Sunteți pe pagina 1din 86

ULTRASTRUCTURA

BACTERIILOR.
ELEMENTELE
PERMANENTE I
NEPERMANENTE DE
STRUCTUR

ELEMENTELE DE STRUCTUR
ALE CELULEI BACTERIENE

Elementele constante (permanente, obligatorii)


Peretele celular
Membrana citoplasmatic
Citoplasma
Nucleoidul
Ribosomii
Mezosomii
Elementele facultative (nepermanente,
neobligatorii)
Capsula
Sporul
Flagelii
Pilii/fimbriile
Plasmidele
Incluziunile celulare

PERETELE CELULAR (PC)

Reprezint un nveli rigid ce


nconjoar protoplastul bacterian.
Lipsete la micoplasme.
Se disting 2 mari grupe de bacterii n
funcie de structura PC:
1. Bacterii gram-negative (G-)
2. Bacterii gram-pozitive (G+)
(1884, savantul danez Christian GRAM).
Elementul comun al ambelor grupe
peptidoglicanul (PG).

PEPTIDOGLICANUL (PG)
PG structur particular rigid a PC bacterian.
Structura PG:
Heteropolimer macromolecular reticulat, constituit
dintr-un component glicanic i unul peptidic.
Partea glicanic (polizaharidic) este constituit
din catene liniare paralele n care alterneaz Nacetyl-glucozamina cu acidul N-acetyl-muramic.
Partea peptidic este reprezentat de uniti
tetrapeptidice (izomeri L i D de AA), fixate de
acidul muramic, care pot fi legate intre ele
direct (formand o structur bidimensional, la
bacterii G-) sau prin puni interpeptidice
(structur tridimensional, la bacterii G+).

Acidul diaminopimelic, izomerii D ai AA i acidul


muramic se ntlnesc doar la celulele procariote.
Fragmente solubile de murein pot stimula
secreia excesiv a citokinelor de ctre
macrofage, prin legarea de receptorii toll-like
sau CD14, inducnd astfel simptome de oc
septic
PG reprezint inta de atac a unor substane:
1. Lizozimul, care taie legturile dintre N-AGA i
acidul N-AM (catena glicanic)
2. Unele antibiotice (beta-lactamine, glicopeptide,
fosfomicina), care perturb procesul de
transpeptidare (formarea punilor
interpeptidice).

PERETELE CELULAR AL BACTERIILOR GRAMPOZITIVE

Uniform, cu pori mici


- Grosimea 20-80 nm (pn la 300 nm)
- Componentul major (40-80%) reprezint PG
(structur reticulat tridimensional)
- Componente minore:
1. Acizii teichoici (polimeri de glicerol sau ribitol
fosfat), fixai de N-AGA. Traverseaz PG i
creeaz sarcin electric negativ la suprafaa
bacteriei, asigur transferul de ioni i fixarea
unor proteine, funcie antigenic. Pot activa
complementul pe cale alternativ i stimula
secreia citokinelor de ctre macrofage.
-

Acizii lipoteichoici: se fixeaz de MCP i


depesc stratul de PG.
Funcii: identic cu acizii teichoici, intervin n
adeziunea la celule i au un efect toxic
slab.
3. Proteine asociate peretelui celular:
proteina A, coagulaza legat (clumping
factor) i proteina fixatoare de
fibronectin la Staphylococcus aureus,
proteina M la Streptococcus pyogenes (rol
n adeziune la substrate, protecie de
fagocitoz)
4. La unele bacterii G+ (de exemplu:
Mycobacterium, Nocardia) peretele conine
o cantitate important de lipide sau ceruri,
la altele (ex.: streptococi) peretele conine
multe glucide.
2.

PERETELE CELULAR AL BACTERIILOR GRAMNEGATIVE


-

1.

2.

