Senzori i biosenzori folosii n laboratoarele de analize medicale

Capitolul I. Senzori. Clasificarea i caracterizarea senzorilor.

I.1.Senzorii
Senzorii sunt dispositive care sesizeaz variaia unui parametru din sistem
prin emiterea de semnal corespunztor, corelat cu mrimea (intensitatea)
parametrului respectiv. Se mai numesc traductoare si cele care au o construc ie
mai complex (care include i alte elemente auxiliare).
Senzorii (traductoarele) au rolul de a transforma anumii parametri ai
sistemului n mrimi de alt natur. Parametrul de transformat formeaz
semnalul de intrare al traductorului, iar cel transformat semnal de ieire.
I.2.Clasificarea i caracterizarea senzorilor
Dup principiul de funcionare senzorii se mpart n:
1.
2.
3.
4.

senzori electrochimici
senzori optici
biosenzori
alte tipuri de senzori
Principalele caracteristici primare ale senzorilor (traductoarelor) sunt
urmtoarele:

funcia de transfer
sensibilitatea (limita de detecie)
selectivitatea (specificitatea)
stabilitatea
timpul de rspuns
1

 gradul de participare al senzorului

sigurana n exploatare
economicitate
Funcia de transfer reprezint expresia relaiei dintre semnalul de intrare
i semnalul de ieire al senzorului
Sensibilitatea (limita de detecie) este reprezentat de concentraia cea
mai sczut n specia urmrit, care conduce la apariia unui semnal care poate fi
distins de semnalul obinut prin msurtori paralele n probele martor
Selectivitatea se refer la efectul interferenelor cauzate de ioni sau
molecule, altele dect specia urmrit
Stabilitatea se refer la modificarea performanelor traductoarelor n
timp din cauza unor diveri factori
Timpul de rspuns reprezint decalajul n timp dintre variaia semnalului
de intrare i variaia corespunzatoare semnalului de ie ire a traductorului
respectiv
Gradul de participare al senzorului aceast caracteristic trebuie s fie
redus datorit eliminrii perturbaiilor cauzate de prezena senzorului n sistem
Sigurana n exploatare presupune asigurarea unui grad de fiabilitate a
sistemului de msur, care este garantat de productor pentru o anumit durat
de funcionare a traductorului i este de dorit s fie ct mai mare.
Fiabilitatea sistemului de msur este definit ca numrul maxim de
defeciuni a sistemului ntr-un anumit interval de timp. n aceste condi ii,
traductorul trebuie s realizeze msurarea mrimilor dorite n conformitate cu
caracteristicile stabilite de productor.
Capitolul II. Biosenzori. Clasificarea i caracterizarea biosenzorilor.
Alctuirea unui biosenzor
2

II.1.Biosenzori
Sunt senzori care au o interfa de natur biologic sau biochimic, care
este foarte selectiv la prezena n mediul de analizat a unui compus specific, ce
poate fi determinat prin detecia semnalului obinut prin interaciunea dintre
acest compus i biointerfaa respectiv. La rndul lor, biosenzorii se pot clasifica
dupa mai multe criterii.
Biosenzorii sunt detectori ce se bazeaz pe molecule selective ce intr n
componena plantelor i animalelor.
Un biosenzor poate fi definit ca un dispozitiv, de obicei electronic, care
folosete moleculele de interes biologic pentru a detecta molecule specifice.
Biosenzorul const dintr-un element biologic imobilizat pe un senzor fizicochimic clasic care transforma informaia chimic ntr-un semnal care poate fi
electric, optic, termic, etc.
II.2.Clasificarea i caracterizarea biosenzorilor
Clasificarea biosenzorilor se poate realiza dup mai multe criterii:
dup tipul traductorului folosit n prelucrarea informaiilor preluate de la
elementul biologic:
1. biosenzori realizai pe baza senzorilor electrochimici (poteniometrici,
2.
3.
4.
5.

amperometrici, conductometrici)
biosenzori realizai pe baza unor senzori termici
biosenzori optici
biosenzori piezoelectrici
biosenzori manometrici
3

 dupa tipul elementului (substratului) biologic:

