2/3/2010

Microbiologie, Virologie,
Imunologie
ntroducere n microbiologie.
Metodele microbiologice de
diagnostic.
Clasificarea i nomenclatura
microorganismelor.
Morfologia bacteriilor.

Microbiologie (mikros bios logos mic,

viu, studiu). Microbiologia studiaz
microorganismele i activitile lor.
Microorganisme / microbi organisme
microscopice, cu dimensiuni de ordinul m
(10-6 m) sau nm (10-9 m).
Mi/o reunesc bacteriile i alte tipuri de
organisme: alge, ciuperci microscopice
(fungi, micete), protozoare, virusuri i
agenti subvirali, de ex. prioni.
Termenul microb a fost utilizat n 1878
de chirurgul francez Charles-Emmanuel
Sedillot.

LUMEA MICROBIAN

DE CE STUDIEM MICROORGANISMELE?
Studiul mi/o patogene i oportuniste
- Prevenirea i controlul maladiilor infecioase

Vrsta (3,5 mlrd ani!!!)

Abundena i diversitatea
60% din biomas;
ap, aer, sol - scoara terestr la 15 km!, surse termale la 100
grade C;
4000 specii descrise mai puin de 1% din apr. 106 specii
necultivabile n laborator)
Informaia genetic
genomul Pseudomonas aeruginosa - 5000 gene,
diversitate genetic superioar eucariotelor, schimb intens de
material genetic
Sisteme eficiente de percepere a lumii, comunicare i
adaptare la condiii variate ale mediului

Studiul mi/o utile, inofensive

Producerea antibioticelor
Obinerea medicamentelor (streptokinaza, insulina),
vaccinurilor, etc. prin tehnologii de ADN recombinant
Producerea alimentelor: unt, brnz, cacaval, chefir, yaurt,
oet, alcool, cacao, cafea, etc.
Rol de insecticide biologice
Fabricarea plasticului biodegradabil
Descompunerea deeurilor i metanului
Extragerea metalelor din minerale
Asigurarea rolului major n ciclurile geochimice, etc

Microbiologia studiaz:
forma mi/o
structura
nutriia
metabolismul
creterea i multiplicarea mi/o (pentru a le
identifica)
urmrete relaiile mi/o cu organismelegazd i cu mediul ambiant

Disciplinile microbiologice n raport cu:

Particularitile biologice ale mi/o:
Algologia, Protozoologia, Micologia,
Bacteriologia, Virologia
Implicaiile n activitile umane:
Microbiologia medical, veterinar,
industrial, alimentar, etc
Habitatul: Microbiologia solului,
Microbiologia marin, Microbiologia
cosmic, etc
Genetica microbian
Ecologia microbian

2/3/2010

MICROBIOLOGIA MEDICAL
STUDIAZ:
Relaiile dintre microorganisme i gazda
lor uman
Capacitile patogene ale mi/o
Capacitile antiinfecioase ale gazdei
Principiile i metodele diagnosticului
etiologic al infeciilor
Bazele terapiei antimicrobiene
Bazele profilaxiei antimicrobiene

4. Examenul biologic (metoda

experimental) inocularea directa a
produsului patologic la animale de
laborator receptive. Mi/o se multiplic
provocnd maladia tipic. Din lichide
biologice sau esuturi afectate bacteria
poate fi izolat i identificat.
5. Identificarea ADN sau ARN microbian
prin tehnici de biologie molecular

CLASIFICAREA I NOMENCLATURA
MICROORGANISMELOR

1.
2.

3.

Lumea microbian este extrem de divers,

ceea ce determin necesitatea aranjrii lor n
grupe conform asemnrii lor.
Se disting 3 noiuni:
Taxonomie tiina despre clasificare
Clasificare aranjarea organismelor n grupe
sau taxoni n funcie de asemnri sau nrudiri
Nomenclatura numirea tiintific a grupelor
taxonomice conform unor reguli internaionale

METODELE MICROBIOLOGICE
DE DIAGNOSTIC

1.

2.
3.

1.

2.

DIAGNOSTICUL DIRECT
Const n detectarea agentului patogen, a
componentelor lui sau a unui produs (ex. toxina)
n prelevate de la bolnav sau din mediul extern
Examenul microscopic - studierea mi/o n stare
vie/nativ sau n frotiuri colorate. Este o metod
de orientare. Informeaza despre prezena
bacteriilor, forma lor, structura, numrul.
Depistarea antigenelor microbiene solubile n
lichide biologice (ser sangvin, LCR, urin)
Examenul bacteriologic izolarea pe medii
nutritive a culturilor pure de bacterii, care vor fi
identificate i testate la sensibilitate fa de
antibiotice

DIAGNOSTICUL INDIRECT (imunologic)

Serodiagnosticul depistarea i titrarea
anticorpilor specifici n serul bolnavului. Ei
apar peste 7-10 zile de la debutul maladiei si
persist deseori dup vindecare
Intradermoreaciile (metoda alergic)
ntroducerea pe cale epidermic sau
intradermic a alergenului microbian i
apariia, peste 2-4 zile, a unei reacii celulare
locale (eritem, infiltrat). Reacia pozitiv
semnific o stare de hipersensibilitate
specific (ntlnire repetat cu acest agent)

