Partea I

Capitolul X. BIODISPOZITIVE I BIOSENZORI

10.1. Introducere
10.1.1. Introducere n domeniul bio-engineering
ntr-o prim etap dorim s subliniem importana domeniului bioingineresc, n contextul actual. Vom porni de la cteva motive de ordin
social i economic. Se tie c populaia globului este n cretere numeric.
n diverse rapoarte sociologice se specific o cretere a mediei de vrst. n
Europa, se prognozeaz c pn n anul 2020 peste 30% din populaie va
avea o vrst mai mare de 60 de ani, n timp ce procentul persoanelor cu
handicap va tinde spre 20%, [66]. Este de la sine neles c rata bolilor
cronice va fi n continu cretere. n schimb, numrul limitat de medici nu
va mai putea satisface o cerere att de numeroas. Serviciile de sntate
public au reacionat la acest fapt. n cadrul unui program de sntate
public internaional [66, 67], s-au lansat trei direcii principale de lucru n
urmtorii zece ani:
(1) sporirea accesului individual la actul medical decizional, prin
intermediul telemedicinei i internetului. Pacientul se poate informa
despre boala sa, se autourmrete n timpul tratamentului (cu ajutorul unor
biodispozitive, biosenzori) i poate fi monitorizat de la distan de ctre
medic.
(2) creterea rolului geneticii n depistarea precoce, prevenirea i
corectarea unor boli.
(3) Electronic healthcare sau orientarea noilor tehnologii electronice
micro i nano spre ngrijirea sntii.
n scopul ndeplinirii acestor trei deziderate se va lucra intens n
urmtoarele arii, [68]:
a) Telemedicina se refer la crearea unei reele de comunicaii de tip
Internet, ntre: unitatea medical, unitatea farmaceutic i pacient. Acest
sistem poate servi la ngrijiri medicale la domiciliul pacientului, permite
consultaii profesionale de la distan, ori rezolv cazuri de urgen pentru

pacienii aflai n locuri izolate.

b) Analize biologice. n acest sens, se dorete realizarea unor biosenzori ce
pot fi utilizai direct de ctre pacient. Momentan exist sisteme de
monitorizare individual a glicemiei i ureei. Din punct de vedere al
plasrii biodispozitivelor, exist dou metode de abordare: (1) metode
invazive (in vivo), cnd biodispozitivul este implantat n corpul
pacientului (aici elementul cheie este gsirea de materiale biocompatibile);
(2) metode ne-invazive (in vitro), cnd se preleveaz snge sau alt
biolichid (printr-o puncie spre exemplu), iar apoi analiza se efectueaz n
afara corpului.
c) Monitorizarea pacienilor are n vedere totalitatea metodelor de
transmitere n timp util, a tuturor parametrilor msurai cu ajutorul
biosenzorilor, spre un centru medical decizional (fizic sau virtual).
Interpretarea analizelor se va face fie de ctre o persoan fizic, fie de ctre
un software specializat.
d) Crearea de dispozitive implantabile pentru: regenerarea funciei unor
organe, tratamentul bolilor cronice, nregistrarea de semnale biologice,
proteze pentru diferite organe.
e) Chirurgie cu invazie minim. Tehnica laparoscopic a minimizat mult
invazia n actul chirurgical. Finalul acestei curse ar fi intervenia
chirurgical la nivel celular. Acest domeniu reprezint o cerere continu
pentru industria de micro- i nano-componente electronice.
f) Succesul geneticii, care este condiionat de existena unor nanoinstrumente i nano-dispozitive, necesare manipulrii materialului genetic.
Acum cteva detalii de ordin economic. n 1996, se estima valoarea
desfacerilor de produse medicale pe plan internaional la 130B$ [68].
Dintre acestea, microsistemele din aparatura medical valorau 120M$ [68].
Asta nseamn c microsistemele sunt prezente n majoritatea aparatelor
medicale. Pentru produse n valoare de 73B$ a rezultat urmtoarea
repartiie, [68]: 37B$ pentru instrumentar medical i chirurgical, 19B$
pentru analize de snge efectuate cu biosenzori, 12B$ pentru sisteme
furnizoare de medicamente, 2.5B$ pentru aparate necesare bolilor cardiace,
2.5B$ pentru proteze auditive.
Se observ c piaa biosenzorilor este o provocare pentru micro- i nanoelectronic. Aici nu mai exist delimitri clare ntre domeniile: electronic,
biologic, chimic, fizic. n final, toate elementele componente ale
biosenzorului sunt integrate pe un singur cip sau pe un multicip hibrid [68].
n continuare se va descrie principiul senzorial din lumea vie. nelegnd
bine aceste mecanisme, proiectanii de biosenzori au cutat s aduc ct
mai aproape de natur principiul de funcionare al senzorilor.

10.1.2. Principiul senzorial n lumea vie

Biosenzorii au fost realizai dup o atent observaie a receptrii
substanelor n lumea vie. La scar microscopic, vorbim despre
recepionarea substanelor la nivel celular. Cuplarea unor substane de
celule provoac schimburi de sarcini ionice, eliberare de substane
semnalizatoare etc. Aceste "impresii" sunt transmise mai departe pe cale
biochimic. S vedem n continuare cum capteaz o celul vie doar o
anumit substan din mediul nconjurtor.
Celulele vii au posibilitatea s se adapteze la modificrile mediului exterior
cu ajutorul receptorilor. Receptorul const dintr-o protein ce este legat la
membrana celulei. El posed o nalt afinitate de a se cupla doar cu
anumite substane ce pot fi: hormoni, enzime, anticorpi, produi de
metabolism, ioni - denumite ligani. Un receptor este specializat strict pe o
substan. Spre exemplu, n sistemul nervos uman s-au evideniat dou
tipuri de receptori pentru neurohormonul acetilcolin: nicotinici - constau
n proteine cu proprieti ionofore i muscarinici - receptori cuplai de
proteina G i bazai pe sistemul mesagerilor secundari, [69, 70].
Mediu extern
celular

Ligant

Na

Biolichid
(purttor de
ligani)

Protein - Receptor

K+
Mediu intern
celular
Membran
celular
Fig. 10.1. Captarea unui ligant n receptorul celulei.

Legarea ligantului de proteina receptor cauzeaz schimbri structurale ale

receptorului. Aceste modificri permit deschiderea temporar a unui canal
prin membrana celulei, pentru ionii cu mobilitate mare: Na +, K+ (vezi
fig.10.1). Influxul de ioni pozitivi Na+, K+, modific puternic potenialul
membranei (chiar o singur legtur produce o cretere detectabil de

potenial). Se obine astfel amplificarea substanial a semnalului incident.

Dup transmiterea semnalului, cel mai adesea, complexul receptor-ligant se
degradeaz n interiorul celulei. De aceea, regenerarea unui nou receptor n
membran necesit ceva timp. Cele mai simple proteine receptor utilizate
n domeniul biosenzorilor, au fost enzimele.

10.1.3. De la celula vie la biodispozitiv

De multe ori tehnica" a mprumutat principii de funcionare din principii
similare biologice. Exist dispozitive electronice ce pot fi considerate
dualele unor simuri: fototranzistorul "simte" semnalul luminos i-l
transmite amplificat, iar dispozitivele acustice cu cristal piezoelectric
echivaleaz cu celulele receptoare de sunet, etc.
Biosenzorii sunt biodispozitive sau pri ale acestora, care recepioneaz
substane. Deci clasa biodispozitivelor este o clas mai larg, care o include
pe cea a biosenzorilor.
Definiie: Vom nelege prin biodispozitiv un ansamblu de pri electrice,
biologice, mecanice, optice ca elemente active (traductoare,
amplificatoare, de caracterizare, etc) i a unor elemente de interconectare,
capsule, terminale, microcanale de alimentare cu biolichid ca elemente de
conectare cu mediul extern.
Biodispozitivul poate avea funcii complexe. Atunci cnd el este construit
doar pentru a detecta o anumit substan, poart numele de biosenzor. Dar
exist biodispozitive create i n alte scopuri: caracterizarea unor materiale
biologice, furnizarea unui medicament, sau detectarea multor substane
(biodispozitiv de tip multisenzor) combinat cu furnizarea de substane,
vehicularea i manipularea de substane, esuturi, etc.
Un exemplu de biodispozitiv este cel utilizat pentru furnizarea insulinei la
diabetici. Acest dispozitiv conine ca elemente active: structuri traductoare
care detecteaz nivelul glicemiei i o micropomp pentru insulin, [68]. n
continuare ne vom focaliza atenia mai mult asupra biodispozitivelor ce au
ca unic funcie recepionarea de substane biosenzorii.

