Obiectivele:

Tipurile de acizi nucleici,

nucleici, func
funciile i
i repartizarea lor n
n celul.
celul.
Constituienii acizilor nucleici; bazele azotate, pentozele, acidul fosforic.
Nucleozidele i nucleotidele. 3, 5- cAMP dezoxiribonucleici.
Structura primar, secundar i teriar a acizilor dezoxiribonucleici Cromatina. Nucleosomul.
Structura acizilor ribonucleici (tRNA, mRNA, rRNA).
Denaturarea i hibridizarea acizilor nucleici.
Acizii nucleici
sunt produi de policondensare ai mononucleotidelor, deci sunt polinucleotide.
Nucleotidele - sunt esteri ai nucleozidelor cu un rest, dou
dou sau trei resturi fosfat

Rolul nucleotidelor:
1. Nucleozid monofosfaii reprezint element
ul structural al acizilor nucleici.
elementul
nucleici.
Nucleozid trifosfaii sunt precursori macroergici la sinteza DNA i RNA. n aceste reacii cednd grupa pirofosfat se
transform n resturi de nucleozidmonofosfat, baza structurala a laniului polinucleotidic.
2. ATP - purttorul energiei chimice n celul, servete la transferul grupelor fosfat macroergice i e cheia ce leag
procesele ce decurg cu eliminarea, degajarea energiei i cele ce utilizeaz energia. ADP i AMP, ce se formeaza n
rezultatul defosforilrii ATP, se vor fosforila pn la ATP n procesul respiratiei tisulare..
3. iau parte la transferul unor blocuri de constructie (acidul acetic, glucoza, colina) transformndu-le n substan e /
biologice active uridindifosfatglucoz, citindifosfatcolin
citindifosfatcolin a etc.
4. 5.Unele mononucleotide premordiale conin i alte baze azotate - nicotinamida n nicotinamid mononucleotid,
precursorul NAD, flavinmononucleotida i FAD.
6. In organiusme snt prezente 2 feluri de esteri fosforici ai nucleotidelor, (AMP, ADP, ATP), n alte cazuri fosfatul leaga
2 atomi de 02 ai pentozei n acelai nucleotid. Se formeaz nucleotide ciclice - 2',3' i 3',5'.
Produsul 2',3' se formeaz ca intermediat la degradarea ribornucleotidelor, pe cnd cAMP 3',5' - este un ribonucleotid
natural ce poseda proprietti unicale i o activitate biologic deosebit, reglnd metabolismul ca mesager n efectul
hormonal.
Nucleozidul Bazele pirimidinice Bazele purinice Structura ADN
Structura primarprimar- reprezint succesiunea dezoxiribonucleotidelor (formate de BA: A,G,C,; ; Pe
Pentozadezoxiriboza, rest fosfat) i este stabilizat de legturile 3'5' fosfodiesterice (format la interac
interaciunea 3'hidroxigrupei
3'hidroxigrupei din
pentoza unui nucleotid i 5'-hidroxigrupa pentozei altui nucleotid. Catena de DNA are dou capete 3' i 5'. Captul 5'
este trifosforilat iar 3 con
conine hidoxilul liber. Deci catenele sunt polare
Structura secundar
- reprezint o spiral dubl (bicatenar) n care bazele azotate ocup
ocup interiorul structurii (sunt hidrofobe) interac
interacioneaz
prin leg
legturile de H, care asigur mperecherea specific (complimentar) a BA. C-G i A-T- planurile BA sunt
orientate perpendicular pe axul unic - planul resturilor glucidice are pozitia de unghi drept fa de cel al BA catenele sunt antiparalele.
Exist diferite forme de DNA
care sunt determinate de gradul de
dehidratare a acizilor nucleici: A,B i Z. Modific
Modificrile n dublul helix sunt
dependente de anturajul extern ai
moleculei de DNA.
DNA.
Dublul helix posed dinamism.

forma A:
A:
con
conine 11 resturi la o spir
spir,
este rsucit spre dreapta.

forma clasica B:
con
conine 10 mononucleotide
mononucleotide la o spir.
este rsucit spre dreapta.
- 10 nucleotide ocup 34 Angstremi (3,4 nm).
- o nucleotid cuprinde 3,4A (0,34 nm).

conformatia Z spre deosebire de A

i B este rsucit spre stnga.
Chargaff (1949) studiind componen
componena DNA a stabilit urmtoarele legit
legiti
la aceea
aceeai specie de organisme DNA are o componen
componen nucleotidic
nucleotidic identic
identic
componenta DNA la diverse specii de organisme difer
difer
- DNA la aceea
aceeai specie nu este dependent de: vrst, ra
raie alimentar, condi
condiiile mediului ambiant
- n DNA, A=T i G=C, deci A/T=1 i G/C=1 - suma BA purinice este egal cu suma BA pirmidinice

dac A+T este mai mare dect G+T avem DNA de tip AT
dac G+T este mai mare dect A+T avem DNA de tip GT t C de topire este mai mica cnd predomin perechile

A-T

t C de topire este mai mare cnd predomin perechile G-C

la eucariote DNA mitocondrial este circular
DNA con
conine secven
secvene structurale i reglatoare
Structura ter
teriar a DNA

se con
conine n cromozomi, care au diferite forme n dependent de strangula
strangulaie, care sunt la om n numr de 46.

