Sunteți pe pagina 1din 54

2.

STRUCTURA I FUNCIILE CELULEI BACTERIENE


Cunoaterea structurii interne a celulei bacteriene este rezultatul utilizrii tehnicilor de citochimie i de
microscopie electronic.
Structura reper a celulei bacteriene este peretele celular. n raport cu peretele se disting structurile
intraparietale (care alctuiesc protoplastul bacterian) i structurile extraparietale.
Structurile intraparietale sunt:
- spaiul periplasmic;
- membrana plasmatic;
- mezosomul;
- citoplasma;
- ribosomii;
- incluziile;
- vacuolele;
- sporul;
- aparatul fotosintetic;
- rhapidosomii (rhapidos = baston) incluzii ribonucleoproteice n form de baston;
- magnetosomii incluzii intracelulare cu structur cristalin delimitate de membran, formate din magnetit
(Fe3O4). Magnetosomii confer dipol magnetic permanent celulei, permindu-i s se alinieze pasiv la cmpul
geomagnetic. Bacteriile care produc magnetosomi manifest magnetotaxie, adic procesul de orientare i
migrare de-a lungul liniilor cmpului magnetic.
Structurile extraparietale sunt reprezentate de:
- glicocalix cu variantele sale structurale: capsula i glicocalixul comportamental;
- flageli;
- fimbrii i pili;
- spini structuri pericelulare groase la baz i ascuite la vrf.
Unele structuri (membrana, citoplasma, nucleoidul, ribosomii) sunt eseniale (obligatorii) i se gsesc la
toate celulele bacteriene. Altele sunt facultative (spor, aparat fotosintetic, capsul, flageli), fiind prezente numai la
anumite grupe de bacterii.
2.1. Peretele celular
Peretele celular este o structur rigid de nveli, care nconjoar complet celula bacterian. La cele
mobile, peretele este strbtut de flageli. Structura parietal lipsete la bacteriile din grupul Mycoplasma, precum i
la cele halofile extreme (cele care triesc n medii saline foarte concentrate, unde structura protectoare fa de ocul
osmotic nu este necesar). Un criteriu empiric cu o valoare practic deosebit n clasificarea i identificarea
procariotelor este comportamentul la coloraia Gram (C. Gram, 1884). Caracterul Gram pozitiv sau Gram negativ
reflect deosebirile structurale majore ale celor grupuri de bacterii. Coloraia Gram implic tratamentul succesiv al
celulelor cu cristal-violet (un colorant bazic), urmat de tratamentul cu soluie de iod n KI i ulterior, extracia cu
un solvent organic polar (alcool sau acetona). n celul, cristal-violetul i iodul formeaz un complex insolubil.
Celulele care rezist etapei decolorrii i rein complexul insolubil (cristal violet-iod) albastru nchis sunt celule
Gram pozitive, iar cele care nu rein colorantul sunt Gram negative. Caracterul Gram pozitiv sau Gram negativ
reflect deosebiri structurale majore ale peretelui.
n funcie de particularitile structurale ale peretelui, bacteriile se mpart n 4 categorii:
l. Firmacutes (firmus = tare; cutis = nveli) sunt bacteriile Gram pozitive, cu perete celular gros i rigid, la care
mureina reprezint pn la 80% din greutatea uscat a acestei structuri i bacteriile acido-alcoolo-rezistente.
2. Gracillicutes (gracillis = subire, fin) sunt bacteriile Gram negative cu perete subire, la care mureina
reprezint circa l0% din greutatea uscat a peretelui.
3. Mendosicutes (mendosus =o structur cu defecte). Noiunea desemneaz organismele domeniului Archaea,
care au perete celular din care lipsete mureina.
Marea majoritate a bacteriilor cunoscute aparin grupului Gram pozitive sau Gram negative.
4. Mollicutes sau Tenericutes (mollis, tener = moale) cuprinde bacteriile din grupul Mycoplasma, lipsite de
perete. Periferia celulei este acoperit de o membran ce conine steroli, cu rol protector fa de liza osmotic. Sunt
cele mai mici bacterii cunoscute, cu capacitatea de a crete pe medii inerte.
2.1.1. Structura molecular a peretelui la bacteriile Gram pozitive

La bacteriile Gram pozitive, peretele celular este gros, rezistent i rigid. Componenta esenial este
mureina, denumit nc i peptidoglican, glicopeptid, mucopeptid sau glucozaminopeptid. Mureina formeaz un
strat rigid, adiacent membranei plasmatice, iar sub aspectul compoziiei chimice este unitar la toate eubacteriile
(Gram pozitive i Gram negative).
Mureina este alctuit dintr-o component peptidic i una glucidic. Componenta glucidic repetitiv este
un dizaharid format din N-acetil-D-glucozamin i acid N-acetilmuramic, legate l-4. Acidul N-acetilmuramic
rezult prin stabilirea unei legturi ester ntre N-acetil-D-glucozamin i acidul lactic (fig. 1). La fiecare unitate
diglucidic este legat o component peptidic, reprezentat de un tetrapeptid, a crui compoziie n aminoacizi
este variabil n funcie de specie, dar conine L-alanin, acid D-glutamic, acid diaminopimelic (derivat al lizinei)
sau lizina i D-alanina i se leag de acidul N-acetilmuramic(fig. 1, 2). Acidul N-acetil muramic i D-aminoacizii
sunt markeri biochimici ai eubacteriilor.

Fig. 1. Derivaii glucidici cei mai comuni n structura peretelui celular bacterian: N-acetil-glucozamina i acidul N-acetilmuramic. a. Acidul
diaminopimelic, derivat al lizinei. b. Lizina.

Fig. 2. Structura glicanului tetrapeptidic, una dintre unitile repetitive ale peptidoglicanului structurilor parietale. Aceast structur
chimic se gsete la E. coli, dar bacteriile conin i ali aminoacizi.

