Sunteți pe pagina 1din 31

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE

FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO


FALCULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO
CATEDRA DE:
TCNICAS HISTOLGICAS

DOCENTE:
LIC. IVN PEAFIEL
TEMA:
FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE
PENETRACIN, VELOCIDAD DE FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN,
VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE EXPOSICIN
EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

GRUPO N 3

TERCER SEMESTRE

Grupo N-3

Pgina
1

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

PERIODO ACADMICO: OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016

RIOBAMBA ECUADOR
GRUPO N-3

INTEGRANTES:
N1
2
3

APELLIDOS Y NOMBRES
Collaguazo Enrquez Erika Gabriela
Molina Ortiz Jhonnatan Paul
Valarezo Flores Stefanye Anah
TEMA:

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD


DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE FIJACIN, USO DE ACUERDO AL
ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y
TIEMPO DE EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE
ANOMIA PATOLGICA.

N1

25%

Grupo N-3

50%

75%

PARTICIPACIN
100%
Observacin
100%
Trabajo correctamente, y
colaboro en todo lo
necesario.
100%
Colaboro con todas las
necesidades requeridas,
para la elaboracin del
presente trabajo
100%
Su colaboracin fue clave
para la correcta
elaboracin del trabajo.
Pgina
2

Cal. Docente

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

INTRODUCCIN
El Laboratorio de Anatoma Patolgica es un rea donde se trabaja como mucha precaucin y sobre
todo sin cometer errores ya que estos conllevaran un resultado que perjudicara al paciente y en si al
mismo profesional.
En el rea de anatoma patolgica se subdivide en fases que son:

La fase pre

analtica-analtica-post analtica.
Dentro de la fase analtica se encuentra la sub rea de batera de fijacin la cual indicaremos cuales son
los tipos de fijadores con o sin formol con sus respectivas caractersticas utilizados en distintas
muestras de rganos.
Antes de la fijacin tisular debemos de obtener la muestra. La extraccin de esta constituye la primera
parte del estudio histolgico; es el Antomo Patlogo el que se pone en contacto con el rgano que se
vaya a estudiar. A ser posible se debe efectuar la extraccin tomando un fragmento de la lesin y una
toma de los tejidos subyacentes. Su grosor no debe sobrepasar los 5 mm.
La fijacin tisular consiste en interrumpir los procesos degradativos que a parecen tras la muerte celular
es decir evitar la autolisis, tratando de conservar la morfologa y composicin de los tejidos lo ms
prxima a la normalidad. La fijacin debe ser inmediata (dentro del minuto que sigue a la extraccin
del tejido).
La fijacin proporciona una imagen esttica:

Imagen real: es la imagen que tena el tejido cuando estaba vivo-

Grupo N-3

Pgina
3

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

Imagen equivalente: es el que se obtiene despus de la manipulacin y comprende la fijacin,


inclusin, corte y coloracin.

Se distinguen dos tipos de fijadores:

La fijacin inicial o primaria: realizada de forma inmediata sobre el tejido fresco.

La refijacin o fijacin secundaria: se realiza con un segundo fijador para algunas estructuras
especiales o simplemente para intensificar la fijacin inicial.

Grupo N-3

Pgina
4

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

OBJETIVO GENERAL:
Dar a conocer los tipos de fijadores utilizados en distintos rganos dentro del laboratorio de anatoma
patolgica

OBJETIVO ESPECFICOS:
Reconocer los fijadores que no contengan formol y a su vez los que si contienen formol.
Conocer e identificar las caractersticas de los fijadores con o sin formol.
Identificar las ventajas y desventajas que producen estos fijadores.
Dar a conocer el uso de los fijadores de acuerdo al espcimen.
Conocer el tiempo de exposicin del personal de anatoma patolgica a estos fijadores.

Grupo N-3

Pgina
5

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

DESARROLLO
La Fijacin
Los fijadores adems de conservar intacta la estructura durante un espacio de tiempo ms o menos
largo, paralizan todos los procesos orgnicos.
La fijacin ideal se realiza entre 0C y 4C porque aunque el fro retarda la accin del fijador al
contraer la pieza, tambin paraliza la autolisis del tejido que ser ms o menos rpida dependiendo por
ejemplo los tejidos ricos en enzimas digestivas como el pncreas o aquellos que tienen gran cantidad de
grmenes sufran la autolisis con mayor intensidad.
Las soluciones fijadoras tienen por objeto precipitar las protenas, aumentar la consistencia de los
tejidos, inactivar las enzimas proteolticas e inhibir el crecimiento bacteriano y por lo tanto, preservar la
constitucin qumica y la morfologa de los componentes titulares.
Cuando las piezas quirrgicas son pequeas o las muestras son obtenidas por aspiracin y de no
existir indicaciones de realizar improntas, frotis para citologa, estudios inmunohistoqumicos o de
microscopa electrnica que requieran fijacin especial se colocarn inmediatamente en formol
buferado al 10% en una relacin de 10 a 1 fijador/muestra. Para una mejor fijacin las piezas no deben
exceder de un espesor de 3 mm y un tamao de 3 x 2 cm
Principios generales de la fijacin.
No existe un mtodo universal de fijacin, por lo que un agente fijador para un tejido
no tiene porque ser adecuado para otro.
Grupo N-3

Pgina
6

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido, porque fijacin no equivale


a conservacin tisular.
Un defecto en la fijacin nunca puede ser corregido.
Es intil realizar un estudio histolgico sobre un material con grandes defectos de
fijacin.

FIJADOR IDEAL CARACTERSTICAS:


Prevenir la autlisis
Preparar el tejido para el procesado posterior
Prevenir el dao osmtico
Preparar al tejido para la tincin posterior
Endurecer el tejido para facilitar su fcil seccin
Prevenir al tejido de retraccin y de rotura
Hacer que los componentes tisulares resistan la extraccin por el agua y los solventes
orgnicos
Preservar el tejido en un estado similar al estado vivo.