10.2. Biosenzor - definiii, clasificri

Definiie: Biosenzorul const n cuplarea spaial ntre un substrat biologic
activ (receptorul) imobilizat pe un traductor de semnal (dispozitiv

electronic) i un circuit electronic de amplificare. Toate aceste elemente

integrate ntr-o singur capsul poart numele de biocip. n figura 10.2 este
prezentat schematic structura bloc a unui biosenzor.
O problem specific a biosenzorilor este imobilizarea receptorilor pe
suprafeele dispozitivelor electronice. Doar cu titlu informativ, dm ca
exemple cteva metode: a) adsorbia biomoleculelor pe suprafee (ce
utilizeaz forele de adeziune, iar alteori forele de atracie electrostatic);
b) captarea biomoleculelor n geluri din polimeri (fixarea moleculelor este
mai sigur); c) crearea unor reacii chimice prin care biomoleculele se leag
covalent de elementele traductorului.
O alt problem specific este refacerea substratului biologic (dup
consumarea complexului receptor-ligant) pentru o nou msurtoare.
Timpul de regenerare al receptorului este un parametru important n
alegerea unui biosenzor de ctre un utilizator.

R
E
C TRADUCTOR
E
P
T (DISPOZITIV
O ELECTRONIC)
R

Fig. 10.2.
Prezentarea
schematic
a unui
biosenzor.

Semnal
electric
(I, V)

Circuit
electronic
de
amplificare

Substane
purttoare de
diveri ligani

Substana purttoare a diverilor ligani, poate fi: ser, limf, snge; generic
o vom denumi biolichid. Spre exemplu n snge exist o multitudine de
ligani. Receptorii au rolul de a extrage din acel amestec o singur
substan, pentru care au afinitate. Aceast substan, pentru analiza creia
a fost conceput biosenzorul, o vom numi analit. Spre exemplu dac se
dorete msurarea concentraiei de glucoz din snge, se folosete ca
receptor enzima GOD (glucozoxidaz), iar analitul este glucoza.
Modificrile ce au loc n biosenzor la reinerea analitului, pot fi:
modificarea grosimii unui strat, schimbarea indicelui de refracie, a
temperaturii, modificri n absorbia luminii, creterea sarcinii electrice,

modificri de potenial electric sau de curent electric.

Clasificarea biosenzorilor.
1) Biosenzori de afinitate. Analitul nu se modific chimic n timpul
msurtorii. El doar se leag de receptor. La sfrit el poate fi ndeprtat
chimic sau prin splare.
2) Biosenzori de metabolism. Aici substratul biologic se consum printr-o
reacie chimic cu analitul. Se formeaz un nou produs. Starea iniial se
poate reface dup completa consumare a analitului. Exemplu: se dorete
detectarea microorganismului Helycobacter Pylor n substana purttoare suc gastric. n metabolismul su, acest microb produce NH 3 (amoniac).
Aadar, senzorul nu va detecta microbul n sine, ci concentraia de
amoniac.
3) Imunosenzori. Detectarea substanelor de tip antigen (Ag) se face cu
ajutorul anticorpilor (Ac), pe principiul "lact-cheie". Anticorpii sunt
proteine cu molecule n form de Y (numite imunoglobuline). n vrfurile
Y-ului sunt doar dou locuri, unde se poate leaga un singur tip de antigen.
Aceti anticorpi sunt produi de organism ca rspuns la o anumit substan
strin (antigen), pe care nu o poate elimina prin fagocitoz i creia, n
ultim instan, i "ncurc planurile", legndu-se de ea: Ac+Ag AcAg.
Exemplu: n referina [2] se descrie un biosenzor cu material piezoelectric
acoperit cu anticorpi pentru Candida Albicans (microorganism din familia
fungilor). n timp de aproximativ o or celulele receptoare au captat ntre
106 i 108 celule de Candida A., avnd ca rezultat scderea frecvenei de
rezonan a cristalului piezoelectric cu 0,5...1,4kHz.
4) Senzori biomimetici. Cu ajutorul acestor senzori se detecteaz semnale
fizice (sunet, stres mecanic, lumin) pe baza interaciunii lor cu substratul
biologic activ (receptorul).

10.3. Structura i funciile traductorilor

Traductorii trebuie s converteasc n mrimi electrice parametri generali
ca: entalpia de reacie (termistorul), modificri ale masei depuse (cristal
piezoelectric), grosimi ale unor straturi transparente (dispozitive
optoelectronice), concentraii de substane sau ioni (traductoare ISE).

10.3.1. Traductori termici

La senzorii de metabolism exist reacii chimice ntre analii i anumii
receptori enzimatici cu degajare / absorbie de cldur. n acest caz nu se

msoar cantitatea analitului, ci variaia de temperatur, T. Tabelul 10.1

prezint entalpiile molare, H, a ctorva reacii catalizate de enzime.
Tabelul 10.1. Entalpiile molare a ctorva reacii catalizate de enzime.

Enzima receptor
Catalaz
Cholesterol-oxidaz (COD)
Glucoz-oxidaz (GOD)
Ureaz

Analit
H2O2
Cholesterol
Glucoz
Uree

-H (kJ/mol)
100.4
52.9
80
6.6

Enzima-receptor se imobilizeaz pe sticl poroas pe suprafaa unui

termistor. Se imerseaz totul n soluia de msurat. Termistorul joac rolul
traductorului i furnizeaz T. De aici rezult numrul de moli de analit,
conform relaiei:
H C T

(10.1)

unde este numrul de moli de analit, C este cldura molar a

dispozitivului (ce se determin anterior prin msurtori calorimetrice).
Dezavantajul principal este schimbul de cldur ce apare ntre diversele
componente ale experimentului, ceea ce va induce erori mari n evaluarea
lui T. Optimizrile vizeaz izolarea calorimetric a biosenzorului ntr-un
reactor.

10.3.2. Traductori optoelectronici

Cu ajutorul traductorilor optici se poate indica variaia unor parametri
precum: coeficient de absorbie a luminii, lungime de und, indice de
refracie, grosimi ale unor straturi transparente. Ca exemplu, n figura 10.3,
este prezentat principiul de detectare a albuminei serice cu un senzor
optoelectronic, [2]. Biolichid
purttor
de
analit A

LED

Rec.
A

Membrana
de
Rec. bromocresol

Rec.

Rec.
Rec.
Rec.

Fotodioda

Fig. 10.3. Principiul de detectare a albuminei serice cu un senzor optoelectronic.

Receptorul a fost imobilizat pe o membran de bromocresol transparent.

Curgerea biolichidului purttor de albumin a determinat captarea ei pe
receptori. Creterea grosimii stratului de analit se face ntre o surs de
lumin (led) i un detector de lumin (fotodiod). Curentul prin fotodiod
scade pe msur ce crete grosimea stratului de albumin depus pe
receptor.

10.3.3. Traductori piezoelectrici

Principiul pe care se lucreaz aici urmrete scderea frecvenei de
rezonan a unui cristal piezoelectric cnd se absoarbe un material strin la
suprafaa sa i-l comprim, [71]. Cristalul este acoperit cu un material
receptor. Efectele zgomotului electric au putut fi nlturate prin utilizarea
de cristale pereche. Aceti traductori au fost utilizai pentru detectarea:
NOx, COx, H+, microorganisme, [2].

10.3.4. Traductori electrochimici

Reaciile electrochimice se produc la interfaa electrod soluie, iar
reaciile biologice cu transfer de electroni se produc la interfaa enzim
soluie. Se utilizeaz poteniometria, cnd se determin variaia
potenialului electric al unui electrod receptor n funcie de concentraia
ionilor de analit dintr-o soluie. Metoda tradiional de detecie a unor ioni
ntr-o substan purttoare folosete ISE (Ion Selective Electrodes). Din
punct de vedere electronic ISE poate fi privit ca o surs de tensiune
electromotoare (de sute de milivoli pentru biosenzori) i cu o impedan de
ieire mare (pn la sute de M), [72]. Masa electric este soluia, iar
ieirea sursei este electrodul de referin. Dac concentraia ionilor de analit
din soluie se modific, atunci potenialul electrodului sensibil la aceti ioni
(receptorul) se modific dup relaia lui Nerst, (9.8). Spre exemplu, n
cazul pH-ului (concentraia ionilor de H+), o scdere a acestuia cu o
unitate, determin creterea tensiunii furnizate cu circa 55mV, [72].
Muli biosenzori electrochimici folosesc amperometria. n acest caz au loc
reacii chimice de oxido-reducere cu transfer de electroni n medii
electrolitice. n domeniul biosenzorilor, aceast tehnic a nsemnat
detectarea unui analit prin msurarea concentraiei unui produs de
metabolism, mult mai uor de determinat. Pentru aceasta se folosesc
electrozi cu enzime receptor aezate n unul sau mai multe straturi. Pentru
msurarea concentraiei de glucoz se folosete enzima GOD care
accelereaz foarte mult procesul de oxidare al glucozei, n urma cruia

rezult i H2O2. Este mult mai uor s se msoar concentraia de H 2O2,

dup care se calculeaz din reacie concentraia de glucoz. Curenii care se
stabilesc n aceste straturi sunt de natura unor cureni de difuzie, [2].
Curentul, Ilim este proporional cu concentraia substanei care se determin
mai uor, ci, (i=H2O2, n exemplul anterior cu glucoza), conform modelului
(9.14), (9.15).

