CURS 1

Virusologie generala
Istoric
Virusologia este una dintre cele mai importante ramuri ale
biologiei n general i ale medicinei n special cu multiple i
importante implicaii interdisciplinare avnd ca obiect de studiu
virusurile umane i animale, cu implicare acestora in patologia
infecioas.Existena bolilor recunoscute astzi ca virale este atestat
din antichitate.
Distincia clar ntre virusuri i bacterii a fost fcut de Dimitri
Ivanoski care a demonstrat c filtrele bacteriene nu re in
virusurile.Dac Ivanoski a lucrat cu un virus vegetal(virusul
mozaicului tutunului), primul virus animal a fost izolat de Loeffer i
Frosch n 1898 (virusul febrei aftoase).
Epoca de vrf a virusologiei debuteaz n 1949 cnd Enders,
Weller i Robins introduc culturile celulare ca substrat pentru
cultivarea virusurilor
n ara noastr, precursori ai cercetrii n acest domeniu au fost:
Victor Babe (a introdus seroprofilaxia n rabie), Gheorghe Marinescu
(studii n domeniul propagrii virusurilor neurotrope pe calea nervilor,
mecanismul imunitii celulare virale), Mihai Cinc (alturi de J.Bordet
descoper fenomenul de lizogenie).
Fondatorul colii romnesti de virusologie este tefan Nicolau,
autor a numeroase studii de vrf, ntemeietor al primei catedre de
inframicrobiologie din lume (1942) la facultatea de medicin din
Bucureti.Colaborator al profesorului . Nicolau academicianul
Nicolae Cajal a asigurat continuitatea colii romne ti de virusologie
conducnd catedra de virusologie Carol Davila pna in anul 1993,
urmndui profesorul Costin Cernescu
Generaliti despre virusuri
Organismul uman poate fi parazitat de urmatoarele microorganisme:
protozoare i fungi, bacterii i mycoplasme, rickettssii i chlamydii,
virusuri i o serie de ageni subvirali cu poten ial patogen. Virusurile
sunt ageni infecioi de talie extrem de mic cu parazitism obligatoriu
intracelular. Viroizii sunt molecule ARN circular formate din 200-400
nucleotide,fr capsid,care determin unele boli transmisibile la
plante.

Caractere generale ale virusurilor

Virusurile au dimensiuni reduse, de ordinul nanomerilor,putnd fi
vizualizate la microscopul electronic, de obicei nu sunt re inute de
filtrele bacteriene, sunt ultrafiltrabile.
Sunt structurate dintr-un miez alcatuit dintr-un singur acid nucleic
(ADN sau ARN) ce conine intreaga informaie genetic necesar
multiplicrii i codificrii celorlalte structuri virale ce formeaz virionul
sau poriunii elementar infectant, miez ce este invelit la periferie de
o capsid de natur proteic alctuit din capsomere
Genomul este purttorul infectivitii virale iar capsida antigenitatea virusurilor. ntruct nu posed in structura lor
mecanisme de sintez proteic virusurile prezint un parazitism
intracelular, folosind aparatul ribozomal al celulei parazitate al crui
metabolism l deviaz pentru sinteze propii.Pentru cultivarea
virusurilor se folosesc animale de experiena, oul de gin embrionat
i culturile de celule.
Virusurile nu sunt sensibile la antiobiotice dar replicarea viral induce
formarea unor substane interferoni- ce induc rezisten a antiviral a
celulelor nc neparazitate.
Infecia viral a celulelor din organism duce la declan area virozei,
care poate mbraca un aspect inaparent sau declan a manifestri
caractertistice.
Taxonomia viral
Taxonomia viral actual difereniaz virusurile n ribovirusuri
(genom ARN) i dezoxiribovirusuri (genom ADN), n interiorul crora
se grupeaz n:
Tulpin cuprinde progenii rezultai din replicarea unui singur izolat
viral
Specie o multitudine de tulpini de virus ce au n comun o serie de
propieti stabile
Genul grupe de specii comune i cu un ancestor comun
Familia grupe de genuri cu caractere comune privind morfologia
virionilor, structura genomic i strategia replicrii
Ordinul cuprinde familii cu strategie comun a replicrii
Criteriile utilizate n stabilirea taxonomiei la ora actual sunt:
Propietile virionului: mrime, form, simetrie, prezen a anvelopei