Legturile glicozidice nu sunt suficiente pentru a asigura rigiditatea structurii parietale. Tetrapeptidele sunt
legate prin puni peptidice transversale (fig. 3). La bacteriile Gram negative, punile peptidice transversale reunesc
gruparea NH2 a acidului diaminopimelic, cu gruparea COOH a D-Ala terminale a peptidului adiacent.

Fig. 3. (a) Modelul general al structurii chimice a peptidoglicanului. (b) Sgeile indic situsurile la care peptidoglicanul poate fi atacat
de hidrolazele peretelui celular. Sunt reprezentate trei catene de peptidoglican ce constau din resturi alternante de acid N-acetil muramic i
N-acetil glucozamin. Tetrapeptidele legate de acidul N-acetilmuramic sunt interconectate prin puni peptidice cu o secven variabil, la S.
aureus de pentaglicin (c), (d) Reprezentarea structurii generale a peptidoglicanului (G = N-acetilglucozamina; M = acid N-acetilmuramic).
Liniile groase reprezint legturi peptidice transversale (dup Brock, 1988).

Cu ct numrul de legturi peptidice este mai mare, cu att crete rigiditatea peretelui. Se formeaz astfel
o structur covalent perfect continu n jurul celulei, o molecul mureinic gigant, un adevrat sac mureinic, cu
structur tridimensional dinamic.
Peptidoglicanii diferitelor specii difer prin aminoacizii 2 i 3 ai tetrapeptidului i prin frecvena punilor
transversale de pentaglicin. Speciile patogene au o frecven superioar a punilor transversale, ceea ce se
coreleaz cu o rezisten mai mare a mureinei la aciunea factorilor litici din umorile organismului (lizozimul etc.).
Sinteza peptidoglicanului ncepe cu sinteza n citoplasm a complexului UDP-acid N-acetilmuramicpentapeptid, ataat de bactoprenol (un lipid al membranei), cuplat ulterior cu o molecul de N-acetilglucozamin
de la UDP. Dizaharidul este polimerizat la un intermediar oligozaharidic i este transferat la captul n curs de
sintez al polimerului glicolipidic parietal.
Legarea transversal este rezultatul unei reacii de transpeptidare, n care grupul NH2 al unui rest de
pentaglicin nlocuiete D-Ala terminal a peptidului nvecinat. Reacia de transpeptidare este catalizat de PBP
(penicillin binding proteins). PBP leag covalent penicilina i alte antibiotice -lactamice, datorit asemnrii
structurale pariale a antibioticului i a precursorului pentapeptidic.
Calea biosintetic ofer explicaia aciunii selective a unor ageni antibacterieni (lizozimul i penicilina)
asupra peretelui mureinic.
Lizozimul cliveaz legturile glicozidice l-4 i hidrolizeaz mureina celulelor aflate n faza staionar.
Penicilina inhib celulele bacteriene aflate n faza de cretere, deoarece inhib treapta final a sintezei
mureinei, reacia de transpeptidare, adic formarea legturilor peptidice transversale ntre catenele de glican
adiacente. Inhibiia transpeptidrii sub aciunea penicilinei duce la formarea unui peptidoglican subire, urmat de

liza i moartea celulei, pentru c autolizinele continu s funcioneze, iar alte puni peptidice nu se mai formeaz.
De aceea, penicilina este activ numai asupra celulelor care cresc. n celulele care nu cresc, autolizinele nu sunt
active i peptidoglicanul nu este degradat.
Orice compus chimic care interfer cu sinteza peptidoglicanului are ca rezultat sinteza unui perete
discontinuu sau mai subire i liza celulei.
La nivelul peretelui mureinic sunt localizate enzimele care modeleaz creterea sa: murein-hidrolazele taie
legturile chimice ale mureinei, iar murein-sintetazele inser noi uniti de construcie.
Mureina formeaz o matrice, n care se gsesc ali polimeri: polizaharide, acizi teichoici.
Acizii teichoici sunt molecule lungi i flexibile. Din punct de vedere chimic sunt polimeri de l-3poliglicerol-fosfat sau de poli-ribitol-fosfat, legai fosfo-diesteric. Polimerii formeaz axul central al moleculei.
Gruprile OH libere ale glicerolului i gruparea OH C 3 a ribitolului sunt ocupate de resturi de D-Ala, D-Glc sau
de N-AcGlc.

Poliglicerol fosfat.

Poliribitol fosfat.

La bacteriile Gram pozitive sunt prezente dou categorii de acizi teichoici:


- acizi lipoteichoici (ALT), care traverseaz peptidoglicanul, legndu-se cu o extremitate de
glicolipidele din membran, iar cellalt capt este liber la suprafaa celulei;
- acizi teichoici parietali, ataai covalent de resturile de acid N-acetilmuramic ale mureinei.
mpreun cu mureina, acizii teichoici formeaz o reea polianionic sau matrice, cu rol n
meninerea echilibrului cu cationii metalici, dar i n reglarea traficului de ioni, nutrieni, proteine i
antibiotice.
Funciile acizilor teichoici sunt multiple:
- acizii teichoici sunt structuri moleculare filamentoase, care confer un plus de rigiditate peretelui
celular al bacteriilor Gram pozitive;
- fiind polianionici, au rol n transportul cationilor metalici n/i din celul;
- au rolul de receptori de fagi;
- au rolul de adezine (mediaz aderena celulei la substrat, favoriznd formarea biofilmelor), confer
rezisten la antibiotice. La bacteriile patogene, acizii teichoici sunt un factor de virulen, deoarece
au proprieti chimiotactic negative fa de fagocite. Acizii teichoici parietali sunt imunogeni, att n
stare liber ct i asociai celulei.
Uneori bacteriile secret cantiti mari de acizi teichoici solubili.
Bacteriile Gram pozitive care nu au acizi teichoici prezint molecule anionice cu funcii
asemntoare (de exemplu, lipomananul, n locul ALT la Micrococcus luteus).
2.1.2. Peretele celular acido-alcoolo- rezistent al micobacteriilor
Unele bacterii (Mycobacterium tuberculosis, Corynebacterium diphteriae, Nocardia asteroides)
au perete celular cu o structur chimic particular (fig. 4). n compoziia sa intr lipide complexe, care
nu se gsesc n structura parietal a altor bacterii. Celulele bacteriene se coloreaz slab dup protocolul
coloraiei Gram, dar se coloreaz la cald cu fuxin bazic concentrat i sunt rezistente la decolorare
succesiv cu acid sulfuric diluat i alcool etilic 96%. Aceste organisme se numesc acido-alcoolorezistente.

