Combinatii complexe model pentru SOD

S-a observat faptul ca radicalul superoxid (O2) apare in organism in cantitate

mare dupa ischemie urmata de reperfuzie, expunere la radiatie sau activarea celulelor
albe in cazurile autoimune de tipul artritelor. Superoxidul joaca de asemenea un rol
important in initierea bolii lui Parkinson, in promovarea tumorilor si in procesele de
degenerare celulara promovate de SIDA. Protonarea superoxidului HO 2 (radicalul
perhidroxil) poate initia autooxidarea membranelor lipidice si determina distrugerea
selectiva a ADN-ului.
In aceste cazuri enzimele de tip SOD nu pot lupta cu productia marita de O 2 si ca
urmare utilizarea unui compus cu activitate de tip SOD (o sinzima) poate fi utila in
terapie acestor afectiuni. Studiile efectuate au pus in evidenta faptul ca unele combinatii
complexe ale cuprului, manganului, fierului si nichelului pot cataliza diproportionarea
O2 la H2O2 and O2 similar cu SOD.
Combinatiile complexe cu masa moleculara mica care au activitate similara cu
aceste enzime se pot utiliza ca medicamente pentru prevenirea sau tratamentul
afectiunilor legate de supraproductia de superoxid. [14]
Pentru a fi un bum mimetic pentru SOD, o combinatie complexa trebuie sa indeplineaca
urmatoarele cerinte:
- activitate de tip SOD;
- solubilitate mare in apa;
- stabilitate termodinamica si cinetica mare;
- liganzi cu capacitate donoare medie si flexibili;
- un potential de reducere corespunzator pentru a cataliza disproportionarea
superoxidului (in domeniul -0.33 - 0.65 V);
- pozitii coordinative libere sau liganzi care se pot inlocui usor;
- o activitate buna in domeniul de pH 68;
- pentru a fi activ in vivo un astfel de compus ar trebui in plus sa aiba capacitatea
de a se acumula atat inregiunea lipofila cat si in cea hidrofoba a celulei;
- o toxicitate scazuta;

- specificitate in conditii biologice;

- o biodistributie optima precum si o stabilitate metabolica mare.
1. Combinatii complexe ale cuprului cu activitate de tip SOD
Deoarece Cupru este centrul activ al Cu,Zn-SOD, multe combinatii complexe ale acestui
ion metalic au fost sintetizate si testate, cercetarile aratand ca multe combinatii
complexe au activitate de tip SOD. Un numar mare de combinatii complexe ale Cu(II),
mono sau binucleare cu liganzi polifunctionali liniari, heterociclici sau macrociclici cu
atom donor oxigen sau azot au fost studiate ca modele structurale, spectroscopice sau
functionale ale SOD-ului de la mamifere. Unii compusi de acest tip pot fi considerati
sinzime (analogi sintetici) pentru SOD deoarece au capacitatea de a cataliza
disproportionarea superoxidului prezentand astfel aproape aceasi activitate catalitica ca
enzima. Cu toate ca multe combinatii complexe prezinta activitate de tip SOD nu s-a
reusit pana in prezent obtinerea unor medicamente pentru uz uman ci doar veterinar.
Exemple: combinatii complexe ale Cu(II) cu histidina [4], combinatii complexe ale
Cu(II) cu derivati macrociclici poliaminici[5], azotat de bis (2,9-dimetil- 1.10
-fenantrolina) Cu (I) (Cu (I) (DMP)2[6] , Cu (II)-oligopeptide si Cu (II) (salicilat) 2[7].
.
Tabel 1. Activitatea de tip SOD, procentul de reactivitate si viteza de disproportionarea
a superoxidului pentru unele combinatii complexe de cupru si Cu,Zn-SOD

Combinatia
complexa

Concentratia (M)

Reactivitate %

viteza (x 109M-1s-1 )

CuZnSOD

0,02

100

1,3

Cu (II) (DIP)2

2,9

0,7

1-2

Cu(II) (salicilat)2

4,6

0,65

1,6

Deoarece reactia de disproportionarea implica ciclul redox Cu(II) si Cu(I), se asteapta ca

potentialul redox al sistemului combinatie complexa Cu(II)/combinatie complexa
Cu(I) sa influnteze activitatea de tip SOD in timp ce ligandul va influenta potentialul