Un cromozom prezint o molecul gigant de DNA superspiralizat (predomin superspiralizarea negativ),

deci este unitatea structural repetabil a cromatinei DNA este asociat n nucleozom cu proteinele bazice
histonele, care formeaz bucle proteice octamerul (set dublu de H4,H3,H2A,H2B) este nfurat de DNA dublu
inelar cu lungimea de 146 nucleotide formnd o structur discoidal.
- solenoid.
solenoid.
Leg
Legturile dintre DNA i histone sunt ionice
-

ARN
Structura primarsecven

a
de
ribonucleotide
(baze:
A,G,C,U; pentoza- riboza i rest fosfat) stabilizat de
primar secven
legturi fosfodiesterice. Este monocatenar.
Structura secundar a t-RNA

are inf
iarea
iarea
unei
"frunze
de
trifoi"
Ea
se formeaz n
inf
n urma imperecherii complementare intracatenare a
nucleotidelor anumitor sectoare. Sectoarele, care nu sunt ncadrate n
n formarea legturilor de H formeaz lan
lanuri sau
bucle
Sectorul de acceptare CCA cu hidroxilul 3 liber la care se fixeaz grupa COOH al AA.
Bucla anticodonic este format din apte nucleotide. Ea con
conine un triplet nucleotidic specific pentru fiecare tRNA numit anticodon. Anticodonul t-RNA dup principiul complementarittii se mperecheaz cu codonul respectiv din
RNAr.
RNAr. Interac
Interaciunea codon-anticodon determin
determin ordinea aranj
aranjrii aminoacizilor n catena polipeptidic.
- Bucla pseudouridilic const din apte nucleotide n care restul acidului pseudouridilic este obligatoriu i particip la
interaciunea cu ribozomii.
- Bucla dihidrouridinic const din 8-12 resturi nucleotidice, printre care prezena ctorva resturi de dihidrouridin este
obligatorie i interactiuneaz cu enzima aminoacil-RNAsintetaza, care contribuie la recunoaterea de ctre aminoacid
a ARN-t specific.

are de acum

Structura ter
teriar
iar a tRNA
nu forma frunzei de trifoi dar amintete forma ncheieturii cotului (Van-derWaals)
(Van-derWaals)

Propriet
ile fizico-chimice ale acizilor nucleici
Proprietile
- Proprit
ile fizico-chimice ale acizilor nucleici sunt:
Propritile
- masa molecular mare.
propriet
ile coloidale i osmotic
proprietile
osmotice, tipice pentru to
toi compu
compuii macromoleculari.
Propriet
ile lor hidrofile depind de fosfa
Proprietile
fosfai.
viscozitatea i densitatea nalt a solu
soluiilor,
capacitatea de denaturare.
la pH fiziologic toti AN sunt polianioni (-)
Denaturarea fi renaturarea
- proprietate caracteristic pentru moleculele cu organizare spaial e provocat de nclzire, aciunea substanelor, care
rup legturile de hidrogen, forele Van-der-Waals, ce stabilizeaz structura secundar i teriar a acizilor nucleici.
Ex. nclzirea DNA-duce la desfacerea spiralei duble n dou catene, adic are loc transformarea spiral - ghem".
La rcirea treptat catenele din nou se reunesc dup principiul complementarittii, formnd spirala dubl nativ. Acest
fenomen se numete renaturare.
La racirea brusc renaturarea nu are loc. Denaturarea i renaturarea acizilor nucieici este nsoit de schimbarea
activittii lor optice. Toti acizii nucleici posed activitate optic maxim la lungimea undei de 260 nm, ceea ce
corespunde cu absorbia maximal a bazelor azotate.
Hibridizarea AN

Pe capacitatea de renaturare a AN este bazat

bazat metoda de determinare a gradului de nrudire a acizilor nucleici,
care poart denumirea de hibridizare molecular.


La baza metodei st mperecherea complementar
complementar a sectoarelor unicatenare ale acizilor nucleici. Aceast
metod a permis descoperirea particularit
particularitilor structurii primare a DNA.
DNA. S-a stabilit, c n
n componen
componena DNA a
animalelor se afl sectoare cu o succesiune nucleotidic
nucleotidic identic
identic, care de multe ori se repet. Hibridizarea decurge foarte
repede. Restul DNA este prezentat printr-o succesiune unical
unical a nucleotidelor, care nu se dubleaz.
dubleaz.

Obiectivele:
Replicarea ADN- mecanismul, substratele, matricea, enzimele i factori proteici, etapele biosintezei ADN.
Telomeraza. Rolul i structura..
Reparaia ADN.
Transcripia sau biosinteza ARN: matricea, substratele, enzimele, mecanismul
Biosinteza ARN pe matrice de ARN
Modificrile posttranscripionale (processing)
Dogma central a geneticii moleculare. Concepia: o gen - un polipeptid.
Inhibitorii sintezei acizilor nucleici.
Ingeneria genetic i semnificaia ei practic. Sinteza anticorpilor
Trsanscripia invers.
Structura genelor - dimensiunile lor, intronii i exonii, genele structurale i reglatoare.
Codul genetic i proprietile lui.
Mutaiile moleculare: prin substituie, suprimare i inseriile de nucleotide. Rolul mutaiilor
Ribozomii - sediul sintezei proteinelor, structura lor.
Procesul de translare (sinteza proteinelor).
proteinelor). Modific
Modificrile posttranslaionare ale proteinelor. Asamblarea proteinelorfoldingul
Reglarea biosintezei proteinelor. Induc
Inducia i represia enzimelor.
Inhibitorii sintezei proteice
proteice..
Polimorfismul proteinelor (variantele hemoglobinei, enzimelor, grupelor sanguine).
Bolile ereditare i diagnosticul lor biochimic.