10.3.5. Traductori biologic intaci

Pentru determinarea unui analit, aceste traductoare folosesc
chemoreceptori direct din lumea vie. Spre exemplu, s-a realizat un receptor
de acetilcolin, utiliznd organul electric al petelui Torpedo i un senzor
capacitiv, [2]. Cnd biolichidul purttor coninea acetilcolin n
concentraie mrit, cretea tensiunea electric furnizat de traductorul
organic al petelui, ceea ce ncrca senzorul capacitiv. S-au putut face
msurtori n domeniul 1....100mol/l concentraie de acetilcolin n
biolichidul purttor prin tehnici de C-V-metrie.
Alt direcie de lucru este cuplarea unor celule receptoare vii cu una sau
mai multe fibre nervoase. Stimularea unor celule olfactive sau gustative cu
un anumit analit conduce la generarea unui impuls nervos detectabil ctre
neuronii din fibr.
Ca exemplu, s-a realizat un senzor pentru determinarea concentraiei de
aminoacizi, utiliznd drept traductor organul olfactiv din antenulele
crabului Calinectes Sadipus. Antenulele, legate de o unic fibr nervoas,
au fost conectate cu o sond de platin. Stimularea receptorilor olfactivi cu
aminoacidul L-glutamat, n concentraia 0,01...1mmol/l, a creat impulsuri
nervoase msurabile, cu valori cuprinse ntre 10-1000V. n plus, s-a
obinut o linearitate bun n aceast gam de msur, [2].
Observaie: Au fost amintite i exemplificate o serie de substane ca:
acetilcolina, dopamina, ioni de Na+, Ca+, K+. Ele particip ca
neurotransmitori la propagarea impulsului nervos. De reinut, c
transmiterea unui impuls nervos se face pur electric: prin deplasare de
sarcin electric. Datorit acestei comportri "electronice" a sistemului
nervos uman, s-a dezvoltat o ramur nou n tiinele biologice:
neuroelectrofiziologia, [2].

10.4. Dispozitive Bio-FET

Prin Bio-FET vom nelege totalitatea dispozitivelor biologice ce conin ca

element traductor activ un tranzistor cu efect de cmp. Ele pot fi biosenzori
(precum tranzistoarele ISFET, ENFET, etc) sau dispozitive de testare i
investigare a materialelor biologice, sau dispozitive create n alte scopuri.

10.4.1. Tranzistoarele ISFET

Tranzistoarele ISFET (Ion Sensitive Field Effect Transistor) au derivat
direct din ISE (electrozii sensibili la ioni). Din punct de vedere constructiv,
dispozitivul ISFET este un MOSFET, pentru care receptorul - un electrod
ce sezizeaz doar anumii ioni (de exemplu de Ca +, K+) - este un metal
special (Pt, Pd, Ir). Regiunea porii este imersat ntr-o soluie biologic cu
analit. Modelarea se face analog cu cea a MOS-FET-ului, doar c tensiunea
de poart VG depinde de concentraia ionilor de analit conform relaiei lui
Nerst. O categorie aparte o reprezint tranzistoarele MEM-FET
(MEMbrane-FET), la care electrodul receptor este o membran organic
depus n dreptul porii tranzistorului, i care capteaz selectiv sarcina
ionic. n figura 10.4. este prezentat structura i simbolul ales pentru
tranzistorul ISFET.
G
Biolichid cu ioni
de analit

ISE

SiO / Si N

n+

. . . . . .2 . . .3 . 4. .

D
n+

G
D
SB

Canal de electroni
S
p-substrat
SB (Substrat)

(a)

Fig. 10.4. a) Structura tranzistorului ISFET;

(b)
b) Simbol.

Tensiunile aplicate: VS=VSB=0, VG>0 i VD>0 se menin constante. Cnd

concentraia ionilor de analit crete, se modific diferena de potenial
metal-semiconductor, conform cu relaia (9.8). Deci variaz VFB i n
consecin potenialul porii. Rezult o mbogire a canalului n electroni,

iar n final o cretere a curentului de dren. Fluctuaiile concentraiei de

ioni de analit se traduc prin fluctuaii ale curentului ID.
Adoptnd pentru curentul de dren al tranzistorului ISFET modelul
simplificat n regim cvasiliniar (5.52), plus efectul tensiunii de poart
asupra mobilitii purttorilor din canal, (5.61), n care neglijm termenul
VDS2, la tensiuni VDS mici, avem:
ID

VGt VT VDS
1 G VGt VT

(10.2)

Tensiunea de poart total, VGt este suma tensiunii, VG, aplicat de la o

surs extern i a potenialului de electrod ME, dat de relaia lui Nerst:
VGt VG 0

RT
ln c A
zF

(10.3)

Prin nlocuirea relaiei (10.3) n relaia (10.2), rezult dependena

curentului de dren, ID, de concentraia de analit, cA:
RT

VG VT 0
ln c A VDS
zF

ID
RT

1 G VG VT 0
ln c A
zF

(10.4)

Observaie: Ne dorim o sensibilitate curent-concentraie de analit ct mai

mare. Relaia (10.4) arat c este mai favorabil un regim de lucru la
tensiuni VGt mici, astfel nct s se poat neglija efectul atenurii mobilitii
sub influena cmpului electric transversal. Rezult astfel, o dependen
logaritmic curent-concentraie. n plus, dac s-ar lucra sub prag, unde I D
depinde exponenial de VG (vezi relaia 5.94), prin compunere cu relaia lui
Nerst ar rezulta o dependen polinomial curent-concentraie, net
superioar funciei logaritmice.
Observaie: ISFET-urile care determin concentraia ionilor de H + se mai
noteaz prin pH-FET-uri, innd cont c pH=-lg [c H+]. O soluie apoas este
neutr cnd pH=7, moment n care concentraia ionilor de H+ o egaleaz pe
cea a ionilor negativi de OH-. Soluia apoas este acid pentru pH<7 i
bazic pentru pH>7. Pentru electrolitul complex al organismului uman
neutralitatea are loc de asemenea cnd cH+=cOH-, dar aceasta se ntmpl la
temperatura de 370C pentru un pH=6,75. Sngele are pH=7,36, deci se
comport slab bazic.
Cu acest gen de tranzistor s-au fcut experimente pentru determinarea
concentraiei ionilor de H+ i K+. National Company Japan a realizat un

biosenzor integrat pe cip de tipul Silicon On Sapphire, coninnd un K +FET cu membran de GOD i dou H +-FET cu membran de ureaz. Cu
acest biosenzor se pot face simultan analize de glucoz i uree n snge [2].
Alt exemplu. S-a realizat un dispozitiv ISFET, ca senzor de metabolism, ce
msoar concentraia de amoniac, ca n figura 10.5, [2]. Receptorul care
sesizeaz NH4- este Paladiu (Pd). El este depus peste oxidul de poart. Se
constat o cretere major a sensibilitii biosenzorului dac peste Paladiu
se depune un strat de Iridiu (Ir). Se obine o cretere a tensiunii V G de la
20mV n cazul electrodului de Pd, la 400mV n cazul acoperirii Pd cu Ir,
cnd concentraia de NH4- este 400ppm. De reinut aceste dou materiale:
paladiu, iridiu, n construcia biosenzorilor.
VG
biolichid
Ir Ir Ir Ir Ir

Pd
SiO2

S
Fig. 10.5. Dispozitiv
MOS pentru detectarea
ionului de amoniu.

n+

NH3

............

n+

p-substrat
SB

Un alt dispozitiv specific msurtorilor de poteniometrie este prezentat n

figura 10.6. Scopul acestui Bio-FET este caracterizarea electric a unor
biolichide, [2].
Semiconductor organic

VG

ID(A)
80
60

VS

~ ~ ~ ~
~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~
~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~
~ ~ ~ ~
~ ~ ~ ~
Suport izolator

(a)

VD

40
20
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 VG(V)

(b)

Fig. 10.6. a) Dispozitiv Bio-FET microelectrochimic; b) Caracteristica ID-VG msurat.

