Sunteți pe pagina 1din 8

Totalizarea nr.

2
TEMA3:
1.

EXAMENUL BACTERIOLOGIC IN DIAGNOSTICUL BOLILOR INFECTIOASE

Metoda bacteriologica de diagnostic al bolilor infectioase. Esenta. Scopul .

Examenul bacteriologic- consta in inocularea (insamintarea) prelevatelor pe medii de cultura pentru izolarea
culturilor pure de bacterii care vor fi ulterior:
-identificate
-testate la sensibilitate fata de antibiotic
-conservate
Etapele examenului bacteriologic (incepind cu prelevarea probelor biologice pina la remiterea rezultatelor) sunt:
Faza pre-analitica (responsabilitatea medicului)

Prescrierea investigatiei (in functie de datele examenului clinic si paraclinic).

In ordonanta se fixeaza:
-identitatea medicului si a pacientului
-scopul analizei
-manifestarile patologice
-locul si data aparitiei si alte date ca: imunospuresie, tratament cu antibiotice, graviditate.

Prelevarea probelor

-Alegerea prelevatului (de la poarta de intrare, locul multiplicarii sau/ si din caile de eliminare ale agentului
patogen)
-Momentul prelevarii
Recoltare->transport->examen macroscopic->examen microscopic->izolarea culturilor pure->acumularea
culturilor pure->identificarea culturii pure->evaluarea rezultatelor, formularea raspunsului

2. Prelevate (biosubstrate) de la pacienti si din mediul ambiant (apa, sol, aer,


produse alimentare, lavaje). Regulile de recoltare si ambalare, conditiile de
transportare in laborator. Pregatirea probelor pentru investigatii de laborator .
Materiale de examinat de la pacienti:
-Secretii rino-faringiene, bronsice
-Sputa
-Puroi
-Exsudate, transudate
-Singe
-LCR
-Urina, secretii genitale

-Mase fecale, bila, suc duodenal


-Bioptate, punctate
-Material cadaveric
Materiale de examinat din mediul extern:
-Apa
-Alimente
-Sol
-Aer
-Lavaje
-Vectori
Mod de prelevare (recoltare):
-In recipiente sterile
-Respectind regulile de autoprotectie
-La debutul bolii
-Pina la administrarea antibioticelor
-Cantitatea suficienta
Transportarea
-Imediata sau utilizind medii de transport, cu respectarea conditiilor special dupa necessitate
-In ambalaj special (cutii metalice, pungi din plastic)
-In fisa de insotire sa fie indicate identitatea pacientului, virsta, sexul, natura prelevatului, data, ora prelevarii,
scopul investigatiei)

3.EXAMENUL BACTERIOLOGIC PENTRU CULTURILE AEROBE


-

Prelevatul este supus examenului macroscopic (modificarea aspectului, a mirosului, etc) - orientare n
diagnostic

Dup necesitate, probele sunt supuse pregtirii pentru investigaie (diluare, omogenizare, centrifugare,
etc)

Examinarea microscopic (preparate native, Gram, Ziehl-Neelsen, Loeffler...) prezena mi/o, forma,
cantitatea, G+/-.

I etap IZOLAREA CULTURILOR PURE


Scopul izolrii - de a obine o cultur pur dintr-un melanj de celule bacteriene sau dintr-un produs
patologic. O colonie separat constituie o cultur pur.
Tehnici utilizate:
1. Prin epuizarea inoculului pe suprafaa gelozei din cutia Petri (nsmnare n striuri paralele,
nsmnare n cadrane, etalarea consecutiv pe trei cutii).

2. Metoda diluiilor logaritmice a inoculului n geloz topit i rcit la 50 C (10-1, 10-2,...), apoi
turnate n cutii Petri sau eprubete.
Incubare n termostat la 37 C, 18-24 h (n funcie de TG).

II etap ACUMULAREA CULTURII PURE


-

Examinarea macroscopic a coloniilor crescute (form, culoare, dimensiuni, etc)

Examinarea microscopic (frotiu Gram) a coloniilor suspecte, confirmarea puritii culturii

Repicarea coloniilor suspecte pe geloz n pant (nclinat) pentru acumularea culturii pure

Termostat, 37 C, 18-24 ore

III etap IDENTIFICAREA CULTURII PURE


-

Verificarea puritii culturii (frotiu Gram)

Identificarea culturii pure const n evidenierea unor caractere specifice ale acestei culturi pentru a o
include ntr-o familie, gen, specie, variant

Se studiaz caracterele:
-

Morfologice

Tinctoriale

De cultur

Biochimice

Antigenice (seroidentificarea)

De patogenitate

Sensibilitatea la bacteriofagi (fago-identificarea)

Sensibilitatea la antibiotice

Identificarea rapid

Utilizarea galeriilor miniaturizate standarde (economie de timp, spaiu, material)


Sistemul API o galerie din plastic format din numeroase alveole care conin fiecare un mediu deshidratat diferit
(glucide, AA, etc). Alveolele sunt inoculate cu o suspensie bacterian testat i incubate. Ulterior la necesitate se
adaug reactive pentru detectarea metaboliilor particulari.
Lectura peste 4-18h conform unui cod de cifre sau computerizat

IV etap EVALUAREA REZULTATELOR, FORMULAREA SI ELIBERAREA RSPUNSULUI


-

Compararea rezultatelor obinute cu caracterele speciilor bacteriene cunoscute pentru a gsi asemnri.