Dogma central a geneticei moleculare

Postulatul de baz a geneticei moleculare a fost formulat de Watson i Krick: este transmiterea
informaiei genetice de la ADN la protein care se realizeaz
realizeaz prin urmtoarele trei procese:

replicarea;
au loc n nucleu

transcripia;

translaia.
au loc n citozol

Procesul de transcripie este reversibil. Enzima care catalizeaz transcripia invers se numete revertaza
(reverstranscriptaza) i a fost descoperit la oncovirui.

Sinteza ARN-ului pe baza ARN se numete replicarea ARN, ea are loc la virui, care nu au ADN. Procesul de
translaie este ireversibil i se numete biosinteza proteinei.

Replicarea (sinteza unei noi molecule de AND pe matrice de ADN)

Componentele necesare pentru replicarea sunt:

sunt:
- DNA matriceal bicatenar
dezoxinucleozidtrifosfaeii respectivi A TP, CTP. GTP, TTP
ionii de Mg++, Mn++, Zn++
ribonucleozidtrifosfaeii respectivi: A TP, GTP, CTP, UTP
Enzimele i proteinele specifice stabilizante .
Helicaza - desfacerea dublului helix, treptat, pe poriuni mici. Cele 2 catene rmn
separate ca urmare a interveniei proteinelor de stabilizare
Topoizomeraza I i II nltur supertorsiunile ADN, (I introduce supertorsiuni
negative; II scindeaz o leg. fosfodiesteric pe una din catene i permite celor 2 catene s se roteasc una fa de
alta)
DNA-polimerazele I, II, III sinteza catenei fiice n direcia 5'3' .
DNA-polimerazele II- posed activitate 5'- 3 exonucleazic, nltur primerul i-l nlocuiete cu fragmente de ADN
DNA-polimerazele II rol neclar
DNA-polimerazele III aciune polimerazic (5'- 3) - sintetizeaz n direcia 5- 3' lanul polidezoxiribonucleotidic,
prelund instrucii de la ADN-matri,
- A ciune exonucleazic (3'- 5)
RNA-polimeraza, primaz - sintetizeaz primerul n direcia 5'- 3 .
DNA -ligazel
-ligazele unete fragmentele Okasaki de pe catena ntrziat

Procesul biosintezei DNA se caracterizeaz prin :

- sediul sintezei DNA este nucleul
- replicarea este un proces semiconservativ
- se desfoar n trei etape : ini
iniiere, elongare, terminare
- prezen

a
praimerului
este
obligatorie
prezen
replicarea este cuplat cu desf
desfurarea DNA parental (necesit
(necesit energie)
energie)
replicarea decurge n ambele direc
direcii cu aceeai vitez.
vitez. Pe catena
ntrziat se sintetizeaz fragmentele Okazaki.
Okazaki.
- este bazat pe mpachetarea compli
complimentar a bazelor azotate
azotate
- catena-fiic este antiparalel cu catena parental dar nu identic dup secvena nucleotidic
- forta motric
motric a procesului este hidroliza pirofosfatului
- angajeaza simultan intregul cromozom.
cromozom.
DNA-polimerazele (III):.
(III):.

prezint
prezint un complex multienzimatic ce posed cteva situsuri - pentru DNA, pentru amors, dRTP, exonucleazic
i catalitic.

are activitate polimetazic, preia instrucia de la matri i necesit prezena amorsei cu OH n 3'liber ct i
dezoxinucleozidtrifosfailor

nu poate ini
iniia sinteza catenelor de DNA-deaceia este necesar praimerul.

posed activitate 3'-5'-exonucleazic i exercit o funcie de autocorecie este ncadrat n repararea DNA

DNA-polimerazele (I): ndeprteaz praimerii prin activitatea sa 5'R3' exonucleazicadaug dRN prin
activitatea sa polimerazic

ireversibilitatea procesului e asigurat de aciunea ei pirofosfotazic posed aciune de sudare cu consum de

ATP posed funcie de autocontrol catalizeaz o copiere a DNA complimentar cu cea matriceal.
Mecanismul replicrii

3 etape: iniierea, elongarea, terminarea

Iniierea parcurge dou etape:
Formarea furcii de replicaie - sub aciunea helicazelor are loc desfacerea duplexului parental pe anumite
poriuni replicatori (la scindarea leg. de H dintre BA - se utilizeaz min 2 mol. de ATP). Topoizomeraza
efectueaz rupturi monocatenare apoi sudeaz legtura fosfodiesteric i favorizeaz relaxarea structurii DNA

Sinteza primerului - sub aciunea primazei se sintetizeaz o poriune mic de ARN n direcia 5'- 3'. Primerul este
format din 5-10 ribonucleotide.
Gruparea 3OH e un iniiator al sintezei de ADN.
Elongarea

ADN polimeraza III unindu-se la captul 3' OH al primerului ncepe sinteza ADN fiic. Reacia decurge prin
atacul nucleofil al grupei 3' OH al primerului asupra unui dRNTP complementar catenei de ADN matri. Se formeaz
legtura fosfodiesteric i se elibereaz PP; hidroliza PP determin polimerizarea propriu zis.

