Cursul 5

Enzime

Enzimele
biocatalizatori
majoritatea enzimelor au stuctur proteic

Proprieti comune ale enzimelor i catalizatorilor reaciilor

chimice:
catalizeaz numai reacii termodinamic posibile
nu modific echilibrul reaciei
mresc viteza de reacie prin scderea energiei de activare (energia
necesar pentru a se forma starea de tranziie)
nu se consum n timpul reaciei
sunt sensibile la aciunea inhibitorilor

Proprieti specifice enzimelor:

specificitate nalt
cinetic caracteristic
eficien remarcabil (viteza crete de 103-1011 ori, comparativ cu
reacia necatalizat)
manifest fenomen de saturare

Energia liber

Energia de activare
a reaciei necatalizate
Energia de activare
a reaciei catalizate

starea iniial

Variaia energiei
libere de reacie

desf urarea reaciei

Figura 2.1. Energia de activare n reacii catalizate i necatalizate

Clasificare

Din punct de vedere structural

Proteine simple: tripsina, chimotripsina, elastaza
Proteine complexe care conin i o component neproteic (cofactorul)

Holoenzim

apoenzim + cofactor

Cofactorii: ioni metalici: (Zn2+- carbonicanhidraza i citocromoxidaz;

Se2+- glutation peroxidaz)
grupri prostetice: pidoxalfosfatul.
coenzima
loc activ sau un situs catalitic
gr.reactive:Ser, Thr, Cys, Lys, Glu
gr. care leag substratul (hidrofile)
complementeritate substrat-situs catalitic (legturi slabe necovalente)

loc alosteric sau situs alosteric efectori alosterici pozitivi i negativi

Modelul Fischer (Lact-cheie)

Modelul Koshland (centrului indus)

Specificitatea enzimelor absolut

de grup
larg

Clasificare:

1.Oxidoreductaze-(r. cu transfer de e- i H+)

2.Transferaze (r. de transfer a unei gr-. de pe donor pe acceptor)

3.Hidrolaze (r.de hidroliz)

Esteraze
Peptidaze

4. Liaze (r. de scindare a unei legturi covalente nehidrolitice)

5. Izomeraze (r. de izomerizare)

6. Ligaze (r. in care se formeaz noi legturi covalente n prezena ATP)

Dehidrogenaze
Oxidaze
Peroxidaze
Dioxigenaze
Monooxigenaze
Transelectronaze

Aminotransferaze
Aciltransferaze

Racemaze
Epimeraze
Mutaze

Transmetilaze
Transhidroximetilaze

Glicoziltransferaze

Glicozidaze
Kinaze

CINETICA ENZIMATIC
k1
k3
E + S ES E + P
k2

vit (v)

vmax

1/2vmax

Variaia vitezei n funcie

de concentraia
substratului este o
hiperbol.

Km
Figura 2.2. Variaia vitezei de reacie n funcie de concentraia substratului

[S]

Ecuaia Michaelis-Menten
Premize:

concentraia substratului este mult mai mare dect concentraia enzimei care se afl n ntregime sub form de
complex ES.

reacia de transformare a complexului n P i E liber este practic ireversibil

reversibiliatea reaciei de formare a ES (k1=k2) determin [ES] constant

vmax x [S]
v =
KM + [S]

vmax = viteza maxim

KM = constanta Michaelis-Menten
[S] = concentraia substratului

Proprietiile catalitice sunt caracterizate de KM (eficiena) i vmax (puterea catalitic)

Cnd vmax = v/2
atunci
KM= [ S ]

Hexokinaza - KM = 30M, funcioneaz cu vmax la concentraiile corespunztoare glucozei n snge n diferite

etape ale ciclului alimentar.

Glucokinaza ( ficat ) - KM = 10mM

Considerm reacia de formare a complexului ES:

k1
k2
Afinitatea unei enzime pentru sub stratul
Kd =
su variaz invers propor ional cu constanta de disociere Kd
E + S ES;
k2
k1.

Turnoverul enzimatic (Kcat)

Constanta de specificitate Kcat/ KM

Ecuaia Lineweaver-Burk
1
1
Km
1

v vmax vmax [ S ]
1/v
y = ax + b

b = 1/vmax

1/vmax

-1/KM
Figura 2.4. Reprezentarea ecuaiei Lineweaver-Burk

1/[S]

Inhibiia activitii enzimatice

Ireversibil

Inhibiie reversibil
necompetitiv
acompetitiv

competitiv

Inhibiia ireversibil
Inhibitori ireversibili
se leag la centrul activ al enzimei printr-o legtur covalent cu un rest
aminoacid
Complexul format este stabil, ducnd la o inactivare permanent a enzimei
sau n cel mai bun caz, activitatea se reface lent, necesitnd ore i zile
pentru refacerea activitii enzimatice -OOC C6H4 O C O + ciclooxigenaz
OH
ACTIV
acetilsalicilat CH3
Ex: aspirina-inhibitor ireversibil
al cicloxigenazei
ciclooxigenaz
INHIBAT

C
CH3

O + -OOC

C6H4

OH

salicilat

Inhibitori de sinucidere
se formeaz n organism din precursori n timpul unui ciclu catalitic abortiv.
Compusul iniial nu este activ. Compusul activ, generat printr-una sau mai
multe reacii este similar structural cu substratul enzimei care comite
sinuciderea i formeaz cu aceasta un complex stabil. Se poate considera
c prin incapacitatea ei de a discrimina ntre adevratul substrat i cel fals
enzima se sinucide.
Ex: fluoruracil