1. Biosenzori de afinitate - analitul nu se modific chimic n timpul msurtorii. El
doar se leag de receptor. La sfrit el poate fi ndeprtat chimic sau prin splare
2. Biosenzori de metabolism - aici substratul biologic se consum printr-o reacie
chimic cu analitul. Se formeaz un nou produs. Starea iniial se poate reface
dup completa consumare a analitului
3. Imunosenzori - detectarea substanelor de tip antigen (Ag) se face cu ajutorul
anticorpilor (Ac), pe principiul "lact-cheie". Anticorpii sunt proteine cu
molecule n form de Y (numite imunoglobuline). n vrfurile Y-ului sunt doar
dou locuri, unde se poate leaga un singur tip de antigen. Aceti anticorpi sunt
produi de organism ca rspuns la o anumit substan strin (antigen), pe care
nu o poate elimina prin fagocitoz i creia, n ultim instan, i "ncurc
planurile", legndu-se de ea: Ac+Ag AcAg
4. Senzori biomimetici - cu ajutorul acestor senzori se detecteaz semnale fizice
(sunet, stres mecanic, lumin) pe baza interaciunii lor cu substratul biologic
activ (receptorul)
dup analiii sau reaciile pe care le monitorizeaz :
1. monitorizarea direct
2. monitorizarea indirect
Un biosenzor adecvat ar trebui s posede cel putin urmtoarele
caracteristici :
biocatalizatorul trebuie s fie nalt specific pentru scopul analizei
s fie stabil n condiii de depozitare normale
rspunsul lui trebuie s fie exact, precis, reproductibil i liniar pe domeniul
analitic
s nu aiba efecte antigenice sau toxice
trebuie s fie ieftin, mic, portabil i capabil de a fi utilizat chiar de operatori mai
puin dotai
4

II.3.Alctuirea unui biosenzor

Indiferent de complexitatea lui un biosenzor este alctuit din trei pr i
principale :
I.

Elementul biologic sensibil (material biologic - esut, microorganism, celule,

enzime, anticorpi, acizi nucleici sau material obinut prin intermediul tiinelor
inginereti)

II.

Traductorul sau detectorul (optic, pizoelectric, electrochimic) care transform

semnalul rezultat din interaciunea analitului cu elementul biologic ntr-o
mrime fizic uor de msurat i cuantificat

III.

Sistemul de msurare si prelucrare a semnalelor senzoriale, astfel ca rezultatele

obinute s poat fi exprimate ntr-un mod simplu i cunoscut
Capitolul III. Biosenzorii i modul lor de utilizare n testele rapide pentru
determinarea prezenei anumitor enzime, anticorpi sau antigeni n biolichidul
uman
III.1.Biolichidul. Etapele unei recoltrii corecte
Prin denumirea de biolichid uman ne referim la toate lichidele care se
regsesc sau sunt produse de corpul uman. Reamintim unele dintre cele mai
importante care se folosesc n practica curent n centrele de analize medicale
din ar i strintate ; acestea sunt :
snge este cel mai abundent biolichid al organismului ; ocupa 6%-7% din
totalul de mas corporal i este mparit n : plasm-55% i elemente celulare

(figurate)-45% ; de la snge putnd fii folosit serul sau plasma

urin
saliv
lichid cefalorahidian
lichid amniotic (folosit doar n screeningul parental)
i ultimul chiar dac nu se ncadreaz n aceast categorie este materialul fecal
5

n cadrul centrelor de recoltare i efectuare analize medicale trebuie

urmrite anumite etape care sunt obligatorii pentru asigurarea unor rezultate
bune i corecte al analizelor efectuate .
Aceste etape const n pregtirea pacientului i recoltarea corect a
materialelor biologice ceea ce nseamn c noi i pacientul nu am fost supu i la
nici un risc de mbolnvire sau infectare cu anumii virui.
Etapele de urmrit sunt :
I.

pregtirea pacientului :
recoltarea se face a jeun (pe nemncate)
recoltarea se face n eprubete special alese pentru tipul de analiz care urmeaz a
fi efectuat
naintea efecturii unor analize este de preferabil a se evita consumul de alcool
cu cel puin 24-48 de ore naintea recoltrii

II.

recoltarea corect :
este obligatoriu folosirea mnuilor de unic folosin
recoltarea se va face strict n eprubetele necesare deoarece anumite eprubete pot
s conin anticoagulante care pot afecta materialul recoltat
se vor respecta specificaiile pentru fiecare eprubet n parte (cu sau fr
centrifugare, viteza de centrifugare, timpul de centrifugare, cu sau fr agitare
naintea efecturii analizei propiu-zise)
n timpul efecturii analizelor se vor purta mnui i masc de protec ie pentru
evitarea contactului direct cu materialul biologic care poate fi infectat
Biosenzorii au un rol foarte important n anumite analize deoarece
capacitatea lor de a fi rapizi, selectivi, uor de folosit i ieftini au condus la o
invazie pe pia n domeniul test kit-urilor sau testelor rapide.
6