CRITERIOS PARA OBTENER UNA BUENA FIJACIN.


a) Eleccin del fijador
La solucin fijadora a utilizar depende del estudio que se quiere realizar. Para las preparaciones de
tejidos y rganos, en las que interesan un estudio topogrfico de los mismos, deben usarse fijadores con
un buen poder de penetracin y de difusin. Para estos casos se recomienda utilizar los lquidos de
Zenker, Boin o Helly: En caso contrario se emplear la solucin de formol al 10% 15% que permite
obtener resultados satisfactorios. Lquido considerado como el fijador universal pues facilita el
empleo posterior de cualquier otro fijador (postfijacin) capaz de complementar su accin. se emplear
la solucin de formol al 10% 15% que permite obtener resultados satisfactorios. Lquido considerado

Grupo N-3

Pgina
7

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

como el fijador universal pues facilita el empleo posterior de cualquier otro fijador (postfijacin)
capaz de complementar su accin.

b) Tamao de las muestras.


El tamao y grosor de las muestras deben ser pequeas y delgadas, de 1cm2 a 2 cm2 y con un espesor
de 2 mm a 5 mm, especialmente si se emplean fijadores con escaso poder de penetracin y de difusin.
c) Volumen del fijador. Una proporcin que es necesario emplear ser de 1 a 20 (muestra fijador).
Ser la ms adecuada para garantizar una buena fijacin

d) Tiempo de fijacin.
El tiempo en la fijacin es importante en dos aspectos.
I.

El intervalo que media entre la interrupcin del aporte sanguneo y la inmersin de las muestras
en la solucin fijadora. Lo deseable es que las muestras se fijen inmediatamente despus de
obtenidas mediante una biopsia o que la necropsia se efecte al poco tiempo de producida la
muerte. Mientras ms largo es este lapso, los procesos autolticos que sufran los tejidos sern
ms evidentes.

II.

Debe tenerse en cuenta el tiempo que permanecern las muestras sumergidas en los fijadores.
Este tiempo vara con relacin al tipo de fijador que se utiliza; al tamao y la naturaleza de la
muestra y la temperatura de fijacin. Por lo tanto los lapsos de fijacin varan en rangos muy
amplios. En cualquier circunstancia, siempre deben respetarse los tiempos recomendados para
cada tipo de fijador para garantizar la conservacin de una buena estructura celular y tisular de
los tejidos.

e) Temperatura de la fijacin.
Es recomendable efectuar la fijacin a bajas temperaturas ( 4o C.) dentro de un refrigerador y con la
solucin fijadora enfriada previamente. Este procedimiento retardar el tiempo de fijacin pero
disminuir de manera notable la autlisis de los tejidos.

f) Almacenamiento de las muestras.


Grupo N-3

Pgina
8

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

En ciertos casos los tejidos fijados no necesitan ser procesados inmediatamente para aplicarles otros
pasos de la tcnica histolgica. Por lo tanto es conveniente almacenar y conservar los tejidos fijados
para un uso posterior. Despus de eliminar el fijador mediante un lavado, se guardan en una solucin
de alcohol al 70%. As los tejidos pueden guardarse por un tiempo bastante largo sin que sufran
modificaciones morfolgicas notorias.

g) Lavado de las muestras fijadas.


Al concluir la fijacin, el fijador debe ser eliminado de las muestras. Para tal fin se procede al lavado
de los tejidos mediante agua o alcohol. Se evita, as, que los tejidos se endurezcan demasiado o que
ciertos componentes del fijador introduzcan modificaciones en los tejidos e impidan una adecuada
obtencin de secciones delgadas o la coloracin correcta de sus componentes celulares.
TIPOS DE FIJADORES
Clases de fijadores segn su mecanismo de accin
FSICOS
Congelacin: Se utiliza como mtodo para la fijacin el enfriamiento por congelacin del tejido es el
mtodo de eleccin para realizar estudios morfolgicos o funcionales en los que se requiere conservar
intacta la estructura antgena del tejido o su contenido enzimtico. La clave para una correcta fijacin
por congelacin del tejido es que su realizacin sea instantnea porque un enfriamiento lento provoca
la formacin de micro cristales titulares de hielo que pueden agregarse con el paso del tiempo
produciendo roturas titulares que dificulten el diagnosticoEl procedimiento idneo para fijar tejidos por congelacin consiste en utilizar ISOPENTANO a menos
de 50C como agente de congelacin y realizar una fragmentacin suficiente de la muestra que se vaya
a congelar.
Normalmente se preparan bloques de no ms de 3 cm. cuadrados de superficie y 3 mm de espesor de
modo que el proceso de congelacin instantnea no requiera ms de 10 segundos. El mantenimiento
Grupo N-3

Pgina
9

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

continuo de isopentano debe realizarse en un congelador programado a -70C para que quede
compensado la subida inmediata de la temperatura que se produce al extraer el lquido del congelador.
Al enfriar tanto no actan bacterias ni enzimas y el tejido se endurece para cortar estos tejidos
utilizamos el micrtomo de congelacin o un aparato ms evolucionado o criostato el cual tiene como
ventajas que la temperatura se mantiene ms baja y se pueden realizar cortes ms finos entre 2 y 15
micras.
Criodesecacin o filiacin: Consiste en someter al tejido a dos procesos el primero es la fijacin
instantnea por congelacin en Nitrgeno lquido y el segundo desecacin por sublimacin directa del
agua confiada a vapor en una bomba de vaco es un proceso complicado y costoso pero tiene una
ventaja muy importante y es que al eliminar totalmente el agua tisular, paraliza la autolisis y produce
una conservacin indefinida, adems evita que se produzcan enlaces qumicos entre el tejido y el
fijador, conservando asila estructura antignica tisular.
Criosustitucin: es la sustitucin lenta y progresiva del agua congelada de un tejido por un lquido
fijador que en ocasiones puede actuar simultneamente como medio de inclusin. Tras la congelacin
instantnea del tejido con nitrgeno liquido o isopentano a -50C se coloca el tejido congelado en el
medio de sustitucin, este medio est formado por una mezcla de alcohol etlico, acetona y propilnglicol. Enfriado a -40C, el intercambio del agua tisular por el lquido de sustitucin, se realiza dentro
de un congelador y debe procurarse que la temperatura no disminuya del punto de congelacin del
lquido de sustitucin.
QUMICOS
FIJADORES QUE ACTAN POR RETICULARIZACIN DE LAS PROTENAS
El proceso que denominamos reticularizacin de las protenas sobreviene cuando la desnaturalizacin
de stas molculas de se produce no por precipitacin, sino porque el agente que provoca el fenmeno
induce la rotura masiva de los puentes de Hidrgeno determinantes de la estructura helicoidal de las
Grupo N-3