Grosimea 10-12 nm
Neomogen, format din straturi
distincte:
PG, stratul intern, constituie 1-10%
din masa uscat a peretelui celular.
Acizii teichoici lipsesc. Nu exista puni
interpeptidice (structur
bidimensional).
Membrana extern (ME) dublu
strat lipidic cu proteine nserate

Unele proteine majore - porine, unindu-se


n triplete, particip la formarea porilor,
altele (nonporine) au funcie de
receptor pentru bacteriofagi i pili sau
asigur adeziunea la receptorii celulelorgazde.
Proteinele minore sunt enzime implicate in
captarea unor substane i transportul
specific transmembranar.
ME este permeabil pentru ioni i mici
molecule hidrofile i impermeabil pentru
molecule hidrofobe sau amfipatice

3. Lipoproteinele asigur legtura dintre ME i


PG
4. Lipopolizaharidul (LPZ) stratul extern al
peretelui
gram-negativ. Este format din:
Lipidul A (endotoxin), glicolipid ancorat n
ME. Stimuleaz formarea i secreia
citokinelor. Determin efectul toxic al
bacteriilor G- manifestat n urma lizei celulare.
Polizaharide complexe, fixate pe lipidul A.
Particip n procese de penetrare i transport
a unor substane, confer specificitate de gen
(antigenul R)
La exterior, subuniti oligozaharidice liniare
sau ramificate. Creeaz sarcin negativ la
suprafaa bacteriei (mpiedic fagocitoza,
accesul moleculelor toxice), confer
specificitate de specie sau tip (antigenul O)

Spaiul periplasmic este regiunea


dintre ME i MCP. Conine PG i
proteine-enzime implicate n
transport, digestia nutrienilor,
protecia contra substanelor toxice
(ex.: beta-lactamazele, care distrug
antibioticele beta-lactamice).
La bacteriile G+ aceste enzime sunt
secretate n mediul extern.

La unele bacterii G- se gsesc proteine


ale sistemelor de secreie (I VI).
Reprezint cilindre proteice ce
traverseaz nveliurile celulei
bacteriene. Asigur transportul
proteinelor (toxine, enzime) din
interiorul celulei bacteriene spre
exterior.


1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

9.

FUNCIILE PERETELUI CELULAR


Confer forma bacteriilor
Barier osmotic i mecanic
Barier de permeabilitate selectiv
Funcie antigenic (Ag O i R)
Particip la procesele de cretere i diviziune
celular
Funcie de receptor
Responsabil de aderena specific la
substrate
Componente ale peretelui celular (lipidul A,
acizii lipoteichoici, fragmente de PG)
contribuie la producerea citokinelor i
activarea complementului pe cale alternativ
cu manifestarea ocului septic (endotoxinic)
Reprezint inta de atac a unor enzime i
antibiotice

Evidenierea peretelui celular: microscopia electronic,


metode speciale de colorare, plasmoliz (n mediu
hipertonic), plasmoptiz (n mediu hipotonic).

Determinarea tipului peretelui


celular
COLORAIA GRAM (condiionat de structura i
compoziia chimic a peretelui celular)
1.
Colorarea frotiului fixat cu violet de genian
(citoplasma bacteriilor se coloreaz n violet)
2.
Splarea cu ap apoi tratarea cu soluie
Lugol (I2 +KI) fixeaz colorantul n celule
prin formarea complexului insolubil violetiodin
3.
Decolorarea cu alcool 95%. Bacteriile G+
pstreaz colorantul, cele G- se decoloreaz.
4.
Recolorarea bacteriilor G- cu fucsin apoas
Rezultat: bacteriile G+ apar colorate n violet,
bacteriile G- n rou.

Mecanismul: Peretele G- este subire,


conine multe lipide (20%), care sunt
dizolvate de alcool, porii au diametrul
mare, pH citoplasmei este slab acid (se
decoloreaz cu alcool);
Peretele G+ este gros, nu conine lipide sau
foarte puine, alcoolul deshidrateaz
peretele i reduce diametrul porilor, pH
acid
(colorantul nu este splat din citoplasm)
Utilizarea practic a coloraiei Gram:
1. Diagnostic
2. Orientare n tratament (sensibilitate
diferit la antibiotice)

Acidorezistena bacteriilor
Unele bacterii G+ (Mycobacterium,
Nocardia) conin n componena
peretelui multe lipide, acizi grai i ceruri
(70% din greutatea peretelui). Aceasta le
confer rezisten important n mediul
extern i sensibilitate distinct la
antibiotice.
Coloraia Ziehl-Neelsen permite
diferenierea acestor bacterii dup
proprietatea lor de acido-alcoolorezisten.