Primul dispozitiv microelectrochimic studiat deinea semiconductori

organici (polimeri) depui ntre surs i dren. Se obineau caracteristici ca
de diod. Dac n plus intervenea al treilea electrod - poarta, se obineau
caracteristicile din figura 10.6.b., pentru semiconductorul organic din
polianilin. Ca i la tranzistoarele MOS, s-a constatat c n vecintatea
"pragului", rezistena ntre surs i dren variaz cu peste 6 ordine de
mrime la variaii foarte mici ale tensiunii VG (cu 0,1...0,3V). Spre
deosebire de tranzistoarele pe Siliciu, la tranzistoarele Bio-FET de acest
gen, dup atingerea unei valori maxime curentul scade. Acest dispozitiv
este potrivit pentru studierea proprietilor diverselor materiale biologice.
Dac se nlocuiete semiconductorul organic cu o soluie neutr, n care se
crete concentraia unui neurotransmitor (adrenalin, noradrenalin,
acetilcolin, dopamin, serotonin etc) se pot obine caracteristici I D-VG,
furnizoare de parametri de model. Modelele tranzistoarelor MOS pot fi
extinse i aici, pe anumite subdomenii de msur. Acest lucru permite
extragerea unor parametri echivaleni (tensiune de prag - concentraie de
prag, tensiune de nivel mare - concentraie de neurotransmitor de nivel
ridicat). Aceti parametri ar putea fi deosebit de utili n stabilirea unor
concentraii limit ntre care se face transmiterea impulsului nervos.

10.4.2. Tranzistoare EN-FET, IM-FET, Microbial-FET

Denumirea de ISFET este generic. Prin tranzistoare ISFET trebuie s se
neleag doar acele FET-uri care determin concentraia ionilor ntr-o
soluie pe baza unui electrod selectiv prin metoda poteniometric. Din
aceast clas de tranzistoare au derivat i IMuno-FET, ENzime-FET,
Microbial-FET, a cror denumire sugereaz tipul relaiei analit-receptor. De
aceea, termenul generic de "Bio-FET" acoper orice tranzistor cu efect de
cmp folosit ca element traductor n domeniul biosenzorilor.
M. Gotoh i colaboratorii si, [73] a realizat un senzor pentru acetilcolin
cu un tranzistor ISFET. Receptorii au fost fixai pe poarta tranzistorului cu
ajutorul unei membrane de polivinilbutirat. Legarea acetilcolinei de
receptori n concentraie de 0,1....10mol/l a produs creteri detectabile ale
potenialului porii (zeci de mV).
Tamya i colaboratorii, [74] au realizat un senzor de metabolism cu
tranzistor Bio-FET pentru determinarea alcoolului. Microorganismul
Gluconobacter, care prin metabolismul su produce alcool, a fost prins ntro pelicul de arginat de calciu pe poarta tranzistorului. Astfel de dispozitive
fac parte din categoria aa numitelor Microbial-FET-uri.

IMmuno-Fet-uri sunt tranzistoare cu efect de cmp, a cror poart este

acoperit cu o membran ce conine anticorpi. n 1987, D. Begreld, [75] a
realizat o astfel de prob pentru detectarea imunoglobulinei umane IgG cu
ajutorul albuminei. S-au detectat concentraii de analit de ordinul 10 -11..10-7
mol/l, [2, 75]. Avantajul major al unor astfel de dispozitive este
recepionarea sigur doar a analitului dorit (deoarece se lucreaz pe
principiul lact-cheie). Dezavantajele sunt legate de dificultatea realizrii
unei membrane receptoare perfect izolatoare, dar i imuno-responsiv i
suficient de subire pentru a transmite creterile de potenial cauzate de
cuplarea Ag-Ac, la suprafaa semiconductorului.
Cea mai consacrat aplicaie n medicin a metodei poteniometrice a fost
msurarea ureei sangvine. Ureea, n prezena catalizatorului ureaz, d
anumii ioni ca produi de reacie: NH4+, OH-, HCO3-. Concentraia acestor
substane ncrcate electric a fost uor de msurat cu ISE. Aceast clas
tranzistoarelor Bio-FET, ce utilizeaz o membran enzimatic receptiv
pentru ionii de analit (amoniu, n cazul de fa) poart numele de EN-FET
(ENzime-FET). Enzima receptoare - ureaz - se depune fie pe capacitoare
MOS cu straturi de Ir/Pd, fie n poarta tranzistorului peste un strat de Si 3N4.
Rspunsul neliniar al unui astfel de senzor va fi studiat n paragraful 10.9.
ntrebare: Care este diferena ntre ISFET i ENFET ?
Rspuns: La tranzistorul ISFET, metalul porii (Pt, Pd, Ir) este elementul
receptor. El reacioneaz electrochimic cu ionii (de H+, K+, Ca+) i formeaz
la echilibru termic un material cu un alt E F, conform relaiei lui Nerst.
Variaiile de concentraie de analit (ioni n cazul nostru) se traduc n variaii
ale MS. La tranzistoarele ENFET, pe metalul porii se depune o enzim
receptoare (de exemplu acetilcolinesteraz - AcChE). Ea va favoriza
hidroliza acetilcolinei n colin, acetat i H+. n urma reaciei rezult 1 mol
de H+ per 1 mol de reactant de acetilcolin. EN-FET-urile sunt n majoritate
senzori de metabolism, iar n cazul de fa se msoar concentraia ionilor
de H+. Acesta este rolul enzimei specifice c accelereaz foarte mult o
reacie catalitic (hidroliza n exemplul nostru), i se obin ioni de H + cu
preponderen din hidroliza doar a analitului (acetilcolin n exemplul
nostru). Concentraia de analit se traduce n concentraie de sarcin
acumulat n poarta tranzistorului i deci n variaii de curent prin
tranzistor.

10.4.3. Optimizri ale tranzistoarelor Bio-FET

S considerm un tranzistor Bio-FET care msoar concentraia ionilor de
K+ captai de o membran permeabil. De fapt este vorba de un tranzistor

MIS-FET care are, n locul oxidului de poart, biolichid ce conine ioni.

Receptorii se pot depune fie lng metalul porii, fie lng suprafaa
semiconductorului, fie sunt dispersai n volumul respectiv. Cnd
biolichidul curge prin acest spaiu, receptorii capteaz ionii de K + (n
aceeai manier n care celulele vii rein analiii din snge, cnd acesta
curge prin capilare foarte nguste). Ionii se vor aglomera lng receptor.
Receptori

Receptor

sa

Receptor
sb

K+

K+

K+ K+

K+ K+ K+
0
xG

x
M

(a)

K+ K+ K+ K
K+ K+ K+ K

K+ K+

K+ K+ K+
0
xG
I

sc

K+ K+ K+ K
0
xG
I

(b)

(c)
+

Fig. 10.7. Distribuia sarcinii ionice de analit (K ) captat de receptori (liniile punctate)
ce au fost plasai: (a) superior, (b) inferior, (c) uniform n volum.

Metalul porii deine un MS cunoscut. Sarcina ionilor de potasiu, captai

din lichidul purttor de ctre receptor, polarizeaz poarta tranzistorului.
Acelai lucru l fceau ionii de sodiu i potasiu n cazul tranzistoarelor
MOS, atunci cnd calculam tensiunea de benzi netede.
Se studiaz n continuare poziia de amplasare optim a unei membrane cu
receptori n spaiul porii tranzistorului Bio-FET, astfel nct efectul ionilor
s fie ct mai puternic resimit la suprafaa semiconductorului, [76]. n
figura 10.7 sunt prezentate trei variante de distribuie a sarcinii electrice
ionice n dreptul porii tranzistorului, cnd receptorii sunt plasai: superior
(la x=0), inferior (la x=xG) i dispersai uniform n volumul porii (vezi i
fig. 10.8).
G
Metal
0

receptor
K+

curgere
S
Fig. 10.8. Structura
Bio-FET.

Biolichid cu ioni
K+
K+
receptor

n+

K+

D
n+

Izol.
(Biolichid)
xG
Semic.

p-substrat

Prin integrarea ecuaiei Poisson n spaiul x (0, x G ) , se calculeaz

tensiunea echivalent indus pe poart de ctre ionii K+. Se aproximeaz
distribuia de sarcin ca fiind liniar n cele 3 situaii. Dac se noteaz cu
CG = is/xG capacitatea specific a izolatorului de deasupra porii i cu sa,
sb, sc, densitile de sarcin de suprafa n cele 3 cazuri (vezi fig. 10.7.a,
b, c), se deduc urmtoarele expresii pentru tensiunea indus pe poart:

1
1
VGa sa ; VGb sb ; VGc sc
6 CG
3 CG
CG

(10.5)

Se poate presupune c sa=sb=sc pentru receptori identici, ce atrag aceeai

cantitate de analit la suprafa, indiferent de poziie. Un rspuns maxim se
obine n cazul c. Dac nu este posibil plasarea receptorilor uniform n
volum, atunci preferabil este situaia b, adic plasarea receptorilor ct mai
aproape de suprafaa semiconductorului.