Vom aduce n discuie cteva tipuri de teste care au la baz biosenzori :

testele de sarcin
testele pentru hepatita B i C
testele pentru infecia cu HIV 1 i HIV 2
testele pentru detectarea de anticorpi i antigeni n cazul Helicobacter Pylori
testele pentru consumul de produse halucinogene sau droguri
testele pentru malarie
testele pentru markeri tumorali
testele pentru markeri cardiaci
testele pentru boli cu transmitere sexual
testele pentru hormoni FSH i LH

III.2.Alctuirea unui test screening

Un test rapid (de tip screening) este alctuit din urmtoarele componente:
o membran din nitroceluloz (dipsticks) pe care se depune biosenzorul i n
acelai timp pe ea se va face i testul propiu zis prin pipetarea materialului
biologic pe membran n zona de start care funcioneaz ca un rezervor datorit
unui tip de fitil pulverizat cu latex
este necesar ca picturile s se adauge treptat i s se atepte absorbia picturii
anterioare naintea pipetrii urmtoarei picturi
unele teste pot s aib dipsticksul ncastrat ntr-un suport (carcas) de plastic
care are rol estetic dar i funcional deoarece pe carcas este imprimat numele
testului, are o zon delimitat special pentru scrierea ID-ului pacientului, astfel
nct s nu se ncurce rezultatele n cazul n care mai muli pacieni au acela i
test de efectuat, ajut la pipetarea mai exact a biolichidului deoarece are o zon
bine delimitat pentru aceasta aciune i de asemenea pe aceste carcase plastice
se gseste o fereastr inscripionat cu literele C (CONTROL) si T (TEST)
astfel ajutnd la citirea mai rapid i mai exact a rezultatelor obinute n urma
analizei efectuate

III.3.Caracteristicile unui test de tip dipsticks

Cele mai importante caracteristici ale unui test de tip screening sunt
urmtoarele:
sensibilitate reprezint nivelul de la care testul depisteaz i afi eaz
schimbrile care au loc la nivelul biosenzorului integrat
specificitatea reprezint probabilitatea de a avea testul negativ, atunci cnd eti
sntos
selectivitate const n faptul c biosenzorul este special conceput pentru a
recunoate un singur tip de rdcin n cazul n care virusul pentru care se
efectueaz analiza are mai multe rdcini
timpul necesar pentru efectuarea analizei este incomparabil mai mic, fa de
metodele clasice (de exemplu metoda Elisa), astfel dac pentru metodele clasice
pot fi necesare i 48 de ore pentru metodele care funcioneaz pe baz de
biosenzor sunt necesare maxim 30 de minute
simplitatea de operare cu cerine de instruire minime pentru utilizatori
portabilitatea testelor, ele fiind uor de transportat i de efectuat
pre de producere i utilizare relativ mic fa de alte metode senzoriale i
biosenzoriale

III.4.Descrierea i modul de utilizare a testelor rapide (screening)

n continuare vom prezenta descrierea i modul de utilizare a celor mai
folosite tipuri de teste dintre cele amintite mai sus:
1. Test de sarcin se efectueaz atunci cnd exist suspiciunea unei sarcini i este
bazat pe nivelul de hCG (gonadotropin corionic uman) are urmtoarele
caracteristici:

 lichidul biologic folosit poate fi att urina ct i serul persoanei testate (pentru
obinerea serului se recolteaz snge intr-o eprubet fr anticoagulant care se
pune la centrifugare pentru 3 minute la viteza de 3000 rotaii/minut)
testul se poate efectua n oricare moment al zilei dar este recomandat efectuarea
acestuia dimineaa deoarece concentraia de hCG este mai mare n acest moment
al zilei
sensibilitatea testului este de 20 mIU/mL iar specificitatea testului este mai
mare de 96%
volumul necesar de prob este de aproximativ 0,15 mL-0,2 mL
timpul de ateptare a rezultatului este de 5 minute, i nu se recomand citirea
rezultatelor dup o perioad mai lung de 10 minute
interpretarea rezultatului este simpl i const n citirea macroscopic a testului
care poate fi pozitiv sau negativ, acest lucru fiind indicat de dungile colorate
care apar n fereastra de citire; astfel o singur dung n zona de control
nseamn c testul este negativ, doua dungi una n zona de control i una n zona
de test nseamn c avem un test pozitiv, iar lipsa ambelor dungi sau prezen a
dungi doar n zona de test ne arat c testul este invalid i trebuie repetat cu
ajutorul altui test
2. Test Hepatita B i C este un test imunologic care se efectueaz n cazul
suspiciunilor de infectare cu una dintre cele doua hepatite B sau C i prezint
urmtoarele caracteristici:
lichidul biologic folosit poate fi serul sau saliva persoanei testate
efectuarea testului are loc dimineaa pe nemncate
sensibilitatea testului este de 20 mIU/mL n cazul ambelor teste iar specificitatea
este de 98%-99%
volumul necesar de proba difer: dac la testul pentru hepatita B (Anti-HBs) este
necesar 0,1 mL; iar la hepatita C (Anti-HCV) este necesar 0,01 mL i 0,1 mL0,12 mL buffer (se gsete n componena kitului pentru hepatita C)
timpul de ateptare este cuprins ntre 5-10 minute i nu se recomand citirea
rezultatelor dup o perioad mai lung de 30 minute
interpretarea rezultatelor se efectueaz la fel ca la testul de sarcin
9

3. Test HIV - este un test imunologic ce verific prezena virusului HIV (virusul
imunodeficienei

umane)

este

agentul

etiologic

al

SIDA (sindromul

imunodeficienei dubndite), este un retrovirus care are capacitatea de a infecta

i distruge limfocitele T helper. Exist dou tipuri de HIV difereniate n func ie
de zona geografic i ale altor caracteristici: HIV-1 este mai virulent, severitatea
infeciei variaz de la o persoan la alta iar acest virus este responsabil pentru
epidemia global actual pe cnd HIV-2 a fost descoperit iniial n vestul Africii,
transmiterea lui nu este la fel de eficienta ca la HIV-1; iar genomul viral este ma
nrudit cu genomul SIV (virusul imunodeficienei simiene)
materialul biologic folosit poate fi serul sau saliva persoanei testate
testul se efectueaza a jeun
sensibilitatea este mai mare de 99% iar specificitatea este foarte ridicat avnd
valoare de 99%
volumul necesar este 0,12 mL fr a se aduga buffer sau alte soluii
timpul de ateptare este relativ mic, adic 5-10 minute i se recomand citirea
rezultatelor in primele 30 de minute
interepretarea rezultatelor se face la fel ca n cazurile prezentate mai sus
4. Test Helicobacter Pylori - este un test rapid imunologic, cromatografic pentru
determinarea calitativ a anticorpilor anti-H.pylori
lichidul pe care se efectueaz anliza este serul persoanei testate dar se poate
efectua i pe materiale fecale
testul se efectueaz a jeun
sensibilitatea si specificitatea acestui test sunt ncadrate n jurul valori de 98%
volumul de ser luat n lucru este de 0,01 mL peste care se se adaug 0,1mL0,12mL de diluant (buffer) care vine n componena kitului de testare
citirea rezultatelor se face n intervalul 10-20 minute; nu se efectueaz citirea
dup o perioad mai lung de 30 minute
interpretarea rezultatelor este simpl

10

5. Test consum produse halucinogene i droguri- testul este unul de tip sandwich i
imunocromatografic;

ajutnd

la

determinarea

calitativ

produselor

halucinogene sau a drogurilor

materialul biologic este reprezentat de urina pacientului
testul se poate efectua n orice moment al zilei dac exist suspiciunea de
consum de droguri
sensibilitatea variaz n funcie de drogul pentru care se face analiza i are valori
cuprinse ntre 50ng/mL-2000ng/mL iar valorile specificiti variaz i ele ntre
93%-99%
volumul de urin folosit este de 0,2 mL per analiz
rezultatele se citesc dup 10 minute dar nu mai trziu de 30 minute
interpretarea rezultatelor se face rapid
6. Test malarie este destinat determinrii antigenului Malaric P.falciparum/Pan
din snge i este bazat pe metoda imunocromatografic de tip sandwich.
materialul biologic pe care se efectueaza analiza este sngele care trebuie
recoltat ntr-o eprubet special cu anticoagulant
testul se efectueaz a jeun (pe nemncate)
sensibilitatea si specificitatea au aceeai valoare i anume mai mare de 99%
volumul de snge utilizat este de 0,005 mL peste care se adaug 0,12 mL de
diluant care se gasete n kitul de testare
rezultatele se citesc dup 15 minute dar nu mai mult de 30 minute
interpretarea este puin diferit, astfel: avem doua zone de test i una de control,
aa c atunci cnd vom avea doar o dung n dreptul zonei de control testul va fi
negativ, cnd vom avea dou dungi prezente una n zona de control i una n
zona de testare unu va fi pozitiv pentru P.falciparum, cnd vom avea dou dungi
prezente una n zona de control i una n zona de testare doi va fi pozitiv pentru
Pan, iar n cazul n care avem toate cele 3 linii roz prezente testul va fi pozitiv
att pentru P.falciparum ct i pentru Pan. Absena oricrei linii sau absena
liniei din zona de control ne arat c testul este invalid