Pgina
10

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

molculas proteicas, con la formacin posterior de una malla reticular polipeptdica por asociacin
qumica entre los grupos activos desenmascarados por el lquido fijador.
Entre los principales fijadores tenemos:
Formaldehdo o formol: Es gaseoso en estado puro, se vuelve

liquido a 21C, es txico y

con un olor caracterstico. Se disuelve fcilmente en agua y en ste

estado en concentraciones

entre 35-40% y estabilizado con metanol se denomina formalina

pura o formol con la

accin del fro la formalina pura tiende a precipitar y esta

situacin

reversible aadiendo unas gotas de NaOH y concentrando la

mezcla. Como agente

fijador el formaldehdo se emplea a una concentracin del 4%

pero como se parte de

suele

ser

una solucin de formalina sta concentracin se obtiene diluyendo una parte de sta de la formalina en
9 de agua en formacin salina o tampn.
Ventajas: Es el fijador ms barato que existe por lo tanto es de eleccin para los trabajos de rutina en
Anatoma patolgica.
Es un buen fijador nico que determina una moderado conversacin de la estructura tisular.
Por ser buen desinfectante y no endurecer excesivamente los tejidos, es un medio ptimo para
conversar y almacenar biopsias y piezas quirrgicas.
Provoca escasa retraccin tisular
Posee una velocidad de penetracin intermedia entre la de los alcoholes y la del sublimado
Tiene aproximadamente una velocidad de un milmetro por hora apenas altera la coloracin
tisular, por eso es el agente de eleccin para fijar grandes piezas quirrgicas.
Es excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general y se emplea como agente de
eleccin para fijar el tejido nervioso y en general antes de cualquier impregnacin argntica.
El proceso de fijacin puede ser acelerado o retrasado sin graves inconvenientes modificando la
temperatura, as a temperatura ambiente se consigue un fijador completa a partir de las 36
Grupo N-3

Pgina
11

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

horas. A 35 entre 12 y 24 horas y a 55C en solo 3 horas. Por este motivo la formalina es un
fijador de eleccin cuando se emplean hornos de microondas en tcnicas de histotecnologa.
Es compatible con la mayor parte de las tinciones que se utilizan rutinariamente en Anatoma
patolgica.
Inconvenientes:
Produce abundantes vapores de carcter irritante sobre la conjuntiva y mucosa nasal.
Por accin de la luz y del oxgeno atmosfrico se transforma progresivamente en cido frmico
y sta sustancia tiene la propiedad de disolver rpidamente la cromatina nuclear por eso con el
paso del tiempo los ncleos celulares adoptan un aspecto fantasma para evitar este
inconveniente el formol debe guardarse en frascos opacos o emplearse en forma de solucin
neutra o tamponado.
Posee una relativa capacidad de fijacin sobre las protenas, los pigmentos que contienen hierro
y los derivados de la bilirrubina, a stos ltimos les da una coloracin verdosa.
Tras la utilizacin prolongada de formalina debido a que se convierte en cido frmico confiere
a las piezas un tinte grisceo y en tejidos que tienen mucha sangre da origen a un pigmento
formlico que es negro o pardo oscuro que precipita en aglomeraciones irregulares sobre
estructuras preexistentes. Este pigmento se puede eliminar sumergiendo los cortes en alcohol
absoluto saturado con acido pcrico compuesta por 10, 12 gramos de pcrico en alcohol etlico al
95-100% durante 5 minutos. O bien podemos sumergirlo en alcohol amonacal que es el de 1 a 5
partes de hidrxido amnico en 95 a 99 de alcohol etlico al 70%. En este caso se tratan los
cortes durante 15 minutos, seguidos de dos baos de agua destilada y despus otro de alcohol al
70% de 5 minutos de duracin cada uno.
Soluciones fijadoras simples que contienen formol: hay 4 tipos:

Grupo N-3

Pgina
12

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

Formol salino: Se utiliza para prevenir el efecto osmtico que provoca el empleo de disoluciones de
formaldehdo en agua destilada y se prepara disolviendo 9 gramos de cloruro sdico en 1000 mililitros
de formalina al 10%.
Formalina neutra: Se prepara aadiendo a la solucin de formalina al 10% una pequea cantidad de
carbonato clcico insoluble que queda depositado en el fondo del recipiente neutraliza esta sal el
exceso de acido frmico que se produce y aunque puede utilizarse todava para la formacin de tejidos
en la prctica ha sido desplazada por las soluciones tamponadas.
Formol tamponado: Es la solucin ms empleada hoy en da para prevenir el choque osmtico que
provoca la disolucin de formalina en agua destilada y el depsito de pigmento formlico que ocurre a
un pH inferior a 6. Se prepara de la siguiente manera, como amortiguador se emplea el tapn fosfato
calibrado con pH de 7.0 a 7.2 de la siguiente frmula:
FORMALINA PURA..100.0 ml.
FOSFATO SDICO MONOBSICO.4.0 gr.
FOSFATO SDICO DIBSICO (ANHIDRO**)...6.5 gr.
AGUA DESTILADA....900.0 gr.

