Analize clinice. Importan.

Organismul uman reprezint un sistem biologic extrem de complex. Funcionarea lui

normal reflectat prin starea de sntate, este rezultatul unor numeroase procese fizico-chimice,
care decurg unele din altele, sau care se desfoar n paralel, inhibndu-se sau stimulndu-se
reciproc. Orice abatere de la starea de echilibru, orice tulburare a funciilor normale, reprezint
un aspect patologic. Restabilirea funciilor normale constituie obiectul terapiei medicale.

Informaiile necesare se obin cu metode chimice analitice. Obinerea

informaiilor analizei presupune: detecia, identificarea i determinarea
cantitativ a componenilor.
Sursa de informare analitic (proba supus analizei materialul biochimic
sau lichidul biologic) conine mai muli componeni, care pot da semnal direct sau
unificat (aditiv semnal mare deoarece reprezint o sum a tuturor componen ilor,
precum i neaditiv unii dau semnal pozitiv, alii negativ).
Rezultatele analizei se obineau n trecut calitativ. Majoritatea
diagnosticelor erau puse pe baza simptomelor sau (i) cu ajutorul razelor X de i se
cunotea faptul c o serie de boli produceau modificri chimice n lichidele
metabolice. Se utilizau o serie de teste pentru a depista componenii normali i
anormali pe diferite probe recoltate, teste care au fost ulterior transformate n
metode cantitative de determinare.
Dac aceste analize se execut corect i se interpreteaz judicios, ele pot fi
folosite pentru stabilirea strii fiziologice sau patologice a unui organism.
Pentru examinarea medical general a unui bolnav sau pentru a diagnostica
complet un ansamblu specific de simptome se recurge la o serie de analize
cantitative ale unor probe recoltate din corpul uman.
Analizele medicale sunt un ansamblu de procedee, tehnici sau metode care
furnizeaz informaii asupra aspectului i funcionalitii unor organe sau
compartimente ale organismului. Ele dau informaii i asupra gradului de boal sau
sntate ce afecteaz organismul prelungete simurile medicului.
Analizele medicale sunt foarte variate pentru c foarte variat este i
funcionalitatea organismului uman cea mai complex ma in biologic creeat
de natur.
Laboratoarele medicale sunt de diferite profiluri:
1

 Laboratorul clinic studiaz calitativ i cantitativ diveri constitueni

ai produselor biologice normale i patologice (snge, urin, LCR,
sput);
Laborator de morfopatologie vizualizeaz structura organelor i
esuturilor;
Laborator de endoscopie prin tehnica endoscopiei se poate privi pe
viu n interiorul unor organe cavitare (stomac, bronhii);
Laborator de electrocardiografie nregistreaz potenialele electrice
ale inimii;
Laborator de encefalografie nregistreaz potenialele electrice ale
creierului;
Mai exist laboratoare care folosesc diferii ageni ca raze X (radiologie),
radioizotopii (laborator de medicin nuclear), ultrasunete (laborator de ecografie).
Diversitatea metodelor de investigare face ca n prezent s existe sute de
analize medicale.
Analizele constituie doar un mijloc pentru a se ajunge la diagnostic.
Laboratorul clinic aici se examineaz diferite produse ale bolnavilor
pentru diagnosticarea bolii sau pentru depistarea unor boli de larg rspndire.
Aceste produse examinate sunt foarte diferite, unele se gsesc n mod normal la
orice individ: snge, urin, LCR, altele doar n caz de boal: puroi, secreii, lichid
pleural etc.
Majoritatea analizelor clinice includ determinri de compu i minerali sau
organici: uree, glucoz, acid uric, Ca, Mg, Na, K; pH. Orice analiz fcut n
laborator ncepe cu recoltarea probelor, etap foarte important, de efectuarea ei
corect depinznd n mare msur rezultatele analizei.
Rezultatele ce apar n laboratorul clinic se pot exprima cifric i descriptiv,
cele descriptive sunt de cele mai multe ori imagini care au valoare n stabilirea
unui diagnostic.
Rezultatele cifrice pot fi afectate de erori care se pot datora reactivilor,
aparaturii sau executrii defectuoase a tehnicii de lucru.
Factorii care influeneaz rezultatele analizelor
Un examen de laborator efectuat n timpul vieii unui individ poate da
valori diferite n funcie de starea de sntate sau de boal a organismului.
2

