Determinarea concentratiei unei solutii prin metoda spectrofotometrica Metoda spectrotote: etriea este 0 metoda prin care se determina concentratia unei solutii in laborator. Ea face parte dintr-o clasa larga de metode (metode spectrometrice) care inregistreaza si masoara spectrele electromagnetice, Principiul metodei In lumea vie, lumina este absorbita si transformata in energie. In cazul plantelor, acest proces este cunoscut sub numele de fotosinteza. In nici un caz ele nu reprezinta singura specie sau singurele obiecte care fac acest lucru. Intr-adevar, toate materialele organice sau anorganice sunt capabile sa absorba lumina. In toate cazurile, absorbtia depinde de freeventa electromagnetica a luminii transmise (de exemplu culoarea) si natura atomilor materialului, Daca acestea sunt complementare, lumina va fi absorbita, in cazul in care acestea nu sunt, atunci lumina va fi reflectata sau transmisa. In cele mai multe cazuri, aceste procese au loc simultan si cu grade diferite, deoarece lumina este de odicei transmisa la freevente diferite. Prin urmare, cele mai multe obiecte vor absorbi selectiv lumina in timp ce, transmit si / sau reflecta o parte din ea. Ori de cate ori se produce absorbtia, este generata energia termica. Asadar, absorbtia depinde de starea unui electronilor materialului. Toti electronii vibreaza interactioneaza cu un atom cu la frecvente specifice. Atunci cand lumina, sub forma de fotor aceeasi freeventa, electronii din atom vor deveni excitati si vor intra intr-o miscare de vibratie naturala. In timpul acestei vibratii, electronii din atom interactioneaza cu atomii vecini, in asa fel incat sa transforme aceasta energie vibrationala in energie termica. Datorita freeventelor diferite devi iv freeventele diferite ale luminii vizibile (citi Suntem acum in masura sa determinatn proprietatile si compozitia materiala a unui obiect prin observarea fr e ale lumini ventelor spe pe care este capabil sa le absoarba. Intrucat unele ‘materiale sunt opace la unele lungimi de unda ale luminii, ele sunt transparente pentru altele. Lemnul, de exemplu, este opac a toate formele de lumina vizibila. Sticla si apa, pe de alta parte sunt opace la lumina ultravioleta, dar transparente la lumina vizibila,Inregistrator, microamperpetru gradat in unitati liniare de transmisie si unitati logaritmice de entictie. Se determina indicele de refractie al apei. Se introduce in cuva aparatului recipientul eu apa distilata, Cuva (se gaseste in cutiuta de pe aparat) este in asa fel construita incat poate fi introdusa inte-o pozitie exacta, Se alege 4 (lungimea de unda) din butonul 1. Comutatorul de la sursa in pozitia 0 obtureaza fanta dinspre proba a aparatului, astfe! incat la folocelula nu ajunge lumina, In aceste conditii aparatul trebuie sa indice T = 0. Daca nu indica, aducem acul indicator la 0 din butonul 3, Cu comutatorul in pozitia I se deschide drumul luminii prin eprubeta cu solvent spre fotocelula. Vom considera ca solventulnu absoarbe lumina, aparatul de masura trebuind sa indice T= 100%. In cauzul in care nu se intampla acest lucru vom aduce acul indicator in dreptul indicatiei 100 din butonul 4. Fig. 1. Spectrofotometral Spekol (vezi text) _ Dupa ce am efectuat reglarile de 0 si 100 introducem pe rand eprubetele cu solutiile etalon de acridin orange (AO) si citim extinsiile. Citirile se fac in regiunea 420-540 din 5 in 5 nm, La modificarea lungimilor de unda toate reglarile trebuiesc refacute. Cu datele masurate vom trasa curbele de absorptie pentru fiecare concentratie (c) in parte dar pe acelasi grafintensitatea luminii emergente din proba = coeficient specific de absorbtie = concentratia substantei absorbante = grosimea probei Absorbanta sau densitatea optica reprezinta raportul logaritmic a radiatiei luminii emergente si radiatia luminii transmise. Hf A=-—log10— ly Pentru a identifica natura compusilor dintr- proba trebuie sa trasam un grafie de tipul: A= f(A). Cand trasam o asfel de curba trebuie sa ne asiguram ca timpul inregistratii ceilalti parametti nu se modifica (natura probei, concentratia si grosimea ei). Daca respectam aceste conditii forma curbei lepinde doar de natura ei. Ea se numeste curba de absorptie. Nu e ‘a doua substante care sa aiba exact aceeasi curba de absorptie. Mod de lueru Vom folosi un spectrofotometru in domeniul vizibil (Fig. 1), solutii de acridin -orange, etalon (cu concentrat unoscute) si o soluti e cu concentratii ce urmeaza sa fie determinata. Speetrofotometrul contine: sursa de radiatii care trebuie sa emita toata toate lungii ile de unda A din domeniul investigat (in acest caz un bec cu ineandescenta ce emite lumina alba), Monocromator, care alege din ce emite sursa o singura lungime de unda (poate fi cu prosma, cu retea de diffactie sau filtre). Detectorul care transforma lumina in curent electric, in acest caz este o fotocelula, Amplificator