Fig. 4. Reprezentarea schematic a componentelor peretelui celular acido-rezistent la grupul Mycobacterium Nocardia. Regiunea
extern a nveliului conine uniti lungi de acid micolic legat de arabinogalactan (dup Holt, 1998).

Rezistena la decolorare se datoreaz compoziiei chimice a peretelui celular. Peptidoglicanul


micobacteriilor conine acid diaminopimelic ca acid diaminic major, iar acidul muramic este N-glicozilat (i nu Nacetilat).
Un alt compus major parietal al micobacteriilor este polizaharidul cu greutate molecular mare
arabinogalactanul, un copolimer polizaharidic, alctuit din arabinoz i galactoz, esterificate cu acizi grai cu
caten lung acizii micolici cu 70-90 atomi de C. La Corynebacterium i Nocardia, acizii grai au caten mai
scurt (40-60 de atomi de C). Glicolipidele complexe din structura peretelui confer proprietatea de acido-alcoolorezisten.
A II-a categorie de lipide, cele libere, sunt lipooligozaharide ce conin trehaloza i lipoarabinomanani.

2.1.3. Peretele celular la bacteriile Gram negative


Peretele bacteriilor Gram negative este mai complex, datorit prezenei unei structuri
caracteristice denumit membrana extern, o replic structural a membranei plasmatice, care poate fi
astfel considerat ca membran intern (fig. 5). Membrana extern, ca i celelalte membrane biologice,
este alctuit dintr-un strat lipidic dublu, puin permeabil pentru moleculele hidrofile. n stratul lipidic
sunt inclavate proteine, denumite porine, ce formeaz canale pentru influxul nutrienilor i pentru
eliminarea produselor de catabolism.
Porinele s-au gsit la toate bacteriile Gram negative i chiar la un grup de bacterii Gram pozitive:
Corynebacterium-Nocardia-Mycobacterium, care produc un perete celular bogat n lipide, asemntor
dublului strat.
Analiza filogeniei organismelor procariote pe baza secvenierii proteinelor a dus la concluzia
existenei unor diferene filogenetice majore ntre organismele cu nveli dublu membranar
(didermice) i cele cu membran simpl (monodermice).

Fig. 5. Reprezentarea schematic a structurii moleculare a peretelui la bacteriile Gram negative. Proteinele trimere matriceale din
membrana extern sunt asociate cu lipoproteine i cu lipopolizaharide (LPS). LPS sunt legate covalent de peptidoglican.

La microscopul electronic, membrana extern a peretelui apare pluristratificat. Componentele chimice


sunt fosfolipide (35% din greutatea uscat), proteine (l5%) i lipopolizaharide (50%).
Proteinele membranei externe se numesc porine, deoarece regleaz permeabilitatea i constituie canalele
membranare de transport celular. Iniial s-au descris trei tipuri de porine: OmpF, OmpC i PhoE. Analiza prin
metoda cristalografiei cu raze X relev c porinele sunt proteine transmembranare trimerice cu o secven de 250450 aminoacizi, a cror configuraie secundar este cea de -pliere. Aproape invariabil, secvenele porinelor au la

captul C-terminal fenil-alanina, sau rareori triptofanul. Porinele au funcie de canale de difuzie a moleculelor
mici. Unele porine sunt permeabile pentru orice molecul mai mic de 600 Da, altele sunt bariere selective de
permeabilitate pentru anioni sau cationi, sau favorizeaz trecerea moleculelor polare * n raport cu cele nepolare. O
celul de E. coli produce circa 105 molecule porine. n mediul hiperosmotic, numrul porinelor diminueaz.
*
Gruprile polare conin atomi de O, S sau N, ce acioneaz ca acceptori de legturi de H prin intermediul crora interacioneaz cu alte
grupri de semn opus sau cu apa ca solvent.
O molecul sau un grup de atomi este nepolar, dac i lipsesc atomii electronegativi N, O, S, astfel c nu conine grupri cu sarcini
electrostatice importante: steroizii i alte lipide, lanurile lungi hidrocarbonate ale aminoacizilor Leu, Ileu, Val.

Cel puin la enterobacterii, dublul strat fosfolipidic al membranei externe este asimetric:
stratul extern conine aproape exclusiv LPS;
stratul intern conine aproape exclusiv fosfolipide.
Lipoproteinele leag ferm membrana extern de peptidoglicanul profund (Magnuson i colab., 1993).
La bacteriile Gram negative, mureina reprezint numai 2,5-l0% din greutatea uscat a peretelui.
Mureina este localizat n stratul cel mai intern al peretelui. Dup un tratament adecvat, membrana extern se poate
ndeprta i se obine sacul mureinic pur, extrem de fin, care pstreaz forma original a celulei i care sugereaz
c mureina ar putea fi o reea bidimensional (un monostrat molecular), n timp ce la bacteriile Gram pozitive
cantitatea de peptidoglican corespunde la minimum 20 de straturi moleculare.
Lipopolizaharidele (LPS) sunt inclavate n membrana extern. Ele sunt de fapt endotoxinele* bacteriilor
Gram negative (Salmonella, Shigella, Escherichia) (fig. 6). Dei sunt localizate la suprafaa celulei, se numesc
endotoxine, deoarece se elibereaz numai dup pierderea integritii celulei .
-

Fig. 6. Raporturile macromoleculelor componente ale peretelui celular (dup Todar, 2004).
*
Termenul LPS este atribuit extractelor bacteriene purificate, libere de contaminani detectabili, n special proteine. Endotoxina este
produsul de extracie cu acid tricloracetic, butanol sau EDTA, care const din macromolecule LPS, proteine i fosfolipide.