Cu civa ani n urm, problema variaiilor fiziologice era, cel mai

adesea, ignorat cnd se interpreta un examen de laborator. Astzi sunt studiate cu
atenie toate cauzele de fluctuaie a rezultatelor i se cerceteaz influen a factorilor
de variaie, legai fie de metod, de condiiile de prelevare sau de diferen ele intrai interindividuale.
Examenul biologic care urmrete variaiile fiziologice demonstreaz
faptul c acestea sunt de amplitudine mai mic dect variaiile patologice. Este deci
necesar precizarea riguroas a limitelor n care se ncadreaz populaia sntoas
i stabilirea de intervale de referin. n aceste condiii cunoaterea variaiilor
biologice i a factorilor care afecteaz concentraia diverilor componen i ai
organismului uman este indispensabil. Trebuie subliniat faptul c conceptul de
valori de referin nu poate fi aplicat dect subiecilor sntoi i deci este necesar
s cunoatem biologia omului sntos.
Pentru o interpretare mai bun a analizelor de laborator trebuie s inem
seama de factorii care pot influena rezultatele analizelor.
Din punct de vedere didactic putem distinge dou surse de variaii:
- variaii analitice;
- variaii biologice.
Variaii analitice
Lucrrile lui Statland i Winkel au pus n eviden cele dou componente
principale ale variabilei analitice:
- eroarea preinstrumental
- eroare instrumental
Variabila analitic preinstrumental depinde de toate sursele de variaii
cauzate de la recoltarea probei pn la determinare, cum sunt:
= pregtirea bolnavului
= recoltarea probelor: trebuie s se in cont de ora recoltrii, felul
sngelui (venos, arterial, capilar), aplicarea garoului sau nu, poziia bolnavului,
anticoagulantului utilizat.
= pregtirea probelor pentru analiz: trebuie s se in cont de timpul de
la prelevarea probei pn la centrifugare i de utilizare sau nu a conservanilor.
Variabila analitic instrumental este eroarea analitic datorat metodelor
de dozare.
Variaiile analitice trebuie meninute constante i la un nivel sczut pentru
a mri incertitudinea n momentul evalurii unui rezultat individual n intervalul de
referin.
3

Variabilitatea biologic deriv din diferitele surse. Clasificarea factorilor

de variaie biologic se efectueaz cu greutate. S-a propus clasificarea lor n
variaii genetice i dobndite, variaii datorate mediului, n variaii datorate
factorilor exogeni i endogeni.
Dac inem cont de diferenele de concentraie plasmatic a unor
constitueni, putem distinge dou grupe de factori fiziologici:
- factori de mas: importana masei musculare, adipoase, hepatice,
care este determinat de exemplu, pentru nivelul anumitor enzime
care provin din aceste esuturi;
- factori metabolici: acioneaz pe substratele care sufer variaii
rapide i sunt supuse reglrii hormonale i nervoase.
innd cont de faptul c procesul de reglare intervine foarte net asupra
variaiilor fiziologice, putem distinge 3 categorii de constitueni:
- constitueni foarte bine reglai (electroliii, albuminele), cei care nu
variaz dect foarte puin;
- constitueni cu variaii importante (de exemplu produii finali ai
catabolismului, ca ureea, uraii sau enzimele eliberate din esuturi);
- constitueni implicai parial n mecanisme de sintez (glucoza,
colesterolul) care sufer variaii medii.
Deci este important s se cunoasc i mecanismele biochimice i
fiziologice care stau la baza variaiilor biologice, ca de exemplu mecanismul de
ieire a enzimelor, timpul de njumtire al diverselor substane etc.
Deoarece aceti factori, dup cum am vzut, sunt greu de clasificat, n
continuare vom descrie factorii mai importani care pot influena rezultatele
analizelor.
Vrsta
Variaiile n funcie de vrst sunt bine cunoscute. n primul rnd trebuie
s menionm concentraiile hormonilor care sufer variaii datorit creterii, de la
nou nscut la copil i la adult.
Se cunoate, de asemenea, variaia colesterolului i a ureei. n ultimul
timp s-a constatat c i activitatea fosfatazei alcaline variaz funcie de vrst.
Sexul
Numeroi constitueni plasmatici au concentraii diferite n funcie de
sex. Dintre acetia enumerm doar civa: hemoglobina, hematocritul fierul,
cuprul, trigliceridele etc.
4

