LABORATORIO HEMATOLOGA BSICA

PRACTICA # 5
BIOMETRA HEMTICA: CUANTIFICACIN DE
HEMOGLOBINA SANGUNEA POR EL MTODO DE
CIANOMETAHEMOGLOBINA
OBJETIVO:
Ejecutar una de las tcnicas ms utilizadas dentro de los
laboratorios de diagnstico clnico, en la cuantificacin de hemoglobina
sangunea, auxilindose para ello de una curva de calibracin.

INTRODUCCIN:
Anexar alumno.

FUNDAMENTO:

La hemoglobina reacciona con el fenicianuro y forma

metahemoglobina, el cual con el cianuro de potasio da lugar a la
formacin de cianometahemoglobina, compuesto colorido muy estable
que se lee fotoelctricamente.

MATERIAL:

Pipeta de Sal
Pipeta volumtrica de 5ml
Tubos de 13 x 100
Ligadura con boquilla
Gradilla metlica
Espectrofotmetro
Reactivo de Drabkin
Estndar de hemoglobina (cianometahemoglobina)

PROCEDIMIENTO:
Curva de calibracin
1. Etiquetar una serie de tubos de ensayo o cubetas, como sigue:
B(blanco), 4, 8, 16 y 20
2. Pipetear los siguientes volmenes de la solucin valorada de
cianometahemoglobina (sol. Estndar) y del diluyente (reactivo

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de Drabkin), dentro de los tubos correspondientes y mezclar bien,

de acuerdo a la tabla que a continuacin se presenta:

Conc. de Hb gr % ml del diluyente

4
4
8
3
16
1
20
0

ml. estndar
1
2
4
5

Dejar reposar 10 min. a temperatura ambiente.

3.- Leer en espectrofotmetro a 540nm, usando el reactivo de
Drabkin como blanco tubo B.
4.- Graficar en papel milimtrico o excel la absorbancia de cada
solucin valorada en el eje de las coordenadas (y), contra
concentraciones, en el eje (x).
Muestra problema.
1. Obtener sangre venosa y mezclar perfectamente bien con un
anticoagulante.
2. Llenar la pipeta de Sal con sangre tratada hasta la marca de
20, equivale a 0.20ml (20 microlitros).
3. Depositar la sangre en un tubo de ensayo que contenga 5 ml
de reactivo de Drabkin.
4. Homogenizar mediante burbujeo, dejar reposar 10 min. A
temperatura ambiente.
5. Leer en el espectrofotmetro a 540nm.
6. Interpolar la lectura de absorbancia del problema en la curva
de calibracin, para conocer la concentracin de la
hemoglobina.
7. La concentracin de hemoglobina en el problema tambin
puede conocerse mediante el uso de la formula:
Conc. Del problema g%= (D.O. problema) * (Conc. De estndar g %)
(D.O. estndar)
VALORES NORMALES.
Mujeres: 13.5 17 g/100ml. de sangre.
Hombres: 15.5 20 g/100ml de sangre.

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CONSTANTES HEMATOLGICA O DE WINTROBE

VCM= El VCM es el volumen medio de eritrocitos individuales.
VCM = Hto ( % ) X 10
No. de eritrocitos /mm3
V.N. = 80-94 m3
HCM = El HCM es el contenido de hemoglobina en un eritrocito
individual.
HCM = Hb ( g/100 ml ) X10
No. de eritrocitos /mm3
V.N. = 27- 32 pg.
CHCM = La CHCM es la concentracin media de hemoglobina
corpuscular por 100 ml de eritrocito concentrados.
CMHC = Hb ( g% ) X 100
Hto (% )
V.N. = 32 37%
NOTA: Es muy importante la observacin morfolgica de los
eritrocitos en un frotis sanguneo para compararla con los ndices
de las constantes de Wintrobe con el fin de lograr mayor precisin
y exactitud en las variaciones hematolgicas.
OBSERVACIONES:

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RESULTADOS:

CONCLUSIN:

CUESTIONARIO
1.- MENCIONE LAS VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA TCNICA DE LA
CIANOMETAHEMOGLOBINA.
2.- DESCRIBA DETALLADAMENTE CMO PARTICIPA LA HEMOGLOBINA
EN EL INTERCAMBIO GASEOSO?
3.- DESCRIBA DETALLADAMENTE CMO SE LLEVA A CABO LA SNTESIS
Y DEGRADACIN DE LA HEMOGLOBINA?
4.- EXPLIQUE PARA QU SIRVEN LAS CONSTANTES HEMATOLGICAS?