2.1.3.1. Structura chimic a moleculei de LPS


Din punct de vedere chimic, LPS sunt molecule complexe, fiind alctuite dintr-o fracie lipidic i una
polizaharidic. De aici deriv proprietile amfipatice ale acestui agregat molecular, conferit de grupri polare
hidrofile i grupri apolare hidrofobe.
Datorit poziiei lor externe, LPS se pot extrage din celule, cu fenol 45-60%.
La microscopul electronic, filamentele LPS au o structur trilaminar, corespunztoare celor dou straturi
poliozidice i stratului lipidic.
Cele mai studiate LPS sunt cele produse de tulpinile de Salmonella. Din punct de vedere structural, molecula
LPS are trei regiuni (Schnaitman i Klena, 1993) (fig. 7a):
o regiune polizaharidic extern (polizaharidul O)
o regiune oligozaharidic intermediar (regiunea R)
o regiune intern hidrofob, denumit lipidul A, prin care LPS se ancoreaz n membrana extern, printre
moleculele fosfolipidice.

Fig. 7a. Reprezentarea schematic a structurii moleculei de LPS.

Regiunile intermediar i intern ale moleculei LPS au compoziie chimic relativ constant la diferite
specii de bacterii Gram negative.

Polizaharidul regiunii externe este un polimer de pn la 100 de resturi glucidice, format din uniti
oligozaharidice repetitive, care confer specificitate serologic de grup unor bacterii Gram negative (de exemplu,
Salmonella). Unitile oligozaharidice conin 2- 4 glucide: D-manoza, D-galactoza, L-ramnoza, o dezoxihexoz, o
didezoxihexoz. Didezoxihexozele sunt zaharuri care nu exist n stare liber n natur, dar intr frecvent n
structura polizaharidului enterobacteriilor i au primit denumiri care deriv de la speciile de origine: abequoza,
tiveloza, paratoza, colitoza.
Variaia antigenic a polizaharidului regiunii externe se amplific pe urmtoarele ci:
- schimbri ale poziiei legturilor (de exemplu, 1-4 n loc de 1-6);
- configuraii* moleculare modificate;
- nlocuiri la nivelul diferitelor subuniti repetitive;
- deleia sau substituia unui rest glucidic din subunitile oligozaharidice.
*

Configuraia moleculei se refer la raportul geometric ntre un set de atomi (de exemplu, cei care deosebesc
acizii L de acizii D). Conversia ntre variantele configuraiei necesit ruperea legturilor covalente. Conformaia se
refer la raportul spaial al atomilor n molecul. Conversia ntre variantele conformaionale se face fr ruperea
legturilor covalente.
Regiunea central a LPS (miezul R) este format dintr-un oligozaharid de pn la 15 resturi, legat covalent
la poziia 3 a lipidului A printr-un trizaharid, 2-ceto-3-dezoxioctonat (KDO). Are o variabilitate chimic mult mai
restrns i confer specificitate de gen.
Lipidul A este legat covalent de oligozaharidul regiunii centrale R, fiind inserat i ancorat, prin catenele
acizilor grai, cu lipidele membranei externe. ntreaga molecul LPS este astfel orientat, nct polizaharidul O se
proiecteaz la exterior i determin specificitatea antigenic a celulei bacteriene.
La Salmonella, lipidul A este alctuit din dizaharide de D-glucozamin, legate l-6 (fig. 7b). Perechile de Dglucozamin sunt interconectate l-4, prin puni pirofosfat.
Gruprile OH din poziiile 3, 4 si 6 ale fiecrui dizaharid sunt substituite de acizi grai (lauric, palmitic,
miristoximiristic, hidroximiristic), cu lungimea medie a catenei de 10-28 atomi de C, legai de resturile de zahr
prin legturi esterice sau amidice. Moleculele lipidice A ale diferitelor bacterii pot s difere prin resturile glucidice.
La grupul OH din poziia 3 se leag componenta oligozaharidic (acidul 2-ceto, 3-deoxioctanoic) (KDO) a
regiunii centrale.
Gruprile -NH2 ale glucozaminei sunt substituite de acidul D-3-hidroximiristic.
Componenta lipidic confer moleculei LPS calitatea de toxin. Lipidul A are proprieti endotoxice,
evideniate la mutantele R care sintetizeaz LPS incomplet, cruia i lipsete polizaharidul O i unele componente
ale oligozaharidului regiunii intermediare R.
n mediile naturale, cele mai multe bacterii sintetizeaz polizaharidul O i formeaz colonii S. Cele care nu
sintetizeaz polizaharidul O formeaz colonii R. Polizaharidul O nu este factorul determinant al patogenitii,
deoarece formele coloniale R ale B. pertusis, N gonnorhoeae sunt patogene.

Fig. 7b. Structura lipidului A al LPS de Salmonella, cu trizaharidul KDO (keto-deoxi-octanoic) i cu resturile de acizi grai.

Moleculele de LPS formeaz baza structural a membranei externe.