redox . S-a observat ca, combinatia complexa His-Phe-Cu(II) are o buna activitate de tip
SOD (K=3,57109 M-1s-1) in timp ce Phe-His-Cu(II) nu are activitatea SOD (K=9.910 4M1 -1)
s [8]
Prin compararea unor derivati poliaminici macrociclici ai Cu(II), s-a observat ca
activitatea depinde de dimensiunea ciclului, tipul si natura substituentilor macrociclului.
Prin modificarea structurii chimice acestora se poate imbunatatii activitatea biologica.
Cu toate ca studiile in vitro ale acestor combinatii complexe ale Cu sunt promitatoare,
experimentele in vivo au fost dezamagitoare.
Primul motiv este ca multe combinatii complexe sufera in vivo disociere cu formarea
ionilor de Cu care se combina ulterior cu componente din ser si isi pierd activitatea de
tip SOD. Cel de-al doilea motiv se refera la reoxidarea compusului redus de catre
O2.Spre deosebire de SOD (K 1=0.44M-1s-1) cei mai multi compusi ai Cu au K 1 in domeniul
103-105M-1s-1.
In conditii fiziologice, concentratia de O2 este de aproximativ 10-11M. Daca k1[O2]
>k2[O2], constanta de viteza a compusilor cu ioni metalici pentru a cataliza
disproportionarea O2 ar fi: Kreal=2K1K2 /(K1+K2+K-1[O2]/[O2]).
Ca urmarea, acesti compusi pot sa mimeze SOD doar atunci cand k1<10M-1s-1. 1.
Doua combinatii complexe ale Cu(I) cu curcumina (raport Cu:curcumina 1:1 si 1:2) au
fost examinate pentru a determina activitatea SOD, capacitatea de a indeparta radicalii
si potentialul antioxidant. Ambele combinatii complexe sunt solubile in lipide si
DMSO.Combinatia Cu(II)-curcumina ( 1 :1) care are o distorsiune mai mare fata de
structura plana are o activitate SOD mai mare [16].
Recent au fost preparate combinatii complexe ale Cu (II) cu liganzi micsti, un
carboxilat (acetat (CH3COO), salicilat (salH) sau benzoat (BZA)) si unul de tip chelat
(1,10-fenantrolina (fen) sau 2,2'-dipiridil (bipy)} sau aminic monodentant cu azot ca
atom donor. Structurile cristaline au fost determinate cu raze X pentru combinatia
complexa cu stereochimie de piramida patrata [Cu(BZA) 2(bipy)(H2O)] si doua combinatii
complexe patrulatere planareCl4OH}. Acesti compusi prezinta deasemenea o activitate
antiproliferativa remarcabila impotriva cancerului de san estrogen independent (BT-20)
si cancerul de prostata androgen independent (PC-3). Combinatia are capacitatea de a
induce apoptoza la ambele linii celulare dupa un tratatament de 48 de ore. Aceste
efecte se obtine probabil prin generarea stresului oxidativ intracelular si initierea caii
apoptotice intrinseci [18].
2. Combinatii complexe ale manganului cu activitate de tip SOD

Mn-SOD este situata in mitocondrie. Enzima latenta contine Mn (III) in situsul activ. La pH
7.0, constanta de viteza cu care MnSOD catalizeaza disproportionarea O 2- este similara
cu cea a Cu,Zn-SOD, dar scade la conditii alcaline.
Un numar mare de combinatii complexe ale Mn(II) cu liganzi de tip chelat au fost
studiate si s-a evidentiat faptul ca prezinta activitate de tip SOD. Liganzii pentru
mangan, sunt in general specii polidentate, aciclice sau macrociclici, cum ar fi TMPyP,
EDTA si NTA
Combinatiile complexe de tip [Mn(III)salen] au prezentat activitate protectiva pe modele
fata de stresul oxidativ, inclusiv neuroprotectie datorita activitatatii de tip SOD.
Combinatia
complexa
hepta-coordinata
a Mn(II) cu
1,4,7,10,13pentaazaciclopentadecanul si liganzi transdicloro (SC-52608) este un catalizator
eficient al disproportionarii O2, prezinta o stabilitate termodinamica rezonabila si este
inerta cinetic. Prezinta un spectru mare de activitate biologica care include inhibarea
distrugerii neutrofil-mediata a celulelor endoteliale ale aortei umane, atenuarea
inflamarii, protectie impotriva ischemiei miocardului si leziunilor care apar dupa
reperfuzie si inhibarea leziunilor tesutului coronarian. Eficienta catalitica si stabilitatea
acestei combinatii complexe pot fi imbunatatite prin modificarea substituentilor
macrociclului.
Combinatia complexa M40403 are o activitate apropiata de a enzimei si este stabila la
sterilizare la temperatura ridicata. M40403 se afla in faza II a testelor clinice pe oameni
din 2003 ca si candidat pentru treatamentul durerilor, inclusiv a celor sinergice
evidentiate cu derivati de opiu. M40403 are deasemenea cpacitatea de a reduce
eroziunea cartilagiilor si oaselor precum si inflamarea cronica in artrita reumatoida.
Aceste modele pentru SOD pot furniza un tratament protectiv de suprafata prin atasare
la dispozitive medicale implantate fabricate din polietilena, tantal, platina sau otel
inoxidabil.