Clasificarea fenotipic (prima tentativ Carl von Linne n

sec. XVII) - reunirea mi/o n baza caracterelor fenotipice
comune (caractere morfologice, de cultur, fiziologice,
biochimice, antigenice, etc)
Clasificarea genotipic
Gradul de omologie al secvenelor nucleotidice ale ADN
microbian. Tulpinile cu gradul de omologie de cel putin 70 %
aparin unei specii, de 30 % - aceluiai gen, etc
Gradul de omologie al secvenelor nucleotidice ale ARN
ribosomal
Coninutul relativ de guanin+citozin (GC%) al ADN
purificat. La bacterii variaz ntre 25 i 75 %.
Clasificarea filogenetic
Determin locul mi/o ntr-un arbore filogenetic i se bazeaz pe
studiul fosilelor sau al HLA.

2/3/2010

Principalele grupe taxonomice (taxoni)

Domeniu
- Regn
- Tip
- Clas
- Ordin
- Familie
- Gen
- Specie (unitate fundamental)
Culturile microbiene ce aparin unei specii, dar sunt
izolate n laborator din diverse prelevate reprezint
tulpini bacteriene (sue). Tulpinile corespund n
general caracterelor de specie, dar pot manifesta
variaii nesemnificative.

n cadrul speciilor pot fi delimitai taxoni

infraspecifici (variante / tipuri), care prezint
diferene minore n activitatea biochimic sau
fiziologic (biovar), n structura antigenic
(serovar), n gradul de patogenitate
(patovar), n sensibilitatea la bacteriofagi
(lizovar) sau la antibiotice (antibiovar).
Pot fi utilizai ca markeri epidemiologici
pentru descifrarea unor epidemii (infecii
nozocomiale, toxiinfectii alimentare, etc)

Conform ultimei clasificri internaionale ale

microorganismelor (Bergey's Manual of
Systematic Bacteriology,2001) se disting:
I.
Forme acelulare (virusuri, viroizi, prioni)
II.
Forme celulare, repartizate n 3 domenii:
Bacteria procariote (bacterii adevrate,
eubacterii).
a)
Bacterii cu perete celular fin, gram-negative;
b)
Bacterii cu perete celular gros, gram-pozitive;
c)
Bacterii lipsite de perete celular (micoplasme).
Archaea procariote, perete celular fr
peptidoglican, cu habitat n condiii extremale
Eukarya eucariote. Include regnurile Fungi,
Animalia (subregnul Protozoa) i Plantae

Nomenclatura mi/o
Numirea mi/o este stabilit de ctre Comitetul
Internaional de Bacteriologie Sistematic.
Nomenclatura taxonilor are la origine un substantiv
grec sau latin, care definete cel mai evident
caracter al mi/o studiate, la care se adaug un
anumit sufix latin.
Ordinul Actinomycetales, Spirochaetales
Familia Enterobacteriaceae, Spirochaetaceae
Genul Staphylococcus, Leptospira, Clostridium,
Pseudomonas
Specia denumire binar (Gen + specie): Escherichia
coli, Staphylococcus aureus, Mycobacterium
tuberculosis, etc.

EXEMPLU:
Specia Escherichia coli
Genul Escherichia
Familia Enterobacteriaceae
Ordinul Enterobacteriales
Clasa Gammaproteobacteria
Tipul Proteobacteria
Domeniul - Bacteria

2/3/2010

BACTERIOLOGIA GENERALA.
CELULA BACTERIAN

Bacteriile sunt organisme unicelulare

procariote autonome, cu dimensiuni ntre
0,2 i 10 m (Spirochaeta 250 m) i
care difer esenial de celulele eucariote
animale sau vegetale.

Celule eucariote

Celule procariote

Aparatul nuclear nucleu cu nucleoli, Molecul de ADN circular,

nconjurat de membran nuclear
lipsa membranei nucleare
Cromozomi cu structur complex, Structur
cromozomic
histone asociate, set diploid
simpl,set haploid
Celula se divide prin mitoz sau meioz

Diviziune binar

Lipsa peretelui celular (n caz de Prezena peretelui celular ce

prezen conine chitina sau celuloza)
conine
obligator
peptidoglican
Prezena organitelor celulare

Absena organitelor celulare,

citoplasma omogen, necompartimentat

2 tipuri de ribosomi n citoplasm i n Toi ribosomii sunt identici

mitocondrii sau cloroplaste
Coeficientul
de
ribosomului
80 S (citoplasma)
70 S (mitocondrii)

sedimentare

al 70 S (50S , 30 S)

MORFOLOGIA BACTERIILOR
Morfologic se disting 4 grupe de bacterii:
Forme sferice (coci)
Forme alungite (bastonae)
Forme ncurbate/spiralate
Bacterii polimorfe: Actinomyces, Rickettsia,
Chlamydia, Mycoplasma