Elongarea decurge n direcia 5'

5' 3,
3, i parcurge cu aceeai vitez pe ambele catene

Catena de baz se va sintetiza continuu, iar cea ntrziat va fi format din fragmente Okasaki. (dimensiuni de
1000 2000 nucleotide la procariote i 150-200 la eucariote).

ADN polimeraza I exclude primerii i sintetizeaz complementar ADN.

Fragmentele snt unite cu enzima ADN ligaza (necesit ATP la eucariote i NAD la procariote).
Terminarea
Terminarea replicrii are loc atunci, cnd cele dou bifurcaii de replicare se ntlnesc ntr-o regiune opus
regiunii "ori". Proteinele speciale semnalizeaz oprirea repilcrii prevenind aciunea helicazelor.

Replicarea la eucariote
Particulariti:
ADN polimerazele:
- implicat n replicarea ADN nuclear- responsabil de sinteza catenei ntrziat
rspunde de sinteza catenei lider. Ea manifest aciune exonucleazic
implicat n reparaia ADN
- implicat n replicarea ADN mitocondrial
Bifurcaia replicii este de 3000 baze pe minut comparativ cu 16.000 la procariote

Pe o molecul de ADN exist mai multe origini de replicare (3X104

(3X104 - 3X105 separate prin perechi de baze). n
aceste origini multiple de replicare se organizeaz bifurcaii- ce se deplaseaz biderecional pe cromosomul
eucariot n curs de replicare.
Telomer Telomeraza

Replicarea capetelor 5 ale catenelor este incomplet (teoria lui Olovnicov, 1971), deoarece dup nlturarea
primerilor ADN p nu e e capabil s completeze aceste goluri. Astfel la fiecare replicare, capetele ADN se scurteaz.

Aceasta nu afecteaz informaia genetic deoarece catenele conin fragmente repetitive neinformative
telomere.

Telomerele sunt replicate de o E specific telomeraza

Telomeraza reprezint o ribonucleoproteid: ARN i protein

Subunitatea proteic TRT (telomeraze revers transcriptase) posed activitate catalitic.

Telomeraza fiind o revertaz (ADN polimeraza ARN dependent) folosete ca matri propria coenzim
un fragment de ARN.

Structura i funcia RNA telomerazice.

Structura primar: la majoritatea RNA telomerice, regiunea matricial se afl la deprtarea de 50 nucleotide de
la captul 5, i are urmtoarea succesiune de nucleotide 5-CUAACCCUA-3.

Structura secundar e compus din 4 bucle i un fragment unicatenar, ce conine matria pentru sinteza DNA
telomerice.
Mecanismul elongrii capetelor cromozomului la eucariote
Inhibitorii telomerazei

oligonucleotidele modificate, complementare regiunii matrice a RNA telomerazice. Aa nucleotide specific se

fixeaz de matria RNA telo a omului, inhibnd activitatea telomerazic in vitro. In vivo apare problema transportului
inhibitorilor prin membrana celular i micarea dirijat n nucleul celular.

Ca inhibitori au fost testai i inhibitorii reverstranscriptazelor azidotimidina, didezoxiguanozina.

Numrul telomerilor determin durata vieii fiecrei celule i condiioneaz reducerea critic a numrului lor,
induce moartea programat a celulei deci pierderea motivelor telomerice este cauza imbtrnirii (telomera conine mii de
motive TTAGGG).
lungimea telomerei este marcherul biologic al mbtrnirii.
mbtrnirii.
Reparaia ADN
Erorile n timpul replicrii sunt reduse la minimum
minimum datorit DNA polimerazei ce posed funcie endonucleazic
Tipuri de deteriorri:
Formarea de bree
Modificarea BA
Pierderea de BA
Formarea dimerilor de pirimidin sub aciunea razelor ultraviolete
Reparaia prin excizia dimerului
Reparaie prin fotoreactivare Reparaie prin recombinare
Transcrierea (transcrip
(transcripia)-biosinteza ARN pe matrice de ADN
Componentele necesare:
1. DNA dublu helicoidal (anumite por
poriuni) (catena+),
2. Substrat - ribonucleozidtrifosfatii,
ribonucleozidtrifosfatii, (ATP, GTP, CTP, UTP)
3. RNA polimeraza: posed aciune polimerazic, nu posed aciune exonucleazic, conine ionii de Zn i necesit
prezena ionilor de Mg++, Mn++ n mediu.
la procariote prezint un pentamer compus din 5 protomeri sigma , 2, i 1;
posed centre catalitice(a) , de fixate a DNA i a substratelor.
la eucariote: RNApI sintetizeaza RNA ribozomal (28S si 18S)
RNApII sintetizeaza RNAm
RNAm
RNApIII sintetizeaza RNAt, RNAr 5S i molecule mai mici
Etapele transcripiei

Sinteza decurge n 3 etape: iniierea, elongarea, terminarea.

