Grupo: 4QM2

Perez Navarro Gabriel

Seccin 4

Gamboa Contreras Alain

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS
Laboratorio de Bioqumica
CURVA TIPO DE AZCARES REDUCTORES

INTRODUCCIN

AZCARES REDUCTORES Y CURVA TIPO

ENZIMAS Y CINTICA ENZIMTICA

Un azcar reductor es aquel que tiene la

capacidad de reducir un reactivo y
oxidarse, dando como productos un cido
aldnico y el reactivo reducido.

Las enzimas son molculas de naturaleza

proteica, que catalizan una gama amplia
de reacciones biolgicas. Estas molculas
aumentan considerablemente la velocidad
de reaccin, disminuyendo la energa de
activacin y facilitando la transformacin
de sustrato en uno o varios productos.
Las enzimas poseen una selectividad a un
sustrato especfico y la actividad de stas
Blanc
se
puede
Tubo No.
o
modificar
con
T
1
diversos factores
Glucosa
como
la
0.005 M
temperatura, el
Fructosa
0
0.1
pH,
la
0.005 M
(ml)
concentracin
Sacarosa
de la enzima y
0.5
0.5
0.2 M (ml)
del
sustrato,
Regulador
utilizando
de
inhibidores, etc.
acetatos
0.5
0.5
0.05 M a
pH 4.7 (ml)
Agua (ml)
3,5-DNS
(ml)
Desarrollo
de color

Una curva tipo es una representacin

grfica de una seal que se mide en
funcin de la concentracin de un analito
y
nos
permite
transformar
unos
parmetros en otros.

OBJETIVOS
PROBLEMAS
2

0.2

0.3

0.4

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

La
cintica
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
enzimtica
abarca
el
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
estudio de la
5 minutos en bao mara
velocidad de las
reacciones
Sumergir en bao de hielo y diluir con
Dilucin
2 ml de agua
enzimticas,
Lectura
en
espectrofotmetro
a 540 nm
considerando los
Absorbenci
0.06 0.14 0.33 0.64 0.90
factores que la
0
a
9
8
7
3
5
afectan
y
Azucar
requiere que se
reductor
0
1
2
4
8
10
realice el estudio (micromol
es) /2 ml
de un factor a la
vez, manteniendo los dems parmetros
constantes

*Determinar
la
actividad de la fructofuranosidasa
(invertasa) de una
manera indirecta a
travs de una curva
tipo de azcares
reductores.
*Elaborar una curva
tipo de azcares
reductores
que
permita transformar
lecturas
de
absorbancia
en
unidades
internacionales
(micromoles de a.r),
mediante la inter o
extrapolacin
de
datos para poder
realizar
ensayos
relacionados con la
cintica enzimtica.

RESULTADOS

Grupo: 4QM2
Perez Navarro Gabriel

Seccin 4

Gamboa Contreras Alain

Tabla 1
Valores obtenidos de la
lectura del testigo y los problemas:
Absorbencia y micromoles de azcar
reductor.

DISCUSIN
PREPARACIN DE TUBOS
Para realizar un estudio de cintica
enzimtica se debe establecer una
curva tipo que nos permita, a travs de
la inter o extrapolacin de datos
transformar parmetros, en este caso
de
lecturas
de
absorbencia
a
micromoles de azcar reductor.
Para la construccin de esta curva se
prepararon un testigo y 5 problemas.
Los tubos contenan:
*Glucosa y fructosa debido a que son
productos de la reaccin de la invertasa
sobre la sacarosa y precisamente se va
a realizar el estudio de la actividad de la
enzima (invertasa) sobre su sustrato
(sacarosa).
*Sacarosa, debido a que es el sustrato
de la enzima y, en la reaccin no se
hidroliza completamente, por eso debe
estar presente.
*Regulador de acetatos debido a que la
reaccin enzimtica se lleva a cabo en
rangos estrechos de pH y un cambio
brusco de este puede provocar la
desnaturalizacin de la enzima (que es
de naturaleza proteica) causando que
nuestro estudio sea errneo.
*Agua debido a que la enzima es una
hidrolasa, esto quiere decir que requiere
agua como otro sustrato para llevar a
cabo la reaccin de hidrlisis.
*3,5-DNS que nos va a permitir realizar
una lectura con el espectrofotmetro,
debido a que en presencia de azcares
reductores, esta especie forma un
compuesto colorido.
3,5-DNS y REACCIN COLORIDA

Se utiliz como revelador el cido 3,5

dinitrosaliclico disuelto en hidrxido de
sodio, por tanto, la especie qumica
indicadora
utilizada
es
el
3,5
dinitrosalicilato. La reaccin de la
invertasa sobre la sacarosa no implica
la aparicin de productos coloridos, por
lo que se requiere de una especie
qumica que nos permita obtener un
compuesto colorido para llevar a cabo
un
anlisis
ptico
con
el
espectrofotmetro.
Los azcares reductores reducen al 3,5
dinitrosalicilato de color amarillo a 3nitro, 5-amino salicilato que es de color
rojo. Los productos de la reaccin de la
invertasa sobre la sacarosa son
azcares reductores, as que este
compuesto
es
adecuado
para
cuantificar la actividad enzimtica
Para revelar la reaccin se requiere una
temperatura de ebullicin, por lo que el
testigo y los problemas se deben
incubar por 5 minutos en esa
temperatura.

Imagen 1- Reaccin de azcares reductores con el

3,5- dinitrosalicilato.

El 3,5- DNS va a tener un papel

importante en este estudio de cintica
enzimtica, debido a:
*Revela la reaccin con aparicin de
productos coloridos.
*Detiene la actividad enzimtica.
*Favorece el equilibrio ceto enlico
Segn sea la cantidad de azcares
reductores ser la intensidad del color.
Como el compuesto es rojo, debe leerse
con una luz de color complementario,
en este caso la luz es verde y su
longitud de onda es 540 nm.

CONCLUSIN
La curva tipo de azcares reductores
construida con la absorbencia de los
problemas estndar y la concentracin

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de azcares reductores permite realizar
un estudio de la actividad de la
invertasa.
La curva tipo brinda la posibilidad de
transformar un parmetro en otro, en
este caso la absorbencia en unidades
de invertasa o micromoles de azcar
reductor.
El anlisis espectrofotomtrico del
compuesto colorido de xido reduccin

permite
cuantificar
la
enzimtica indirectamente.

activad

BIBLIOGRAFA
*http://es.slideshare.net/vegabner/determin
acin-de-azcares-reductores-porespectrofotometra-mtodo-dns
*http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero
/CARBOHIDRATOS_21119.pdf
*Albert
L.
Lehninger,
principios
de
bioqumica, 4 ed, edit. Omega, 2006.