10.5. Biodispozitive de tip MEMS

Sunt biodispozitive care combin structuri mecanice (micropompe,
actuatori) cu structuri microelectronice. n cazul Sistemelor Micro-ElectrMecanice (MEMS) problemele sunt legate de vehicularea biolichidului n
spaiul porii tranzistorului. n mod clasic, acest lucru se face cu o
micropomp cu membran i valve, acionat de un actuator, figura 10.9.a.
Actuator
Actuator

deformat

deformat
membrana
n repaus

membrana
n repaus

Valva
V1

Valva
V2
Camera
de
admisie

Camera
de
refulare

Difuzor

Camera
de
admisie

Confuzor

Camera
de
refulare

(a)

(b)

Fig. 10.9. Metode de vehiculare a biolichidului: a) micropomp cu membran i valve;

b) micropomp cu membran i difuzor-confuzor.

Prin actuator se nelege dispozitiv de acionare. Proiectarea actuatorilor se

studiaz la automatizri. Dezavantajele acestei micropompe sunt:
fiabilitatea sczut (deoarece valvele fiind elemente n micare se pot
bloca, defecta uor), posibilitatea deteriorrii unor componente biologice
prin nchiderea / deschiderea valvelor. De aceea este preferat micropompa
cu difuzor-confuzor din fig.10.9.b, fr pri n micare, [77]. Este adevrat
c atunci cnd actuatorul ridic membrana, se absoarbe lichid att prin
difuzor din camera de admisie (un flux mare), ct i prin confuzor din
camera de refulare - fapt nedorit - (dar un flux mic). Oricum, marele
avantaj vine din simplitatea tehnologic: microstructurile difuzor-confuzor
se realizeaz uor prin corodare anizotrop a siliciului; n plus nu au pri n
micare.
Actuator
Gfront

S
n+

oxid poart fa
Si-film, p = membrana micropompei
= corp tranzistor
canal de inversie

n+

Oxid ngropat
Membrana
cu
Receptori
Si

Si

K+

Si, p

Si, p

Camera de admisie
Biolichid

Gback

Si, p

Camera de refulare
Biolichid

Fig. 10.10. Structur Bio-FET cu tranzistor SOI-MOSFET.

n figura 10.10 este prezentat o variant constructiv de tranzistor BioFET pe structur SOI i alimentare prin micropomp cu difuzor-confuzor.
Filmul de siliciu reprezint sediul tranzistorului, dar i membrana pe care o
acioneaz actuatorul. Elementul traductor din fig. 10.10 este un tranzistor
SOI-MOSFET clasic. Pentru a avea canalul de inversie ct mai aproape de
membrana cu receptori, se recomand polarizarea porii din spate, G back.
Poarta din fa, Gfront, poate fi utilizat doar pentru conexiunea mecanic cu
actuatorul. Analiza fcut cu formulele (10.5) recomand plasarea
membranei cu receptori pe partea inferioar a filmului de siliciu (ct mai
aproape de zona activ a tranzistorului). Microcanalele difuzor-confuzor au
o form n trunchi de piramid i se obin uor prin corodare (spre exemplu
pentru Si <111>, unghiul de corodare este 54,74 0). Membrana cu receptori
poate fi depus sub stratul ngropat. Acest izolator ngropat reprezint un
excelent strat de stopare a corodrii siliciului.
S

D
Si-film, n = membrana micropompei =
= corp tranzistor
canal de acumulare

Membrana

Oxid ngropat
cu
Receptori

Si

Si

K+

Si, p

Si, p

Camera de admisie
Biolichid

Gback

Si, p

Camera de refulare
Biolichid

Fig. 10.11. Structur SOI-BioFET optimizat.

Tehnologiile SOI permit realizarea unor filme de siliciu de grosimi

variabile. Ele trebuie astfel proiectate nct s reziste din punct de vedere

mecanic. Aceasta deoarece din punct de vedere electric, se dorete un film

ct mai subire pentru o sensibilitate maxim a senzorului. Este nevoie ca
traductorul s fie sensibil la tensiuni foarte mici (proporionale cu
concentraii mici de analit). De aceea, se poate utiliza aici tranzistorul
pseudo-MOS ca element traductor, deoarece are avantajul fa de
tranzistorul SOI-MOSFET, c "simte" tensiuni de poart n orice regim de
lucru. Astfel, se elimin o grij suplimentar: aducerea tranzistorului n
regim de inversie. Avem urmtoarele simplificri tehnologice: nu mai sunt
necesare difuziile n+ n filmul de siliciu, nici depunerile de oxid i metal
pentru poarta din fa, Gfront.
Mai putem face nc un pas n optimizarea structurii: eliminarea
actuatorului. El avea rolul de a ridica i cobor membrana de siliciu.
Acelai efect l poate avea poarta din spate (care ea nsi nu este mobil),
dar acioneaz un film de siliciu suspendat, care se poate arcui. Se pot
adapta aici principiile de la tranzistorul MOS cu poart mobil, dar avnd
grij ca deformarea filmului de siliciu s nu duc la spargerea sa. De fapt,
nu este nevoie de o deformare prea ampl a filmului. Mici pulsuri negativepozitive (de cca 8V), aplicate pe Gback, pot produce ncovoieri suficiente
ale filmului pentru a recircula biolichidul prin dreptul membranei cu
receptori.
Figura 10.11. prezint structura optimizat a SOI-BioFET. Pentru
recircularea biolichidului este necesar s se fixeze VS=VD=0V, iar pe
terminalul Gback s se aplice ntr-un timp tr, pulsuri de tensiune de +8V i
respectiv 8V. Aceast manevr arcuiete n jos filmul de siliciu la tensiuni
pozitive, iar prin confuzor se elimin vechiul fluid; apoi, la tensiuni
negative, filmul se arcuiete n sus i prin difuzor se absoarbe noul fluid.
Dup timpul de recirculare, tr, (calculat din considerente de microfluidic)
se poate presupune c s-a mprosptat tot biolichidul n spaiul porii.
Urmeaz msurtorile electrice.
Pentru msurarea concentraiei de analit captat n spaiul porii de ctre
receptor, se monitorizeaz curentul de dren, I D. Se procedeaz astfel: se
aplic tensiuni constante, de referin pe cele 3 terminale: VS=0, VD>0,
VGback>0. n acest mod, tranzistorul pseudo-MOS este n regim de
acumulare, unde curenii sunt mai mari i deci mai uor de msurat. Se las
dispozitivul n repaus un timp de captare, tc, (calculat din considerente
biologice: captarea analitului pe receptor). Se citete curentul ID. Cu
ajutorul acestui curent, dintr-o relaie de tipul (10.4) se calculeaz
concentraia de analit, cA.

10. 6. Biodispozitive pentru caracterizare

Spre deosebire de biosenzori, care sunt biodispozitive destinate

determinrii concentraiei unui analit ntr-un amestec de substane,
biodispozitivele concepute pentru caracterizarea proprietilor fizicochimice ale unor compui biologici pot msura alte mrimi dect
concentraiile (cureni, capaciti electrice). Prin msurtori polarografice
se determin curentul n funcie de tensiunea aplicat pe biodispozitiv.
Diferena dintre polarografia clasic, utilizat n chimie, i cea aplicat aici
const n faptul c biodispozitivul lucreaz cu o cantitate mult mai mic de
substane. Spre exemplu, dac ntr-o instalaie chimic de polarografie se
utilizeaz 100-500 ml soluie ntre doi electrozi metalici, la biodispozitive
cantitatea de soluie ajunge la 0,1-0,5 ml. Uneori aceast cantitate infim de
biolichid este ncapsulat n cadrul unei structuri complexe pentru a evita
evaporarea sau reaciile chimice secundare nedorite. Alteori este nchis
ntr-o cavitate ce comunic cu exteriorul sau cu un microrezervor prin
intermediul unei membrane semipermeabile.
n fig.10.12.a este prezentat un biodispozitiv pentru caracterizarea soluiei
de epinefrin (adrenalin) de concentraie 1 mg/ml, de uz farmaceutic.
Aceast substan este un neurotransmitor (sau un neurohormon) din
familia catecolaminelor. Ambele denumiri provin fie din latinescul adrenes fie din grecescul epi-nephros i nseamn literal acelai lucru: pe
rinichi, sugernd prin aceasta, glanda suprarenal care secret acest
neurotransmitor. Din punct de vedere chimic adrenalina, C 9H13NO3,
conine un lan aromatic (catecol), la care se leag un grup ce conine
nitrogen (amina), fig.10.12.b.

(a)

(b)

Fig.10.12. Structura biodispozitivului, (b) formula chimic a epinefrinei ca ion.