Se emplea fundamentalmente para fijar tejidos nerviosos en la preparacin de algunas tcnicas de


impregnacin argntica. Y se prepara aadiendo una parte de cido actico glacial a 9 partes de
formalina al 10% con ello se consigue un pH en torno a 2.
* 4gr: no tiene agua, cogemos 3.5gramos si no pone nada en el bote cogemos 4 gramos.
Formol clcico o solucin de Baker: Se emplea como fijador de eleccin en algunas tcnicas de
histoenzimologa y se prepara aadiendo cloruro clcico al 1% a una solucin de formalina neutra o
tamponada al 10%
LQUIDOS FIJADORES SIMPLES
Grupo N-3

Pgina
13

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

Dependiendo del mecanismo de actuacin sobre los tejidos podemos clasificar los lquidos fijos
simples en 4 apartados:
Fijadores por deshidratacin tisular: Alcohol etlico y acetona. Son sustancias altamente
higroscpicas es decir absorben agua actan eliminando tanto el agua libre como el agua ligada a las
protenas de forma que estas ltimas precipitan y disminuyen su solubilidad. Este cambio proteico es
conocido con el nombre de desnaturalizacin y provoca importantes alteraciones en la organizacin y
estructura celular y tisular, por tanto estos agentes fijadores inducen grandes cambios en la morfologa
orgnica sobre todo si se emplean como agentes fijadores aislados. Alguno de ellos como por ejemplo
la acetona, altera poco la estructura antignica tisular y ello se debe a que estos fenomenitos inducidos
son reversibles en parte tras la rehidratacin. El fundamento molecular de la accin deshidratante de los
alcoholes y la acetona, est en la competicin que establecen con las protenas por las molculas de
agua cuando se encuentra en soluciones concentrada, los principales agentes fijadores por
deshidratacin son alcoholes metlico y etlico, acetona y cloroformo.
Los nicos que se utilizan como fijadores simples son el alcohol etlico y la acetona.
El alcohol metlico se emplea exclusivamente para la fijacin de extensiones hematolgicas.
Alcohol etlico: lquido claro, transparente o incoloro, voltil, inflamable y de olor agradable. En el
comercio se puede encontrar puro en cuyo caso tiene fuertes gravmenes tributarios para evitar su
utilizacin clandestina para evitar la fabricacin de bebidas alcohlicas, o bien lo tenemos
desnaturalizado diluido al 90 o 70 %. Como fijador nico utilizaremos alcohol a unas concentraciones
entre el 70 y 90% y se obtiene cogiendo de 70-90 ml de alcohol puro y se lleva hasta 100 con agua
destilada. La fijacin mas potente va a corresponder a las soluciones ms concentradas pero a altas
concentraciones la capa externa del tejido se endurece en exceso, lo que impide la penetracin del
fijador a la parte interna de la pieza.
El tiempo de fijacin correspondiente a una pieza de 5mm de espesor es dos a cuatro horas renovando
unas 3 veces el lquido.
Grupo N-3

Pgina
14

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

Es un fijador que preserva el glucgeno y la actividad de ciertas

enzimas

titulares, fija los pigmentos y se emplea en las extensiones

citolgicas.

Como altera escasamente la estructura antignica de los tejidos es

un buen agente

fijador para inmuno histoqumica.


Entre las ventajas del alcohol estn:
Fijan y deshidratan al mismo tiempo
Posee una gran velocidad de penetracin
Precipita muy rpidamente las protenas y el glucgeno lo que unido a la anterior propiedad
aporta extraordinariamente el tiempo de fijacin es un notable agente bactericida y por tanto un
buen conservante.
Entre sus inconvenientes tenemos los siguientes:
Fijan y deshidratan al mismo tiempo: es incompatible con muchos fijadores: KCr2 o el OsO3 lo
que limita su participacin en muchas mezclas fijadoras.
No fija adecuadamente la cromatina porque disuelve los cidos nucledos y adems disuelve
parcialmente los lpidos.
Endurece y contrae excesivamente los tejidos.
A medida que realiza la fijacin se va diluyendo al incorporar el agua que extrae de los tejidos
por lo cual pierde actividad progresivamente
Prepara mas la tincin porque carece de efecto mordiente
Puede dar origen a fenmenos de desplazamiento de sustancias.
Acetona: es un lquido transparente, inflamable, muy voltil y de olor dulzor. Des hidrata rpidamente
y considerable el tejido por lo que es poco utilizable. El tiempo de fijacin nunca exceder de dos horas
y en piezas delgadas son recomendables 20 minutos. Su uso como fijador est prcticamente limitado a
Grupo N-3

Pgina
15

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

los mtodos e inmuno histoqumicos porque conserva muy bien la estructura antignica y la actividad
enzimtica, a veces tambin se utiliza en microscopia electrnica para la fijacin del material que se va
a incluir en resinas acrlicas. Se emplea generalmente sin diluir a 4C, entre sus inconvenientes mas
notables provocan una gran contraccin tisular y por tanto grandes artefactos que suelen hacer intil su
empleo en el microscopio ptico convencional otro de sus inconvenientes es que debido a su rapidez de
accin y a su capacidad de endurecimiento es imprescindible controlar el tiempo de fijacin.
Todos los fijadores de este grupo son de carcter cido y se emplean formando parte de mezclas
fijadores. Poseen adems una gran velocidad d penetracin en los tejidos y algn poder de
descalificacin.
cido actico: Lquido transparente y fuerte olor avinagrado. Sus vapores son muy inflamables en
estado puro se denomina: c. Actico glacial. Cuando la temperatura ambiente disminuye o aumenta,
disminuye por debajo de los 10C tiende a solidificarse en forma de agujas cristalizadas muy custicas.
Se utiliza diluido en concentraciones entre el 1 y 5 % formando parte de mezclas fijadores o de
soluciones decalcificantes. Entre las ventajas que tiene es el fijador ideal para ncleo protenas y acido
nucleicos y otra es precipitar protenas sin sustraer el agua de los tejidos porque no es giroscpico y
produce cierto edema intersticial que compensa la excesiva

refraccin pausado

por otros agentes fijadores. Entre los inconvenientes es mal

fijador

de

citoplasma y membranas celular y destruye mitocondrias.