Iniierea ncepe n anumite secvene de ADN numite promotor (P 40 nucleotide). ARN polimeraza
recunoate cu ajutorul sigma

Toi P bacterieni au 2 secvene consens situate pe catena codifictoare:

Caseta Pribnow 5 TATAAT 3

Caseta 35
5 TTGACA 3
P la eucariote:
GC casete GGGCG
CAAT casete CCAAT
Caseta Hogness TATAT/AT
Primele 2 sunt responsabile de frecvena transcripiei (cnd ncepe), a 3 - - implicat n iniiere semnal (unde). Toate
sunt responsabile de exacitatea iniierii
Pe P deosebim 2 locusuri: de recunoatere (depistat cu ajutorul sigmei) i locusul de legare lax a ARN polimerazei.
polimerazei.
Locusul de recunoatere e situat la o distan de 25 nucleotide de locusul de legare i 10 nucleotide de la punctul de
iniiere (+1)

Sigma
Sigma subunitatea gsete punctul de iniiere i:
Activeaz identificarea secvenelor de RNA polimeraz
Ia parte la desfacerea dublului helix de ADN
Ia parte la formarea primei legturi fosfosiesterice
Astfel complexul de iniiere este format, sigma subunitatea e disociat de la holoenzim i ia parte la iniierea unui alt
ciclu de transcriere.
Elongarea i Terminarea

Elongarea - alunecarea ARN polimerazei pe matra de ADN sinteza transcriptului (50 nucleotide pe
secund) . RNAp nu controleaz catena sintetizat erorile sunt mai multe fa de

Terminarea RNAp recunoate secvenele nucleotidice specifice de pe ADN, ce conin un numr mare de G, C
i T.. Proteina - se asociaz la E i se mic mpreun cu ea, ns la identificarea semnalelor de terminare coboar de
pe matri i ncetinete aciunea E,producnd transcriptul cu folosirea energiei ATP
Procesingul
Toi precursorii de ARN n nucleu trec etapa de maturizare posttranscripional. Pe parcursul procesingului pre-ARN se transform n ARN matur.

Procesingul nclude trei operaii:

Modificarea fragmentelor terminale 5 i 3 ale ARN:

ARN:
a. Cap-area: la captul 5 -este adiionat guanozina metilat (protejarea mARN de atacul 5-exonucleazelor);
b. la captul 3 se adaug o secven mare de poli A (200 A -coad). Ea servete la exportul moleculelor de ARN din
nucleu n citoplasm.

Excizia intronilor i sudarea exonilor. Aa numitul splising are loc n nucleul celulei: enzime specifice
identific secvenele de baze la jonciunea intron exon. Un rol important n excizie le revine ARN nuclear (ARN U),
care are o secven de baze complementar cu secvenele de la fiecare intron.ARN nuclear scoate intronii, capetele
exonilor sunt juxtapuse, apoi sudate de RNA ligazele

Metilarea bazelor t-ARN mpedic distrugerea ARNt de ctre nucleaze.

Transcripia invers

sinteza ADN pe catena de ARN

Matria ARN

Substrat dRNTP:dATP, dGTP, dCTP, TTP

Enzima revers transcriptaza

Caracteristic viruilor oncogeni

Mecanismul:
a. Revers transcriptaza sintetizeaz pe ARN viral catena de ADN- hibrid ADN_ARN
b. Scindarea ARN viral de o nucleaz
c. Autoreplicarea ADN cu formarea unui duplex de ADN

Structura genelor- dimensiuni, GS; GR

Gene- poriunile ADN ce conin informaia genetic cu privire la sinteza unei proteine
Fiecrei gene i cores
corespunde un lan polipeptidic- de aici i conceptul: o gen un lan polipeptidic
GS- genele ce codeaz polipeptide i ARN. Poriunile GS ce conin informaie (transductibile) exoni; iar
secvenele ce nu sunt traduse n ARNm introni
GR segmente de ADN, repetabile, relativ mici ce au un rol reglator. Rolul lor:
Pot fi semnale ce ne arat nceputul i sfritul GS
Particip n iniierea i terminarea transcripiei GS

Dimensiunile genelor f. variabile. Ex. Proteina ce conine 350 AA--- 350X3=1050 nucleotide. tiind c BA sunt
localizate la 0,34 nm_---0,34 nmX 1050=357 nm =0,36mcm

