https://www.scribd.

com/doc/55437408/57/Recoltarea-embrionilor
MrGaffa on May 14, 2011

2.2.6. Recoltarea embrionilor

Embrionii sunt colectai atunci cnd se gsesc n cornul uterin, dup
ieirea lor din oviduct (ntre zilele 4-5). Din motiv sanitare i de congelare
se prefer colectarea embrionilor nc inclui n zona lor pelucida (ies n
a 9-a zi). Cel mai frecvent, colectarea se realizeaz ntre zilele 6-8 dup
fecundaie, de regul n ziua a 7-a. Recoltarea embrionilor se face
chirurgical i nechirurgical .
Mult timp, metoda chirurgical a fost singura utilizat. Tehnica
operatorie presupunea parcurgerea a dou etape: laparotomia, cu
exteriorizarea aparatului genital n plag i recoltarea propriu-zis a
embrionilor prin splarea cu un lichid cu o compoziie special, a
oviductelor (dup un interval de timp mai mic de 3 zile de la nsmnare)
sau a coarnelor uterine (dup un interval de timp mai mare de 4 zile de la
nsmnare). n prezent, metoda chirurgical de recuperare a embrionilor
la vac este abandonat, datorit inconvenientelor pe care le prezint.
Astzi, este generalizat metoda nechirurgical de prelevare a
embrionilor, a crui principiu const n splarea coarnelor uterine cu un
mediu special preparat, splare care se realizeaz n condiii de asepsie n
a 7-a zi de la nsmnare. Tehnica nechirurgical de colectare a
embrionilor s-a perfecionat continuu, firme specializate produc pe scar
industrial mediul de recoltare, congelare, decongelare i ntreaga
aparatur necesar recoltrii i transferului embrionilor.
Tehnicile nechirurgicale
de recoltare a embrionilor presupun mai multe operaunii : contenia
femelei, anestezia, vidarea rectului, toaletarea vulvei i a regiunii
perivulvare, identificarea prezenei corpilor galbeni pe ovar, introducerea
lichidului de splare n lumenul coarnelor uterine, splarea acestora,
recuperarea lichidului mpreun cu embrionii, identificarea i recuperarea
embrionilor din lichidul recuperat i supus decantrii i aprecierea
morfologic a acestora. n condiii de ferm, recoltarea embrionilor se
face la locul unde se gsete femela donatoare, dup ce n prealabil,
vecinele acesteia au fost ndeprtate. Femela se contenioneaz
adecvat, astfel nct s-i fie limitate micrile, trecerea sondei prin
canalul cervical care este nchis, provocnd dureri animalului i

implicit, reacie de aprare. Pentru a suprima durerea, se practic

anestezia epidural cu 4-6 ml procain 2% sau cu 10 ml ludocain 1%,
care blocheaz nervii coccidieni i ultimele perechi de nervi sacrali
(S3,S4,S5). Acul se introduce ntre prima i a doua vertebra coccigian
sau `ntre ultima vertebr\ sacral\ [i primavertebr\ coccigian\, anestezia
instalndu-se dup\ circa 10-15 minute [idureaz\ `n jur de 90 de minute,
zonele insensibilizate fiind: coada,anusul, rectul, vulva, vaginul [i uterul.Se
introduce, cu precau]iile de rigoare, mna `n rect, acesta sevideaz\ de
con]inut, apoi se apreciaz\ r\spunsul femelei la tratamentul poliovulator,
palpndu-se cu aten]ie ambele ovare [i num\rdu-se corpiigalbeni
(foto 24).
~n cazul `n care r\spunsul la tratamentul desuperovulare este pozitiv, se
procedeaz\ cu precau]ie la introducereacateterului de tip Folley cu dou\ sau
trei c\i, prin conductul cervical pn\`n cornul uterin. Pentru rigidizarea
cateterului, se introduce pe
lumenulacestuia un mandren (tij\ metalic\), care se men]ine pn\ se ajunge
`nlumenul cornului uterin, apoi seretrage. Cateterul este introduscirca 5-8
cm de la bifurca]iacoarnelor uterine, pe unul dintreacestea, apoi se
introduce de laexterior, cu seringa, 8-15 ml de aer `n scopul fix\rii
cateterului [i pentru a `mpiedica refularea dincervix a lichidului de
sp\lare.Vasul din sticl\, ce con]ine lichidulde sp\lare se suspend\ la 1,5 m
dela sol [i, prin c\dere, acesta ajunge prin calea de admisie a cateterului`n
coarnele uterine. Irigareaacestora se face continuu, calea deevacuare a
lichidului esteconectat\, printr-un tub de plastic,la vasul de colectare a
mediuluirecuperat (de sp\lare). Recuperarealichidului de sp\lare se face
princalea de admisie (`n cazulcateterului cu dou\ c\i la care s-aadaptat o
pies\ `n forma literei (y)
Foto 24
Recoltarea embrionilor prinmetoda nechirurgical\
prev\zut cu canal de admisie [i evacuare al lichidului, ramura de evacuarea lichidului
fiind conectat\ la un filtru de colectare a c\rui orificii au undiametru de 75

m, care are rolul de re]inere a embrionilor, lichidul cetraverseaz\ filtrul fiind colectat `ntrun recipient situat sub filtru. Mediulfolosit la sp\larea unui corn uterin se folose[te la
sp\larea, `n acela[i mod,a celui de-al doilea corn uterin. Cantitatea de mediu care se
folose[te pentru sp\larea unui corn uterin este de 300-500 ml, efectundu-se
irig\rirepetate [i un masaj transrectal permanent al cornului uterin perfuzat.Exist\

diverse sonde de recuperare a embrionilor, imaginate de diver[icercet\tori, care se

bazeaz\ pe acela[i principiu constructiv
(Elsden [i colab., 1978, Newcomb [i colab., 1978, Cassou etc.).

113
~ntre momentul recuper\rii embrionilor [i cel al inocul\ri lor `nuterul
receptoarelor, zigo]ii trebuie s\ fie men]inu]i `n via]\ `n condi]iispeciale [i s\
fie manipula]i `n cele mai bune condi]ii tehnice [i igienice.Compozi]ia
mediilor de recoltare [i cultivare a embrionilor s-a modificatfrecvent `n
decursul timpului, pe m\sur\ ce cuno[tin]ele `n domeniu auavansat [i pe
baza multiplelor experien]e `ntreprinse.~n ultimii ani s-a generalizat
folosirea unei solu]ii tampon fosfat -PBS (Fosfat bufferet salin) pentru
sp\larea coarnelor uterine [i pentru p\strarea embrionilor recupera]i. Acest
lichid are un pH de 7,2, o presiune osmotic\ de 290 miliosmoli [i con]ine
multe s\ruri minerale,glucoz\ [i protein\ (albumin\ bovin\ seric\, 2-4 g/l, sau
ser de vi]el fetaldecomplementat 10%
(tab. 2)