Exemplu de rspuns: Din proba examinat a fost izolat tulpina de Corynebacterium diphtheriae, biovar
gravis, tox+, sensibil la ...., rezistent la .....

4. Particularitati de izolare in cultura pura a bacteriilor


-

A bacteriilor sporulate: nclzirea prealabil a prelevatului 80 C 20 min

A bacteriilor acido-rezistente: tratarea prealabil cu acid a prelevatului i neutralizarea ulterioar cu o


baz

A mi/o patogene din prelevate plurimicrobiene: mbogirea prealabil a florei patogene utiliznd medii de
mbogire

A bacteriilor cu virulen nalt i pretenioase la cultivare: inocularea la animalele de laborator sensibile

5.Caile si metodele de creare a conditiilor anaerobe,medii de cultura speciale si


paratajul utilizat
Fizice
1camera anaeroba-in care operatiunile de insamintare la observarea culturilor si repicari se fac in absenta
oxigenului
2Siatemul Mac Intosh si Filde-foloseste un borcan etans in care aerul indepartat cu o pompa in vid este inlocuit
cu hidrogen sau cu un ameste gazos iar clorura de paladiu inclusa in azbest catalizeaza la cald fixarea
hidrogenului pe urmele de oxigen
Chimice
In cutia petri poate fi creata o incinta etansa din care oxigenul este indepartat prin reactia cu pirogalul in mediu
alcalin.Un pachet cu:Pirogalol 0.4g,Carbonat de potasiu:0.4g,Talc:4.0g
este suficient pentru a crea
anarobioza intro cutie petri de 11 cm
Biologice
1Mediu Kitt-Tarozzi
A.bulion peptonat+glucoza 0.15%,agar(ph7,2-7.4)La fundul eprobetei pentru absorbtia oxigenului se introduc
bucatele de ficat sau carne intrun strat de 1-1.5 cm si se acopera cu 6-7 ml mediu.
Pina la utilizarea mediului se incalzeste la baia ferbinte 10-20 minpentru inlaturarea oxigenului dizolvat in el ,apoi
se raceste .Pentru izolarea formelor anaerobe sporogene mediul insamintat din nou se incalzeste la temp de 80
grade(20-30min)pentru inactivarea formelor bacteriene asporulate.

6.Etapele examenului bacteriologic pentru izolarea culturilor de bacterii anaerobe


(clostridiene, neclostridiene)
Condiia principal cultivare n absena oxigenului
1. Utilizarea mediilor anaerobe (Kitt-Tarrozzi regenerat - 100 C, 20 min, rcit, acoperit cu vazelin;
nsmnarea n geloz n coloan)
2. Crearea condiiilor de anaerobioz
-

Metoda fizic utilizarea anaerostatului

Metoda chimic n exicator se ntroduc substane ce fixeaz oxigenul (pirogalol+baz); utilizarea gaspachetelor

Metoda biologic Fortner cultivarea concomitent a aerobilor i anaerobilor

Recoltarea cu precauie, evitnd contactul cu aerul (n seringi, utiliznd medii speciale)

I etap MBOGIREA ANAEROBILOR

nsmnarea prelevatului n 2 eprubete cu mediul Kitt-Tarrozzi regenerat

nclzirea unui tub la 80 C, 20 min distrugerea florei nesporogene

Incubarea la 37 C, 24-48 h (va avea loc multiplicarea anaerobilor)

II etap - IZOLAREA CULTURII PURE


DE ANAEROBI
-

Studierea caracterelor de cultur tulburarea mediului, descompunerea bucilor de ficat, etc

Izolarea culturii pure de anaerobi prin metoda Zeissler (nsmnarea a 0,1 ml din mediul K-T pe 3 cutii
cu geloz-snge glucozat consecutiv). Incubarea n anaerostat/exicator/gas-pack, 24-48 h

Metoda Weinberg diluii succesive ale culturii n geloz glucozat lichefiat i aspirarea n tuburi lungi
i nguste, nchise ermetic. Incubarea n termostat, 24 h
III etap - ACUMULAREA CULTURII PURE

Studierea macroscopic a coloniilor

Examinarea microscopic (frotiu Gram) a coloniilor suspecte

Repicarea n mediul K-T regenerat pentru acumularea culturii pure

Incubarea n termostat, 24 h
IV etap - IDENTIFICAREA CULTURII PURE DE ANAEROBI

Verificarea puritii culturii pure (frotiu Gram)

Studierea caracterelor culturii pure izolate (cu respectarea condiiilor de anaerobioz)


V etap - EVALUAREA REZULTATELOR, FORMULAREA I ELIBERAREA RSPUNSULUI

7-9.STUDIUL CARACTERELOR DE CULTURA ALE MICROORGANISMELOR ANAEROBE


IZOLATE