Sunteți pe pagina 1din 7

Abstaract

Pe baza testele noastre de monitorizare microbiologic efectuat n 2011, am raportat aici


curent starea microbiologic a oarecilor i obolanilor adpostii n biobaze din Japonia. Am
testat mai multe mult de 14.000 de oareci, 6000 probe de ser, 500 mostre de fecale sau
mixurile fecale, i 200 de eantioane pulmonare din 3549 locaii pentru oareci din cadrul
universitilor japoneze i institute (U/I), companii farmaceutice i organizaiile de cercetare
(P / C). Am testat, de asemenea, mai mult de 1.500 de sobolani, 1.600 de eantioane de ser, i
20 de probe de fecale sau mixurile fecale din 772 U / I i P / C a locaiilor pentru obolani.
Culturi bacteriene, serologie, microscopie, PCR, i analiza ADN-ului, folosindu-se probe
ADN au fost efectuate. S-a ntalnit Staphylococcus aureus (18,8% n unitile pentru oareci,
58,6% n unitile pentru obolani) a fost agentul cel mai rspndit n ambele tipuri de locaii
pentru oareci i obolani. Urmtorii ageni de contaminare ca raspdire n locaiile pentru
oareci au fost Norovirus murine (11,97%), protozoare intestinale (0.05-8.49%, din diverse
specii), Pasteurella pneumotropica (5.32%), i Hepaticus helicobacter (3.17%), n timp ce
protozoare intestinale (0.74-6.84% din diverse specii), Syphacia murin (6.20%),
Pseudomonas aeruginosa (3.61%), i Pasteurella pneumotropica (3.05%) au fost ageni de
cele mai prevalente ulterioare locaiile pentru de obolani. Aceste rezultate sugereaz c n
momentul respectiv microbi predominante la oareci de laborator i obolani din Japonia sunt
patogeni oportuniti n principal, protozoare intestinal, i microbii cu patogenitate sczut.
Introducere
n prezent, oareci de laborator i obolani sunt utilizai pe scar larg n experimente pe
animale n multe domenii de studii. Pentru obinerea de rezultate experimentale fiabile
utilizarea de animale care sunt garantate de a avea calitate microbiologic i genetic este
necesar. Monitorizarea microbiologic este definitca testarea repetat a unei colonii de
animale pentru probe microbiologice selectate [11], este singura modalitate de a garanta
calitatea microbiologic a laboratorului de cercetare.
Statutul microbiologic al oarecilor i obolanilor n biobazelor i instituiilor de cercetare este
cunoscut pentru a schimba n timp. Numarul microbilor din elemente de testare este nc n
cretere, aa cum se arat de ctre descoperirea de ageni patogeni nou detectai, cum ar fi
Helicobacter hepaticus [2] i Norovirus murine (MNV) [13]. Cunoscnd situaia actual n
laborator microbiologic soareci si sobolani este indispensabil din punct de vedere de selec ie
de articole de monitorizare microbiologice n fiecare facilitate animal. Acest studiu descrie
microbiologic actual Starea de soareci si sobolani din instalaiile experimentale in Japonia. Ea
se bazeaz pe rezultatele noastre de microbiologice rezultatele testelor de monitorizare
colectate n 2011 de la instalaiile experimentale interne n universit i, naional sau institute
private companiile farmaceutice, i organizaii de cercetare de contract.
Materiale i metode
Animale i probe
n 2011, am testat 12,885 oareci, 2699 probe de ser, 311 probe de fecale sau mixurile fecale,
i 1 prob pulmonar din 2534 faciliti soareci, in universitati si institute de (U / I) n cadrul
Japonia, precum i 1656 oareci, 3,611 eantioane de ser,215 probe de fecale sau mixurile
fecale, i 248 probe pulmonar din 1015 faciliti mouse-ul n companiile farmaceutice i
organizaii de cercetare de contract (P / C) n Japonia. Noi testat, de asemenea, 745 obolani,

