INFORME DE LABORATORIO N 4

ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

ESTUDIANTES: Rojas, Dayana; Mndez, Sofa; Osorio, Yadiris; Martnez, Daniela
GRUPO: HR, Universidad de pamplona, facultad de ciencias agrarias, programa
zootecnia, 2016
DOCENTE: Leidy Yesenia Rizo Vega

MARCO TEORICO

Las enzimas son biomoleculas especializadas en la catlisis de las reacciones

qumicas que tienen lugar en la clula. Son muy eficaces como catalizadores ya
que son capaces de aumentar la velocidad de las reacciones qumicas mucho ms
que cualquier uno de ellos induce la transformacin de un solo tipo de sustancia y
no de otras que se puedan encontrar en el medio de la reaccin. Diferentes
factores ambientales pueden afectar la actividad enzimtica, se podr detectar
dos: el pH y la temperatura.
EFECTO DEL pH: el pH es otro factor que influye en la actividad enzimtica,
debido a que el pH influye en la ionizacin de los grupos funcionales de los
aminocidos que forman protena enzimtica. Cada enzima realiza su accin
dentro de un determinado intervalo de pH, dentro de este intervalo habr un pH
ptimo donde la actividad enzimtica ser mxima. Por debajo del pH mnimo o
por encima del pH mximo el enzima se inactiva ya que se desnaturaliza. La
mayora de las enzimas presentan un pH ptimo para el cual su actividad es
mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye bruscamente.
EFECTO DE LA TEMPERATURA: al igual que ocurre con la mayora de las
reacciones qumicas, la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se
incrementa con la temperatura. La variacin de la actividad enzimtica con la
temperatura es diferente de unos enzimas a otros en funcin de la barrera energa
de activacin de la reaccin realizada. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre
en otras reacciones qumicas, las reacciones catalizadas por enzimas se produce
un brusco descenso de la actividad cuando se alcanza una temperatura crtica.
Este efecto no es ms que un reflejo de desnaturalizacin trmica del enzima
cuando se alcanza dicha temperatura.

METODOLOGIA

*RECONOCIMIENTO DE LA CATALASA EN TEJIDOS ANIMALES

Se coloc en un tubo de ensayo unos trozos pequeos de hgado, posterior a esto
se aadi 2 mL de agua oxigenada.
Se repiti el anterior procedimiento pero esta vez con trozos de tomate esto con el
fin de ver la accin de la catalasa sobre los tejidos vegetales
*DESNATURALIZACION DE LA CATALASA
Se coloc en un tubo de ensayo unos trozos pequeos de hgado, posterior a esto
se aadi agua, se coloc a fuego durante dos minutos aproximadamente,
despus de haber realizado esto se retir del fuego y se retir el agua sobrante y
se aadi agua oxigenada hasta cubrir los trozos de hgado (se compararon estos
resultados con los resultados del procedimiento anterior)
*HIDROLISIS DE ALMIDON
Se coloc en una gradilla 6 tubos de ensayo los cuales fueron enumerados del 16, adicionando en cada uno de ellos las siguientes cantidades:
NUMERO DE TUBO
1
2
3
4
5
6

SOLUCIN 1
2 mL de almidn
2 mL de almidn
2 mL de almidn
2 mL de almidn
2 mL de almidn
2 mL de almidn

SOLUCIN 2
N/A
N/A
1 mL de saliva sin diluir
1 mL de saliva sin diluir
1 mL de saliva diluida H
1 mL de saliva diluida H

Despus de haber adicionado estas cantidades se colocaron los tubos a bao

mara a 37C, durante 10 minutos.
*En los tubos 1,3 y 5 se adiciono 1 gota de lugol (prueba de almidones)
*En los tubos 2,4 y 6 se adiciono 1 mL de reactivo de benedict (prueba para
azucares reductores)

*INFLUENCIA DEL pH EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Se recogi 6 mL de saliva en un beaker de 50 mL, en una gradilla se colocaron 3
tubos de ensayo enumerados del 1-3, en cada uno de ellos se adiciono las
siguientes cantidades:
NUMERO DE TUBO
1

SOLUCIN 1
2 mL de saliva

2 mL de saliva

2 mL de saliva

SOLUCIN 2
2mL de buffer fosfato
0.1M a pH 3
2mL de buffer fosfato
0.1M a pH 7
2mL de buffer fosfato
0.1M a pH 11

Despus de haber adicionado estas cantidades, se agitaron vigorosamente, luego

se adiciono 2 mL de almidn al 1% en cada tubo, nuevamente fueron agitados y
se agreg una gota de lugol.
RESULTADOS
*RECONOCIMIENTO DE CATALASA EN TEJIDOS ANIMALES
Se observ que al aadir el agua oxigenada el hgado se vuelve blanco, posterior
a eso se forma una burbuja en la parte de arriba, el hgado tiene presencia de
catalasa.
Por el contrario, al aadir agua oxigenada al tomate, esta presenta poco burbujeo,
y muy poca presencia de catalasa. Desdobla la catalasa porque es toxica para el
cuerpo, hay presencia de liberacin de oxgeno.

COMPARACIN: se compararon las dos reacciones y se lleg a la conclusin que

en el hgado hay ms peroxisomas que en el tomate estos peroxisomas al
someterlos a la presencia de agua oxigenada, el cual es altamente reactivo y
toxico para las clulas del hgado, la funcin de los peroxisomas es proteger a las
clulas del hgado del agua oxigenada.