cido

tricloroactico: Son

cristales

incoloros

custicos,

solubles en agua en

solucin al 5 % fija los nervios de 8 a 20 horas. Nunca se lavan el tejido despus de usar ste cido
porque el edema que produce es excesivo y de lugar a muchos artefactos. Al 2.5 % se usa mezclado con
otras sustancias.
cido sulfosaliclico: Se usa al 5% es buen fijador porque permite casi todas las coloraciones endurece
ptimamente los tejidos pero no los contrae despus hay que lavar el tejido con agua pero la fijacin
debe hacerse en la oscuridad de 6 a 24 horas.

Grupo N-3

Pgina
16

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

cido crmico: Se emplea en disoluciones al 2% formando parte de mezclas fijadoras, se utiliza


bastante en microscopia electrnica.
Entre las ventajas que tiene:
Excelente fijador estructural y acta como mordiente en tinciones que emplean colorantes
bsicos, entre los colorantes que tiene es que incompatible con fijadores habituales como el
formol y alcohol.
Escasa velocidad de penetracin en trozos pequeos tarde varios das en penetrar en la pieza
Impregna de coloracin verdosa los tejidos por lo que hay que lavarlos abundantemente en agua
destilada tras el uso de ese acido, los tejidos quedan excesivamente blandos.
FIJADORES POR FORMACIN DE SALES CON LOS TEJIDOS
En estos casos el fijador es un catin metlico fundamentalmente cromo o mercurio o un derivado
orgnico como el cido pcrico que son susceptibles de formar con los tejidos sales denominados
protenatos metlicos o picratos por lo general todos los agentes d este grupo poseen gran velocidad de
penetracin y fijacin porque la formacin de la sal, se produce instantneamente.
Cloruro de mercurio o sublimado: es un polvo cristalino blanco y venenoso y hay que usarlo bajo
campana se usa en soluciones del 5-6%. El efecto fijador se consigue por la combinacin de los iones
de Mercurio con los grupos cidos de las protenas especialmente con los de carcter carboxlico,
hidroxlico, sulfidrilo y con los residuos fosfricos de las nucleoprotenas.
Entre sus ventajas tenemos:
Es un excelente fijador de los caracteres morfolgicos celulares por lo que es el de eleccin para
patologas hematopoyticas y renales, donde el diagnostico se apoya normalmente en la
observacin de finos detallesnucleares y citoplasmticos.
Es un excelente mordiente por lo que produce intensa y brillante coloracin nuclear y
citoplasmtica.
Grupo N-3

Pgina
17

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

Inconvenientes:
No es un buen bactericida por lo que no es un buen lquido conservante tiene escasa capacidad
de penetracin por lo que requiere fraccionamiento cuidadoso del tejido.
Si se prolonga demasiado tiempo de actuacin contrae y endurece los tejidos hasta dificultar el
corte en el micrtomo, por eso nunca deben sobrepasarse las 4 horas de fijacin. Tras haber
cumplido esta y comn paso previo a la inclusin, los tejidos pueden conservarse
indefinidamente en alcohol etlico al 70%.
Dicromato Potsico: es un polvo amarillento que reacciona con las protenas para formar cromatos, se
utiliza en disolucin acuosa al 1-2%, fija las protenas por lo que las mitocondrias quedan
perfectamente conversadas y da un aspecto homogneo al ncleo despus de la fijacin del dicromato
deben lavarse abundantemente con agua.
Ventajas:
Es que tiene un fuerte efecto mordiente excelente fijador

para

lapidar

complejos para mielina, mitocondrias y aparato de Golgi

que

los

contienen

indispensable

en

abundancia.

Su

utilizacin

es

para tcnicas de impregnacin argntica de las clulas

del

sistema

nervioso central.
Inconvenientes:
El primero de ellos es incompatible con alcohol y formol, posee baja velocidad de penetracin y
endurece escasamente los tejidos lo que puede dificultar el corte en el microtomo.
Los tejidos han de ser lavados despus de fijados en una solucin salina o tamponada para
evitar el depsito de pigmento verde que puede producirse en el curso de la inclusin o
coloracin posterior.

Grupo N-3

Pgina
18

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

cido Pcrico: En el comercio se encuentra en forma de agujas cristalizadas de color amarillo muy
txicas de carcter explosivo.
Acta coagulando las protenas a travs de la formacin de picratos que las confieren gran apetencia
por colorantes cidos. Se utiliza en solucin saturada al 2%, es un excelente fijador estructural que
conserva adecuadamente la composicin proteica de los tejidos. Controlando adecuadamente el tiempo
de fijacin produce una ptima contraccin de los tejidos que favorece su procesamiento histolgico.
Aunque tiene penetracin algo lenta posee buena velocidad de fijacin no disuelve el glicgeno ni los
lpidos es el fijador de eleccin para estas sustancias.
Posee una leve accin decalcificante por lo cual puede

emplearse

como

fijador par a las muestras de tejido seo.