Cei doi electrozi metalici, Met1 i Met2, au fost denumii surs i dren
(notai S i D), iar tensiunea pe biodispozitiv a fost notat cu V DS. Volumul
de biolichid utilizat a fost de aproximativ 0,2 ml (1 pictur), iar distana
dintre electrozi d=1mm. Izolatorul 1 a fost plexiglassul, iar izolatorul 2
aerul. Cei doi electrozi metalici au fost realizai din aliajul Sn 60 Pb38 Cu 2
ISO 9453 (25), [78].

n figura 10.13 sunt prezentate rezultatele experimentale. Biodispozitivul

nseriat cu o rezisten de valoare mare, R=110 k, a fost alimentat la o
surs de tensiune US. n figura 10.13.a sunt prezentate rezultatele
msurtorilor n curent continuu, sub forma caracteristicilor ID VDS.
Apariia regiunilor cu rezisten diferenial negativ demonstreaz
amorsarea unei surse interne de tensiune invers, bazat pe reacia
electrochimic de reducere a adrenalinquinonei n adrenalin, [79]:

Pe poriuni, caracteristica poate fi modelat cu relaia Butler Volmer, dac

predominant este procesul de electrod sau cu legile de difuzie ale lui Fick,
dac predominant este procesul de difuzie a ionilor de analit. Oricum
ambele relaii descriu dependene neliniare, exponeniale pe poriuni ale
caracteristicii statice a biodispozitivului, care prin logaritmare dau relaia
Tafel de legtur dintre curent i potenialul pe dispozitiv:
ln I D ln I 0 z

q VDS
kT

(10.6)

unde: ID este curentul prin biodispozitiv, VDS tensiunea ntre Surs i

Dren, (0,1) este coeficientul de transfer, q sarcina electric
elementar, z numrul de electroni schimbai n reacia de oxido
reducere (z = 2 n cazul de fa), k constanta lui Boltzmann, I 0 curentul
de saturaie pentru reacia de oxido-reducere, sau curentul limit pentru
procesul de difuzie (ce depinde de constanta de difuzie a moleculei de
epinefrin). Presupunnd procesul redox predominant, se poate determina
rata reaciei de oxidare a adrenalinei, KAdr+ , din relaia, [62]:

Fig. 10.13. (a) Caracteristicile ID -VDS ale biodispozitivului cu 2 terminale n curent

continuu; (b) Curbele de comutaie.
I 0 F z K Adr [c Adr ]

(10.7)

La nivelul sinapsei neuronale aceti neurotransmitori asigur transmiterea

impulsului nervos (care este o supratensiune de la -30mV la 70mV).
Aadar, fiziologic predomin un regim de comutaie. De aceea, n
fig.10.13.b au fost studiate curbele VDS timp n regim de comutaie pentru
dou biolichide: soluii apoase de adrenalin (caz n care VDS s-a notat cu
Uadren) i de NaCl cu aceeai concentraie de 1mg/ml (caz n care V DS s-a
notat cu UNaCl n figura 10.13.b). Adrenalina este mult mai sensibil la
variaii de tensiune electric dect clorura de sodiu. Astfel, se observ n
fig.10.13.b c atunci cnd tensiunea sursei externe US a comutat de la 0V la
2V, tensiunea pe biodispozitivul cu soluie de adrenalin a atins 320mV, n
timp ce tensiunea pe biodispozitivul cu soluie de NaCl a atins doar 90mV,
[79].
Semiconductoarele organice tind s nlocuiasc clasicele jonciuni pn pe
Siliciu, n msura n care prezint conducie electric neliniar. Biolichidele
i n special cele utilizate de sistemul nervos n propagarea influxului
nervos pot fi candidai demni de luat n seam, aa cum rezult
experimental. ntruct n biodispozitive conducia electric prin soluie este
i ionic i electronic, se poate pune problema obinerii unor separri de
sarcini prin aciunea unui al treilea electrod.

)
Met3

(a)
(b)
Fig.10.14. (a) Structura biodispozitivului de test cu trei terminale; (b) caracteristica ID
VGS n curent continuu.

n fig.10.14.a este prezentat un biodispozitiv de caracterizare cu trei

terminale ce utilizeaz aceleai materiale ca i cel anterior prezentat.
Metalul de poart Met 3 a fost Al plasat pe spatele izolatorului1, iar
biolichidul soluie de epinefrin 1mg/ml. n fig. 10.14.b sunt prezentate
curbe ID VGS msurate la tensiunile VDS= 1V, 2V. Liniaritatea acestor
curbe n gama de msur abordat, infirm instalarea unor canale de
inversie/acumulare; dar dezalinierea lor pentru cele dou valori distincte ale
lui VDS probeaz experimental c al treilea terminal influeneaz curentul
prin biodispozitiv, probabil datorit segregrii ionilor pozitivi i negativi
care circul prin soluia lichid.

10.7. Biodispozitive pentru furnizarea de substane active

Toate biodispozitivele utilizate ca proteze auditive, ca implant sub-retinal,
biostimulatoare cardiace, detectoare de uree declanatoare de dializ,
detectoare de glucoz declanatoare de insulin, micropompe de
dozare/microdozare de medicamente reprezint cteva exemple de
biodispozitive concepute n scopul substituirii unor deficiene organice. De
cele mai multe ori ele includ un sistem de biosenzori multifuncionali,
integrat cu circuitul electronic de prelucrare ntr-un biocip, sau structuri
MEMS obinute prin micro ori nanotehnologii. n prezent, convergena
dintre tiina materialelor biocompatibile i microtehnologii au direcionat
aceste biodispozitive spre aplicaii in vivo. Aa au aprut biodispozitivele
implantabile n esut, oferind platforme pentru terapeutic, precum livrare
de substane active la momentul oportun.

n fig.10.15 este prezentat un biodispozitiv implantabil pentru furnizarea

insulinei. El face parte dintr-o clasa mai larg, bazat pe aa numitele
biomicrocapsule, care au scopul de a asigura un spaiu sigur pentru o specie
de celule nchise ntr-o cavitate i plasate n interiorul unui organism gazd.
Se creeaz o camer imunoizolant reprezentat de dou membrane
semipermeabile, care s permit schimbul de nutrieni cu exteriorul.
Urmeaz nchiderea camerei dup introducerea celulelor. Materialele
membranei trebuie s asigure o funcionare normal a celulelor ncapsulate,
fr s permit recunoaterea lor din partea corpului, deci evitarea
funciilor de respingere.
Din punct de vedere tehnologic se pornete de la corodarea anizotrop a
dou plachete de siliciu pn la obinerea unor membrane subiri cu grosimi
de circa 10 m. Aceste membrane sunt porozificate astfel nct se obin
microcanale cu lungimi ntre 6-9 m i diametre nanometrice. Se creeaz
camera imunoizolant. Se acoper marginile plachetelor cu colagen sau
albumin seric, se introduc celulele n cavitate i apoi se lipesc plachetele
de siliciu, nchiznd camera. Membranele semipermeabile din Si poros
permit celulelor s funcioneze normal (absorb nutrieni din exterior i
furnizeaz insulin prin membrana poroas), fig.10.15, [80]. S-a
demonstrat c celulele productoare de insulin au o viabilitate de
aproximativ 8 zile pe substrat de Si poros, dar prezint o proliferare
superioar n aceste 8 zile pe Si poros fa de substratul de latex, clasic
utilizat n biochimie, [81].

Fig.10.15. Dispozitiv de furnizare a insulinei prin ncapsularea celulelor secretoare de

insulin ntre dou membrane de Si-poros.

