16/2/2016 TP n°1 : mise en évidence de bactéries ­ TPE ­ Bactérie et Antibiotique

 Le but de cette manipulation est de mettre en évidences les bactéries dans
différents milieux. Elle va permettre de répondre à 2 questions : 
 Où trouve­t­on les bactéries?
Y a­t­il différents types de bactéries?
    Principes de la manipulation : 
La gélose contient tout les nutriments nécessaire au développement des bactéries. On met
en contact les milieux/objets avec la gélose, et les bactéries se déposent sur la gélose et se
développent. Pour accélérer le développement, on place les boites de pétri dans une étuve.
Après 48h, on bloque le développement bactérien en plaçant les boites de pétri au
réfrigérateur, car les bactéries ne peuvent pas se développer à une température < 6°C. On
observe ensuite les résultats.
    Les milieux testés sont au nombre de 10 : 
1. L'eau du robinet
2. un cheveux
3. un clavier
4. l'air
5. un portable
6. le doigt : avant le nettoyage des mains
7. le doigt : après le nettoyage des mains
8. de la salive
9. le sol d'un couloir très fréquenté
10. la lunette des toilettes

Protocole :
Matériels nécessaires : 
1 boite à pétri rempli de gélose par milieux/objets à tester
un scalpel stérilisé pour la manipulation des boites de pétri
une étuve
un réfrigérateur
2 techniques sont utilisés ici, suivant que c'est un milieu ou un objets qui est testé
:
1. Si c'est un objets qui est testé : 

ouvrir la boite de pétri
poser l'objet à la surface de la gélose
refermer la boite de pétri
placer dans l'étuve
Recommencer ces étapes pour chaque objets.
Il faut effectuer cette opération au plus vite, pour éviter une contamination trop importante de
la gélose par l'air.
    2. Si c'est un milieux qui est testé : 
    Il faut normalement utiliser des boites de pétri de contact. N'ayant pas ces boites, voici la
manière dont nous avons procédé : 
ouvrir la boite de pétri
sortir la gélose à l'aide d'un scalpel stérilisé et la déposer sur le milieu à tester
attendre quelque secondes et remettre la gélose dans la boite de pétri
refermer la boite de pétri
placer dans l'étuve
Recommencer ces étapes pour chaque milieu testé
https://sites.google.com/site/tpebacterieantibiotique/annexes/manipulations/tp­n­1­mise­en­evidence­de­bacteries 1/6
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Recommencer ces étapes pour chaque milieu testé
Voici la manipulation en image, avec les informations précise pour chaque tests :

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Résultats : 
 

    Les boites de pétri sont placées 48h dans une étuve pour développer la flore bactérienne.
Après ce laps de temps, on observe le développement des bactéries à la surface de la
gélose : 

Bactéries dans l'eau               Bactéries sur un cheveux     Bactéries sur un clavier 

 Bactéries dans l'air            Bactéries sur un portable      Bactéries sur des toilettes

Bactéries sur un doigt avant et après nettoyage              Bactéries dans la salive         Bactéries sur le sol

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http://www.hostingpics.net/thumbs/97/90/65/mini_979065sol.jpg            
 
    Chaque tâche sur la gélose correspond a une bactérie souche déposée au départ et qui
s'est par la suite développée pour former une colonie. Ainsi, plus il y a de colonies, et plus
les bactéries étaient nombreuses au départ.

     Plusieurs constats sont possibles :

Toutes les boites de pétri contiennent des bactéries. Ici en exemple, l'air, un cheveu et de la salive.

        ­On remarque que tout les milieux testés présentent un développement de bactérie.
Ainsi, on en déduit que tout les milieux contenaient des bactéries au départ, et par
conséquent que les bactéries sont partout (plus d'information dansRepères ­ les bactéries);

https://sites.google.com/site/tpebacterieantibiotique/annexes/manipulations/tp­n­1­mise­en­evidence­de­bacteries 3/6
16/2/2016 TP n°1 : mise en évidence de bactéries ­ TPE ­ Bactérie et Antibiotique

On les trouve sur nos cheveux, dans notre salive, et même dans l'air! C'est justement à
cause de ces bactéries présentent dans l'air qu'il faut faire attention à l'interprétation des
résultats : en effet, les boites de pétri ont été contaminé par l'objet à tester, mais aussi par
l'air. Il faut donc ignorer les colonies de bactéries issues de l'air pour analyser les résultats.
Un bon exemple de ce phénomène est la boite de pétri avec le cheveu : On remarque un
développement de bactéries autour du cheveu, mais aussi sur le reste de la gélose : ces
dernières sont dues au contact de l'air.

   
    Parmi tout les milieux testés, un
est très particulier : c'est l'eau du
robinet. En effet, on ne remarque
qu'une très petite colonie de
bactéries à la surface de la
gélose. L'absence de bactéries
dans l'eau s'explique par des
règles d'hygiène à respecter :
L'eau du robinet subi un contrôle
continu pour assurer la sécurité
des foyers qui l'utilisent et réduire
le risque d'épidémie dû à une
mauvaise qualité de l'eau.
(plus de détail dans Les
alternatives au antibiotiques ­
l'hygiène)

La mise en évidence des bactéries dans l'eau du robinet.
En rouge, la seul colonie de bactéries visible à la surface de la gélose.

        ­Différentes tâches sont visible : elles représentent différents type de bactéries. On les
différencie par leur forme, leur couleur, mais on ne peux pas les identifier seulement grâce à
ça. (ci­dessous ) en bleu, des bactéries se développant sous forme de ramification, et
ressemblant quelque peu à des racines. En mauve, de bactéries jaune/orange translucide.
(ci­dessus ) En rouge, une colonie ronde issue d'une bactérie d'un jaune vif, peut être une
staphylocoque dorée, facilement reconnaissable par sa couleur jaune, proche de la couleur
de l'or. en vert, quelques exemple d'une bactéries très courantes, au vu de la quantité
importante de ces bactéries sur chaque boites de pétri. On peut supposer que ce sont des
bactéries Escherichia Coli, car c'est une des bactéries les plus présente dans notre milieu de
vie. On peut ainsi affirmer qu'il existe des bactéries différentes, avec sûrement des
fonctionnements différents, et par conséquent des antibiotique associé varié, ainsi que leur
mode d'action. (plus d'informations dansRepères ­ les antibiotiques)

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    ­Sur le schéma ci­dessus, les zones entourées en rouge sont les zones touchées par le
doigt. Autour de l'empreinte, un développement bactérien est visible; Pourtant, aucun objet
n'a touché ces zones. Ainsi, seul l'air a pu contaminer la gélose. Il ne faut donc pas tenir
compte de ces zones et ne s'intéresser qu'aux zones touchées par le doigt pour analyser les
résultats. On remarque qu'après un lavage des mains, le nombre de bactéries visible est
bien inférieur aux bactéries visibles sur la boite de pétri contenant une emprunte de doigt
avant lavage. 
Le nombre de bactéries peut donc être réduit par un entretien de l'hygiène de vie.
 
    L'expérience ne permet pas de savoir pourquoi les bactéries sont moins importantes
après un nettoyage des mains. Ont­elles été tuées par l'un des composants de l'eau? Leur
développement a­t­il été stoppé? Ou bien sont­elles simplement évacuées avec les eaux
usées? Ces questions seront étudiées dans la partie : "Les alternatives aux antibiotiques ­
l'hygiène"

https://sites.google.com/site/tpebacterieantibiotique/annexes/manipulations/tp­n­1­mise­en­evidence­de­bacteries 6/6