Codul genetic
Informa
Informaia genetic
genetic referitor la biosinteza proteinelor se transmite cu ajutorul codului genetic,
genetic, ce reprezinta forma
de exprimare a rela
relaiei dintre secven
secvena de nucleotide din DNA i
i succesiunea de AA din LP.
LP.
Cele 4 nucleotide, grupate cte 3, pot oferi 64 de posibilitti pentru cei 20 AA. Un AA este specificat de 3
nucleotide i fiecare triplet se numete codon. Codonii se citesc consecutiv de moleculele de tRNA, care
ndeplinesc rolul de adaptor n sinteza proteinelor.
Propriettile codului genetic
este triplet 61 codoni codific aminoacizii corespunztori, 3-codific terminatia sintezei proteice;
codul este degenerat unui aminoacid poate s-i corespunda mai multe codoane: arg, leu, ser, fiecare este
codificat de cte 6 codoni, ns met- i trp sunt specificati de ctre un singur codon. Codonii unui aminoacid sint
sinonime. Specificitatea codonului e determinat de primele dou litere. Degenerarea se refer la nivelul nucleotidului 3
din codon sau 1 din anticodon care oscileaza, (o baz ovielnic) i e dispus s incalce regulile (efectul Wobble).
Codul nu are virgule,
virgule, semne de punctuatie, ce ar indica nceputul i sfritul fiecarui codon. Citirea mesajului
genetic se face nentrerupt de la codonul start pn la cel terminator.
Codul genetic este universal - toate vietuitoarele utilizeaz acela mecanizm de traducere (abaterea prezint
codul genetic al mitocondriei);
-Codul genetic nu este ambiguu (acelai triplet nu semnific 2 aminoacizi diferiti.
Nu se suprapune cu exceptie la virusuri;
Codul genetic este liniar (este coliniar adic exist o concordant liniara ntre gen i proteina codificat).
(AUG) este tripletul de initiere
iar UAG, UAA,UGA de terminare (non sens) uracilul n pozitia 1 prezint codoanele nonsens
codoanele cu U (n pozitia 2) codifica AA hidrofobi
cei cu A n pozitia -2 codific AA polari sau cu sarcin
dac n anticodon n directia (5'->3') prima baz nucleotidic e:
a) Citozina sau Adenina, el va citi un singur codon;
b) Uracilul sau Guanina el va citi 2 codoane;
c) inozina - respectiv va citi 3 codoane;

Obiectivele:
Ribozomii - sediul sintezei proteinelor, structura lor.
Procesul de translare (sinteza proteinelor).
proteinelor).
Modific
Modificrile posttranslaionare ale proteinelor.
Reglarea biosintezei proteinelor. Induc
Inducia i represia enzimelor.
Inhibitorii sintezei proteice
proteice..
Polimorfismul proteinelor (variantele hemoglobinei, enzimelor, grupelor sanguine).
Ingeneria genetic i semnificaia ei practic. Sinteza anticorpilor
Mutaiile moleculare: prin substituie, suprimare i inseriile de nucleotide. Rolul mutaiilor

Ribozomii

Reprezint sediul de traducere a ARNm i sinteza proteinelor.

Structura- complexe ribonucleoproteice i sunt formai din dou subuniti de mrime inegal (mare i mic)

Structura ribozomilor procariotici:

subunitatea 30 S conine ARNr 16S i 21 proteine.
subunitatea 50S ARN r 5S, 23S i 31 proteine.
Sinteza ARNr i formarea subunitilor are loc n citoplasm.

Structura ribosomilor eucariotici:

subunitatea 40S ARNr 18S i 33 proteine.
subunitatea 60S ARN r 5S, 5,8S, 28S i 49 proteine. ARNr se formeaz n nucleol.

Ribozomul va avea constanta de sedimentare 70S la procariote si 80S la eucariote.

S este coeficientul de sedimentare Svedberg, care depinde de forma, densitatea i dimensiunea particulelor.

Centrele catalitice ale ribosomilor

Situsul A - aminoacil responsabil de unirea complexului aminoacil- ARNt
Situsul P peptidil gzduie
zduiete ARNt legat de un lan
lan polipeptidic deja sintetizat
Situsul E e responsabil de eliminarea ARNt


Procesul de sintez proteic poate fi schiat sumar prin interaciunea celor 3 tipuri de ARN - informaia din
ARNm este citit n ribozom si transpus n proteine, AA necesari fiind adui de ARNt.

n starea sa nedisociat ribozomii sunt activi.

Deplasarea liber a ribozomilor n diferite sectoare ale celulei, sau combinarea lor n diferite locuri cu
membranele reticulului endoplasmatic ofer posibilitatea de asamblare a proteinei n celul.

Mai mul
muli ribozomi pot citi simultan acela
acela ARN mesager pe care il parcurg in acela
acela sens. Se constituie astfel
un poliribozom, structur
structur ce permite accelerarea sintezei proteice.
Translarea (traducerea, biosinteza proteinelor)
se realizeaz
realizeaz n urmtoarele etape:
I. Activarea AA.
II. Translarea proprio
zis:
propriozis:
1.Iniierea lanului polipeptidic.(LP)
2. Elongarea LP.
3. Terminarea LP i
i eliberarea acestuia
III. Prelucr
Prelucrri posttraducere ale proteinei sintetizate.
Activarea aminoaciz
aminoacizlor,
are ioc n citozolul celulei
- AA se leag de gr. OH din pozitia 2' sau 3' al cap CCA din RNAt cu consum de energie (2 leg. Macroergice).
- activarea tuturor AA e catalizat de 20 de AA RNAt - sintetaze care asigur specificitate.
- Enzima are 4 centre de fixare: pentru tRNA, ATP, AA i H20.
- necesit prezena ionilor de Mg2+, K, pentru a-i exercit funcia.
aci
unea pirofosfatazei cauzeaz ireversibilitatea reac
aciunea
reaciei

Se desfoar n dou etape:

ATP PPi
1. NH2-CH-COOH
I

R
2. NH2-CH-CO O-AMP+AR
Nt
O-AMP+ARNt
I

NH2-CH-CO O-AMP
I

R Aminoacil Adenilat

NH2-CH-CO O-RNAt +AMP

R

Aminoacil RNAt

Biosinteza decurge n 3 etape:

Ini
Iniierea, elongarea, terminarea

Iniierea:
Iniierea:
- subunitatea 30S formeaz complex cu FI-3- apoi se leag ARNm cu codonul AUG plasat n situsul P
- se agaug FI-1- fmet-ARNt i GTP se leag de FI-2 i se unete la complexul format de subunitatea 30S
30S. FI-3 i
ARNm formnd complexul de ini
iniiere.
- Complexul de ini
iniiere se combin cu subunitatea 50S formnd ribozomul integru, func
funcional activ 70S .
- Are loc hidroliza GTP la GDP i P i eliberarea factorilor de ini
iniiere.
Elongarea
Decurge n 3 etape :
1 fixarea noului Aminoacil ARNt
complexul: aminoacil-ARNt,
aminoacil-ARNt, factorul de elongare T (FE-T) i GTP.

se fixeaz pe situsul A, dup ce are loc hidroliza GTP la GDP care se elibereaz mpreun cu FE-T.

2. formarea legturii peptidice.

Enzima peptidil-transferaza catalizeaz formarea legturii peptidice ntre doi AA din situsul A i P.Peptida rmne
ataat de RNAt de pe situsul A.

3. transloca
translocaia
ribozomul se deplaseaz la urmtorul codon de pe ARNm i peptidilARNt
peptidilARNt trece de pe situsul A pe P

aceast etap necesit factorul de elongare G (FE-G) i GTP (necesar

(necesar pentru realizarea modificrilor
conforma
conformaionale care deplaseaz ribozomul)
ribozomul).

Terminarea
este semnalat de unul din cei trei codoni stop.
dup ce ultimul rest de aminoacid (C terminal) a fost ad
adugat la lantul polipeptidic, el este covalent ataat cu
grupa sa COOH de ARNt n situsul A.

desprinderea necesit prezena factorilor de desprindere RI ,R2, R3, care transfer

transfer peptide pe situsul P.

rup legtura esteric dintre ARNt i polipeptid desprind ARNm, ARNt i disociaz ribozoma n dou
subunitti.

Necesarul energetic la formarea fiecrei legturi proteice

- dou legturi macroergice se folosesc la activarea fiecrui AA

- o legtur macroergic- la fixarea AA ARNt la situsul A

- o legtur- la translocare

Modificrile posttraducere includ:

- ndeprtarea restului formil la procariote i a metioninei la eucariote;
- formarea hidroxiprolinei i hidroxilizinei
- acetilarea capatului N - terminal- metilarea lizinei, argininei
- fosforilarea hidroxiaminoacizilor
- carboxilarea glutamatului
- iodurarea resturilor de tirozin
- glicolizarea resturilor de lizin
- excizia unor secvente polipeptidice
- formarea puntilor disulfidice
- ataarea unor substitueni neproteici (hemul)
Anticorpii sunt. Sinteza Anticorpilor
Fiecare dintre milioanele de anticorpi produi
produi leag unul dintre milioanele de antigene posibile. Este greu de
crezut c organismul
organismul are n
n patrimoniul su genetic cte o gen pentru fiecare anticorp pe care-l
care-l produce ntruct aceasta
ar presupune o supradimensionare a genomului eucariot.
Gradul de diversificare n ob
obinerea lan
lanurilor H" i L" este crescut prin faptul c o poriune variabil este
rezultatul asamblrii a 3 regiuni. Deci ADN ce determin poriunea variabil a anticorpului este constituit din:
din:

Por
Poriunea variabil (V) constituit din - 400 de gene.

Poriunea de diversitate (D) ce cuprinde -12 gene

Portiunea de articulare sau jonciune

(J) - 4 gene
Asamblarea acestor gene n diferite combina
combinaii permite construirea a 20000 de sectoare V - fapt ce asigur extrema
varietate a anticorpilor.
anticorpilor.

Inhibitorii sintezei proteice:

- la nivelul replicrii:
:
replicrii
- Mitomicina c - mpiedica
mpiedica separarea catenelor de ADN
- Acidul Nalidixic - inhiba
inhiba ADN giraza

- la nivelul transcriptiei:
- Actinomicina D - se
se fixeaza pe ADN
Rifampicina - inhiba
inhiba ARN polimeraza

la nivelul translatiei:,
Tetracicilina - inhiba
inhiba legarea ARNt la ribozomi
Puromicina - blocheaza
blocheaza elongarea inhib
inhibnd competitiv ARNt
Kanamicina translatie
translatie -inhiba
-inhiba citirea codului genetic
Toxina difteric - inhib translocaza
Reglarea sintezei proteinei
- asigur cantitatea optim
optim de protein necesar organismului.
- se realizeaz
realizeaz la nivelul sintezei de ARNm ct i la cel al etapelor citoplasmatice de sintez.
- celulele dispun de dou
dou tipuri de enzime:

a) Inductibile, a cror concentraie depinde de prezena sau absena din mediu a unui compus - inductor. De
obicei aceste enzime sunt implicate n ci catabolice.

b) Represibile, a cror concentraie depinde de prezena sau absena din mediu a unui compus corepresor

c) Constitutibile care sunt n cantitate constant indeferent de starea metabolic a organismului

Modelul lui Jacob-Manod de reglare a biosintezei proteinelor poart numele deTeoria
deTeoria operonului.
Bacteria are ca surs glucoza.
glucoza.Bacteria are ca surs lactoza