LPS este polianionic datorit sarcinilor negative ale lipidului A i leag cationi. Moleculele adiacente
polianionice de LPS sunt aparent legate electrostatic, una de alta, prin cationi bivaleni (Ca 2+, Mg2+) i formeaz o
structur compact ca un acoperi de igl, pe suprafaa membranei externe. Situsurile LPS care leag cationii
sunt eseniale pentru integritatea membranei externe, dar n acelai timp ele reprezint clciul lui Ahile al

acestei structuri, deoarece antibioticele policationice din grupul polimixinei se complexeaz avid cu LPS i
dezorganizeaz membrana extern, mrind permeabilitatea pentru agenii cu aciune asupra membranei sau
componentelor citoplasmatice. Toi agenii policationici se leag de LPS anionice, cu o afinitate variabil.
Bacteriile Gram negative sunt rezistente la detergenii anionici i neutri, dar sunt sensibile la detergenii
monocationici.
Agenii chelatori ai ionilor de Ca2+ i Mg2+ dezorganizeaz i permeabilizeaz membrana extern (Vaara,
1992).
Reacia Gram nu se coreleaz strict cu compoziia chimic a peretelui, ci depinde de structura sa fizic, de
starea fiziologic a celulei, de integritatea ei structural. Astfel, levurile, dei au perete celular gros, dar cu o
compoziie chimic diferit de a mureinei, se coloreaz Gram pozitiv, iar bacteriile Gram pozitive mbtrnite se
coloreaz Gram negativ.
2.1.3.2. Spaiul periplasmic
Spaiul periplasmic este un compartiment celular al bacteriilor Gram negative, delimitat de membrana
extern a peretelui celular i de membrana intern (citoplasmatic). Este singurul compartiment al celulei
procariote i conine un volum apos semnificativ n care se gsesc proteine i oligozaharide. Proteinele sunt
reprezentate de enzime degradative (DN-aza, RN-aza, proteaze, fosfataze, penicilinaza etc.) i proteine de legare
specifice pentru diferite molecule, cu rol n transport i chimiotaxie.
Oligozaharidele se gsesc n concentraii variabile i au rolul de a regla presiunea osmotic a celulei. Cnd
presiunea osmotic a mediului crete, oligozaharidele trec n citoplasm, iar cnd scade, oligozaharidele revin n
spaiul periplasmic.
Spaiul periplasmic ndeplinete o funcie esenial ce const n acumularea nutrienilor moleculari din mediu,
nainte de a ptrunde n celul. Spaiul periplasmic funcioneaz ca un compartiment adaptativ, a crui funcie de
depozit este foarte important, deoarece bacteriile Gram negative triesc, de cele mai multe ori, n mediile
oligotrofe (mediile aquatice).
n spaiul periplasmic, nutrienii sunt scindai parial sub aciunea enzimelor degradative i de aici sunt
preluai de proteinele de transport din membrana intern i transferai n celul.
2.1.4. Peretele celular la Archaea
Din punct de vedere fiziologic, microorganismele domeniului Archaea sunt mprite n trei tipuri:
metanogene, halofile i sulf-dependente.
Metanogenele sunt strict anaerobe i produc gaz metan ca produs final al fermentaiei. Pot fi mezofile (din
ap, sol, intestinul animalelor) i hipertermofile, ce cresc la 110 o (Methanopyrus).
Halofilele triesc n medii hipersaline, n soluii saturate de NaCl (Halobacterium halobium). Unele
halofile se protejeaz de lumin cu un pigment care conine carotenoizi. Sunt aerobe obligate. Metanogenele,
halofilele i sulfat-reductorii termofili (Thermococcus, Pyrococcus) sunt incluse n linia filogenetic
Euryarchaeota.
Archaea sulf-dependente sunt hipertermofile i i dobndesc energia prin reacii de reducere a sulfului
elementar (Thermoproteus, Pyrodictium etc.) sau de oxidare a compuilor redui ai S (Sulfolobus). Sunt specii
aerobe i anaerobe. Sunt rspndite n mediul marin i n mediile vulcanice terestre. Ele aparin liniei filogenetice
Crenarchaeota (crenos = izvor).
La Archaea, peretele celular prezint diferene structurale majore, comparativ cu al eubacteriilor (fig. 8).
Diferitele specii de Archaea se coloreaz Gram pozitiv sau Gram negativ. Peretele lor nu conine acid muramic sau
D-aminoacizi, markeri biochimici ai mureinei.

Fig. 8. Structura pseudomureinei, polimerul peretelui celular la Methanobacterium sp.

Din punct de vedere chimic, peretele la Archaea este heterogen. La Archaea Gram pozitive
(Methanobacterium - productoare de metan), peretele conine o pseudomurein, metanocondroitin sau
heteropolizaharide.
Pseudomureina (markerul biochimic al metanobacteriilor) este alctuit din uniti repetitive formate din
dou zaharuri aminate (N-acetilglucozamin i acidul N-acetiltalosaminuronic, markerul biochimic al
metanobacteriilor), legate l-3. Resturile acidului N acetiltalosaminuronic sunt legate prin puni peptidice (ca i
la murein), iar aminoacizii sunt numai izomeri L. Legturile l-3 ale pseudomureinei sunt rezistente la aciunea
lizozimului. Componenta peptidic este alctuit din 3 L-aminoacizi: acid glutamic, alanina i lizina.
Ambele componente pot fi modificate: N-acetilglucozamina poate fi nlocuit total sau parial de Nacetilgalactozamin, iar resturile de glicin, treonin, ornitin sau asparagin pot lua locul celor 3 aminoacizi, dac
sunt n concentraii mari n mediul de cretere.
Mureina i pseudomureina sunt componente omologe ca structur i funcie, dar diversitatea compoziiei
chimice exclude originea lor comun.
Archaea cu alte tipuri de nveli celular reacioneaz Gram negativ, dar structura tipic de perete Gram
negativ lipsete.
2.1.5 Funciile peretelui celular
Peretele celular este o structur esenial a celulei bacteriene, ndeplinind funcii multiple:
- este o structur cu rol esenial n arhitectura celular, pentru c fiind rigid, determin forma celulei i
meninerea ei. Dup pierderea coninutului celular, sacul mureinic pstreaz forma iniial a celulei. Mureina
confer elasticitate celulei, permind mrirea volumului ei prin cretere. Elasticitatea este capacitatea de a
suferi deformri la presiune, fr alterarea structurii celulare.
- confer protecia fa de liza osmotic n mediile hipotonice;
- peretele celular regleaz funcia de permeabilitate, constituind o barier mecanic suplimentar, alturi de
membrana citoplasmatic. La bacteriile Gram pozitive, peretele are o porozitate de 1,1 nm, permind trecerea
moleculelor mai mici de l200 Da*.
*