461 probe de ser, i 6 fecale sau probe cecale la 335 U / I faciliti obolan, precum i 768
obolani, 1.173 probe de ser, i 17 probe de fecale sau mixurile fecale de la 437 P / C
faciliti. Animale i probe de la comercial cresctori sau alte laboratoare de testare a
contractului nu au fost incluse n acest studiu.
Selectarea elemente de testare
Un total de 36 de elemente de testare de monitorizare microbiologice pentru oareci i 32 de
elemente de testare microbiologice pentru obolanii au fost folosit n acest studiu (tabelele 1 i
2). Microbii au fost clasificate n modul urmtor pentru patogenitate lor [12]: agenti patogeni
categoria A, zoonotici i umane efectuat prin oareci sau obolani; Categoria B, mouse-ul
autohton au ageni patogeni de obolan care pot provoca boli simptomatic i moarte
ocazional de oareci sau obolani; Categoria C, microbi care provoaca de obicei infectii
asimptomatice de oareci sau obolani nsoite cu modificari in functii fiziologice; Categoria
D, microbi care pot cauza oportuniste infecii; i categoria E, microbi care sunt, de obicei non
patogen dar indic starea de igien a creterii mediu.
Teste de cultur: teste de cultur s-au efectuat pentru toate bacterii cu excepia Helicobacter
hepaticus, Helicobacter Bilis, asociate cili respiratorii Bacillus (CAR bacilul), i Clostridium
piliforme. Conjunctival i traheale tampoane au fost brzdat direct agar snge de cal (Eiken
Chemical Co, Ltd., Tokyo, Japonia) i / sau de Chanock PPLO agar [9] suplimentat cu ser de
cal (Life Tehnologii, Carlsbad, CA, USA) i extract de drojdie (realizate in-house) pentru
agenii patogeni respiratorii. Cuprins Cecal au fost brzdat pe geloze selective, cum ar fi DHL
agar (Eiken chimice), NAC agar (Eiken chimice), i X-SA agar (Nissui Pharmaceutical Co.,
Ltd., Tokyo, Japonia) pentru a evalua prezena agenilor patogeni intestinali. Coloniile au fost
recuperate din plcile cu agar dup incubations la 37 C timp de 24 h (DHL agar i X-SA
agar), 48 h (agar cu snge i NAC agar), sau 7 d (PPLO agar). colonii suspectate de a fi agent
la punctele bacteriene au fost pasaje i a stabilit ca o cultur pur cu snge de cal agar (Eiken
chimice) sau inima infuzie agar (Eiken Chimic). Izolatele bacteriene au fost apoi identificate
folosind urmtoarele teste: coloraia gram, de testare catalaza, Testul oxidazei, i teste
biochimice folosind comercial kituri disponibile, cum ar fi seria Api (Sysmex bioMrieux Co,
Ltd., Tokyo, Japonia) i serie de teste de identitate (Nissui Pharmaceutical). Pentru
identificarea Staphylococcus pulmonis aureus i Mycoplasma, raportate anterior Testele PCR
au fost utilizai fr testele biochimice [6, 8]. Pentru izolarea dermatofi i, un mic e antion de
pr a fost obinut de la umrul i din spate a animalelor i inoculate pe dextroz de cartof
agar (Eiken chimice). Dup incubare la 25 C timp de 14 d, plcile cu agar au fost evaluate
pentru existena unor colonii. Cand Coloniile suspectate a aprut pe agar, au fost identificate
pe baza morfologiei lor [17].
Serologie: Testele serologice au Fost efectuate pentru M. pulmonis, C. piliforme, bacilul
masina I Toate elementele virale cu excepia MNV. Serurile de Testare s-au diluat 1:40
pentru ELISA Sau 01:10 pentru testele de imunofluorescen indirecta (IFA) si teste de
aglutinare. Cca ONU Anticorp secundar pentru aceste teste, Proteina A I anti-obolan IgG au
Fost utilizate pentru oarece sonda I Mostre de obolan ELISA, respectiv. FITC IgG antioarece marcat cu FITC I anti-obolan IgG au Fost Utilizare de deseuri cca anticorpi
secundari version IFA pentru sonda DIN FIECARE derivate specie respective.
n centrul nostru, s-au efectuat cele mai multe teste serologice folosind ELISA ca test de
depistare primar i IFA ca testul de confirmare. Pentru testul parvovirusul oarece (MPV), un

