Sunteți pe pagina 1din 17

Ministerul Sntii al Republicii Moldova

Universitatea de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae


Testemianu
Facultatea Medicin
Catedra Biologie Molecular i Genetic Uman
TEZ DE DIPLOM
Leucemii determinate de oncogene himere: gena BCR-ABL
mecanisme i particulariti citogenetice.

Numele i prenumele studentului:


Tocan Maxim
anul VI, grupa M1001
Numele i prenumele conductorului tiinific:
Rotaru Ludmila
conf. universitar

INTRODUCERE. Actualitatea temei investigate.


Leucemiile reprezint un grup heterogen de hematopatii maligne
caracterizate prin proliferarea n mduva osoas a unei clone celulare
anormale.
Etiologia: - infecia cu virusuri
- expuneri la radiaii
- substane chimice
- anomalii genetice (translocaii, inversii, deleii
cromozomiale)

Cariotipul celulelor leucemice

35 % cariotip
normal
65 % mutaii
genetice

INTRODUCERE. Actualitatea temei investigate.

40 % din leucemiile acute


prezint o translocaie
echilibrat

Oncogene himere
domeniile funcionale a 2 gene
fuzioneaz una cu alta, rezultnd
apariia unei gene noi

INTRODUCERE. Actualitatea temei investigate.


Frecvena oncogenelor himere n leucemiile acute limfoblastice

Aduli
BCR-ABL 30%
MLL-AF4 3%
TEL-AML1 1%
E2A-PBX1 5%
SIL-TAL 2%
Altele 59%

Copii
Hox11L2 5%
BCR-ABL 3%
MLL-AF4 2%
TEL-AML1
25%
E2A-PBX1 4%
SIL-TAL 4%
Altele 57%

INTRODUCERE. Actualitatea temei investigate.


Frecvena oncogenilor himere n leucemiile acute mieloide la aduli

LAM la aduli
PML-RARa 12%
AML1-ETO 7%
DEK-CAN 2%
Altele 21 %

CBFb-MYH11
10%
MLL 15%
FLT3 30%

Scopul lucrrii
Studierea aspectelor moleculare i genetice ale leucemiilor determinate de
oncogene himere.

Obiectivele lucrrii
Cercetarea mecanismelor molecular-genetice responsabile de apariia
leucemiior
Analiza i evaluarea implicrii genei BCR-ABL n dezvoltarea leucemiilor
Evaluarea metodelor de diagnostic a genei BCR-ABL
Efectuarea unui studiu observaional descriptiv despre diagnosticarea genei
BCR-ABL prin metoda RT-PCR
Realizarea unei concluzii despre importana identificrii anomaliilor
molecular-genetice n hemopatiile maligne

Gena BCR-ABL
Reprezint un exemplu de oncogen himer ce se formeaz n urma
translocaiei cromozomiale reciproce, t(9;22)(q34;q11), ntre braele lungi
ale cromozomilor 9 i 22. Rezultatul acestei fuziuni duce la formarea aa
numitului cromozom Philadelphia, care reprezint un semn specific
important n diagnosticul leucemiei cronice mieloide (LMC).

Gena BCR-ABL. Consecinele


1. Alterarea
adeziunii
celulare
la
stroma
medular (prin cile
Crkl i B-integrine)
2. Activarea constitutiv
a
cilor
de
semnalizare mitotic
(RAS, MAP, kinaze,
jak/stat, PI3 kinaze)
3. Inhibiia
apoptozei
(cile
Bcl2,
SRC
kinaze)
4. Diminuarea reparaiei
ADN
cu
apariia
instabilitii genetice

Gena BCR-ABL. Mecanisme molecular-genetice.


Ruptura genei ABL poate aprea n orice regiune pe o lungime de 300
kb, n regiunea captului 5. Punctul de rupere poate fi localizat n
amonte de la primul exon Ib, ntre exonul Ib i Ia, precum i n aval de
exonul Ia .
n rezultat apar 2 ARNm diferii: transcriptul b2a2 sau b3a2 , care
codific o
protein
. Mult mai rar apar variantele b2a3 i b3a3.

Gena BCR-ABL. Mecanisme molecular-genetice.


n gena BCR, au fost depistate mai multe regiuni de rupere:

M-bcr
(Major
breakpoin
cluster
region)

85-90 %
LMC

30 % LAL

m-bcr
(minor
breakpoint
cluster
region)

60 % LAL

2 % LMC

Gena BCR-ABL. Diagnostic citologic.


Hemograma: -anemie, normocitar,
normocrom
- leucocitoz ( > 900 G/L)
Mielogram (necesar pentru
definirea % de blaste) :
hiperplazia global a linie
granulomatoase
numeroase megacariocite de
dimensiuni reduse
exces de eozinofile i bazofile
eritroblastopenie relativ: < 10 %

Gena BCR-ABL. Diagnostic genetic.

Cariotipajul
reprezint
examenul de referin pentru
evidenierea
cromozomului
Philadelphia. El ne permite de
asemenea
cuantificarea
numrului de metastaze Ph
pozitive, ce este un criteriu
major
n
rspunsul
la
tratament i n detectarea
anomaliile
citogenetice
adiionale.

Gena BCR-ABL. Diagnostic genetic.


FISH -Hybridation in situ
fluorescente
-hibridizarea secvenei
specifice de acizi nucleici
( ADN sau ARN) i o secven
complementar de acizi
nucleici marcai prin
fluorescen
-specificitate foarte nalt, dar
este foarte sensibil din cauza
dificultilor de accesibilitate a
pentru BCR (cromozomul 22) - sonda sondei la inta sa

verde
pentru ABL (cromozomul 9) sonda
roie
la fuzionarea genelor apare culoarea
galben

Gena BCR-ABL. Diagnostic genetic.


RT-PCR (Reverse Transcriptase- Polymerase Chain Reaction)
tehnic molecular
trasncriptul BCR-ABL din celulele medulare i prelevatul sangvin
metod de elecie n depistarea i monitorizarea transcriptelor de fuziune
cuantificarea rapid a nivelurile MRD
previne contaminarea cu produi PCR

RT-PCR

RT-PCR
calitativ

RT-PCR
cantitati
v

Gena BCR-ABL. Diangnostic genetic.


RT-PCR calitativ
-Tehnica:
retro-transcripia din mRNA
n cDNA
amorse specifice

-Determinarea tipului de
transcript indispensabil pentru
monitorizare
indispensable pentru diagnostic
contraindicat n monitorizare

Gena BCR-ABL. Diagnostic genetic.


RT-PCR cantitativ
-Tehnica:
retro-transcripia din mRNA n
cDNA
amorse specifice
evidenierea amplificrii prin
sonde fluorescente Taqman
-Relaie linear ntre numrul de
cicluri necesare pentru a atinge
pragul i log numrului de copii
prezente la nceput
-Determinarea numrului de
copii a eantionului
expresia rezultatului n
raport cu o gen martor:
ABL

R(%)=n
10 BCR-ABL /n ABL x100
Fluorescenc
e

104

103
102

101

prag

Materialul i metodele de cercetare.


Stagiu 03.01-31.01.2016
Studiu observaional descriptiv
Lot de 704 de pacieni perioada
2012-2015
CHU Amiens, Frana

S-ar putea să vă placă și