Propietile genomului: tipul de acid nucleic, numrul de spire, sensul

de transciere sau polaritatea, numrul de segmente, frecven a de
nucleotide
Propietile proteinelor virale: numr, greutate molecular, func ie,
secvena aminoacizilor
Propietile fizico-chimice: stabilitate termic,rezisten la ph, radia ii,
detergeni, solveni, ioni, etc
Propietile biologice serologice,tropism celular, vectori
Replicare viral: strategia replicrii, transcrierea, traducere, modificri
postraducere, ansamblarea i eliberarea virionilor progeni
Clasificarea virusurilor utilizeaz variate criterii
Dup natura celulei parazitate virusurile pot fi :
- bacteriene
- animale
- vegetale
Dup dimensiuni :
- virusuri mici cu diametrul de 15 30
nm(enterovirusuri)
- virusuri mijlocii cu diametrul de 70
180 nm (mixovirusurile, virusurile
din grupul Herpes, arbovirusuri, HIV)
- virusuri mari cu diametrul de 200
300 nm (poxvirusuri)
Dup calea de transmitere virusuri enterotrope
( enterovirusuri, rotavirusuri)
- virusuri hepatotrope ( ex. virusurile
hepatitelor virale, unele arbovirusuri, unele virusuri Coxsackie grup B)
- virusuri cu tropism respirator ( ex, mixovirusuri, adenovirusuri,
rinovirusuri, coronovirusuri)
- virusuri neurotrope ( ex. arbovirusuri, tulpini neuropatogene ale
enterovirusurilor si de virus rujeolos, virus rabic )
- virusuri dermotrope ( ex. virusul grupului Herpes , poxvirusurile,
virusul rujeolos, virusul rubeolic )
- virusuri limfocitotrope (ex. virusul rujeolos, HIV)
Dup calea de transmitere a virusului:
- calea fecal - oral virusuri enterice (ex. poliovirusurile )
- calea aerian virusuri repiratorii (ex. virusuri gripale )
- calea sexual (ex.HIV)
- calea sngelui (ex.virusul hepatitic B,C)
- calea artropodelor (ex. arbovirusurile)

- calea materno- fetal ( ex. virusul rubeolos)

Dup acidul nucleic coninut:
Ribovirusuri (ARN) familia picornaviridae, cu genurile:
- Enterovirus ( ex. virusul poliomielitic,
- Cardiovirus ( ex. virusul encefalomiocarditei)
- Rhinovirus (ex. agenii guturaiului)
- Aphtovirus (ex. virusurile febrei aftoase )
- Heparnavirus (ex. virusul hepatitei A)
familia Calciviridae (ex. coronavirusuri, astrovirusuri)
familia Tagoviridae, cu genurile:
- Alfavirus (ex. virusurile encefalitei ecvine de est i vest )
- Rubivirus (ex.virusul rubeolos)
- Hepacivirus ( virusul hepatitei C)
- Pestivirus ( virusul diarei bovine)
familia Flaviviridae cuprinde virusul febrei galbene
familia Arteviridae cuprinde virusul artritei ecvine
familia Bungaviridae
cuprinde virusul encefalitei de
California, virusul febrei hemoragice de Crineea, etc
familia Orthomixoviridae include 3 tipuri de virusuri gripale
Influenzavirus A,B,C
familia Paramixoviridae include genurile: Morbillivirus ( virusul
rujeolos) ; Pneumovirus ( virusul respirator sinc ial) ; Paramixovirus
( paramixovirusuri i virusul urlian)
familia Rhaldoviridae virusul rabic
familia Filoviridae cuprinde virusuri cauzatoare de febre
hemoragice (virusul Ebola, virusul Marburg)
familia Reoviridae cu genurile:
Reovirus cu tropism respirator i intestinal
Orbivirus include virusuri encefalitogene
Rotavirus cu virusuri cauzatoare de gastroenterite
la nounscui i copii mici
familia Retroviridae cu subfamiliile:
Oncoviridae

virusuri
oncogene,
ex.
HTLVI2,Leukemia virus
- Lentivirinae ageni ai unor boli degenerative ale
SNC i HIV
- Spumavirinae determin infecii cronice
asimptomatice

- Desoziribovirusuri (virusuri ADN) cu urmtoarele familii:

Familia Parvoviridae- nglobeaz virusuri ce infectez celulele
stem ale mduvei osoase hematogen determinnd boli
hematologice.
Familia Papoviridae cu subfamiliile
Polimixovirusuri determin tumori cu multiple localizri
Papillomavirinae determin papiloame cutanate
Familia
Odenoviridae

virusuri
cu
tropism
adenofaringoconjunctival
Familia Hepadnaviridae virusuri cu tropism hepatic
Familia Herpesviridae cuprinde virusurile Herpes simplex 1
i 2; Citomegalic; Varicelo- zosterian; virusul Epstein-Barr; HIV
Familia Poxviridae - include virusul Vaccinia; Variolic;
Molluscum contagios; agenii Orf (parvovaccinia)
Morfologia virusurilor
Forma virusurilor poate fi :
- cilindric, de exemplu virusul mozaicului tutunului, variante de virus
gripal
- sferic, exemplu virusurile gripale
- poliedric, de exemplu virusul poliomielitei
- prism sau crmid, de exemplu virusurile pox.
Structura virusurilor
Particula viral (virionul) este alctuit dintr-un miez central de acid
nucleic i un nveli extern numit capsid i uneori anvelop (peplos).
Miezul de acid nucleic (genomul nucleoid), fie ADN fie ARN, este
suportul infectivitii virusurilor, conine informia genetic necesar
multiplicrii virale i sinteza constituenilor virali din metabolismul
deviat al celulei gazde. Acidul nucleic poate fi dispus liniar, circular
sau ncolacit i este constituit din mai multe segmente sau dintr-o
singur molecul.
Capsida este dispus la exteriorul genomului i este constituit din
capsomere alctuite din punct de vedere chimic din proteine simple
sau proteine legate de fraciuni glucidice.
Asamblarea capsomerelor se face dup regulile simetriei helicoidale
acidul nucleic rsucit situat central i capsomereleidentice a ezate
metameric; simetriei icosaedrice (cubic) acidul nucleic dispus
central i n jur capsomerele dup planuri de simetrie riguroase
realiznd n final o figur geometric numit icosaedrie; simetriei
mixte - ce trec prin vrfuri, laturi i fee

Anvelopa este elementul structural facultativ, alctuit din subunit i de

natur proteic, numite peplomere.La acest nivel putem ntlnii i
lipide, ele fiind preluate din membrana celulei gazd, deci nespecifice
unui anumit virus.
Virusurile bacteriene ( bacteriofagii) prezint o morfologie tipic i
anume prezena urmtoarelor fomaiuni
- capul, alctuit din acid nucleic i capsida format din capsomere
dispuse sub form unei prisme hexagonale
- gtul, poriune dintre cap i coad
- coada, alctuit din miezul lacunar, teaca contractil i placa bazal
de care se ataeaz fibrele cozii
Metode de cultivare a virusurilor
Virusurile nu posed n structura lor mecanisme de sintez
proteic, fapt ce determin s utilizeze aparatul ribozomal al celulei
parazitate creia i deviaz metabolismul n vederea propiilor sinteze,
motivnd astfel necesitatea strictului parazistism intacelular ale
acestora.
Exist trei modaliti virus- gazd utilizate n prezent: animalele
de experiena, oul de gin embrionat i culturile de celule. Animalele
de experien sunt astzi mai puin utilizate, rmnd indispensabile n
studiul patogeniei virozelor, al rspunsului imun, pentru testarea
inocuitii unor medicamente sau vaccinuri.
Relaiile care se stabilesc ntre virusul animal i celula gazd pot fi:
1)-relaii de tip litic (citocid)
2)-relaii de tip simbiotic
In urma relaiei de tip litic virus - celul gazd rezultatul se traduce
totdeauna prin moartea celulei gazd i eliberarea de particule virale
neoformate (progeni) n mediul extracelular.
n relaia de tip simbiotic virus-celul gazd, celula gazd nu moare,
ci ctig proprieti noi.
Ambele tipuri de relaii virus-celul gazd parcurg etapele
de mai jos ale ciclului replicativ, diferenierea realiznd-o faza de
cretere liniar.
REPLICAREA VIRUSURILOR
Ciclul de replicare viral nu poate fi conceput dect n relaie cu celula
gazd. Acest ciclu de replicare al virusurilor, a crui durat se
situeaz ntre 3-6 ore, i se descriu urmtoarele faze :

