O USO DA HISTOLOGIA COMO MEIO DE

IDENTIFICAO DE LESES EM PESQUISAS DE REAS

CEREBRAIS EM ANIMAIS: A REALIDADE E O IDEAL NO
NOSSO CONTEXTO

Liliane Maria da Silva

Aluna do curso de Psicologia FAI Adamantina-SP
Agostinha Mariana Costa de Almeida
Orientadora e professora da FAI Adamantina-SP

INTRODUO

PRIMEIRAMENTE, VAMOS DEFINIR O QUE HISTOLOGIA?

Histologia significa o estudo dos tecidos dos vivos de vegetais e animais.

O termo vem do grego hydtos (tecido) +logos
(estudo). So
analisados quesitos como funo, estrutura, origem, evoluo, etc.

O estudo das clulas comeou no sculo XVI, quando os cientistas da poca

inventaram o primeiro microscpio. Era algo rudimentar, pouco preciso
para fazer estudos mais detalhados. Com o avano da tecnologia, o
surgimento do microscpio eletrnico ajudou muito aos histologistas.

Os tecidos observados no microscpio devem ser bastante finos, para que a

luz possa atravessar toda a camada de clulas, e gerar uma boa imagem. O
uso de corantes ajuda na identificao das partes das clulas, como Azul de
Metileno, Fenolftalena, etc.( Fonte: site infoescola /Lucas Martins 2014).

INTRODUO

O processo de uma pesquisa em leses de reas cerebrais, abrange

tcnicas e o procedimento histolgico, uma delas, que norteia todo o
trabalho, atuando tanto como forma de confirmao ou de erros.

A partir dos resultados desse processo, o pesquisador dar

continuidade ou no, ao seu trabalho, porque possibilita com preciso
a localizao da rea da leso em estudo.

O processo envolve que o pesquisador tenha competncias abrangentes

como leitura de microscpio, reas cerebrais envolvidas da fisiologia
animal, domnio em leitura de lminas e compreenso de atlas do
crebro animal.

INTRODUO

Nosso estudo, em andamento, envolve um processo minucioso que

implica em comparao com modelos de lminas do Laboratrio de
Neuropsicologia da USP de Ribeiro Preto, o que nos d parmetro
para o trabalho realizado no Laboratrio de Psicologia Experimental da
FAI, uma das etapas para, a partir dessa leitura, das lminas, prosseguir
a pesquisa na rea cerebral : colculo inferior. A rea que pretendemos
atingir em princpio a Substncia Cinzenta Periaquedutal Dorsal ou
em alguns livros e artigos estar como Matria Cinzenta.

A substncia cinzenta periaquedutal dorsal (SCPd) e o colculo inferior

(CI) so estruturas mesenceflicas, que atuam em coordenao com
outros ncleos, entre eles a amgdala, para organizar comportamentos
defensivos envolvidas na elaborao de respostas de medo e ansiedade
diante de estmulos de perigo.

OBJETIVO

DEMONSTRAR A IMPORTNCIA DO PROCESSO

HISTOLGICO COMO MEIO DE IDENTIFICAO DE
ERROS E ACERTOS EM LESES CEREBRAIS EM
ANIMAIS.

METODOLOGIA

Todos os procedimentos aqui descritos foram autorizados pelo CEUA

FAI sob o
nmero de protocolo 002/11. Para chegarmos ao
procedimento histolgico teremos seguido as seguintes etapas:

CIRURGIA ESTEREOTXICA

CIRURGIA ESTEREOTXICA;

ESQUEMA DOS CORTES CORONAIS DO MAPA

ESTEREOTXICO

METODOLOGIA

Perfuso e microtomia

Aps a cirurgia estereotxica os animais foram pesados e anestesiados, por via

intraperitonial, com soluo anestsica contendo uma mistura de Ketamina e Xilasina
( 0,3 ml para cada 100 gramas do animal) de acordo com o peso corporal e foram
perfundidos por via intracardaca com salina seguida por soluo de formaldedo
10%controlando-se a fixao do tecido pelo volume inoculado e a rigidez da cabea e
dos membros superiores.

Os crebros foram removidos e armazenados em formaldedo 10% por dois dias,

depois colocados em uma soluo de sacarose 30% por mais dois dias, mantidos em
geladeira. No momento anterior microtomia, o encfalo foi dividido em 3 partes,
mediante 2 cortes coronais , utilizando-se navalha para microtomia e sendo
descartado parte do crtex frontal , do cerebelo e do bulbo. Aps o armazenamento
em soluo de formaldedo 10%, os crebros foram cortados.

METODOLOGIA
A seguir, os crebros foram retirados do vibratomo, colocados em
formaldedo a 10% diludo em salina 0,9%, durante 48 horas, submetidos
rotina histolgica e emblocados em parafina. Aps esse processamento
executou-se a microtomia (Micrtomo Leica, Alemanha), obtendo-se os
cortes, que foram corados pelo mtodo Violeta de Cresila.
Sendo os cortes removidos das placas e montados em lminas histolgicas
albuminizadas. Aps a secagem em estufa por 24 horas os cortes foram
recobertos com Entelan e lamnula.
Os critrios utilizados na seleo das lminas para as anlises foram a
integridade do corte histolgico, a boa marcao da rea lesionada a
colorao homognea pelo violeta de Cresila e o reconhecimento das reas
cerebrais, que foi realizado atravs de comparao com um atlas
estereotxico (Paxinos e Watson, 1998).

MATERIAIS UTILIZADOS HISTOLOGIA USP

MATERIAIS UTILIZADOS HISTOLOGIA FAI

FOTOMICROGRAFIA DO CREBRO
ANIMAL USP MODELO

FOTOMICROGRAFIA LESES FAI

CONCLUSES

O procedimento histolgico de grande importncia como meio de

identificao de leses em reas cerebrais em animais por ser nele que
realmente constatamos estar fazendo a cirurgia no local correto.
Com o advento cada vez maior da tecnologia em nossas universidades e
faculdades advm a ideia de que a eficcia de todo o processo depende
de um programa que faa a leitura da lmina com mais preciso que o
olhar humano, o que diferencia um contexto de pesquisa como sendo o
ideal, enquanto isso no acontece, o pesquisador tem que nortear seu
trabalho baseado em modelos e leituras de atlas de fisiologia animal para
concluir suas pesquisas.

REFERNCIAS

Estereotaxia
disponvel
http://www.amorim.eng.br/tese/capitulos/introducao/index.html

FERREIRA, Renata. Alteraes no processamento da informao sensorial auditiva

induzida pela abstinncia ao lcool em ratos: importncia dos mecanismos
GABArgicos e glutamatrgicos do colculo inferior. Dissertao de Mestrado
apresentada Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras de Ribeiro Preto/ USP, 2010.

FILHO, Nicodemos Teles de Pontes. Morfometria e Histoqumica do Crtex Cerebral

Submetidos ao lcool e a Desnutrio. Tese(Doutorado) Universidade Federal de
Pernambuco: Recife, 2003.

MARTINS, Lucas. O que histologia? Disponvel em:

em:

http://www.infoescola.com/biologia/o-que-e-histologia/

PAXINOS, George, WATSON, Charles. The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. 4 ed.
New York: Academic Press, 1998.