10.8. Biodispozitive pentru prelevare individual a celulelor

vii
Principiile de funcionare ale acestor biodispozitive sunt bazate pe legi
fizice, chimice i biologice n general. Dar fabricaia lor este posibil doar
prin utilizarea micro i nanotehnologiilor. Acesta a fost motivul esenial,
pentru care dezvoltarea acestor biodispozitive a putut fi pus n practic
mai mult de ctre ingineri microelectroniti dect de ctre biologi.
1. Biodispozitive pentru ncapsulare individual a celulelor vii
n acest domeniu s-a cutat un material suport, biocompatibil cu celulele
vii, prelucrabil prin metode MEMS/NEMS, pentru a furniza locauri
individuale pentru celule. O celul izolat n aceast capsul poate fi
alimentat cu nutrieni, iar n final i se pot msura unii parametri biologici
precum: ratele de asimilaie/dezasimilaie, timpul de via, proliferarea.
Unul dintre mediile de implantare unicelular a fost siliciul nanoporos cu
pori de dimensiuni cuprinse ntre 7 i 49nm, [81, 82]. Celulele depuse pe
acest substrat au fost celulele secretoare de insulin (insulinome). n paralel
s-a studiat comportamentul acestor celule pe suporturi binecunoscute n
biologie: (a) suport din latex i (b) suport dintr-un material de referin
(petri dishes). Dup 8 zile, procentajul de supravieiure al celulelor
insulinome a fost cuprins ntre 90-100% pe materialul de referin, dar i pe
membrana de siliciu poros, iar pe membrana de latex de doar 70%. Dup 4
zile proliferarea celulelor insulinome a fost de acelai ordin de mrime,
5105celule/ml, pe membranele de Si-poros i de petri dishes i mult mai
mic pe suportul de latex, 2104celule/ml. Dup nc 4 zile (deci 8 zile n
total), proliferarea pe suportul de referin a ajuns la 4,5106celule/ml, pe
Si-poros a ajuns la 2106celule/ml, iar pe latex a ajuns doar la
2,2104celule/ml, [81].
Urmtorul pas a fost cutarea unor substraturi cu microcapsule, cu ajutorul
crora s se studieze in vitro celulele vii, meninndu-le aceeai stare
morfofuncional ca n mediul in vivo. Au fost studiate trei tipuri de
substraturi: (a) siliciu, (b) strat de Au depus peste Si, (c) sticl, toate cu
forme ce mimeaz cuiburile in vivo, n care cresc celulele eucariote. n
cele 3 substraturi s-au realizat microcaviti de 1-40m prin tehnici de
corodare anizotrop, [83].

Membrana
Citoplasma
Nucleu

Fig.10.16. Comportarea celulelor pe substrat de Siliciu.

S-au folosit mti hexagonale, ptrate i circulare pentru creearea unor

capsule cu diverse forme. Celulele au fost plasate n caviti i introduse
ntr-un incubator, unde au fost alimentate cu nutrieni, astfel nct condiiile
lor de via s fie ct mai apropiate de cele in vivo. Celulele depuse n
aceste mirocaviti au fost celulele fibroblaste dermice, prelevate prin
biopsia pielii, [83]. Experienele au demonstrat c:
- celulele fibroblaste ader bine la toate cele 3 materiale utilizate;
- comportamentul celulelor nu depinde de forma capsulei (haxagonal,
circular, etc.); celulele caut s ia forma capsulei;
- comportamentul celulelor n timp a dovedit ns o dependen de
materialul substratului. Cultura de fibroblaste s-a nmulit i a supravieiut
cel mai mult pe suportul de sticl;
- prin microscopie optic s-a observat c histologia (structura) membranar
i citoplasmatic a celulei a fost identic cu cea observat la culturile aflate
pe materialul de referin petri dishes;
- tendina general a celulelor a fost s ias puin din alveole pentru a
genera un film coerent peste substrat; n special zona celulei ce coninea
nucleii se bomba deasupra substratului.
2. Micro i nano instrumente de manevrare celular
n acest scop au fost mprumutate o serie de dispozitive din diverse
domenii i adaptate, miniaturizate pentru scopuri biologice: micropompe cu
difuzor/confuzor [77], microdoze, microgrippere mecanice [84],
micropipete [85], pulsuri laser pentru aducerea/eliminarea celulelor din
microcaviti [86].

Fig. 10.17. Seciune transversal printr-un microgripper tactil.

Gripperele sunt instrumente de manevrare i asamblare utilizate n tehnic.

Microgripperele utilizate n domeniul biologic trebuie s manipuleze
materiale de dimensiuni micronice sau submicronice. n aceste cazuri
actuarea se face utiliznd fore electrostatice sau piezoelectrice, care erau
inutilizabile la scar macroscopic. Adugnd sistemului micromecanic un
senzor piezoelectric, ce sesizeaz atingerea i eventual o microcamer de
luat vederi, se poate obine un microgripper ca n figura 10.17, care nu
numai c manevreaz microelementele, dar i pipie i vede, [84].
Principiul de funcionare al actuatorului bio-termic se bazeaz pe
coeficienii de dilatare diferii ai aluminiului i siliciului. Cnd structura
este nclzit consola se ncovoaie. Datorit senzorului piezorezistiv
incorporat, rezistena electric a stratului de siliciu este puternic dependent
de stresul mecanic. Astfel, fora tactil mecanic este citit cu uurin,
graie unei puni Wheatstone integrat n consol.
De asemenea au fost mprumutate din electrochimie tehnici de separare a
unor componente celulare: electroforeza, electroosmoza, dielectroforeza,
[87]. Proteinele sunt formaiuni globulare aranjate n aa manier nct
zonele hodrofobe sunt orientate spre interior, iar zonele hidrofile sunt n
contact direct cu mediul apos exterior. De asemenea, aranjamentul
gruprilor acide i bazice ale proteinei este puternic influenat i de pH-ul
mediului exterior, adic de concentraia ionilor de H +. Toate aceste
considerente duc la modelarea globular a proteinelor. Lanul proteic are
diverse dimensiuni i diverse ncrcturi electrice. Electroforeza proteinelor
este influenat de sarcina electric, de dimensiuni, de solubilitate i de
activitatea biologic, fig.10.18.a, [87]. Mobilitatea , se definete similar,
ca fiind raportul dintre viteza unui segment proteic v, per intensitatea
cmpului electric aplicat din exterior, E, deducndu-se formula:

 = v/E = Q/{6() r}

(10.8)

unde se poate constata c mobilitatea crete cu sarcina global Q, i scade

cu raza r a proteinei globulare, depinznd de asemenea de coeficientul de
vscozitate . Ca aplicaie la acest studiu se poate observa electroforeza
Acidului Dezoxiribo Nucleic (ADN) n fig.10.18.b.

(a)

(b)

Fig. 10.18. (a) Electroforeza unui lan proteic este influenat i de ncrctura electric
a segmentelor proteice, dar i de masa lor; (b) exemplu electroforeza ADN-ului.

Micropipetele sunt alte intrumente clasice miniaturizate, fig.10.19.

Fig. 10.19. Micropipete: (a) de dimensiunea firului de pr; (b) pentru manevrri ale
organitelor celulare

Pentru a manevra membrana unei celule vii, se utilizeaz o micropipet ca

n fig. 10.19.b. Dup o nclzire bine controlat a unui tub capilar de sticl
sau cuar cu diametrul de aproximativ 1 m se plaseaz pe membran.
Dup rcire, prin conracia aerului din capilar se poate trage de celul.
Pentru a msura activitatea celular a celulelor miocite prelevate de la
broasc, cercettorii au utilizat o micropipet ca n figura 10.20, [87]. Este
necesar un contact foarte bun pipet-celul pentru msurtori corecte (spre
exemplu msurtori ale deschiderii canalelor ionofore de pe pereii
celulari). Acest contact este obinut prin suciune, cnd celula miocit
(prezentat n stnga) este prins de pipet.

Fig. 10.20. Micropipete ce acioneaz asupra membranei unei celule miocite.

10.9. Analiza rspunsurilor neliniare ale biosenzorilor

Deoarece biosenzorii conin elemente traductoare active n combinaie cu
receptori biologici, este de ateptat ca rspunsul lor s fie neliniar. n figura
10.21. este prezentat rspunsul tensiune - concentraie de uree a unui senzor
cu Ir/Pd pe capacitor MOS, raportat de Winquist n 1985, [88]. Analitul
msurat aici este ureea sangvin. Se observ c rspunsul senzorului
prezint o pant de aproximativ 0,7mV/mol/l ntre 1...20mol/l
concentraie de analit. La concentraii mari de uree se constat o drastic
scdere a sensibilitii senzorului (explicat prin creterea pH-ului n stratul
de receptori enzimatici). ntruct nsi productorii acestui senzor constat
comportri diferite la nivele "mari" i nivele "mici" ale concentraiei de
analit, ar fi de dorit: 1) modelarea acestui rspuns neliniar; 2) stabilirea unei
granie (unei concentraii de prag) ntre cele dou nivele.
Pentru a nu fi tributari nici unei convenii, cea mai general metod, pentru
aflarea concentraiei de prag, ar fi aplicarea teoremei conduciei electrice
neliniare.