1 faza de eclips:
-adsorbia
-internalizarea
-decapsidarea
2 faza de cretere liniar:
-sinteza proteinelor timpurii
-transcrierea genomului progenilor folosind ca matri genomul
parental
-sinteza proteinelor tardive (structurale)
3 faza de platou:
-maturarea
-asamblarea
-eliberarea particulelor virale nou formate.
Faza de eclips:
- imediat dup infecie, cu o durat de 10-20 de minute, creia i se
descriu trei etape:
Adsorbia const n ataarea virusului pe receptorii specifici de pe
suprafaa celulei susceptibile, receptori corespunztori situsurilor
virale de ataare.
Penetrarea sau internalizarea - reprezint ptrunderea virusului n
interiorul celulei. Penetrarea la virusurile neanvelopate se face prin
viropexie ( nglobarea virusului n citoplasm), iar la cele anvelopate
prin viropexie sau fuziune direct a anvelopei cu membrana celular.
Decapsidarea - enzimele virale induse alturi de enzimele lizozomale
celulare duc la separarea miezului viral de capsid.
La sfritul acestei etape se pierde temporar infectivitatea.
FAZA DE CRETERE LINEAR
Sinteza noilor proteine virale de ctre ribozomi este succedat
de aezarea lor n jurul acidului nucleic viral producndu-se
asamblarea i maturarea particulelor virale neoformate.
FAZA DE PLATOU
Este faza n care are loc replicarea viral, se acumuleaz
enzime de replicare, precum i energia necesar sintezei de
componente virale neoformate. Durata fazei de cre tere linear este
limitat de oferta de energie pentru sinteza macromolecular pus la
dispoziie de celula gazd.

Aciunea agenilor fizici i chimici asupra virusurilor

Factorii fizici i chimici pot aciona asupra virusurilor inducnd
modificri ale unor proprieti a virionilor sau modificnd compozi ia
constituenilor virali, aciune ce se soldeaz cu pierderea infectivit ii
acestora.
Cldura - are aciune diferit asupra virusurilor i anume:
- la temperatura camerei (18-25 grade Celsius) acestea sunt relativ
stabile, ns n timp se pierde infectivitatea
- temperatura de 50-60 grade Celsius duce la inactivarea virusurilor
ca urmare a degradrii proteinelor de la nivelul capsidei, fenomen ce
se soldeaz uneori i prin pierderea de antigenit i. (v.gripal n 5
minute, v.polio i v. Herpes n 30 minute).
- prin fierbere la 100 grade Celsius se distruge virusul rabic n 2
minute, virusul hepatitic A n 5 minute i virusul hepatitei B n 5
minute.
Frigul - are aciune conservant asupra virusurilor iar temperaturile
negative sunt folosite pentru stocarea acestora
Umiditatea - hidratarea virusurilor duce la moartea acestora
Tratamentul mecanic- prin agitare se produce dezintegrarea
viral.Modificrile mici ale presiunii osmotice pot prezice modificri
chimice ale proteinelor capsidei, n timp ce ocurile osmotice
acioneaz nociv
Disecarea - poate produce inactivarea unor virusuri (ex. mixovirusuri)
n timp ce altele rezist destul de mult timp (ex. enterovirusuri).
Disecarea lent diminu puterea patogen pe cnd disecarea rapid
conserv.
Liofilizarea - reprezint modalitatea de conservare a virusurilor i
const n congelarea materialului viral n prezen a unei substan e
crioprotectoare, urmat de disecarea n vid. Virusurile liofilizate cu o
durat de conservare variabil cu natura virusului, condi iile de
pstrare, calitatea sticlei.
Ultrasunetele - produse prin trecerea unui curent alternativ de nalt
frecven printr-un cristal de cuar piezoelectric, pot produce
modificri structurale sau funcionale ce pot duce la exacerbarea
propietilor hemaglutinante (ex.v. gripal), pierderea infectivit ii
(ex.virusurile encefalitice).
Radiaiile - ionizante (radiaiile Roentgen), cele ale izotopilor
radioacivi sau neionizante (luminoas, UV) determin efecte prin