Inhibiia reversibil competitiv

Inhibitorul competitiv:
analog structural al substratului
se leag reversibil la situsul activ al
enzimei
Ex:
methotrexatul- inhibitor al dihidrofolat reductazei
captoprilul, enalaprilul - inhibitori ai enzimei de
conversie a angiotensinei
statinele- inhibitori al hidroximetilglutaril-CoA reductazei

vit (v)

vmax

E+S

ES
E+I

E+P

f r inhibitor
cu inhibitor

1/2vmax

EI

Vmax nu se
modific
KM crete

Km K'm

[S]
1/v
cu inhibitor

f r inhibitor
1/vmax

-1/KM

-1/K'M
Figura 2.3. Reprezentarea grafic a inhibiiei competitive

1/[S]

Inhibiia reversibil necompetitiv

Inhibitorul necompetitiv
se leag n alt loc dect substratul
se leag de enzima liber i de complexul
ES

vit (v)

Vmax scade
KM nu se
modific

vmax

f r inhibitor

v'max

cu inhibitor

1/2vmax
1/2v'max

Km

[S]

K'm
1/v
cu inhibitor

f r inhibitor
1/v'max
1/vmax
-1/KM
Figura 2.4. Reprezentarea grafic a inhibiiei necompetitive

1/[S]

Inhibiia acompetitiv

Inhibitorul acompetitiv
se leag numai la complexul ES
apare numai la sistemele multienzimatice

Inhibitia acompetitiva
Vmax i KM scad
cu inhibitor

1/v

panta nu se
modific

f r inhibitor

1/v'max

1/vmax

-1/K'M

-1/KM
Figura 2.5. Reprezentarea grafic a inhibiiei acompetitive

1/[S]

Factorii care afecteaz activitatea enzimatic

Temperatura

Pentru fiecare enzim exist o

temperatur optim pentru
exercitarea activitii catalitice.
Creterea vitezei de reacie cu
temperatura se manifest ntr-un
domeniu limitat de temperatur,
limita superioar corespunznd
temperaturii optime.
Dincolo de aceast temperatur
activitatea enzimei scade,
deoarece ncepe procesul de
denaturare termic a proteinei
care se accentueaz cu creterea
temperaturii.

activitatea
enzimatic (%)

20

40

60

Figura 2.6. Variaia activit ii enzimatice cu temperatura

Temp (C)

Factorii care afecteaz activitatea enzimatic

pH-ul
pH optim, pH-ul la care
activitatea enzimatic
este maxim.
Pentru majoritatea
enzimelor acesta variaz
ntre 5-9
Exceptii: pepsina (2),
fosfataza acid (5-6),
fosfataza alcalin (8-9).

activitatea
enzimatic (%)

10

Figura 2.7. Variaia activit ii enzimatice cu pH-ul

pH

Izoenzime

Forme moleculare multiple ale unei enzime care catalizeaz aceeai reacie
Au caracteristici cinetice (KM , Vmax) diferite
Sunt proteine oligomere:

Lactatdehidrogenaza
LDH1 - H4
muchi cardiac
LDH2 - MH3
LDH3 - M2H2
muchi scheletic
LDH4 - M3H
LDH5 - M4
ficat

Creatin fosfokinaza (CPK)

M2- miocard i muchi
MB - n miocard
B2 n creier i muchi
CPK
Creatin + ATP Creatinfosfat + ADP

COOCOOLactat dehidrogenaza

H - O - C : H + NAD+ ================ O = C + NADH + H+

CH3
CH3

Reglarea activitii enzimatice

1.Modificri cantitative:
Inducie enzimatic
Represie enzimatic

controlate hormonal nervos

2.Modificri ale eficienei catalitice

covalente

prin activare proteolitic

prin procese de fosforilare -defosforilare

alosterice:

Modificri ale eficienei catalitice covalente prin activare

proteolitic
Ex: procesul digestiv,coagulare, fibrinoliz, execuia
apoptozei
E inactiv(zimogen)----------E activ

pepsinogen---------- pepsin
tripsinogen ---------- tripsin
chimotripsinogen ------------ chimotrpsin
proenzimele factorilor coagulrii ----- factori activi
plasminogen -------- plasmina
procaspaze ----- caspaze

Modificri ale eficienei catalitice covalente prin

procese de fosforilare -defosforilare

ATP

ADP
protein kinaz
O-

proteina

OH

proteina

OP
O-

P
O-

protein fosfataz

HO

H2O

Modificri ale eficienei catalitice alosterice

Enzime alosterice

sunt proteine oligomere

activitatea lor - reglat prin modificari conformaionale

catalizeaz etape cheie, ireversibile ale cilor metabolice

cinetic diferit de cinetica MM-sigmoid

conin centre regalatoare alosterice (+/-)

Legarea lor n centrul alosteric determin o transformare conformaional

denumit tranziie alosteric care va mri eficiena ctalitic n cazul efectorilor
pozitivi i o va micora n cazul efectorilor negativi.

 inhibiie feedback

Produsul final al unei ci metabolice inhib enzima care

catalizeaz prima reacie.
ABCD
Acumularea lui D n cantitate mare determin legarea lui n
centrul alosteric al enzimei care catalizeaz transformarea
substratului A n B. D acioneaz ca un inhibitor alosteric negativ
sau feed-back inhibitor.

stimulare feedback

Fructozo 1,6 bisfosfatul, este activator alosteric al reaciei

catalizate de fosfofructokinaza-1 al crei produs de reacie este.

stimularea feed forward.

Produsul unei reacii (reacia determinant de vitez) acioneaz

ca un efector alosteric pozitiv asupra unei reacii situate n aval
de reacia al crui produs este. De exemplu, fructozo 1,6
bisfosfatul este efector alosteric pozitiv al piruvat kinazei.