antigen recombinant (vezi mai jos) a fost utilizat pentru ELISA, i virusul oarece minute
antigen s-a utilizat n IFA Anticorpii pentru a detecta reactivitate incrucisata [14]. Limfocitara
virusul coriomeningitei (LCMV), virusul obolan Kilham, i H-1 virus au fost testate cu
ajutorul IFA singur. Unele serologic teste, cum ar fi cele pentru Corynebacterium kutscheri i
Salmonella typhimurium, au fost realizate utiliznd aglutinare teste [12]. Toate plcile ELISA
au fost preparate n centrul nostru, cu excepia testelor 5 ELISA (hepatita mouse-ul virus
[MHV], M. pulmonis, hantavirus, virusul Sendai, i C. piliforme). Kituri ELISA disponibile
comercial (MOBILISM , Wakamoto Pharmaceutical Co, Ltd., Tokyo, Japonia) au fost
utilizate pentru aceste 5 teste. Recombinant MPV au fost furnizate de antigen [14] utilizate n
testul ELISA MPV Universitatea Tsukuba de. Slide-uri antigen IFA au fost preparate de
centrul nostru, cu excepia testelor IFA pentru LCMV i hantavirus, pentru care au fost
furnizate diapozitive antigen de Universitatea Nagasaki Universitatea Hokkaido i, respectiv.
S-au efectuat procedurile de testare serologice printr-o metod descris anterior [4]. Toate
Numele tulpina de bacterii i virusuri utilizate ca serologic antigene sunt enumerate n tabelul
3.
Microscopie: s-au efectuat analize microscopice pentru ectoparazii, protozoare intestinale,
oxiuri, i Pneumocystis spp. Band din celofan fost impresionat la fesa i / sau posterioar,
precum i zona perianala pentru examinarea microscopic a ectoparaziilor i pentru
examinarea ovulele Syphacia spp, respectiv.. Un rect prob a fost plutea ntr-un vas Petri cu
soluie salin pentru determinarea prezenei Aspiculuris tetraptera. Cnd existena oxiurilor
fost observat macroscopic intr-un vas Petri, au fost identificate oxiuri pe baza morfologiei
lor, prin utilizarea unui microscop. Wet monta specimenele de coninut duodenal sau mixurile
fecale au fost amestecat cu o pictur de soluie salin i examinate microscopic pentru
determinarea protozoare intestinale. Speciile Determinarea de protozoare intestinale a fost
realizat de ctre Analiza morfologic precum i pe baza modelele lor de circula ie
caracteristice.
Proba Omogenatul pulmonar au fost microscop a examinat cu albastru de toluidin O colorare
pentru Pneumocystis spp. [3]. n cazul n care existena unor Pneumocystis-ca Au fost
observate chisturi, un test PCR raportate anterior pentru Pneumonia [10] a fost realizat pe
alicotat probe pentru a confirma prezena acestei ciuperci.
Teste moleculare: Testele PCR de H. hepaticus i H. s-au efectuat Bilis precum RT-PCR teste
pentru MNV utiliznd primeri i proceduri raportate anterior [4, 5]. Probe de fecale sau
cecale au fost obinute de la animale i depozitate la -80 C pn s-au efectuat testele. Drept
confirmare Teste pentru toate probele pozitive PCR de H. Hepaticus i H. Bilis, analiza ADNului, folosind chips-uri ADN a fost efectuat. Dispozitivul ADN cip-analiza (Analyzer, Toshiba
Corporation, Tokyo, Japonia), truse de analiza (Monigene elicopter, Toshiba), i cip ADN-ului
s-au folosit n conformitate cu instruciunile productorului. Toate PCR produse n testele
MNV RT-PCR au fost esalonate direct i comparat cu datele disponibile ntr-o baz de date
public (GenBank) pentru verificare.
Analiza datelor
In acest studiu, o cerere a fost considerat ca o instalaie de indiferent din numrul probei.
Facilitile au fost clasificate ca U / I sau informaii PC utiliznd furnizate de client, iar
rezultatele au fost compilate pentru fiecare U / I i PC.
Bacterii