Un dalton este egal cu masa atomului de H, adic l,672649 x l0 -24 g. l kDa = l 000 Da.

la bacteriile Gram pozitive, peretele particip la formarea septului de diviziune, care separ cele dou celule
surori, i la procesele de cretere. Creterea volumului celular este rezultatul creterii peretelui;
la bacteriile Gram negative membrana extern conine proteine cu funcii de transport molecular, care au rol
de receptori de vitamine, glucide, aminoacizi, de transferine (leag Fe i l transfer n celul);
membrana extern este o barier cu permeabilitate selectiv: permite difuzia moleculelor mici n ambele
sensuri, fiind impermeabil pentru macromolecule. Permite difuzia limitat a substanelor hidrofobe,
deoarece lama extern nu conine glicerofosfolipide. Suprafaa celulei este acoperit cu LPS, care formeaz o
structur quasicristalin. Din aceast cauz, lama extern nu prezint o difuzie lateral marcat a moleculelor,
tipic membranelor alctuite din glicerofosfolipide;
porinele membranei externe, legate necovalent de murein, regleaz procesele de permeabilitate prin
modificri conformaionale, deoarece funcioneaz ca adevrate canale moleculare. n mediile cu osmolaritate

mic (cele naturale), porinele sunt mai permeabile, iar la bacteriile patogene, n organismul gazd, porinele au
permeabilitate mai mic;
la bacteriile patogene, n membrana extern se gsesc proteine de virulen: adezine, cu rol de fixare a
bacteriei pe celulele sensibile;
LPS are proprieti chimiotactic negative fa de fagocite, mrind nivelul virulenei bacteriene i confer
individualitate biochimic i serologic diferitelor tulpini;
LPS este antigenic i induce sinteza anticorpilor specifici cu rol protector.
2.1.6. Protoplatii bacterieni

Protoplastul este structura organizat a componentelor celulare care ramne dup ndeprtarea peretelui
celular i care, pstrndu-i viabilitatea realizeaz procese metabolice, biosinteze i transfer de energie (fig. 9).
Protoplatii bacterieni au fost obinui experimental n l952 de ctre Salton. El a evideniat c peretele
celular de Micrococcus lysodeikticus s-a digerat sub aciunea lizozimului .

Fig. 9. Imaginea electrono-optic a celulelor de Bacillus subtilis. a. n regiunea central s-a iniiat formarea septului de diviziune. b. Un
stadiu intermediar al degradrii peretelui sub aciunea lizozimului i retracia protoplastului. c. Protoplastul (Mihescu i colab., 1991).

Cea mai folosit metod de obinere a protoplatilor este digestia enzimatic cu lizozim a peretelui
bacteriilor Gram pozitive. Lizozimul, care se gsete n lacrimi, saliv, albuul de ou, atac mureina
(peptidoglicanul) prin hidroliza legturilor l-4 ale lanurilor polizaharidice. Rezult un dizaharid format din Nacetilglucozamin i N-acetilmuramic, la care rmn ataate catenele peptidice.
Protoplastul este foarte sensibil la liza osmotic. Citoplasma celulei bacteriene este o soluie mai
concentrat (l0 mM) dect a mediului de suspensie. Apa trece din compartimentul cu concentraie mic n cel cu
concentraie crescut, printr-un proces denumit osmoz. ntr-un mediu neprotejat osmotic, apa ptrunde n
protoplast i se produce plasmoliza.
ntr-un mediu protejat osmotic, protoplatii celulelor Gram pozitive i pstreaz integritatea structural,
capacitatea respiratorie, de biosintez, de cretere i diviziune i chiar de replicare a fagului, dac infecia s-a fcut
nainte de ndeprtarea peretelui.
Mediul de protecie osmotic (de protoplastizare) trebuie s conin o concentraie mare a unor substane
pentru care membrana celular este impermeabil (soluie de sucroz 0,3 M). Dac mediul de suspensie este
hipertonic, protoplastul pierde apa i colapseaz, proces denumit plasmoptiz.
n condiii speciale de mediu, protoplastul i regenereaz peretele i revine la forma original a celulei,
proces denumit reversie. Regenerarea este sigur dac protoplastul mai pstreaz un rest de perete, care va
funciona ca primer al resintezei structurii parietale.
Tratamentul cu lizozim nu este eficient pentru conversia bacteriilor Gram negative la protoplati, datorit
membranei externe care mpiedic accesul enzimei la peptidoglican. Pentru creterea eficienei aciunii enzimatice,
celulele se trateaz cu EDTA, care diminueaz concentraia ionilor de Mg. Se formeaz sferoplati (celule sferice
nconjurate parial sau total de membrana extern).
2.2. Membrana plasmatic
Membrana plasmatic sau plasmalema (lemma, lb. greac = pelicul) este bariera separatoare a citoplasmei
de mediul extern. Consecina imediat a lezrii membranei este pierderea componentelor citoplasmatice.
2.2.1. Structura membranei plasmatice
Grosimea membranei este de 7-10 nm. La microscopul electronic are o structur trilaminar, dup
modelul unitar al membranelor celulare (unit membrane) al lui Robertson. Pe baza structurii fine s-a considerat