Reglarea sintezei la eucariote

Att la nivelul transcripiei ct i la nivelul translaiei

Reglarea hormonal (cortizol- sinteza E gluconeogenezei; estrogenii, androgenii, vitamina D sintez de

proteine specifice)

Reglarea exspresiei genetice prin moleculele proteice legate de ADN (histonele) sinteza ARN pe ADN e
inhibat prin adaosul de histone

Reglarea proteinei la nivelul translaiei e posibil prin aciunea factorilor proteici, care contribuie iniierea,
elongarea, terminarea.
Ingineria genetic
tiinta,
tiinta, preocupat
preocupat de crearea noilor fenotipuri prin transplantarea genei unui organism n genomul altuia n
scop de a lichida defectele ereditare ale genomului,
genomului, adic
adic tratarea afectiunilor ereditare (gena
(gena ntrodus
ntrodus nu gureaz
gureaz n
n
patrimoniul ereditar al genomului -gazd
-gazd)

Se
obtin molecule hibride (himerice)

n linii marl procedura include etapele:

1. Cptarea genei

2. Cptarea ADN-ului recombinat

3.Clonarea ADN-ului recombinat

Cptarea genei:
genei:
Stiind structura primar a proteinei n laborator se poate obine gena respectiv (se obin gene pn la 250 codoane) - mai
greu e ob
obinerea genei din genomul celulei (genele se despart prin introni)- mai uor e cptarea genelor din virusuri cu
enzima revertaza.
Cptarea ADN-ului recombinat
gena necesar se ntroduce n
n celul pentru a se integra cu genomul acestuia. Pentru aceasta n vitro gena se
une
unete cu ADNADN-vector (plasmide ce con
conin ADN inelar (c
(cteva gene).
gene).

De regul se folosete E Coli, ce contine un cromozom i plasmide, ce pl

plutesc n citozol (plasmida este de 1000
ori mai mica dect cromozomul).
Plasmidele
se replic
replic independent de replicarea materialului genetic. Unele
plasmide se pot include n cromozom i apoi din nou s-l
s-l prseasc. Plasmidele pot trece dintr-o celul n alta n
procesul de conj
j
ugare.
Plasmidele
se
separ
din
E.Coli
i li se nltur o parte de ADN inelar cu ajutorul enzimelor
con
restrictaze, care recunosc i taie diferite sectoare. Folosind restrictaze diferite se poate de tiat ADN n locusurile
necesare. In rezultat se formeaz capete lipicioase (sectoare monocatenare, capabile de a uni nucleotide complimentare.
La fel se procedeaz i cu gena,care trebuie ntrodus (se formeaz capete lipicioase complimentare capetelor
plasmidei). Dac se amestec gena i plasmida ele se vor uni cu capetele lipicioase. Enzima ligaza va uni capetele i se
va cpta molecula ADN inelara, care con
conine gena menit pentru transplantare.
Clonarea
ADN-ului recombinat- ob
obinerea cantitilor dorite de protein codificat de gena eucariot ntrodus n
plasmid. Dac n cultura E.Coli se ntroduc plasmide recombinate, se formeaz bacterii recombinate. In celul
plasmidele se replic. Bacteriile nmulindu-se formeaz celule, care con
conin aceste plasmide. Acum din masa bacterian
se poate de capatat cantitti sufuciente de ADN recombinat.
recombinat.

Ranadamentul sintezei bacteriene

este impresionabil: Ex- 100 celule E.Coli produc prin clonare 5 mg
somatostatin (cantitate, ce se obine prin prelucrarea a 100 tone de creier de bovine). Prin tehnica engineriei genetice sau obtinut cantiti mari de insulin
insulin (Humulun), Interferon, vaccine.

Diversitatea formelor n Iimita uneia i aceai specie se datorete mutaiilor i ntr-o msura mai mare
recombinrii genetice.
Muta
Mutaiile.
Modificrile genomului orgnismului, care se pstreaz i se transmit prin ereditate poart numele de muta ii.
Muta
Mutaiile sunt modificri ale informa
informaiei genetice, care se transmit apoi de la o genera
generaie la alta. Modificrile pot
interesa o pereche de baze (mutatii punctiforme) sau un grup de baze pe una sau pe ambele catene ale unei molecule de
DNA.

Mutatiile punctiforme: pot decurge prin:

l. substitutie (misens mutatii, unde deosebim 2 tipuri):

10

a. Tranzitie - o BA purinic este nlocuit tot cu una purinc, una pirimidinic -tot cu una pirimidinic.
b.Transversie - o pereche de baze purinice este nlocuit cu una pirimidinic sau invers.
2. Inser
mecanism
const n ntroducerea unei perechi de baze suplimentare n catena de DNA.
Inserie - acest
3. Dele
Deleia const n excluderea unei perechi de baze n aa mod ca ea nu mai poate f complementar i la replicare
apare "golul" n ambele catene. Unele modificri n secventa nucleotidic pot duce la formarea codonului sinonim i
succesiunea aminoacizilor nu se va schimba (mutatii benigne).
La afectarea segmentelor mari de gen apar mutatii ntinse. In dependent de consecin
consecinele modific
modificrilor deosebim
muta
mutaie benign, neutr, nociv.
Agen
Agenii mutageni pot provoca muta
mutaiile spontane ct i muta
mutaiile induse.

11