Staphylococcus aureus a fost microbian cea mai raspandita agent la oareci i obolani, n
ambele U / I i P / C faciliti. Procentul rata de infectare pozitiv Staphylococcusaures fost
18,8% (U / I, 21.45%, i P / C, 10,87%), n mouse-ul faciliti i 58.62% (U / I, 68.42%, i P /
C, 40,0%) n instalaiile de obolan. n facilitile de mouse-ul, Pasteurella pneumotropica
(6.14%), H. hepaticus (4.33%), Pseudomonas aeruginosa (2.75%), H. Bilis (0.25%), i M.
pulmonis (serologice, 0,1%, i de cultur teste, 0,05%) au fost urmtoarele microbii cea mai
raspandita in instalaiile U / I. Dei nu ali ageni bacterieni au fost detectate n soareci, in
instalaiile P / C prin efectuarea testelor de cultur, s-au gsit cazuri seropozitivi de M.
pulmonis (0,46%).
n instalaii de obolan, Pseudomonas aeruginosa (3,61%), Pneumotropica Pasteurella
(3,05%), CAR bacilul (1,49%), C. piliforme (0,97%), i M. pulmonis (serologie, 0.57%)
urmate Staphylococcus aureus ca urmtoarea microbi cele mai prevalente. Dintre aceti
ageni, Pseudomonas aeruginosa, C. piliforme, i, au fost detectate M. Pulmonis sau
seropozitivi n 5,88, 1,7, i 1,08% n U / I obolan faciliti, respectiv. Cazuri seropozitivi de
CAR bacilul au fost gsite doar n P / C facilitati de obolan (2,22%).
Virusuri
n facilitile de mouse-ul, MNV fost cele mai prevalente agent viral. Procentul rata de
infectare pozitiv MNV fost 11.97% (U / I, 9.38%, iar P / C, 23.81%). MHV a fost al doilea
agent viral cea mai raspandita. Pozitive procent rata de infectare a fost de 0,68% MHV (U / I,
0,5%, i P / C, 1,37%). Cazuri pozitive pentru oricare dintre celelalte ageni virali au fost
detectate la oareci din ambele U / I i P / C faciliti. n facilit ile de obolan, nici un caz
seropozitive au fost detectate n ambele U / I i P / C faciliti.
Alti agenti
n P faciliti de mouse-ul / C, nu ageni de parazitare (adic, intestinal Au fost detectate
protozoare, oxiuri, sau ectoparazii). n faciliti de mouse-ul U / I, The parazitare cea mai
raspandita agent a fost amoeba (9,75%). Octomitus intestinalis (7.96%), murin
Tritrichomonas (5.68%), Bettencourt Chilomastix (3,41%), Aspiculuris tetraptera (3.26%),
Syphacia obvelata (1.51%), i Spironucleus murin (0.05%) au fost cele mai prevalente
urmtor parazitare ageni n oareci. Pneumonia murina a fost detectat n soareci, in ambele
U / I i faciliti P / C (U / I, 0,48%, i P / C, 1.41%).
Similar cu soareci in P / C faciliti, nu ageni parazitare au fost detectate n obolanii
adpostite n P / C faciliti. / I faciliti mai agent parazitare raspandita la obolani adpostite
n U a fost amoeba (10.17%). Syphacia Muris (9.29%), Tritrichomonas murin (4.52%),
intestinalis Octomitus (3.39%), Chilomastix Bettencourt (1.13%), Murin Spironucleus
(1.09%), i Aspiculuris tetraptera (0,56%), urmate ca urmatorul parazitare mai raspandita
Ageni la obolani.
La oarece i obolan de necropsii, leziuni macroscopice n mare organe (38 cazuri de leziuni
la nivelul ficatului, 18 cazuri de leziuni n plmni, 9 cazuri de leziuni la nivelul pielii, 6
cazuri de leziuni in ganglionii limfatici, splin i 4 cazuri de leziuni n rinichi, 2 cazuri de
leziuni n glandele de mamifere, i 1 caz de leziuni ochiului) au fost observate la 78 de oareci
i obolani. Dintre acestea, Staphylococcus aureus a fost izolat din 2 cazuri de abcese
subcutanate in C57BL / 6 oareci, Pasteurella pneumotropica fost izolat din 1 caz de

consolidare pulmonar ntr-un modificate genetic mouse-ul, i pneumonia murina a fost