La femei amilaza, transferina au concentraii mai crescute, pe cnd la

brbat activitatea fosfatazelor alcaline, transaminazelor, ureei i uratului sunt mai
crescute.
Rasa
S-a constatat c la rasa neagr concentraia plasmatic n trigliceride,
potasiu i sodiu este mai crescut dect la albi, iar concentraia n acid uric este
mult mai crescut la anumite populaii din Oceania.
Stri fiziologice deosebite: sarcin, menopauz, menstruaie.
S-a constatat, n primul rnd, o modificare a concentraiei hormonale,
care atrage dup sine i alte modificri.
n timpul sarcinii printre variaiile importante cauzate de aceast stare, pe
lng variaiile hormonale, amintim scderea albuminelor plasmatice, a calciului
care este legat de acestea, a imunoglobulinelor, glucoza, acidul uric, hemoglobina
i eritrocitele, a vitaminei C. Se observ o cretere a proteinelor care transport
hormonii, a activitii fosfatazei alcaline care crete de dou ori prin aportul
fosfatazei alcaline placentare. Mai cresc: colesterolul, trigliceridele, fosfaii i
volemia.
n menopauz scade mai nti progesteronul, apoi estrogenii. Tot n
menopauz crete net activitatea fosfatazei alcaline, concentraia plasmatic a
calciului, colesterolului, acidului uric.
n timpul menstruaiei, pe lng hormonii implicai n ciclu, apar
numeroase variaii ale aldosteronului, acizilor aminai, colesterolului i
magneziului.
Alimentaia poate interfera dozarea colorimetric a anumitor
constitueni datorit coninutului lor n diverse principii, cum sunt: pigmenii,
carotenii, antocianii. Exist alimente care au efect asupra unor constitueni
biologici prin coninutul lor crescut n anumite substane, cum sunt spre exemplu:
spanacul, mcriul care conin cantiti crescute de acid oxalic i care interfer n
dozarea calciului; un exces alimentar de sfecl provoac hipokalemie i
hiperaldosteronism.
Cafeaua i cofeina cresc glucoza plasmatic i acizii grai esterificai i
scade timpul Quick (Timpul de protombina (PT) masoara timpul necesar
sangelui sa se coaguleze. In organism,procesul coagularii implica o serie de
reactii chimice).
Cele mai importante efecte sunt cele datorate unui regim alimentar
neechilibrat, unui regim vegetarian sau n cazul unui regim alimentar cu aport mare
5

de carne, care modific pH-ul. n cazul unui post alimentar ndelungat, se observ
pe lng creterea cantitii corpilor cetonici plasmatici, se constat i creterea
secreiei de aldosteron, a glicerolului, a trigliceridelor, a acidului uric, a ureei.
Efortul fizic crete concentraia albuminei i a altor enzime plasmatice.
n cazul unui efortde mic intensitate se constat o cre tere u oar a proteinelor
plasmatice i a fosfatului. n condiiile unui efort intens cresc enzimele de origine
celular: creatinkinaza, LDH, AST, ALT i chiar ornitil-carbamil-transferaza.
Stress-ul
Stress-ul este un factor important de care trebuie s se in seama n
momentul recoltrii probelor, deoarece acesta duce la creterea concentraiei
plasmatice a colesterolului, a trigliceridelor, a glucozei, a acidului uric, a
noradrenalinei, a hormonilor tiroidieni, a hormonului de cretere, acizilor
neesterificai.
Ritmurile circadiene (Ritmul circadian, sau ritmul nictemeral este un
ciclu de aproximativ 24 de ore al proceselor biochimice, fiziologice sau
comportamentale aparinnd entitilor vii, inclusiv plante, animale, ciuperci sau
cianobacterii)
Se constat c activitatea plasmatic a fosfatazei alcaline scade
dimineaa, de la 25% pn la 50% . Concentraia plasmatic a aldosteronului
crete de la 6 dimineaa pn la ora 15, secreia sa fiind mai sczut noaptea. Se
presupune c acest efect se datoreaz poziiei ortostatice. Excreia noradrenalinei
este mai crescut ziua dect noaptea, iar concentraia plasmatic a fierului are un
ritm circadian maxim dup-amiaza i minim la 4 dimineaa.
Mediul ambiant
Insecticidele, pesticidele, solvenii organici, vaporii de benzin, oxidul de
carbon, soluiile fixative pentru pr dau modificri ale valorilor obinute n urma
examenelor de laborator, cel mai frecvent datorit modificrilor toxice (citopenie,
afeciuni hepatice, nefrotoxicitate, anemie hemolitic). Astfel, bilirubina,
transaminazele colinesteraza au valori crescute, n timp ce elementele figurate i
timpul Quick sunt diminuate.
Frigul
La temperaturi sczute cresc n plasm leucocitele, hormonul de cre tere,
hormonii tiroidieni precum i catecholaminele. Activitatea enzimatic a
creatinkinazei crete, n timp ce acizii aminai cum este tirozina i triptofanul
plasmatic prezint valori sczute.
Febra
6