Inconvenientes:
En estado puro el cido pcrico es explosivo si se somete a color hay que mantenerlo alejado de
fuentes de color.
Deben dejarse evaporar sus disoluciones para evitar la formacin de precipitados. Si se
prolonga el efecto de fijacin que es de 4-18 horas dependiendo de tamao pieza aparecen
inconvenientes por una excesiva retraccin tisular. Sobre todo si la pieza ha sido
inadecuadamente lavado en agua y luego deshidratada.
Tie los tejidos de color amarillo y si no se elimina completamente antes de la inclusin en
parafina provoca un continuo deterioro de la estructura tisular que pueda hacer imposible su
estudio histopatolgico algunas semanas despus del procesamiento.
La eliminacin se realiza mediante lavados sucesivos en alcohol etlico al 70-80% o en una
solucin saturada de LiCO4 en alcohol de 70 es incompatible en la inclusin en celoidina.

Grupo N-3

Pgina
19

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

Acetato de uranilo: Es una sal soluble en agua, cristalizado de color

amarillo,

se

descompone con la luz, no endurece los tejidos, se usa en soluciones

al

normalmente mezclado con OsO3 y despus de la fijacin hay que

lavar el tejido

2-3%

abundantemente con agua.


MEZCLAS FIJADORAS
Tenemos dos tipos:
Glutaraldehido: lquido oleoso en comercios se

encuentra en disolucin al

25%. Mecanismo de actuacin es el mismo que el

formaldehdo y

como fijador se emplea en concentraciones entre

el 1 y el 3%.

Ventajas:
Es el primer fijador de eleccin para microscopa electrnica porque tienen una excepcional capacidad
para preservar la morfologa celular.
Se emplea para fijacin de animales por perfusin en patologa experimental.
Inconvenientes:
Tiene velocidad de penetracin muy baja por lo que los fragmentos de tejido no pueden tener
volumen superior a unos pocos milmetros cbicos.
Posee gran capacidad de retraccin y endurecimiento tisular que impide prolongar el tiempo de
fijacin por encima de las 3 horas.
Tiene osmolaridad muy baja por lo que hay que emplearlo disuelta en soluciones
amortiguadoras.
Tetraxido de Osmio: OsO4: En el comercio se encuentra en forma de cristales amarillentos solubles
en agua, muy voltiles y txicas. Acta igual que el formol y se prepara como agente fijador al 1% en
tampn fosfato.
Grupo N-3

Pgina
20

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

Ventajas:
Es el mejor fijador estructural conocido, por eso se utiliza en microscopa electrnica especficamente
como 2 fijador.
Inconvenientes
Muy caro y descompone en preseca de luz por lo que hay que conservarlo en recipientes opacos
y oscuridad.
Aunque sea soluble en agua es difcil preparar disoluciones acuosas con las que se trabaja
Muy txico y en estado cristalino emite vapores que irritan la crnea mucosa respiratoria. Su
manipulacin es obligatoria en una campana de extraccin de gases para prevenir la aparicin
de queratitis.
Posee muy baja capacidad de penetracin tisular por lo que las muestras deben tener muy poco
volumen.
Es incompatible con formol y dificulta la coloracin nuclear, esto obliga a lavar
abundantemente los tejidos tras utilizarlo.
La combinacin de diversos fijadores simples formando soluciones, complejas llamadas mezclas
fijadoras pretende sumar las ventajas de cada una de ellas amortiguando sus inconvenientes. Desde un
punto de vista general se clasifican en dos grupos:
AQUELLAS QUE CONTIENEN FORMOL

Grupo N-3

Pgina
21

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

Liquido

de Bouin:

Solucin

muy usada

como

alternativo

formalina cuando queremos fijar ciertos Tejidos como

piel

endocrinos, testculos y tejido embrionario en general.

la

rganos

Sin embargo no

est fijado para la fijacin de biopsias renales sobre los

cuales

provoca

una severa distorsin.


Se prepara de la siguiente manera:
SOLUCIN ACUOSA DE C. PCRICO
(C. PCRICO AL 1-2% EN AGUA DESTILADA)..750.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA250.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.50.0 ml.
PH. FINAL2.2
TIEMPO DE FIJACIN..2 a 24 horas

Fijador de Bouin-Hollander: es una variante del lquido de

Bouin

especialmente indicado para la fijacin de los cilindros de

biopsia

mdula sea cuando no es posible controlar el tiempo de

fijacin de la

muestra en ste lquido, la conservacin, puede incluso

conservar

de
las

48 horas sin que se produzca excesivo endurecimiento.


Se prepara de la siguiente manera:
ACETATO

2.5 gr.

C. PCRICO..4.0 gr.

FORMALINA CONCENTRADA....10.0 ml.


Grupo N-3

Pgina
22

NEUTRO

DE

COBRE.

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

C. ACTICO GLACIAL..1.5 ml.

AGUA DESTILADA..100.0 ml.


Para preparar la solucin se disuelve primero la sal de cobre en el agua destilada luego se aade el
cido pcrico y tras filtrarlos el formol y el cido actico glacial.
Esta solucin se conserva indefinidamente a temperatura ambiente el tiempo de fijacin oscila entre 4872 horas y sigue las mismas precauciones que el lquido de Bouin
Bouin alcohlico (fijador de Dubosq-Brasil): Es una alternativa de lquido de Bouin cuando la pieza
que se debe fijar es relativamente voluminosa porque posee una velocidad de penetracin mucho mas
elevada. Se utiliza tambin cuando se precisa una fijacin especfica de sustancias hidrosolubles como
el glucgeno ya que evita su disolucin.
Se prepara de la siguiente manera:
ALCOHOL ETILICO 80%...............................................75.0 ml.
C. PCRICO0.5 gr.
FORMALINA CONCENTRADA.....30.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL...7.5 ml.
Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijacin para fragmentos con un espesor en torno a 5
milmetros es de 2 a 3 horas.
Liquido de Gendre: Es una variacin que est especialmente diseada para la fijacin del glucgeno y
pigmentos derivados de la hemoglobina. Se prepara por:
SOLUCIN SATRUADA DE C. PCRICO
EN ALCOHOL ETLICO AL 70%.....................................80.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA...15.0 ml.
Grupo N-3