METODA DE COLORARE ZIEHLNEELSEN


Principiul: bacteriile acido-rezistente
colorate cu fucsin fenicat nclzit nu
pot fi decolorate cu acizi sau alcool.
1.
Frotiul se coloreaz cu fucsin fenicat,
nclzind lama pn la apariia vaporilor
(repetare 2 - 3 ori)
2.
Se cltete cu ap, apoi se trateaz cu
soluie de acid sulfuric de 5%
3.
Dup splare frotiul se recoloreaz cu
albastru de metilen
Rezultatul: bacteriile acido-rezistente
rmn colorate n rou, cele acidonerezistente se decoloreaz, apoi se
recoloreaz n albastru

Sub influena unor substane (lizozim,


antibiotice)
PG poate fi deteriorat, iar bacteria
explodeaz din cauza presiunii osmotice
ridicate (5-20 atm). n mediu echilibrat osmotic
pot fi obinute forme particulare:
Protoplastul - reprezint o structur sferic
totalmente lipsit de perete celular. El este
obinut din bacterii G+
Sferoplastul - structur sferic sau
neregulat parial lipsit de perete celular.
Este o bacterie G- lipsit de peptidoglican i
nconjurat de ME i MCP
Bacteriile care prezint un deficit n PG sunt
numite forme L (descoperite la institutul
Lister). Ele se pot forma in ma/o sub influena
antibioticelor betalactamice. Sunt instabile
fa de variaii osmotice i rezistente la
betalactamice. Pot fi reversibile sau ireversibile

MEMBRANA CITOPLASMATIC (MCP)

Prezint o structur membranar


clasic: dublu strat fosfolipidic n
care sunt nserate proteine i
glicoproteine. Lipsesc sterolii.
La bacteriile gram-pozitive MCP
formeaz invaginaii, mezosomi
(septali, laterali), n care se
conin enzime, citocromi i
proteine ale sistemului
transportor de electroni.

Proteinele MCP:
1.
PLP (Proteine de Legare a Penicilinei) - PBP
de la penicillin-binding proteins - (sunt
inactivate de penicilin i antibiotice betalactamice). Reprezint enzime ce
catalizeaz legturile dintre catenele
peptidice din PG reacia de
transpeptidare
2.
Componente ale sistemului de transport
(permeaze)
3.
Proteine ale sistemelor de secreie (I VI)
(la bacteriile gram negative)
4.
Proteine receptori
5.
Enzime ale lanului respirator (in special in
mezosomi)

Funciile membranei
citoplasmatice

1.

Barier osmotic i de permeabilitate selectiv


Asigur transportul activ prin intermediul
permeazelor
Excreia enzimelor hidrolitice, toxinelor, etc
Sediul metabolismului energetic (mezosomi)
Intervine n diviziunea celular (mezosomi)
Particip n sinteza PG i a fosfolipidelor
Particip n chemotaxie prin receptori specifici
Asigur transmiterea informaiei din mediul
nconjurtor spre interiorul celulei bacteriene

2.

3.
4.
5.
6.
7.
8.

Evidenierea MCP

1.

Microscopia electronic

2.

Fenomene de plasmoliz (n mediu hipertonic


retracia citoplasmei) sau plasmoptiz (n mediu
hipotonic liza celulei, desprinderea MCP de
peretele celular)

CITOPLASMA
- Necompartimentat
- Lipsesc organitele celulare
- Format din ap (80%), conine
nucleoidul, ribosomi (apr. 20 000 per
celul), incluziuni, plasmide, ioni, enzime,
deeuri, etc.
- Consistena dens (stare de gel) asigur
permanena mediului intern
- pH acid
Funcii: sediul tuturor proceselor
metabolice
Evidenierea: prin orice metod de
colorare

NUCLEOIDUL BACTERIAN
- Constituit din ADN bicatenar circular, uneori
liniar, plasat liber n citoplasm. ADN este
repliat n bucle i stabilizat prin ARN i
proteine. Fiecare bucl este hiperspiralizat
sub aciunea ADN-girazei i topoizomerazei
IV (se ntlnesc doar la bacterii). Pe ADN
sunt fixate enzime de sintez (ADN - , ARN
polimeraze)
Funcii: dirijeaz activitatea celulei (procesele
de sintez, creterea, multiplicarea,
diferenierea celulei, replicarea proprie, etc)
Evidenierea:
- Microscopia electronic
- Metode speciale de colorare (Feulgen)
Feulgen: HCl.aldehida.react.
Shiff.culoare rosie