S-a observat o scdere a glucozei plasmatice

i o cre tere a
metabolismului bazal, a ureei i a urailor urinari la persoanele cu febr mare.
Greutatea corporal
S-a constatat c hemoglobina, creatininei plasmatice, acidul uric
plasmatic, ALT-ul i -glutamil-transferazei cresc direct proporional cu greutatea
corporal.
Tutunul
Pot aprea diferene ntre examenele de laborator la nefumtori fa de
fumtori. Astfel, pe lng oxihemoglobina care este crescut la fumtori, mai
crete acidul ascorbic n plasm, glucoza plasmatic, trigliceridele, colesterolul
precum i ionul tiocian n saliv. S-a demonstrat de asemenea c valoarea
concentraiei de antigen carcino-embrionar este net crescut, de la 3% la 19%, la
fumtori fa de nefumtori.
Medicamentele, pot influena examenele de laborator. Variaiile pe care
le pot da medicamentele conduc la interpretarea greit a rezultatelor examenelor
de laborator i la stabilirea unui diagnostic eronat.
Medicamentele pot influena analizele medicale astfel:
= din punct de vedere pur analitic: medicamentele sau metaboliii
acestora pot perturba sau pot interfera n dozarea unor constitueni biologici.
Spre exemplu, unele medicamente pot da coloraii similare cu unii
constitueni biologici, cum ar fi cazul salicilailor care dau cu reactivul Folin
aceeai coloraie cu aceea a acidului uric.
Unele medicamente i/sau metaboliii acestora prezint proprieti
reductoare, ca n cazul acidului ascorbic care interfer numeroase dozri ale
constituenilor biologici care prezint aceleai proprieti (glucoza, acidul uric,
creatinina).
= din punct de vedere biologic: pot provoca aceste medicamente
modificarea unui parametru biologic printr-un mecanism fiziologic, farmacologic
sau toxicologic.
Medicamentele pot aciona asupra enzimelor i proteinelor inhibnd
activitile i proprietile caracteristice acestora. Pot forma diferite complexe cu
compuii biologici, pot prezenta fluorescene proprii i pot modifica pH-ul.
Principalele boli i dereglri dependente de ioni metalici i
molecule de interes clinic

Fiecare organism necesit o concentraie optim dintr-un element dat

peste care sau sub care nu se mai poate dezvolta corespunztor.
Elementul sau
Afeciunile n care este implicat
compusul organic
Ca
Cataracte i tetanie;
Co
Anemie pernicioas, miocardiopatie;
Cu
Infarct miocardic, artrite reumatice, psoriazis, leziuni
arteriale, hepatite infecioase, leucemie, ciroze, nefrite,
dereglri pigmentare;
Fe
Anemie feripriv, iritaii ale mucoaselor, colaps cardiac;
Li
Sindrom maniaco-depresiv;
Mg
Spasmofilie infantil, boli gastro-intestinale;
Na, K
Gut;
Zn
Anemie, cancer, tulburri de cretere, anomalii de schelet,
ciroz hepatic;
F
Fluoroz, carii
Pb, Hg, As, Be
Toxici puternici, poluani;
Glucoza
Diabet zaharat, acromegalie, insuficien tiroidian, afeciuni
hepatice grave, intoxicaii
Colesterol
Hipercolesterolemie, ateroscleroz, diabet, icter, pancreatite;
Uree
Insuficien renal, cardiac, encefalit;
Creatinina
Insuficien renal cronic, distrofie muscular, acromegalie
Bilirubin
Hepatite toxice, ciroz hepatic, insuficien cardiac;
Acid uric
Boli infecioase, leucemii, intoxicaii cu Pb i Hg.
Metode i tehnici analitice utilizate n laboratorul clinic
O analiz chimic poate fi considerat ca un lan informaional compus
din 3 etape reprezentat grafic:
1. mrimile de intrare sunt constituite din luarea i pregtirea probei.
Semnalul de intrare reprezint aciunea chimic sau fizico-chimic care se aplic
sistemului cu scopul de a perturba starea lui iniial i a ob ine un semnal
caracteristic msurabil. De exemplu, n metodele titrimetrice semnalul de intrare
este adugarea titrantului. n metodele optice, semnalul de intrare este radia ia
electromagnetic;