Te ns iune ( m V )

35
30

V_experim.
V_analitic

25
20
15
10
5
0
0

50

100

150

200

250

300

Conce ntratie ure e (um ol / l )

Fig. 10.21. Dependena experimental tensiune-concentraie de uree (dup Winquist

[88]); alegerea unui model analitic prin metoda celor mai mici ptrate (curba punctat).

n acest scop, pentru rspunsul experimental din fig. 10.21, a fost ales ca
model de fitare relaia (2.81):
V (c)

a c
1 c

, c>0

(10.9)

unde V este tensiunea msurat, c - concentraia de analit (uree), - are

semnificaia unui factor de atenuare a sensibilitii la nivele mari ale
concentraiei de analit, - un parametru ce caracterizeaz neliniaritatea
receptorului i a - un factor ce caracterizeaz nivelele mici ale concentraiei
de analit.
Observaie: Curba experimental din figura 10.16 a fost trasat prin
interpolare (cu funcii splain de gradul I), iar curba analitic a fost trasat
prin metoda curbelor de regresie, adoptnd criteriul celor mai mici ptrate.
ntrebare: n ce const interpolarea i n ce const metoda curbelor de
regresie? Cnd se folosete fiecare metod pentru trasarea unei curbe?
Indicaie: Interpolarea traseaz graficul funciei prin punctele date, dar ne
foreaz mna la anumite forme standard pentru funcie. Regresia
traseaz graficul printre punctele date i putem alege noi modelul funciei.
Alegnd un criteriu de regresie (spre exemplu metoda celor mai mici
ptrate), obinem parametrii modelului ales de noi.
Din criteriile de regresie ale curbei analitice au rezultat urmtoarele valori
pentru parametrii de model: a=0,95mV/mol/l, =0,098(mol/l)-0,78,
=0,78. Deoarece modelul (10.9) ales pentru rspunsul biosenzorului se
supune condiiilor TCEN (vezi clasa acestor funcii prezentate n paragraful

2.7) se poate aplica direct rezultatul (2.85) pentru determinarea

concentraiei de prag:
1

cT

1/

(10.10)

Rezult cT=19,01717mol/l. Aflarea unei granie cT, poate fi un avantaj

pentru descompunerea domeniului de msur n dou game: una cu
sensibiliti mari (pentru c<cT) i una cu sensibiliti mici (pentru c>cT).
n figura 10.22 sunt prezentate rspunsurile curent-concentraie de Oxigen
nregistrate de un Microbial-FET ce conine microorganisme productoare
de oxigen: Bacillus Subtilis i Trichosporon Cutaneum, [89].
600

1400

1200

500

1000

Curent Id ( n A )

Curent Id ( nA )

400

I(nA) Bacillus Subtillis

300

I calc(nA) Bacillus Subtillis

200

800

600
Imas(nA) Trichosporon
cutaneum
400
Icalc(nA) Trichosporon
cutaneum

100
200

0
0

50

100

mg

150

O2/l

200

250

0
0

50

100

150

mg

O2/l

200

250

(b)
(a)
Fig. 10.22. Curbe experimentale i analitice pentru rspunsul unui microbial-FET: (a)
necesar depistrii Bacillus S.; (b) necesar depistrii Trichosporon C.

Celulele de Bacillus S. i Trichosporon C. au fost fixate cu un strat de

nitroceluloz n poarta tranzistorului. Aceste microorganisme au fost puse
n contact cu o soluie coninnd glucoz. Prin metabolismul lor, ele au
generat oxigen, a crui cantitate a fost msurat. S-a adoptat tot modelul
analitic (10.9). Au rezultat urmtorii parametri de model de fitare:
Pentru Bacillus S. : a=18nA/mg, =2,8*10-2(mg/l)-1, =1.
Pentru Trichosporon C.: a=15nA/mg, =9,9*10-3(mg/l)-0,94, =0,94.

Prin aplicarea rezultatului (2.85) au rezultat conform TCEN urmtoarele

concentraii de prag: cT-BacillusS=35,71mgO2/l, cT-TrichosporonC=135,61mgO2/l.
Aceste exemple vor s arate c teorema conduciei electrice neliniare poate
fi aplicat i n cazul biosenzorilor. Valorile concentraiilor de prag ce
rezult din aceast teorem pot reprezenta granie utile, ce despart
domeniile de msur n dou game - cu sensibilitate mare i cu sensibilitate
mic.

10.9. Perspective de cercetare n domeniul bioelectronicii

O direcie vizeaz continuarea combinaiei de succes dintre biotehnologie
i microelectronic. Se urmrete integrarea pe acelai cip a biosenzorului
i a sistemului digital de prelucrare a semnalului. Scopul ar fi obinerea
unor actuatoare integrate complet i controlate de nivelul analitului n
snge. S-ar putea realiza actuatoare, care s furnizeze automat anumite
medicamente n snge, sau micropompe de declanare a dializei, [2].
O alt direcie de cercetare se bazeaz pe observaia fcut de Scheller [2]
n legtur cu procesarea de semnal fcut la nivel enzimatic. Exist dou
tipuri distincte de enzime ce pot realiza suma matematic a semnalelor
generate de doi senzori distinci [2]. De asemenea, s-a realizat diferena i
produsul de convoluie a dou semnale cu ajutorul a dou enzime distincte.
Dac acest lucru va fi fcut n viitor la o scal mic de integrare i cu o
vitez de rspuns superioar circuitelor digitale, vom asista n viitor la
dezvoltarea biocalculatoarelor.
Modelarea rspunsurilor biosenzorilor prezentat aici este doar o
provocare. Dac un biosenzor are un comportament neliniar, cu att mai
mult un organism viu are. Modelarea rspunsurilor n lumea biologic i n
special n medicin este un teren neatins nc. Utilitatea lor ar fi imens. Un
exemplu: medicul analizeaz rspunsul unui electrocardiograf doar
calitativ. Acest rspuns s-ar putea modela cu parametri ce ar indica
elasticitatea vaselor de snge, timpi de comutaie, amplitudini - parametri
ce ar putea duce la un diagnostic optimizat.
Aplicaii ale TCEN sunt interesante mai ales n analiza rspunsurilor lumii
vii. Spre exemplu, dozarea medicamentelor ar putea fi fcut pe baza
stabilirii concentraiei de prag. Organismul uman prezint o anumit
reactivitate biologic la un medicament. Dac se administreaz n
concentraii prea mici, organismul nu "simte" nimic. Peste o doz "prag"

reactivitatea ncepe s se fac simit. n viitor s-ar putea dovedi o

reactivitate chiar i sub prag. Parial s-a demonstrat acest lucru. Scznd
concentraia medicamentului foarte mult, s-a ajuns la stabilirea unor diluii
foarte nalte (homeopatice), la care reactivitatea organismului crete din
nou. Aceste concentraii, sau n cellalt caz, diluii prag, ale unor
medicamente, ar putea fi extrase cu TCEN.
Dezvoltri n direcia electrofiziologiei. Proprietile fundamentale ale
neuronilor constau n generarea i conducerea impulsurilor electrice
nervoase. Un stimul cu intensitatea sub prag nu se propag. Asemnarea
conduciei electrice intraneuronale cu dispozitivele MOS este frapant.
ntre doi neuroni conducia se face prin intermediul mediatorilor chimici i
a neurotransmitorilor (substane ca acetilcolina, dopamina etc). Iat de ce
aceste substane sunt att de intens cercetate cu ajutorul biosenzorilor. Dar
nu numai neuronii, ci toate celulele au comportamente electrice: conducia
prin canalele ionofore, ncrctura electric a mediului micelar,
electroforeza proteinelor sunt doar cteva exemple.
De asemenea, deosebit de interesant ar fi modelarea n domeniul
electronicii celulare i a transmiterii semnalelor biologice. Exist o
transmisie la nivel intracelular (prin mesagerii secunzi spre receptorii
nucleari), o transmisie intercelular (prin circulaia sangvin a analiilor) i
apoi o transmisie global ntre organe. Electrofiziologii au avansat mult n
ultimele decenii, reuind prin observaii directe s explice unele fenomene
electrice ce apar n funcionarea celulelor. i instrumentele puse la
dispoziie de nanotehnologii i-au ajutat. ns ceea ce lipsete n acest
domeniu este modelarea. O stpnire cantitativ a fenomenului la nivel
celular i apoi global, ar fi cheia unei medicini moderne. Este de ateptat
ca aceast modelare s fie extrem de dificil, ntruct organismul are
diverse metode de adaptare printr-un numr extrem de mare de feed-backuri. De aceea ele trebuie s debuteze treptat: mai nti la nivel celular i n
cele din urm la nivelul ansamblului organismului viu.
Prerea personal a autorului acestei cri este c n viitor vom asista la o
convergen a tiinelor ntr-un mod surprinztor. Dac n trecut, materia
acestei lumi a fost studiat din unghiul chimistului, al fizicianului, al
biologului, al electronistului, astzi asistm la o superspecializare pe
domenii extrem de nguste: electroniti specializai doar pe tranzistoare
SET, sau doar pe nanotuburi de carbon, ori biologi care studiaz doar un
anumit organit celular. Ironia soartei este c electronistul care aprofundeaz
mult nanotuburile le redescoper printre proteinele din canalele ionofore
celulare, iar biologii sunt forai s dea explicaii despre fenomene electrice

celulare. Probabil c doar conlucrarea acestor cercettori va asigura

succesul n viitor.