detectat n 2 cazuri de consolidari pulmonare n modificate genetic oareci.
Discutii
In acest studiu, am aratat microbiologice curent Starea de soareci si sobolani adpostite n
instalaii experimentale n Japonia, pe baza datelor colectate de la 2011 microbiologic nostru
rezultatele testelor de monitorizare. n centrul nostru, a fost dificil s verifice dac probele
provenite de la fie o facilitate SPF sau non SPF-facilitate. Prin urmare, Rezultatele au fost
clasificate i analizate ca fiind originare de la U / I sau P / C.
n studiul nostru, ne-am propus pentru a nelege tendinele actuale de microbii predominante
din elemente de monitorizare selectat la oareci i obolani din faciliti experimentale, i, de
asemenea scopul de a oferi informaii practice pentru lucrtorii din aceste faciliti
experimentale n schimb. Prin urmare, date au fost clasificate n U / I i facilit i PC i
macroscopic analizat pe baza numrului facilitate n acest studiu. O analiz bazat pe
numrul eantion de date noastre va prezenta rate mai mici dect cele pozitive, de instala ie
Analiza pe baz de numr pentru fiecare microb. n cazul n care unii microbi considerate
pozitive n oareci i obolani, numrul de faciliti testate pentru microbi, cum ar fi
Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, pneumonia murina, Helicobacter hepaticus,
Helicobacter Bilis, i MNV pentru soareci si Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus
aureus, Bacillus CAR, i pneumonia carinii pentru obolani au fost de cel pu in 10 ori mai
mic dect pentru altor microbi testate. Dei testarea unui numr mare de facilit i ar trebui s
dezvluie valori mai aproape de real cifrele pentru prevalena microbii men ionate de mai sus,
discuia de mai jos se bazeaz pe premisa c datele noastre reprezint diferena indicat n
numr testate printre fiecare microb.
Am descoperit ca soarecii adapostite in facilitile U / I au fost pozitiv pentru 17 elemente, n
timp ce soareci in P / C faciliti au fost pozitive pentru 5 articole. O tendin similar (U / I,
12 articole, i P / C, 3 articole) a fost observat pentru instalaiile de obolan. Astfel, calitatea
microbiologic a oarecilor i obolanilor adpostite n P / C faciliti este mai mare dect cea
a oarecilor i obolanilor adapostite in instalatii U / I.
n studiul de fa, Staphylococcus aureus a fost gsit a fi agentul bacterian cea mai raspandita
in ambele mouse-ul i faciliti de obolan. Aceasta bacterie este privit ca un oportunist
patogen pentru animale imunocompeteni i este de multe ori nu este inclus ca un element test
de rutina pentru imunocompetent soareci si sobolani de o parte din reclama cresctorii din
Japonia. n centrul nostru, Staphylococcus aureus a fost considerat ca un element op ional
pentru imunocompetent animale. Acest context cu privire la testarea pentru acest patogen
oportunist poate fi o cauza a ridicat prevalenta de Staphylococcus aureus la oareci i
obolani, n Japonia.
Urmtorii ageni bacteriene cele mai prevalente gsit n facilit i de mouse-ul au fost
pneumotropica Pasteurella i H. hepaticus, cu Pseudomonas aeruginosa n urma indeaproape.
n faciliti de obolan, Pseudomonas aeruginosa i Pasteurella pneumotropica au fost cel mai
mult ageni bacterieni predominante urmtoarele Staphylococcus aureus. Cu excep ia H.
hepaticus, aceste bacterii sunt clasificate n categoria D patogeni (ageni patogeni oportuniti)
n centrul nostru.