energia cuantic i natura materialului absorbant, cu efecte mai ales

la nivel corpuscular.Lumina naturala are o aciune distrugtoare
asupra virusului, proporional cu intesitatea i durata expunerii i
invers proporional cu lungimea de und. Virusurile nu sunt
influenate de lumina artificial.Radiaiile ultraviolete blocheaz
replicarea
normal
a
ADN-ului,
capacitatea
imunogen,
hemaglutinant, etc.Aciunea lor este diferit: unele virusuri sunt
inactivate n totalitate (arbovirusul West Nile) altele i pstreaz
structura antigenic intact(virusul gripal) iar virusul heptitei B i cel al
pestei porcine sunt rezistente.Radiatiile X induc alterarea fizicochimic sau biologic a strusturilor virale, a cror integritate este
necesar particlulei virale.Radiaiile n doze mari duc la pierderea
infectivitii i antigenitii- se utilizeaz n sterilizare
Aciunea agenilor chimici
Enzimele - acioneaz diferit asupra capsidei virale. Proteazele atac
eficent capsida, ducnd la eliberarea acidului nucleic
Ageni care denatureaz proteinele - detergen i sintetici, eter,
cloroform, ureea,guanina, ph puternic acid sau alcalin
Ageni oxidani - peroxizii, acidul nitros, ageni alkilani, formaldehida
Genetica viral
Genetica virala are ca obiect de studiu:
Particularitle sistemelor genetice virale(caracterele genomului viral,
expresia produselor sale, ereditatea viral)
Interrelaia virus - celul gazd la nivel molecular i consecin ele
acestora(variabilitatea viral, modificri ale aparatului genetic cellular)
Intervenii la nivelul genomului viral prin inginerie genetic
Genomul viral este alctuit din acid nucleic (AND sau ARN)
format din gene structural (codific enzime, forma iunile capsidei i
de nveli) i gene reglatoare (regleaz activitatea genelor
structurale) ce pot fi activatoare sau represoare.
Mutaia viral
Variabilitatea este o propietate important a replicrii virale care
rezult n primukl rnd din mutaii. Mutaiile sunt gre eal n
replicarea genomului viral, ceea ce duce la formarea de noi progeni
modificai fa de particula viral parental, ace ti noi progeni purtnd
numele de mutaii virale. Aceste mutante pot fi :
Spontane - fr intervenia unui factor cunoscut
Induse - sub aciunea unor factori mutageni fizici (radia ii ionizane
sau UV, chimici (acidul nitros, colorani acridimici, guanidine, HBB hidroxi- benzil benzimidazol)

Frecvena mutaiilor este mai mare la virusurile ARN dect la

cele ADN, fapt explicabil prin absena mecanismelor de corec ie a
erorilor de transcriere n cazul polimerazelor ARN.
Interaciuni genetice ntre virusuri:
Aceste interaciuni genetice au loc atunci cnd asistm la
infecia concomitent a unei celule gazd cu dou sau mai multe
virusuri cu condiia ca genomurile virale s con in acela i tip de acid
nucleic
Manifestrile interaciunilor genetice se traduc prin:
recombinarea a dou sau mai multe genomuri virale, care duce la
apariia unui nou tip de virus denumit hibrid viral sau recombinant.
Acest fenomen l ntlnim la virusurile cu genom fragmentat
(ex.virusuri gripale), explicnd apariia epidemiilor si pandemiilor de
grip
reactivarea ncruciat definit a infecie mixt a celulei gazde cu un
virus activ i cu un virus inactiv,cu UV ceea ce duce la apari ia de
progeni care manifest fenotipic activitatea genelor virusului activ ct
i a unor gene din virusul inactivat. Exist o serie de virusuri numite
virusuri defective, care au un genom incomplet ceea ce le face
incapabile de sinteze propii n celula gazd i numai interven ia n
celul a unui virus de activare face posibil unirea genelor celor dou
viusuri rezultnd o particula viral recombinat - virusul hepatic D
declanseaz hepatita D numai n prezena n hepatocit i a virusul de
tip B.
pleiotropismul - mutantele virale selectate se manifest fenotipic i
prin alte caractere asociate, aspectul practic al acestui fenomen fiind
covariaia.Dac n genomul viral apre o mutaie la nivelul unei
zone,de regul de modific genele nvecinate genei mutante. Din
punct de vedere medical importana fenomenelor genetce virale
const n explicarea modificrilor de patogenitate a virusurilor, a
variaiilor antigenice ale acestora, n obinerea de vaccinurilor
atenuate i a vaccinurilor virale recombinate.