(eronat) c membrana plasmatic este alctuit din dou straturi de proteine, ntre care se gsete unul lipidic, dar
cantitatea de proteine este prea mic pentru a forma dou straturi continue.
Membrana celulei procariote conine proteine, glucide i lipide, dar spre deosebire de membrana celulei
eucariote, cu puine excepii, nu conine steroli (fig. 10a).
Singer i Nicolson au propus modelul mozaicului fluid (fig. 10b) de organizare a membranelor biologice,
care consider c membranele sunt structuri bidimensionale de proteine globulare i lipide, cu distribuie orientat,
stabilizate de cea de a III-a component major apa. Moleculele de ap sunt legate prin puni intermoleculare de
H, formnd o structur de reea. Dizolvarea unei molecule n ap semnific stabilirea unei continuiti ntre
structura chimic a moleculei dizolvate i structura de reea a apei. Pentru a se integra (dizolva) n structura de
reea de apei, molecula trebuie s formeze o legtur de H cu apa sau s accepte o legtur a acesteia.
legat de o grupare care conine N i din glicerol. Este foarte hidrofil (formeaz legturi
cu moleculele de ap).

Fig. 10. a. Reprezentarea schematic a


moleculei
fosfolipidice,
componenta
structural a membranei. Fosfolipidele sunt
molecule polare. Cozile de acizi grai sunt
foarte hidrofobe (nu formeaz legturi cu
apa) i constituie o barier de permeabilitate
fa de moleculele hidrosolubile. Capul
moleculei este format din gruparea fosfat,

Fig. 10b. Modelul mozaicului fluid al structurii membranei.


Fosfolipidele formeaz un strat dublu, cu componentele hidrofobe
orientate spre interior, iar capetele hidrofile constituie suprafaa
intern i extern a membranei. n marea lipidic proteinele plutesc
ca nite iceberg-uri. Unele se extind n toat grosimea dublului strat
lipidic, iar altele sunt ancorate pe faa intern sau extern. Membrana
micoplasmelor i eucariotelor conine colesterol.

Membrana este un dublu strat fosfolipidic i glicolipidic foarte subire (bidimensional), la care se
asociaz proteinele membranare. Ansamblul molecular al membranei este asemnat cu un ocean
fosfolipidic, n care plutesc ca nite iceberg-uri, proteinele.
Proteinele confer membranelor multe dintre proprietile funcionale specifice (de exemplu,
meninerea i utilizarea gradientului transmembranar de H pentru sinteza ATP).
n raport cu dispunerea lor n structura membranei, proteinele sunt periferice i integrate.
Proteinele periferice sunt asociate cu membrana, dar nu au nici o secven inclus n structura ei.
Structura lor este analog proteinelor hidrosolubile.
Proteinele membranare integrate au cel puin un domeniu al moleculei situat n regiunea
hidrofob a stratului lipidic. Ele pot fi dislocate din structura membranei numai sub aciunea detergenilor
ce solubilizeaz lipidele.
Clasa proteinelor integrate se mparte n dou subclase:
1. Proteinele transmembranare au o mare parte a masei lor inclus n dublul strat fosfolipidic,
dar expun domenii semnificativ diferite pe ambele fee ale membranei, ceea ce confer asimetria
funcional a acesteia.
Ele au o structur heterogen, deoarece cel puin un domeniu al moleculei este inclus n mediul
hidrofob al lipidelor i trebuie s fie compatibil cu acesta. Secvena de 19-23 aminoacizi a domeniului
inclus n stratul lipidic este hidrofob i are configuraia -helix (fig. 11).
Domeniile extralipidice ale proteinelor integrate sunt hidrofile*, ceea ce confer asimetria
structural i funcional a membranei. Proteinele integrate difuzeaz liber n planul lateral al matricei
lipidice, dar nu trec liber dintr-un strat n altul i de aceea asimetria funcional a membranei se pstreaz
pentru perioade lungi. Aa se explic permeabilitatea superioar a feei interne n raport cu faa extern.
*

Biomoleculele sunt amfipatice, adic posed regiuni bogate n grupri ncrcate electric (polare), precum i regiuni hidrofobe
(nepolare). Gruprile polare conin atomi de O, S sau N, ce acioneaz ca acceptori de legturi de H prin intermediul crora
interacioneaz cu alte grupri de semn opus sau cu apa ca solvent. Apa este o molecul foarte polarizat, avnd sarcini pozitive i
negative. Moleculele ce poart grupri electrostatice, ca NH 3 i COO- sunt polare i greu de separat din ap. Proteinele se pliaz
cu resturile de aminoacizi hidrofobi, spre interior, iar aminoacizii cu grupri polare (Arg, Glu, Ser) se gsesc la suprafaa
moleculei.

Asimetria structural a proteinelor integrate se evideniaz pe imagini electrono-optice ale


membranei criofracturate. Tehnica criofracturrii presupune nghearea rapid a membranei la temperatura
azotului lichid i fracturarea membranei cu un cuit special. Membrana se cliveaz de-a lungul regiunii
hidrofobe a acizilor grai i rezult dou jumti de membran, cu un grad accentuat de asimetrie,
conferit de proteinele transmembranare .

Fig. 11. Reprezentarea schematic a localizrii proteinelor membranare. Proteinele periferice sunt n raporturi spaiale strnse
cu capetele hidrofile ale fosfolipidelor. Proteinele integrate sunt localizate n dublul strat fosfolipidic ori au domenii care se
extind n regiunile hidrofile (dupa Holt si colab., 1998).

2. Proteinele membranare ancorate au un domeniu ce penetreaz dublul strat lipidic, dar nu


traverseaz complet membrana. Sunt ancorate de membran prin legtur covalent cu lipidele.

