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1re STL

Fiche technique n5

COLORATION AU BLEU DE METHYLENE


1. Principe
La coloration au bleu de mthylne (BM) est une coloration trs simple qui permet dobserver
les bactries, les champignons, mais aussi les cellules qui sont en gnral mieux conserves
quavec la coloration de Gram. Elle permet de renseigner sur :
- la forme des bactries
- la taille
- le mode de regroupement
2. Technique

Raliser un frottis et le fixer.


Recouvrir la lame de bleu de mthylne phniqu, 1 2 minutes.
Rincer leau distille.
Scher la lame entre 2 feuilles de papier Joseph.
Observer lobjectif x100 limmersion dans lhuile et pleine lumire.

COLORATION DE GRAM
1. Principe
La coloration de Gram permet de distinguer les bactries Gram ngatif qui apparaissent
roses et les bactries Gram positif qui apparaissent violettes. Cette diffrence de
coloration est lie des diffrences de nature de la paroi bactrienne.
Elle permet de renseigner sur :
- Le type Gram + ou Gram - la forme des bactries
- la taille
- le mode de regroupement
2. Technique

Raliser un frottis et le fixer.


plonger la lame dans le violet de gentiane (ou cristal violet) phniqu pendant 1
minute.
laver la lame leau distille.
plonger la lame dans une solution de lugol pendant 1 minute
Laver leau distille
Dcolorer dix secondes lalcool.
RINCER IMMEDIATEMENT A LEAU DISTILLEE
plonger la lame dans la safranine (ou la fuchsine) phnique pendant 1 minute
laver la lame leau distille.
Scher la lame en la tamponnant avec du papier Joseph.
Observer lobjectif x100 limmersion dans lhuile et pleine lumire.