*DESNATURALIZACION DE CATALASA
Bsicamente lo que se hizo fue cocinar el hgado, cuando se coloc al fuego se
observ que comenzaban a salir burbujas, el hgado iba perdiendo su color y se
ve un poco ms pequeo, al agregarle agua oxigenada hubo poca presencia de
catalasa y el hgado se desnaturalizo.

*HIDROLISIS DE ALMIDON

En el tubo n 1, hubo presencia de almidones, en el tubo n 3, poca presencia de

almidones, en el tubo n 5, cuando se le adiciono el lugol se form una capa color
azul oscuro pero al ser movido el tubo, su color volvi a ser el mismo, por lo tanto
hubo poca presencia de almidones.
En el tubo n 2 formo un color azul celeste, por tanto hubo presencia de azucares
reductores, en el tubo n 4 hubo formacin de dos fases: poca burbuja, si hay
presencia de azucares reductores. Y en el tubo n 6 igualmente hubo formacin
de dos fases: poca burbuja, si hay presencia de azucares reductores.

*Qu tubos se pueden tomar como control en las pruebas de almidones y

azucares?
-RESPUESTA: En la prueba de almidones el tubo N1 fue positivo ante
dicha prueba, y en la de azucares en tubo N 6
*En cul de los tubos hubo accin enzimtica?
-RESPUESTA: La accin enzimtica se dio en todas las pruebas donde se
rompi un enlace de la maltosa y glucosa.

*INFLUENCIA DEL PH EN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Despus de haber hecho el procedimiento respectivo estos fueron los resultados

*En qu tubo fue ms

activa la enzima sobre el
almidn?
-RESPUESTA: En el
tubo N 1, si hay
presencia,
pero
no
amilasa, en el tubo N 2
Si hay presencia, pero
no amilasa, tubo N 3
La amilasa funciono
perfectamente.
*Cul es el pH ptimo
para la amilasa?
RESPUESTA: El pH ptimo est dentro del rango 5-7
*Cul es el pH ptimo de la saliva humana? Explique los resultados

RESPUESTA: La saliva es un lquido generado por unas glndulas que existen en

la
boca que se llaman glndulas salivares. Al da se genera entre 0.5 a 2
litros y est sujeta al ciclo circadiano, por eso por la noche generamos cantidad.

El pH de la saliva es aproximadamente entre 6,5 y 7 y est compuesta de agua y

de iones como el sodio, el cloro o el potasio, y enzimas que ayudan a la
degradacin inicial de los alimentos, cicatrizacin, proteccin contra infecciones
bacterianas e incluso funciones gustativas.

PREGUNTAS Y RESPUESTAS

*Describa el efecto de la temperatura en la accin enzimtica

RESPUESTA: En general, la velocidad de la reaccin se incrementa con la
temperatura hasta que un punto mximo es alcanzado. Este incremento se debe a
que aumenta el nmero de molculas ricas en energa que pueden pasar la
barrera energtica de estado de transicin, para formar a los productos.

*A qu valores de pH es estable la actividad enzimtica de la catalasa?

RESPUESTA: Temperatura: 30 - 40C
pH: 4 7
*A qu pH terico es ms activa la amilasa?
RESPUESTA: La amilasa no necesita de activador para actuar, pero es menos
estable al calor, y el pH ptimo de la amilasa es de 4,5.

*Qu diferencia hay entre una coenzima y una apoenzima.

RESPUESTA:

- Las coenzimas son compuestos orgnicos que se unen mediante enlaces dbiles
y de forma temporal a la apoenzima (inactiva) y forman la holoenzima activa y se
consideran el grupo prosttico (no protenico) de una reaccin enzimtica. Las
coenzimas son portadoras de diferentes grupos qumicos, actuando en las
reacciones enzimticas como dadores o receptores de dichos grupos. Se alteran
durante la reaccin enzimtica, pero, una vez acabada sta se regeneran de
nuevo volviendo a ser funcionales. Algunas coenzimas son nucletidos o
derivados de nucletidos (ATP), y pueden tener en su composicin
vitaminas(CoA).
-La apoenzima es la parte proteica de una holoenzima, es decir, una enzima
inactiva que no puede llevar a cabo su accin cataltica desprovista de los factores
necesarios, ya sean cofactores como iones metlicos (Fe, Cu, Mg, etc.) u
orgnicos, como es una coenzima o grupo prosttico, dependiendo de la fuerza de
sus enlaces con la apoenzima. La apoenzima, es por tanto, catalticamente
inactiva, hasta que se le une el factor adecuado.

*La pepsina es una enzima secretada por el estmago. Discuta el rango de pH en

el cual la enzima se encuentra activa y sugiera lo que probablemente le
estructuralmente a la enzima cuando pasa del estmago al intestino.
RESPUESTA: El estmago secreta pepsinogeno, es la forma inactiva de la
pepsina, para activarse necesita de un pH acido, esto se logra por la formacin de
cido clorhdrico HCL, luego al pasar al intestino se desactiva ya que no el pH
alcalino no permite su actividad, el rango de pH es de 2.

*Que otros factores, adems de la temperatura y el pH influyen en la actividad de

una enzima
RESPUESTA: Factores importantes en la actividad enzimtica, Concentracin de
sustrato, Concentracin de enzima, Inhibidores, Factores alostricos

* Cite cinco enzimas y los sustratos respectivos sobre los cuales actan.
RESPUESTA:

-Isomerasas Epimerasas. (mutasa)

-Hidrolasas Glucosidasas, lipasas
-Liasa Descarboxilasas, liasas
-Ligasas Sintetasas, carboxilasas.
-Oxirreductasas Deshidrogenasas.

EVIDENCIAS