2. informaiile primite de la mrimile de intrare sunt preluate de un

sistem intermediar black-box - care efectueaz msurarea propriu-zis (sunt
constituite din traductoare nchise n cutii);
3. semnalul de rspuns. Valoarea mrimii msurate este corelat cu
coninutul calitativ sau cantitativ al probei analizate sub forma unui semnal
informaional de ieire. Informaia poate fi afectat de erori dac instrumentaia
folosit, orict de sofisticat ar fi nu este utilizat corect sau dac nu se acord o
importan deosebit etapei de pregtire i prelucrare a semnalului.
Veriga principal a lanului informaional o constituie metoda analitic
utilizat.
Metode analitice
n laboratorul clinic se folosesc majoritatea metodelor chimice analitice
la care se adaug i metode microbiologice. Datorit complexitii deosebite a
metodelor biochimice, uneori este necesar s se efectueze o serie de separri a
elementelor (concentrri de elemente chiar) de analizat.
Dintre metodele de separare i concentrare se folosesc n special metode
cromatografice (cromatografia pe hrtie, n strat subire) (cromatografia de
schimb ionic, n faz gazoas), electroforeza, extracia cu solveni.
Metodele microbiologice sunt destul de laborioase iar n unele situaii au
o precizie i specificitate redus.
Metodele chimice i fizico-chimice instrumentale: sunt folosite la
determinarea cantitativ.
Metode chimice:
gravimetria
titrimetria
Se bazeaz pe determinarea de mas sau de volum
Metodele fizico-chimice sau instrumentale s-ar putea include i
metodele de separare dar importante sunt metodele de determinare (informare i
caracterizare).
Funcie de natura semnalului de intrare sau ieire:
= metode optice
= electrochimice
= termice
= magnetice
= nucleare
n laboratorul clinic se utilizeaz metode optice.
n funcie de interaciunea radiaiei electromagnetice cu sistemul studiat
ntlnim:
9

- spectrometrie de absorbie (bazat pe absorbia radiaiei ) n UV, VIS,

IR;
- spectrometrie de emisie (emisie de radiaii) n UV, VIS, raze X,
fluorescen
- spectrometrie Raman, bazat pe difuzia radiaiei n medii omogene;
- metode turbidimetrice i nefotometrice bazate pe difuzia radiaiei n
medii eterogene;
- refractometria bazat pe refracie;
- difractometria bazat pe difracia radiaiei cu raze X, cu electroni sau
neutroni;
Se prefer metodele analitice cu sensibilitate i selectivitate ridicat
capabile s detecteze prezena unor componente n concentraii foarte mici.
Utilizarea n scop analitic a absorbiei i fluorescenei atomice,
fluorescenei de raze X, polarografie cu redizolvare anodic, a cromatografiei gazlichid, metode ce permit evidenierea i determinarea unor cantiti de ordinul ppm
i ppb deschid noi perspective n aprofundarea cunotinelor actuale privind rolul
microelementelor n organismele vii.
Tehnici analitice utilizate n laborator sunt:
= directe
= indirecte
Pentru determinarea cantitativ a unei specii chimice sunt folosite metode
de analiz prin intermediul anumitor tehnici analitice. Alegerea uneia sau alteia
dintre acese tehnici depinde de o serie de factori: rapiditatea cu care trebuie fcut
analiza; acurateea cerut analizei respective, cantitatea de prob luat n lucru i
concentrarea probei, tipul instrumentelor disponibile pentru efectuarea analizei.
Tehnici analitice directe: semnalul de ieire este corelat direct cu
informaia analizat care, de cele mai multe ori este o funcie de concentraie.
1. Metoda comparaiei sau metoda etalonrii standard = const n
compararea valorilor proprietilor msurate pentru proba de analizat cu
valoarea proprietilor msurate pentru o prob etalon de concentraie cunoscut.
Dac semnalul analitic msurat este o funcie liniar de concentraie
atunci prin efectuarea msurtorilor pentru proba de analizat x i pentru proba
standard se vor obine relaiile:
Sx = kcx
Sstandard = kcstandard
Sx/ Sstandard = cx/ cstandard cx = Sx/ Sstandard cstandard

10

Dac dependena semnalului analizat este o funcie log de concentra ie

(metode poteniometrice) atunci etalonarea scalei instrumentului de msur se va
face direct n uniti logaritmice. Ca exemplu msurtorile de pH pHmetre.
Metoda comparativ d rezultate cu att mai precise cu ct proba de
analizat i proba standard sunt prelucrate i msurate n condiii aproximativ
identice.
Uneori nu este necesar adugarea acelorai reactivi n aceleai cantiti
ci trebuie respectat i succesiunea de adugare de reactivi, timpul scurs ntre
adugarea reactivilor i efectuarea msurtorilor, temperatur, pH.
2. Metoda curbei de etalonare
Se folosete o soluie standard din care prin diluii succesive se prepar o
serie de soluii de concentraii cunoscute. Se msoar proprietatea fizic n acelea i
condiii pentru soluia etalon i proba supus analizei.
a) Dac semnalul analitic dat de proprietile fizice msurate este o
funcie liniar de concentraie (absorban, intensitate de curent) se obin o serie de
valori care reprezint grafic funcie de concentraie conduc la o curb de etalonare

b) Se pot folosi mrimi proporionale cu proprietile fizice msurate:

nlimea, suprafaa picurilor obinute la nregistrri, grafice ale spectrelor de
absorbie;
c) Dac semnalul analitic este o funcie logaritmic de concentraie
(metode poteniometrice) curba de etalonare se realizeaz printr-o reprezentare
semilogaritmic : = f (lg c)
n cazul probelor biochimice tria ionic (este un lucru important) a
probei de analizat este mare, ca urmare soluiile standard utilizate pentru curbele de
etalonare trebuie s aib o trie ionic apropiat de a probei de analizat.