Formele sferice (coccus)

Micrococi (Micrococcus) celule izolate
Diplococi (Diplococcus) perechi (neisserii bob de cafea, pneumococi - lanceolati)
Streptococi (Streptococcus) - lanuri
Tetracoci (Tetracoccus) cte 4 celule
Sarcine (Sarcina) pachete din 8-16-32
coci
Stafilococi (Staphylococcus) grmezi
neregulate de coci

2/3/2010

Formele alungite (bastonae)

1. Bacterium bastonae cu capetele rotunjite,

nu formeaz spori (Mycobacterium,
Corynebacterium, enterobacterii, etc)
2. Bacillus bastonae mari cu capetele retezate,
formeaz spori ce nu depesc diametrul celulei
(ex.: Bacillus anthracis). Posibil aranjarea n
lanuri - streptobacili
3. Clostridium bastonae cu capetele rotunjite,
formeaz spori ce depesc diametrul celulei
(ex.: Clostridium tetani, Clostridium botulinum,
C. perfringens, etc)

2/3/2010

1.

2.

3.
4.

Formele ncurbate (spiralate)

Vibrio bastonae ncurbate (1/2 spir,
aspect de virgul) (ex.: Vibrio cholerae)
Campylobacter, Helicobacter 2 spire,
aspect de pasre n zbor (ex.:
Campylobacter jejuni)
Spirillum celule spiralate rigide
Spirochaeta celule spiralate, cu 5-25
spire, flexibile (ex.: Treponema,
Leptospira, Borrelia)

2/3/2010

EXAMENUL MICROSCOPIC

1.

2.

Studiaz morfologia i structura bacteriilor,

precum i caracterele lor tinctoriale.
Examenului microscopic pot fi expuse lichide
biologice sterile (snge, LCR, lichid pleural),
precum i prelevate nesterile din cile respiratorii,
tubul digestiv, aparatul uro-genital, tegument,
urechi, ochi, etc
Examenul microscopic poate fi efectuat:
n stare nativ (preparate umede, necolorate:
ntre lam i lamel, pictur suspendat).
Studiaz morfologia, mobilitatea bacteriilor,
unele activiti (ex.: sporogeneza)
n frotiuri (preparate fixate i colorate)

Prepararea frotiului
1. Etalarea materialului microbian (produs
patologic, cultur microbian) n strat subire pe
suprafaa unei lame de sticl degresat
2. Uscarea
3. Fixarea (termic, chimic). Omoar microbii i
marete afinitatea lor pentru colorani
4. Colorarea. Asigur contrastul dintre microbi i
fondul preparatului
5. Examinarea frotiului la microscopul optic cu
imersie

2/3/2010

Caracter tinctorial capacitatea bacteriilor

de a fixa diferii colorani
Coloranii bazici (violetul de genian sau
de metil, fucsina bazic, albastrul de
metilen, vezuvina, chrizoidina, etc) au
afinitate pentru structurile acide ale celulei
bacteriene
Tipuri de coloraii: simple, complexe
(difereniale, speciale)

ETAPELE ISTORICE DE EVOLUIE

A MICROBIOLOGIEI
I EMPIRIC (pn n sec. XV)
Hippocrate considera c maladiile infecioase sunt cauzate de
modificarea aerului prin miasme
Girolamo Fracastoro, de la Universitatea din Padua, a presupus
existena unei seminaria contagiosus , mi/o infectante, capabile
s se multiplice
II MORFOLOGIC (sec. XVI XVIII)
Antonie van Leeuwenhoek, 1673 prima observare i descriere a
mi/o
III - FIZIOLOGIC (sec. XIX)
Theodor Schwann i Frantz Schultze discrediteaz teoria generaiei
spontane. Louis Pasteur, Robert Koch confirm teoria
germenilor.

Louis Pasteur a demonstrat specificitatea

proceselor fermentative (bolile vinului), a
identificat agenii cauzali ai bolii viermilor de
mtase, a preparat vaccinuri eficiente pentru
prevenirea turbrii, antraxului, holerei
ginilor, a susinut necesitatea sterilizrii
instrumentelor, bandajelor, etc.
Robert Koch a utilizat frotiul, a ntrodus
mediile de cultur solide, a izolat agentul
antraxului i al tuberculozei. Autor al teoriei
de confirmare a rolului etiologic al unui mi/o
(postulatele lui Koch)

Ilia Mecinicov argumenteaz rolul antagonist al

florei intestinale normale, a descoperit fagocitoza
i rolul inflamaiei n aprarea antimicrobian.
Alexander Fleming descoper penicilina
Emil Roux propune mediul de cultivare a agentului
difteriei, obine i utilizeaz serurile imune antitoxice
contra difteriei, fondator al imunitii umorale
Victor Babe fondator al microbiologiei n Romnia,
autor al primului manual de microbiologie. Studiaz
rabia.
Ion Cantacuzino a studiat patogeneza holerei,
tuberculozei, vaccinul i vaccinarea antiholerica.
Fondatorul colii de microbiologie din Romnia