PLASMIDELE
Elemente genetice (ADN) extracromosomiale,
capabile de replicare autonom. Confer
bacteriei caractere suplimentare. Se transmit
celulelor-fiice
la diviziunea bacteriei. Plasmidele conjugative
F se transmit prin conjugare.
Episom - plasmida integrat n cromosom
Tipuri de plasmide:
1.
F factor de fertilitate (sinteza pililor F, cu rol
n conjugare).
2.
R rezisten la antibiotice
3.
Ent producerea enterotoxinei
4.
Hly producerea hemolizinei
5.
Col producerea de bacteriocine
Utilizarea practic: n tehnologii de ADNrecombinant

CAPSULA
- nveliul extern neobligator al unor bacterii.
Reprezint polimeri organici sintetizai n mediul natural
de via al bacteriilor (exemplu: n macroorganism).
Se disting:
- Capsula adevrat (peste 0,2m), vizibil la
microscopul optic
- Microcapsula, detectat la microscopul electronic
- Capsula flexibil (slime, glicocalix), o reea lax de
fibre polizaharidice, care difuzeaz n mediu. Nu se
evideniaz microscopic. Asigur formarea
biofilmelor bacteriene ansamblu structurat de
celule bacteriene nglobate ntr-o matrice de polimeri
de origine bacterian, care poate adera la suprafee
inerte (ex.: cateter, stimulator cardiac, endoproteze,
sonde de intubare, etc) sau esuturi vii.

Compoziia

chimic a capsulei: ap
i substane organice (polizaharide,
mucopolizaharide, peptide)
Bacillus anthracis acid glutamic
Neisseria meningitidis, Streptococcus
pneumoniae polizaharide
Streptococcus pyogenes acid
hialuronic

Funciile capsulei:
Impiedic desicarea bacteriei
Barier de permeabilitate pentru substane
toxice (antibiotice, ioni metalici)
Barier protectoare faa de factori
antiinfecioi (complement, fagocite),
bacteriofagi, protozoare
Rezerv nutritiv
Asigur aderarea bacteriei la substrate
esuturi sau suporturi inerte (placa dentar,
biofilm pe catetere, proteze, instrumente, etc)
Specificitate antigenic de specie sau tip (Ag
K)

Evidenierea capsulei
Coloraia Burri-Gins (metod negativ)
- Pe lam se amestec suspensia bacterian
cu tu de China, se etaleaz, se usuc
Frotiul se fixeaz cu alcool
- Se coloreaz frotiul cu fucsin apoas
Rezultatul: capsula apare ca un halou
incolor pe fondul negru. Citoplasma
bacteriilor se coloreaz n rou.
Coloraia Giemsa (capsula se coloreaz n
roz) coloraie pozitiv a capsulei

SPORUL BACTERIAN
Reprezint o difereniere celular care
asigur supravieuirea bacteriei n condiii
nefavorabile ale mediului extern.
Bacterii sporogene Bacillus, Clostridium.
Aceste mi/o se prezint sau sub form
vegetativ, metabolic activ, sau sub form
inert metabolic sporul.
Procesul de formare a sporului este numit
sporogenez, sporulare. Este declanat n
special de carene nutritive sau condiii
nefavorabile ale mediului extern.
-

Stadiile sporogenezei (durata 36-72 ore)


Stadiul I se formeaz filamentul axial, compus
din ADN
Stadiul II divizarea asimetric a citoplasmei
printr-un sept, formarea presporului, care
conine un filament de ADN. MCP nglobeaz
presporul.
Stadiul III nglobarea complet a presporului,
care este limitat de 2 membrane
Stadiul IV formarea cortexului de PG ntre cele 2
membrane
Stadiile V-VI formarea tunicii proteice la exterior
i maturarea sporului. Uneori se formeaz un
nveli extern suplimentar - exosporiu
Stadiul VII sporul matur este eliberat iar celulamam se dezintegreaz

Proprietile
-

sporului
Inactiv metabolic
Coninut sczut de ap liber
Coninut mare (pn la 10%) de
dipicolinat de calciu
Rezistent la temperaturi i pH
extreme, desicare, radiaii, ageni
chimici i fizici

Forma sporului (sferic, oval) i poziia


n celul (central, subterminal,
terminal) sunt caractere utile n
identificarea bacteriilor.

n condiii favorabile sporul germineaz,


dezvoltndu-se forma vegetativ.