11

Pentru efectuarea msurtorilor la aceeai trie ionic se folosete

adugarea unui electrolit inert n exces. Ca electrolit inert: soluii tampon pentru
ajustarea triei ionice totale TISAB
Dac tria ionic a probei de analizat este foarte mare se impune o
diluare prealabil a acesteia.
3. Metoda adaosurilor
n cazul unor probe cu un coninut complex, de tipul probelor
biochimice, cnd alturi de componenta principal de determinat se gsesc cantiti
necunoscute i variabile din ali ioni (componeni interfereni care influeneaz
semnalul analitic), metoda comparaiei i a curbei de etalonare nu mai dau rezultate
exacte. Ar fi necesar astfel o separare a componentelor prin metode adecvate.
Tehnici analitice indirecte:
Din aceast categorie fac parte diferitele titrri instrumentale, n care
punctul de echivalen se stabilete prin urmrirea variaiei unei proprieti fizice
pe tot parcursul titrrii (intensitatea curentului de difuzie, conductibilitate,
absorban).
Titrarea instrumental ofer o mrire a acurateei i precizie a msurtorilor
pentru c la punctul de echivalen proprietatea fizic urmrit se poate msura
suficient de precis, fa de panta de rspuns necesar n cazul determinrilor directe
(la punctul de echivalen are loc o variaie brusc a concentraiei).
n cazul titrrii indirecte nu este necesar cunoaterea absolut a mrimilor
fizice msurate pe parcursul titrrii. Trasarea graficului semnal analitic-volum de
titrant permite evaluarea grafic a punctului de echivalen.
Metode spectrale de analiz metode optice
Metodele spectrale se bazeaz pe fenomenul de emisie sau interaciune a
radiaiilor electro-magnetice cu atomii sau moleculele substanei ce se determin.
Emisia sau absorbia radiaiilor e.m. de ctre sistemul studiat se consider ca un
proces de apariie a unor semnale analitice care posed informaii calitative i
cantitative despre compoziia substanelor studiate. Observarea i studierea
semnalelor analitice se poate face n diferite regiuni ale spectrului radiaiilor e.m.
Energia acestor radiaii cuprinde un domeniu foarte larg 108 10-6 eV.
Metodele optice au la baz proprietile optice ale unui sistem de atomi,
molecule simple sau complexe. Proprietile optice depind de natura atomilor,
structura combinaiilor, lungimea de und a energiei radiante.

12

Exemple de proprieti optice ce pot fi corelate cu concentraia: absorbia, emisia

radiaiei, difracia, dispersia, emisia ntrziat a energiei radiante.
Spectrometria de absorbie molecular n UV-VIS
Legea de baz a absorbiei: fie un fascicul luminos de intensitate I 0 care
strbate soluia ce conine proba de analizat, pot avea loc o serie de fenomene o
parte din radiaie e reflectat, o parte difuzat i o parte e transmis.
Absorbia radiaiei este caracterizat de transmitan T = It/I0
absorban A = - lgT = - lg It/I0
Dac toat lumina este absorbit It = 0.
Dac I0 nu se absoarbe, T = 1.
A ia valori ntre 0 i teoretic, iar practic ntre 0 i 2.
Legea Lambert-Beer: A = .l.c arat dependena dintre absorban i
concentraie. Se pot face determinri cantitative directe.
= absorbtivitate molar (coeficient molar de absorbie)(l/mol.cm);
l = grosimea stratului absorbant;
c = concentraia (mol/l).
Aparatura are urmtoarele pri principale:
- sursa de radiaii; n VIS bec cu filament de wolfram; n UV lamp de
hidrogen sau deuteriu;
- monocromator: VIS prism de sticl; UV cuar sau NaCl sub form de
prism cu unghi mic sau reea dens;
- suport pentru probe: VIS cuv din sticl transparent; UV cuve din
cuar.
- receptori sau detectori;
- amplificatorul.
Radiaia transmis neabsorbit de prob este transformat de detector n
curent electric care este nregistrat sub form de spectre de absorbie.
Receptorul spectrometrului de absorbie este o celul fotoelectric sau un
fotomultiplicator.
Aplicaii: determinri de concentraii; 90% din dozrile compu ilor
organici din clasa glucidelor, lipidelor, proteinelor, aa, h., enzime, vitamine.
Dozarea glucozei este unul din cele mai frecvente teste cerute de medici se
folosete snge, plasm, ser, urin, LCR.
Dozarea ureei: este un test indispensabil n special n cazul bolnavilor cu
afeciuni renale acute sau cronice; - determinrile se fac n snge, plasm, ser,
urin.
Refractometrie i interferometrie
13

La baza metodelor refractometrice de analiz st determinarea indicelui de

refracie (n) al substanei de analizat.
O raz de lumin care cade sub un anumit unghi de inciden pe o suprafa
ce separ dou medii omogene transparente parial se reflect i par ial se refract.
Trecerea energiei radiante dintr-un mediu transparent omogen n alt mediu are loc
cu schimbarea direciei de propagare a fasciculului. Fenomenul este numit refrac ia
radiaiei i are ca msur cantitativ indicele de refracie.