11

7. Test markeri tumorali test imunocromatografic de tip sandwich destinat

determinrii markerilor tumorali n snge
materialul biologic folosit este serul pacientului
testul este efectuat a jeun
sensibilitatea variaz n funcie de tipul markerului tumoral ntre 5ng/mL25ng/mL iar specificitatea variaz ntre 98%-99%
volumul de snge este de 0,2 mL per analiz
rezultatele se citesc dup 10-20 minute dar nu mai mult de 30 minute
interpretarea acestora este simpl
8. Test pentru markeri cardiaci test imunocromatografic pentru determinarea
calitativ a markerilor cardiaci n ser pentru diagnosticarea infarctului miocardic
materialul biologic folosit este serul pacientului
testul este efectuat a jeun
sensibilitatea variaz n funcie de tipul markerului cardiac ntre 0,5ng/mL50ng/mL iar specificitatea variaz ntre 90%-97%
volumul de snge este de 0,1 mL per analiz
rezultatele se citesc dup 15 minute dar nu mai mult de 20 minute
interpretarea acestora este simpl, la fel ca la testele precedente
9. Test boli cu transmitere sexual altele dect HIV n aceast categorie se
ncadreaz sifilisul si gonoreea. Ambele teste sunt imunocromatografice de tip
sandwich
materialul biologic folosit este serul pacientului n cazul sifilisului i secreii
urogenitale n cazul gonoreei
testul este efectuat a jeun si n cazul testului pentru gonoree este necesar o
splare a zonei urogenitale cu 12 ore naintea efecturii testului
sensibilitatea variaz n funcie de tipul testului cu valori ntre 1*10 8 CFU/mL n
cazul gonoreei si mai mare de 99% n cazul sifilisului iar specificitatea are
valoarea de 99%
volumul de snge este de 0,05 mL de ser i 0,04 mL diluant n cazul sifilisului
iar n cazul gonoreei tamponul cu secreii se introduce ntr-o eprubet peste care
se pune 0,3 mL diluent 1 iar dup stoarcerea i aruncarea tamponului se adaug
12

0,1 mL diluent 2; din aceast soluie obinuta se folosesc 0,2 mL pentru

efectuarea analizei
rezultatele se citesc dup 10-20 minute dar nu mai mult de 30 minute
interpretarea acestora este simpl, la fel ca la testele anterioare
10. Test pentru hormoni LH i FSH aceste teste const n determinarea
hormonului luteinizant sau a hormonului foliculo stimulator uman i au la baz o
metod calitativ, imunocromatografic de tip sandwich
materialul biologic folosit este urina pacientului
testul este efectuat a jeun
sensibilitatea variaz n funcie de tipul hormonului ntre 25mIU/mL-30mIU/mL
iar specificitatea are valoarea de 99%
volumul de snge este de 0,2 mL per analiz
rezultatele se citesc la 10 minute, nu se mai citeste rezultatul dup un interval
mai mare de 10 minute
interpretarea acestora este simpl

BIBLIOGRAFIE
1.
2.
3.
4.

http://www.campmedica.ro/teste-rapide-pentru-diagnostic-in-vitro.html
http://documents.tips/documents/biosenzori-55cd8a706c2f0.html
https://www.synevo.ro/antigen-helicobacter-pylori-din-materiile-fecale/
https://www.synevo.ro/helicobacter-pylori-anticorpi-igg/
13

5. https://www.synevo.ro/anti-hiv12/
6. www.arh.pub.ro/cravariu/Biodispozitive.doc
7. http://iota.ee.tuiasi.ro/~emse/Senzori%20si%20traductoare%20in
%20monitorizarea%20mediului.pdf

14