Pgina
23

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

C. ACTICO GLACIAL.7.5 ml.


El tiempo de fijacin oscila entre 1 y 4 horas. Tras acabar el proceso debe realizarse sucesivamente 2
lavados cortos en etanol al 80, 95 y 100
Fijador de Mller: Es la disolucin acuosa de un fijador simple de dicromato potsico con la adicin
de sulfato sdico su importancia actual radica en que se emplea para fabricar los fijadores de Orth y de
Zenker. Lo que llamamos solucin madre. Est compuesta de:
DICROMATO POTASICO2.5gr.
SULFATO SDICO..1.0 gr.
AGUA DESTILADA 100.0 ml.
Tiempo de fijacin 4 y 8 horas. Tras la fijacin es necesario lavar abundantemente en agua corriente
durante unas horas.
Fijador de Orth: Hoy da se emplea exclusivamente en ciertas tcnicas de fijacin de tejido nervios.
Se prepara de la siguiente manera:
Solucin stock de Orth: idntica a la composicin del fijador de Mller.
Solucin de trabajo: en el momento de su uso se mezclan:
SOLUCIN STOCK..90.0 ml.
FORMULINA CONCENTRADA.10.0 ml.
El tiempo de fijacin de tejido nervioso es de 48 horas y tras el proceso de fijacin los tejidos han de
ser lavados abundantemente en agua y almacenados en alcohol etlico al 70%
Solucin de B-5 y Zenker-Formol (Liquido de Nelly): Ambas mezclas son en esencia casi idnticas.
La denominacin B5 corresponde en realidad a una modificacin de la de Zenker.

Grupo N-3

Pgina
24

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

La solucin de Zenker-formol contiene dicromato potsico y sulfato sdico. La mayor utilidad de estos
fijadores es que mejoran considerablemente la tincin nuclear, de hecho la fijacin en una mezcla que
contenga sublimado es hoy da prcticamente imprescindible para el diagnstico morfolgico en las
patologas del sistema linfoide y hematopoytico. Adems estas soluciones B5 zenker formol son los
fijadores de eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido conectivo y para fibrina.
Se prefiere la solucin de B5 porque al no contener dicromato, esto permite una mejor conservacin de
la cromatina nuclear y de la estructura antignica tisular.
Solucin de 35:
*Solucin stock de B5: Esta mezcla es estable durante bastante tiempo pero concentrado en frasco
opaco y oscuridad.
CLORURO MERCRICO... 12.0 gr.
ACETATO SDICO....2.5 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P.200 ml.
Solucin de trabajo de B5: Esta solucin es inestable debido a que el formaldehdo reduce el
sublimado a cloruro mercurioso y mercurio metlico que se depositan en forma de un precipitado
blanco grisceo, por este motivo y por el elevado ndice de endurecimiento que posee el sublimado, el
tiempo de fijacin no debe superar las 4 horas. Adems el espesor mximo de las muestras no debe
superar los 4 mm debido al escaso poder de penetracin de la mezcla fijadora. Debido a la aparicin de
precipitados mercricos sobre los tejidos las secciones histolgicas antes de ser coloreados. Han de ser
sometidas a un tratamiento especfico mediante soluciones que eliminan estos depsitos. Tras la
fijacin los tejidos se pueden conservar indefinidamente en alcohol etlico al 70-80%
SOLUCIN STOCK DE B520.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA .2.0 ml.
Solucin de Zenker-Formol Eliminacin del pigmento mercrico:
Grupo N-3

Pgina
25

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

*Solucin stock de Zenker:


CLORURO MERCRICO5gr.
DICROMATO POTSICO...2.5 gr.
-SULFATO SDICO 1 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P. ....100.0 ml.
* Solucin de trabajo: en el momento de su uso mezclamos:
SOLUCIN STOCK DE ZENKER..95 ml.
FORMALINA CONCENTRADA...5 ml.
Tanto para la solucin almacenada como para la de trabajo deben guardarse las mismas precauciones
que para la de B5
Eliminacin del pigmento mercrico o deszenkerizacin:
Se realiza tratando las secciones histolgicas antes de su coloracin con soluciones yodadas y
utilizamos:
*Solucin de LUGOL:
YODURO POTSICO..2gr.
CRISTALES DE YODO ..1gr.
ALCOHOL ETLICO 70-80%................................................100 ml.
*Solucin de tiosulfato sdico:
TIOSULFATO SDICO..5gr.
AGUA DESTILADA...100ml.
Grupo N-3

Pgina
26

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

Despus de la desparafinacin hay que tratar los cortes durante diez minutos con la solucin yodada a
continuacin lavar bien en agua destilada despus decolorar durante dos minutos en la solucin en agua
corriente durante 10 minutos antes de realizar la coloracin.
AQUELLAS QUE NO CONTIENEN FORMOL
Liquido de Zenker: Trata de combinar los efectos
sublimado y del dicromato potsico. En la prctica habitual

favorables
ha

del
sido

sustituido por B5. Su empleo ha quedado prcticamente

restringido al

proceso de refinacin-decalcificacin a que son sometidas

las biopsias de

mdula sea cuando se realiza una fijacin inicial con B5.