Combinatia complexa cu 1,4,7,10,13pentaazaciclopentadecan si liganzi

transdicloro(SC-52608)

M40403

Au fost obtinute doua noi complexe cu mangan(III) bazate pe liganzi tridentati cu ciclu
imidazolic si fenolic. Structura liganzilor favorizeaza oxidarea Mn(III) datorita
compatibilitatii geometriei combinatiilor complexe cu o distorsiune tetragonal Jahn-Teller
fapt demonstrat prin difractie cu raze X pentru una dintre combinatiile complexe.
Aceasta a indus o scadere a potentialului oxidativ pentru cuplul Mn(III)/Mn(II) ce poate fi
corelata cu activitate SOD [19]
Combinatii complexe ale fierului care prezinta activitate de tip SOD
Fe-SOD se gaseste in bacterii, alge si plante superioare.
In ciclul catalitic fierul oscileaza intre Fe(III) si Fe(II). Combinatiile complexe ale fierului cu
activitate de tip SOD sunt: Fe (EDTA), Fe(III)-tetrakis (4-N-metilpiridil) porfirina
(Fe(III)TMPyP), Fe(II)_tetrakis-N,N,N',N'(2-piridilmetil)etilenediamina (Fe-TPEN) si Fe (III)tris [N-(2-piridilmetenil-2-aminoetenil] amina (Fe-TPAA).
La pH 10.1 Fe(III)-TMPyP poate cataliza disproportionarea cu o constanta de viteza de
3107 M-1s-1[11]. Alti analogi TPAA in combinatii complexe cu Fe si Cu au activitate SOD
mare.
Probabil ca ciclul piridinic al TPAA furnizeaza pentru ionul metalic un mediu coordinativ
similar cu cel din SOD nativa [12] Cu toate acestea, activitatea in vitro, nu corespunde
intotdeauna cu cea in vivo. In vitro, activitatea SOD a Fe-TPEN este de 100 de ori mai
mare decat a Fe-TPAA pe cand in vivo Fe-TPAA are un nivel de protectie de 10 ori mai
mare comparativ cu Fe-TPEN [11].
Ca un potential catalizator de tip Fenton, in prezenta H 2O2, Fe(II)-TPEN reactioneaza cu
H2O2 pentru a genera radicalul hidroxil si Fe(III)-TPEN dupa care Fe(III)-TPEN sufera
reducere cu GSH sau ascorbatul. [14]
Fe(II)-TPEN+H2O2Fe(III)-TPEN+OH+OH
Deci, in vivo, Fe(II)-TPEN ca un mimetic al SOD are ca efect secundar capacitatea de a
genera OH.
Concluzii

Anionul superoxid rezulta din multe procese de imbatranire si in plus poate

genera si alte specii reactive ale oxigenului de tipOH, NO2, H2O2

tintele acestuia sunt multe enzime si clusterii fier sulf din membranele celulare

Superoxid dismutazele sunt enzime prezente la eucariota, bacterii, plante ,

matricea mitocondriala care catalizeaza .. formarea O2..

Se cunosc trei tipuri de SOD fiecare avand un ion metalic diferit in situsul catalitic.

Cele mai intalnite forme ale enzimei sunt superoxid dismutaza ce contine cupru si
zinc (Cu,Zn-SOD), superoxid dismutaza ce contine mangan (Mn-SOD) si superoxid
dismutaza ce contine fier (Fe-SOD) (care se gaseste la bacterii si plante)..

Cu,Zn-SOD au fost caracterizate cu ajutorul difractiei de raze X si datele obtinute

au permis ciclul reactiilor enzimatice ?????????????????????

Combinatiile complexe studiate ca modele pentru SOD sunt combinatii complexe

ale cuprului, manganului sau fierului cu liganzi polidentati cu atomi donori azot
sau oxigen care mimeaza situsul coordinativ al diverselor forme de SOD.

Pentru unele din aceste specii s-a evidentiat capacitatea de disproportionare a

anionului superoxid cu viteze apropiate de cele ale enzimelor native. Combinatiile
de acest tip care prezinta toxicitate scazuta se afla in faza testelor clinice ca
medicamente pentru tratamentul afectiunile insotite de superproductia anionilor
superoxid in organism

Dezavantajul utilizarii combinatiilor complexe ale cuprului in acest scop este

inactivarea lor in vivo datorita coordinarii la biomolecule si ca urmare este
necesara obtinerea de combinatii complexe noi cu stabilitate mai mare

Combinatiile complexe ale cuprului in vitro sunt eficiente ca antiinflamatoare si

pentru unele s-a pus recent in evidenta si capacitatea de a determina regresia
tumorilor

Obiective

Sinteza de combinatii complexe noi ale cuprului cu liganzi polidentati flexibili,

cu liganzi cu atomi donori azot, prin metoda template.

Caracterizarea in stare solida a combinatiilor complexe (analiza chimica,

analiza termica, spectre IR si electronice)

Caracterizarea in solutie a combinatiilor complexe (spectroscopie electronica)

Stabilirea capacitatii de fixare a superoxidului de catre combinatiile complexe

(spectrofotometric)

Stabilirea activitatii de tip SOD