Evidenierea sporilor: colorarea dup AUJESZKY


(sporul se coloreaz n rou, iar citoplasma n
albastru)

GRANULAIILE DE VOLUTIN
Reprezint polimeri anorganici de
polimetafosfati. Servesc n calitate de rezerv
de fosfai i pot interveni n metabolismul
energetic.
Interesul medical: la agentul difteriei,
Corynebacterium diphtheriae, granulele de
volutin se localizeaz la extremitile celulei,
iar la corynebacterii nepatogene sunt
repartizate neuniform n citoplasm.
La tratarea cu unii colorani bazici granulele de
volutin se coloreaz n alt culoare, de ex. n
rou-violet la colorarea cu albastru de metilen
fenomenul metacromaziei.
Evidenierea: metoda Loeffler (cu albastru de
metilen), metoda Albert

1.

2.

3.

Coloratia Albert
Frotiul fixat se coloreaza cu solutia Albert A
(toluidin albastru, verde de malahit, acid
acetic, alcool etilic) 5 min
Se inlatura colorantul si fara a spala se
aplica sol Albert B (sol apoasa de I2+KI) 2
min
Se inlatura reactivul, se spala, usuca si se
examineaza

Rezultat: Citoplasma verde, granulatiile


albastru-inchis

FLAGELII
structuri filamentoase proteice, ntlnite la
bacterii, bacili, spirili i spirochete.
Funcii: intervin n mobilitatea bacterian,
reprezint Ag H al bacteriilor.
Structura flagelului:
- Filamentul, structur helicoidal constituit
din fibrile proteice (flagelin) rsucite
- Corpul bazal, constituit dintr-un ax rigid i
mai multe inele ce servesc la fixarea
flagelului (la nivelul MCP i PC).
- Crligul de articulaie
Mobilitatea bacteriei este asigurat de
rotaia flagelului (30 70 micrometri/s).

Tipurile de bacterii dup


numrul i poziia flagelilor:
Bacterii monotriche
Bacterii lofotriche (un mnunchi de
flageli la o extremitate)
Bacterii amfitriche (cte un flagel
sau un mnunchi de flageli la
fiecare extremitate)
Bacterii peritriche (flageli pe toat
suprafaa celulei)

La spirochete flagelii se plaseaz n


spaiul periplasmic flageli interni,
periplasmatici.

Evidenierea

flagelilor
I - metode directe
- Microscopia electronic

Coloraia special Loeffler

(mordansarea cu
tanin, sruri de aluminiu, Fe, apoi colorarea cu fucsin sau
albastru de metilen)

II metode indirecte
(studierea mobilitii
bacteriilor)
- Studierea preparatelor native
pictur suspendat sau
ntre lam i lamel
(microscopia cu contrast de
faz sau pe fond negru)

nsmnarea culturii bacteriene n medii


semisolide (se observ turbiditate)
Creterea culturii n vl pe suprafaa
mediului solid

FIMBRIILE / PILII
Pilii comuni (fimbriile) elemente
proteice
fine, rigide, scurte repartizate pe
suprafaa celulei bacteriene G - n special.
Sunt formate din subuniti proteice
identice (pilina), implantate n ME.
Numrul fimbriilor per celul: zeci sute
Funcii: asigur adeziunea bacteriilor la
suprafee inerte, la celule sau alte
bacterii, reprezint antigenul F

Pilii

conjugativi structuri capiliforme


de natur proteic, prezeni n numr
de 1-10 per celul (numai la
bacteriile ce gzduiesc plasmide
conjugative F).
Funcii: transferul de ADN prin
conjugare, receptori pentru unii
bacteriofagi
Evidenierea pililor: microscopia
electronic