Aparatura folosit: - refractometre (se bazeaz pe msurarea unghiului

limit de refracie, care este o msur a indicelui de
refracie);
- interferometre (aparate destinate determinrii
unor diferene mici de indici de refracie; ele
funcioneaz pe baza fenomenului de interferen.
Determinrile se fac cu mare precizie.)
Aplicaii ale determinrilor cu indicele de refracie
Indicele de refracie face parte dintre constantele fizice care se pot msura cu
precizie ntr-un timp scurt, cu o cantitate minim de prob.
Refractometria i interferometria au aplicaii att ca metode analitice propriu-zise
ct i ca mijloace de caracterizare fizico-chimice.
Determinri calitative: identificarea substanelor cercetate respectiv
evaluarea gradului de puritate se poate face cu ajutorul n care sunt tabelai pentru
fiecare substan.
Determinri cantitative: n sistemele binare exist relaii de legtur ntre n i
concentraie. Aceste relaii sunt liniare, ntr-un domeniu foarte ngust de
concentraie i se folosesc doar la determinri foarte precise ale compozi iei
sistemului.
Precizia determinrii depinde de forma curbelor: n = f (compoziie); n = f
(conc.); de diferenele ntre valorile n ale componenilor.

14

Polarimetria se ocup cu studiul fenomenelor optice n lumin polarizat.

Are ca obiect determinarea cantitativ a rotaiei radiaiei polarizate n plan
respectiv determinarea unghiului de rotaie.
Aplicaii: Pentru dozarea i control n determinarea structural pentru
substanele organice i anorganice optic active. Se pot determina i substane care
nu sunt optic active. dup prealabila lor precipitare sau complexare cu substan e
optic active i ndeprtarea excesului de substan activ.
Determinri biochimice n ser prin metoda spectrofotometric
Principiul metodei spectrofotometrice const n msurarea densitii optice
pe baza creia se calculeaz concentraia parametrului n prob, conform legii
Lambert-Beer.
Metoda se aplic n dou moduri:
- end-point: msurarea modificrii absorbanei dup un anumit timp
stabilit de metoda de lucru specific fiecrui parametru;
- cinetic: msurarea modificrii absorbanei pe minut timp de 150180 secunde, funcie de parametru.
1. Determinarea glucozei n lichide biologice (ser, urin)
Prin metoda GOD/PAP glucoza este msurat dup oxidarea ei enzimatic n
prezena glucooxidazei, cu formare de peroxid. Peroxidul format reacioneaz cu
4-aminofenazona i fenol sub aciunea peroxidazei, cnd rezult un compus colorat
n rou violet, quinoneimina, a crei culoare este direct proporional cu
concentraia glucozei (msurat la = 505 nm).
2. Ureea
Ureea este determinat prin metoda cinetic enzimatic cu ureaz, n UV.
Ureea este hidrolizat n prezena apei de ctre ureaz la amoniu i CO2. Amoniul
produs se combin cu -cetoglutaratul i cu NADH-ul n prezena glutamat-DH, cu
formarea de glutamat i NAD. Modificarea absorbanei datorit formrii de NAD
n locul NADH-ului consumat este proporional cu concentraia de uree din
lichidul biologic (ser i plasm).
Pentru dozri de uree din urin se dilueaz urina (colectat fr aditivi, timp
de 24 ore) 1:20, cu ser fiziologic i se multiplic rezultatul cu 21.

15

3. Acid uric
Metoda utilizat pentru msurarea acidului uric n ser sau plasm este
enzimatic/colorimetric. Acidul uric este convertit de ctre uricaz la alantoin i
peroxid. Acesta, sub influena catalitic a peroxidazei, formeaz cu 4aminofenazona un compus colorat rou-violet, quinoneimina, a crui culoare este
direct proporional cu concentraia de acid uric msurat.