Impreuna, aceste rezultate sugereaza ca cele mai prevalente ageni bacterieni la oarece i
obolan faciliti n Japonia sunt ageni patogeni oportuniti.
Grupul nostru raportate anterior prevalena Specii de Helicobacter n colonii mouse-ului n
Japonia, n 2000 [7], i H. hepaticus i H. Bilis au fost detectate n 25,5 i 2.1% din coloniile
de oarece testat, respectiv. n studiul de fa, ratele de infectare pozitive ale H. hepaticus i H.
Bilis au fost 3,17 i 0,17%, respectiv. Aceast scdere a ratelor de infectare pozitive pentru
Helicobacter specii pe o perioad de 10 ani n aceste oarece faciliti se poate datora o
mbuntire a gradului de contientizare de utilizare dintre aceti ageni, precum i
mbuntiri n stabilirea sisteme de testare pentru aceste medicamente n fiecare unitate de n
ultimii 10 ani.
M. pulmonis a fost agentul bacterian singura categorie B (patogeni mortale) detectate n
instalaii mouse-ului si obolan n acest studiu. Dei rata de infectare pozitiv pentru M.
pulmonis a fost relativ sczut (faciliti de mouse-ul, 0,16%, i faciliti de obolan, 0,57%,
prin teste serologice), acest agent ar trebui s fie inclus ca un element test de rutin, avnd n
vedere sale patogenitate la oareci i obolani.
n termen de ageni virali, MNV a fost cel mai frecvent agent viral n instala ii de mouse-ul,
urmat de MHV. Nici una agenilor virale testate n acest studiu au fost detectate n facilit ile
de obolan. Centrul nostru a nceput n mod oficial pentru a testa pentru MNV n 2009. La
acel moment, am raportat o MNV pozitiv rata de infectare de 25,4% prin efectuarea PCR n
mouse-ul faciliti n Japonia [5]. n studiul de fa, pozitive Rata de infectare a fost de
11,97% MNV. Dei pozitive rata de infectare de MNV a sczut n ultimii 3 ani, este nc
relativ ridicat. Infecia pozitiv MNV Rata poate scdea n viitor, ca fiecare instalatie ncepe s
includ agentul, ca parte a lor de rutina microbiologice Testarea. MHV a fost agentul viral
singura categorie B (fatal patogeni) pentru a fi detectate la oareci. Aceste rezultate
demonstreaz c exist infecii MHV sporadice n mouse-ului faciliti i puternic sugereaz
c ar trebui s fie incluse MHV ca o parte a unui screening microbiologic de rutin, avnd n
vedere patogenitatea sa la soareci.
Este bine cunoscut faptul c nu a protozoarelor sau oxiuri sunt detectate la oareci i obolani
prin cezariana derivate derivate din colonii-barier susinut. Prin urmare, acestea au fost
clasificate n centrul nostru ca ageni categoria E i testate ca Indicatorii de stare
microbiologice a coloniilor de animale; cele notabile excepii de la aceast categorie de
clasificare E au fost Muris Giardia, Muris Spironucleus, i Aspiculuris tetraptera, care au fost
raportate ca fiind potenial patogeni [1, 16, 18]. n studiul de fa, nu prevalenta de protozoare
intestinale n categoria E a fost gasit in nici P / C-ul sau de obolan facilit i. Aceste date a
sugerat c stricte Sisteme de carantin i de ntreinere a animalelor sunt comune n P / C
faciliti.
Cercetatorii intr-un laborator de diagnostic in Statele Unite ale Americii efectuat un sondaj de
microbi predominante pentru un numr mare de de probe mouse-ul si sobolan n 2003 [15].
Acestea au raportat rate pozitive relativ ridicate pentru MHV (aproximativ 2%), MPV (peste
2%), diareea epizootic de oareci sugari Virusul (aproximativ 1%), i Helicobacter spp.
(peste 30%) n oareci i pentru virusul pneumoniei de oareci (aproximativ 1%), obolan
parvovirusul (peste 1.5%), Helicobacter spp. (circa 18%), oxiuri (peste 10%) i Pneumocystis
carinii (despre 4%) la obolani. n studiul de fa, nu am detecta orice acestor microbi
excepia MHV, dei Helicobacter spp. i parvovirusul obolan nu au fost incluse n nostru

elemente de testare. Aceste rezultate sugereaz c exist geografic caracteristici legate de


prevalenta de microbi n oareci i obolani. Elementele de testare menionate mai sus ar
putea avea nevoie care urmeaz s fie examinate la oareci i obolani importate din SUA pe
durata carantinei.
Am descris n acest studiu microbiologic actual Starea de soareci si sobolani adpostite n
instalaii experimentale n Japonia pe baza rezultatelor microbiologice noastre teste de
monitorizare efectuate n 2011. n rezumat, ageni microbieni predominante gsite n prezent
n experimental faciliti n Japonia au fost n principal oportuniste agenti patogeni, cum ar fi
Staphylococcus aureus i intestinale protozoare, n ambele facilitile la oareci i obolani; n
plus, MNV i H. hepaticus au fost predominante n mouse-ul faciliti. n cele din urm,
prevalena agenilor patogeni mortale, cum ar ca MHV i M. pulmonis a fost relativ mic.