
totui, literatura de specialitate ofer puine date despre comportamentul
lor n timpul expunerii la temperaturi ridicate.
n acest capitol se va prezenta un studiu TG/DSC pentru amikacin,
kanamicin, gentamicin,neomicin i streptomicin pe intervaul 25400C, n vederea stabilirii punctului (intervalului) de topire i a
temperaturii de descompunere, respectiv n vederea estimrii profilului de
descompunere.
Material i metod
Termogravimetrul utilizat a fost de tipul Mettler Toledo TMA/SDTA 841e
(Mettler Toledo, SUA). S-au utilizat creuzate de alumin de 70 L.
Analizorul DSC folosit a fost de tipul Mettler Toledo 822, pentru care sau utilizat creuzete de 40 L, confecionate din aluminu. Termogramele
au fost prelucrate i interpretate cu ajutorul programului STARe SW 9.00.
Substanele utilizate n studiu au fost de puritate analitic. Termogramele
34

TG i DSC au fost nregistrate pe domeniul de temperatur 25400C. n

cazul analizelor TG cantitatea de prob a fost de aproximativ 5 mg. n
cazul termogramelor DSC n creuzetele de aluminiu s-a adus o
cantitate de aproximativ 2 mg prob. Att n cazul analizelor DSC, ct i
n cazul analizelor TG s-a utilizat atmosfera dinamic de N2 (purjare cu
un debit de 50 mL/min), iar viteza de nclzire a fost 10C/min.

Rezultate
Antibioticele aminoglicozidice au prezentat o pierdere iniial de mas
(fenomen endoterm) pe domeniul 40-170C. Aceasta a reprezentat ntre
5,1% (kanamicin sulfat) i 12,8% (amikacin sulfat). Aceast pierdere de
mas se traduce prin pierderea apei adsorbite ca umiditate (ntre 40105C) i pierderea apei din reeaua cristalin (ntre 105-170C).
Pe domeniul 174,3-192,4C aminoglicozidele studiate au prezentat un pic
endoterm nensoit de pierderi de mas. Acesta poate fi asociat cu o
modificare n aranjarea reelelor cristaline ale substanelor studiate.
Topirea antibioticelor aminoglicozidice a fost nsoit de descompunere,
cu pierderi semnificative de mas.Astfel, intervalul de topire n cazul
amikacinei sulfat pornete de la 244,8C, n cazul gentamicinei sulfat la
241,5C, n cazul kanamicinei sulfat la 284,7C, n cazul neomicinei
sulfat la 219,7C iar n cazul streptomicinei sulfat la 215,0C.Pierderea de
mas
semnificativ
asociat
descompunerii
antibioticelor
aminoglicozidice se datoreaz n parte
pierderii gruprilor OH i NH2 sub form de ap i probabil un
amestec format din amoniac i N2. La temperature mai mari are loc
carbonizarea aminoglicozidelor cu pierdere ulterioar de mas sub form
de ap i oxizi de carbon.
Datele obinute n cadrul studiului subliniaz faptul c aminoglicozidele
sunt substane termic instabile, modificrile fizico-chimice ncepnd s
apar de la 40C. Studiul evideniaz de asemenea faptul c
35

aminoglicozidele rein cantiti importante de ap n structura lor, ceea ce

impune controlul strict al umiditii n cazul acestor substane{Szaniszlo,
2013, Studiu Analitic al unor Antibiotice;Szaniszlo, 2013, Studiu Analitic
al unor Antibiotice}.
2 .Analiza calorimetric diferenial (DSC)
Are la baz msurarea energiei calorice care apare dup schimbrile de
faz care urmeaz dup o variaie de temperature pentru o prob
meninut la acelai regim de temperatur cu o prob de referin.

36

Concluzii generale
Streptomicina este un antibiotic natural din clasa
aminoglicozidelor de generaia I, utilizat mai ales ca i antibiotic de
rezerv n tratamentul tuberculozei, fiind asociat cu alte antituberculoase
pentru a se evita dezvoltarea rezistenei. n terapie se utilizeaz sulfatul de
streptomicin. Se absoarbe puin n tubul digestiv (20%) realiznd
concentraii crescute la acest nivel. Se metabolizeaz foarte puin,
eliminndu-se practic nemodificat pe cale renal (80%) prin filtrare
glomerular.
Pentru caracterizarea analitic a streptomicinei sub form de
sulfat exist o serie de metode (volumetrice, spectrale, cromatografice,
electroforetice, termice) prin care poate fi pus n eviden.

37

Bibliografie
1.
Oniga O, Tiperciuc B, Nastas C, Ionu I. Cluj-Napoca EMqIHq,
editor. Cluj-Napoca2013.
2.
* NA, Elisabeta B, Roxana D, Sorina D, Beatrice P.
Aminoglicozidele- Actualizare i reevaluare n practica medical
modern. Educaie medical continu; 2002.
3.
***Farmacopeea Romn. Ediia a X-a ed: ed. Bucureti: Editura
medical; 1996.
4.
***Farmacopeea Britanic. Ediia a VII-a ed: ed. Londra: The
Stationery Office; 2009.
5.
***Farmacopeea European. Ediia a VII-a ed2012.
6.
***Farmacopeea American. Ediia a VII-a ed2008.
7.
https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov.
8.
Streptomycin. Drug Information Provided By Gold Standard.
9.
BLUGGS CW, PILLING MA. The absorption, distribution, and
excretion of streptomycin in man. J Clin Invest. 1946;25:94-102.
10.
ANM.
11.
www.anm.ro/.
12.
Zhang X, Zhang Y, Zhao H, He Y, Li X, Yuan Z. Highly sensitive
and selective colorimetric sensing of antibiotics in milk. Analytica
Chimica Acta. 2013;778(0):63-9.
13.
Generaliti despre spectroscopia IR.
14.
Balazs S. Studiu Analitic al unor Antibiotice. 2013. p. 8.
15.
Granados O, Meza G. A direct HPLC method to estimate
streptomycin and its putative ototoxic derivative, streptidine, in blood
serum: Application to streptomycin-treated humans. Journal of
Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2007;43(2):625-30.
16.
Szaniszlo B. Studiu Analitic al unor Antibiotice. 2013:8.
17.
Kowalski P, Oledzka I, Okoniewski P, Switala M, Lamparczyk
H. Determination of streptomycin in eggs yolk by capillary
electrophoresis. Chromatographia. 1999;50(1-2):101-4.
18.
http://termoanalitic.wordpress.com/4-termogravimetrie-tg/.

38