4. Creatinina
Se determin prin metoda colorimetric dup urmtorul principiu: n mediu
alcalin, creatinina reacioneaz cu acidul picric formnd picratul alcalin, compus
complex de culoare galben care se fotocolorimetreaz la = 500 nm. Se msoar
rata de formare a complexului colorat n primele 5 minute de la iniierea reaciei.
Cleareance-ul de creatinin se calculeaz dup formula:

5. Proteinele totale
Se dozeaz prin metoda colorimetric cu reactivul biuret. Proteinele
formeaz n mediul alcalin cu ionii de Cu - un compus colorat a crui intensitate a
culorii este direct proporional cu concentraia proteinelor msurat n ser sau
plasm.
6. Bilirubina total
Se dozeaz prin metoda colorimetric Jendrassik Grog (1938). n prezen a
cafeinei, bilirubina total este eliberat de pe molecula de albumin i reac ioneaz
cu acid sulfanilic diazotat cu formarea unui compus colorat a crui intensitate a
culorii este direct proporional cu bilirubina total.
7. Bilirubina direct
Determinarea bilirubinei conjugate (directe) se bazeaz pe capacitatea ei de
a reaciona direct cu acid sulfanilic i reactivul diazo. Se formeaz un compus
16

colorat n rou, intensitatea culorii fiind direct proporional cu concentra ia

bilirubinei directe n ser.
8. Colesterolul

17

18

19

20

21

Analize biochimie

22

23

24

25

reactant de faz acut negativ (scade ca rspuns la procesele infecioase i

inflamatorii acute).
Albumina constituie un indicator global al strii de nutriie a organismului,
n special la persoanele vrstnice cu diverse afeciuni cronice. S-a constatat astfel
c la persoanele vrstnice spitalizate, hipoalbuminemia reprezint un factor de risc
independent n ceea ce privete mortalitatea.

n urin, prezena proteinelor i deci i a albuminei este considerat patologic dar

cu toate acestea se accept ca un nivel urinar al proteinelor de circa 20-30
mg/24ore este fiziologic.
26

Albumina urinar provine din albumina sanguin i n mod normal ea nu se gsete

n urin. n bolile care afecteaz rinichiul precum i n bolile care dau sngerri pe
traiectul cilor urinare, albumina trece n urin (albuminurie).

Exemple: glomerulonefrite, nefroz, cistit, tuberculoz renal, calculi urinari.

Alte boli care pot s duc la albuminurie sunt:
- hipertensiune arterial esenial;
- bolile de inim;
- diabetul zaharat;
- diferite infecii i intoxicaii cu substane minerale sau organice;
- mielor multiplu.
Alte semne asociate: deseori albuminuria se nsoete de hematurie (prezena
hematiilor din snge n urin).

Bilirubina se produce prin degradarea eritrocitelor n sistemul reticuloendotelial.

Bilirubina seric este compus din trei fraciuni:
= bilirubina indirect (Bu) neconjugat, insolubil n ap, circul n plasm legat
de albumin.
= bilirubina direct(Bd) conjugat circul legat de un zahar, solubil n ap;
= delta bilirubina (BI), molecula de bilirubin este legat covalent de albumin.
Determinarea bilirubinei se utilizeaz pentru diagnosticul bolilor hepatice, anemie
hemolitic, diagnostic diferenial ntre diferitele tipuri de icter, se bazeaz pe
urmtoarele criterii:

27

28

29

30

Determinarea concentraiei de Ca n urin difereniaz hipercalciuria de

hipocalciurie i poate fi o cauz a litiazei renale.

31

32

33

34

35

36

Se pot recolta 4 tipuri de probe:

= glucoza plasmatic/seric determinat jeun (bazal)
= glucoza seric determinat la 2 ore postprandial
= glucoza plasmatic/seric determinat dintr-o prob de snge recoltat ntr-un
moment oarecare al zilei, indiferent de intervalul de la ultima mas (random).
= glucoza plasmatic/seric determinat n cadrul testului de toleran la glucoz
(la 2 ore dup administrarea a 75g glucoz).

37

38

Lipoproteinele cu densitate mare (HDL) reprezint colesterolul bun. HDL

transport

(lipoproteinele cu densitate mic)

39

n organismul uman trigliceridele intr n constituia lipoproteinelor cu

densitate foarte joas (VLDL) 59%, chilomocronilor 81-88% i HDL (3%).
Determinarea n plasm sau ser a trigliceridelor este important, deoarece se
identific cu determinarea factorilor de risc n ateroscleroz.

VLDL transport trigliceridele, fosfolipidele i colesterolul i reprezint

mecanismul intern al organismului de transport al lipidelor.
VLDL este adesea numit colesterol ru deoarece depoziteaz colesterolul pe
pereii vaselor sanguine. Valorile crescute de VLDL sunt asociate deseori cu
ateroscleroza i afeciuni ale inimii.

40

Determinarea concentraiei lipidelor totale se face prin: metoda SPV, metoda

turbidimetric

41

42

43

44

45