Se prepara de la siguiente manera.
SOLUCIN STOCK DE ZENKER95.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.. 5.0 ml.
El cido actico reacciona con el dicromato y hace que la solucin se oscurezca progresivamente, por
lo que debe recomponerse antes de su uso.
El tiempo de fijacin puede ser ms prolongada que con la solucin de b5 porque el cido actico que
contiene, produce un excesivo endurecimiento. Pero no se deben sobreasar las 48 horas. Tras la fijacin
el material debe ser tratado con sulfato sdico al 5% durante 1-2 horas.
Liquido de Carnoy: Es el mejor fijador conocido para el glucgeno y en general, para los hidratos de
carbono simples y para protenas fibrilares y sobre todo miofibrillas, su accin fijadora es
extremadamente rpida deshidratando el tejido al mismo tiempo, sin embargo produce una excesiva
retraccin mstica y una hemlisis masiva de eritrocitos as como una pobre conservacin estructural
del ADN. Est compuesta por:
ETANOL ABOSLUTO..60.0 ml.
CLOROFORMO.30.0 ml.
Grupo N-3

Pgina
27

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

C. ACTICO GLACIAL..10.0 ml.


El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras deben cambiarse directamente a
alcohol etlico absoluto. El mayor endurecimiento se produce al prolongar demasiado la deshidratacin
en alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el etanol por metanol en la composicin de lquido
fijador, que adems provoca menor retraccin tisular, y para conservar la pieza se deposita en alcohol
etlico absoluto.
Lavado postfijacin.
Es el aclarado que se realiza despus del proceso de fijacin para eliminar los residuos del agente
fijador, con el fin de limitar el tiempo de contacto entre el fijador y el tejido o impedir el contacto del
fijador con los medios de inclusin utilizados, para proseguir el tratamiento de la muestra, a veces
algunos colorantes alteran su efecto si la pieza contiene restos de determinados fijadores, como es el
caso por ejemplo del cido pcrico. No todos los fijadores deben lavarse igual:
Las piezas fijadoras en formalina se lavan con agua prolongadamente.
Fijadas por cido pcrico hay que introducir las piezas hasta quitar color amarillo.
Fijadas por tricloroactico hay que introducirlas en alcohol de 90%.
Conservacin de tejidos.
Cuando se practica un estudio histolgico, solo se incluyen una pequea porcin del material remitido
para el anlisis. El resto se guarda de reserva para estudios complementarios. Casi nunca es posible
conservar el tejido en el mismo lquido utilizado para la fijacin.
La solucin conservante ms indicada en la mayor parte de los casos es el alcohol etlico al 70% en l
adems de iniciarse la deshidratacin, el tejido una vez fijado puede conservarse durante meses sin
apenas sufrir cambios, como alternativa ms simple y siempre que no se desee preservar el tejido para
posteriores estudios inmunohistoqumicos, pueden usarse como conservante una solucin de formalina
neutra o tamponada al 10%.
Grupo N-3

Pgina
28

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

Cuando lo que se produce exclusivamente es derramar la intrusin del tejido en parafina sobre todo
para pequeas muestras delicadas se puede realizar la deshidratacin completa en alcoholes crecientes
y conservarlos en butanol que permite una conservacin indefinida y mejora la textura tisular.
Cuando se deseen conservar rganos completos procedentes de necropsias podemos utilizar las
soluciones de JORES.
JORES I:
SULFATO SDICO.22 gr.
SULFATO POTSICO..1 gr.
CLORURO SDICO..9 gr.
BICARBONATO SDICO..18 gr.
FORMOL 10%.............................................................................................50 ml.
SOLUCION ACUOSA SATURADA DE HIDRATO DE CLORAL.50 ml.
AGUA DESTILADA C.S.P.1000 ml.
JORES II:
ACETATO POTSICO300 gr.
GLICERINA.600 ml.
AGUA DESTILADA C.S.P. ..1000 ml.
En recipiente bien cerrado se conserva hasta aos.
Resultados de la fijacin y su interpretacin.
Durante la fijacin se producen procesos que modifican la estructura tisular; se producen desgarros en
tejidos que siendo de distinta estructura estn en contacto, por ejemplo la muscular y la submucosa y al
Grupo N-3

Pgina
29

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

exponerlos a cambios bruscos, como tienen distintos contenidos, en agua se contraen ms que otros.
Tambin se producen grietas por la misma causa que los desgarros, pero son pequeas aberturas que
pueden dar lugar a error porque parecen naturales, son muy difciles de evitar y son ms frecuentes
cuando la fijacin se hace en tejidos que ya han comenzado su descomposicin.
Estas deformaciones de los tejidos que no corresponden con la realidad y son producidas por la
agresividad de los fijadores se denominan artefactos y varan de un fijador a otro debido a las
caractersticas propias de cada uno.

RECOMENDACIONES

Debe tenerse en cuenta el tiempo especfico de fijacin de acuerdo al fijador que estemos

usando, para evitar se dae la muestra.


El lquido fijador debe ser colocado con rapidez en la muestra.
Deber elegirse el fijador ms conveniente de acuerdo a la muestra que tengamos.
Es recomendable efectuar la fijacin a bajas temperaturas.
Despus de terminado el proceso de fijacin, se deber lavar la muestra, evitando as que los
tejidos se endurezcan.

Grupo N-3

Pgina
30

FIJADORES DE TEJIDOS: FIJADORES CON O SIN FORMOL, VELOCIDAD DE PENETRACIN, VELOCIDAD DE


FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO DE
EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.

BIBLIOGRAFA

Google Books, (2015). Tecnico Especialista en Anatomia Patologica Del Servicio Gallego de
Salud.volumen i Ebook. [online]Disponible en: https://books.google.com.ec/books?
id=r7hL2GosWjYC&printsec=frontcover&dq=fijadores+histologicos+pdf&hl=es&sa=X&ved=
0ahUKEwia2fehq7zJAhXF4SYKHVA-CYQQ6AEIIjAB#v=onepage&q&f=false [Accessed 3
Dec. 2015].
TEJIDOS,
P.
(2013).
PROCESAMIENTO
DE
TEJIDOS.
[online]
Nancycepedablogs.blogspot.com. Disponible en: http://nancycepedablogs.blogspot.com/
[Accessed 3 Dec. 2015].
Anon, (2015). [online] Available at:
http://www.seapcongresos.com/2011/SEAP/19_mayo_jueves/Anfiteatro/08.00/Dolores_Isabel.p
df [Accessed 3 Dec. 2015].

Grupo N-3

Pgina
31

S-ar putea să vă placă și