Structura membranei plasmatice este stabilizat prin legturi de H i interaciuni moleculare


hidrofobe. Ionii de Mg i Ca realizeaz legturi ionice cu sarcinile negative ale fosfolipidelor i
stabilizeaz structura membranei.
Lipidele conin esteri ai acizilor grai (AG) cu glicerolul. Acizii grai celulari au o caten de 9-20
atomi de C i includ majoritatea glicolipidelor i fosfolipidelor membranare, n a cror structur
predomin AG cu l4, l6 i 18 atomi de C, saturai sau nesaturai. Acidul gras saturat cu 16 atomi de C
(acidul hexadecanoic) este foarte conservat la procariote. Eubacteriile conin circa 20 de AG, unii dintre ei
fiind specifici procariotelor. Bacteriile Gram negative au proporie mai mare de AG saturai i
mononesaturai, cu numr par de atomi de C, dect cele Gram positive (Magnuson i colab., 1993).
Ultimele au o proporie mai mare de AG cu numr impar de atomi de C. n categoria acizilor grai nu sunt
incluse catenele lungi de 24-90 atomi de C ai acizilor micolici i nici quinonele izoprenoide.
Fosfolipidele (fosfogliceride) membranelor biologice sunt molecule amfipatice polare, deoarece
au un cap polar (glicerolul) legat cu cozile nepolare* ale acizilor grai: glicerolul intr n structura de
reea a apei, fiind hidrofil, iar acizii grai formeaz componenta hidrofob a moleculei (fig. 12). Astfel,
membrana are dou suprafee polare, cu caracter hidrofil, datorat resturilor de glicerol.

Fig. 12. a. Structura de baz a dublului strat fosfolipidic. b. Distribuia stabil a moleculelor lipidice n ap, cu formarea unei
vezicule membranare.
*

O molecul sau un grup de atomi este nepolar dac i lipsesc atomii electronegativi N, O, S, astfel c nu conine
grupri cu sarcini electrostatice importante: steroizii i alte lipide, lanurile lungi hidrocarbonate ale aminoacizilor Leu, Ileu, Val.
Moleculele nepolare au tendina de a se deplasa din ap spre mediul uleios, aa cum este interiorul membranelor .

Rolul lipidelor membranare s-a studiat folosind ca model veziculele membranare artificiale sau
naturale, ce se formeaz spontan dup spargerea celulelor. n soluie apoas, lipidele se agreg i
formeaz spontan structuri n dublu strat: micelii * sferice cu acizii grai la interior, iar moleculele de
glicerol ramn expuse n mediul apos. Miceliile se organizeaz asemntor n mediul hidrofob (uleios),
dar componenta apolar (hidrofob) se orienteaz spre mediul de dispersie. Agregatul funcioneaz ca o
barier impermeabil pentru trecerea liber a moleculelor polare n i din celul.
*
Miceliile sunt particule formate din cteva mii de macromolecule amfipatice i ap. Moleculele amfipatice au o grupare
carboxil polar i o caten lung apolar (de exemplu, acizi grai) i sunt orientate cu regiunea hidrofob spre interior, de unde
apa este exclus, iar gruprile hidrofile sunt orientate la suprafa, n contact cu apa.

Al II-lea tip de agregat lipidic n ap este dublul strat, n care cele dou straturi lipidice formeaz
o lam bidimensional (fig. 12a). Regiunile hidrofobe ale fiecrui monostrat interacioneaz reciproc, dar
la capete sunt n contact cu apa. Lama dublului strat este relativ instabil, se pliaz i formeaz al III-lea
tip de agregat, o sfer (vezicul), un liposom, care delimiteaz un compartiment apos (fig. 12b).
Datorit caracterului hidrofob, deplasarea lipidelor dintr-un strat n altul (micare flip-flop) necesit ca
un grup polar s prseasc mediul apos i s se deplaseze n interiorul hidrofob al dublului strat, proces
care presupune schimbri majore ale energiei libere. n timpul sintezei membranei bacteriene (ca i n
celulele eucariote), fosfolipidele sunt produse pe faa intern a membranei i trebuie s difuzeze n lama

extern. Micarea transmembranar este facilitat de o familie de proteine (flipaze), care ofer o
modalitate de micare mai favorabil energetic i mult mai rapid dect micarea necatalizat.
Cu excepia micoplasmelor i a metanotrofelor, membrana procariotelor se deosebete de cea a
eucariotelor prin absena sterolilor. Sterolii sunt molecule plane, rigide, iar acizii grai sunt flexibili.
Sterolii confer un grad superior de rigiditate membranei plasmatice. Rigiditatea membranei este necesar
celulelor lipsite de perete. La eucariote, rigiditatea ar fi necesar pentru a suporta forele fizice care se
exercit asupra membranei.
Antibioticele polienice (nystatin, candicidin) reacioneaz cu sterolii i destabilizeaz membr ana.
De aceea ele sunt active fa de celulele eucariote i nu influeneaz celulele procariote.
Micoplasmele ncorporeaz n structura membranei sterolul disponibil n mediul de cretere i sunt
sensibile la antibioticele polienice.
La unele bacterii, n structura membranei se gsesc molecule asemntoare structural cu colesterolul
care pot avea acelai rol de cretere a rigiditii: hopanoidele. Un compus cu distribuie larg este
diploptenul, cu 30 atomi de C.
Membrana citoplasmatic la Archaea are o structur electrono-optic trilaminar, dar din punct de
vedere chimic este unic prin natura lipidelor.
Lipidele eubacteriilor i eucariotelor sunt esteri ai acizilor grai cu glicerolul. Lipidele Archaea
nu conin acizi grai i sunt de dou tipuri: glicerol-dieteri i diglicerol-tetraeteri, cu catene izoprenoidice
(fig. 18). La C3 al glicerolului se leag o grupare fosfat, sulfat sau un rest glucidic.

Fig. 13. Lipidele majore la Archaea. a. Glicerol dieterii. b. Diglicerol-tetraeteri cu catena linear. c. Diglicerol-tetraeteri cu 4
inele pentaciclice. d. Catena de C este ataat totdeauna de glicerol prin legturi eter.

Catenele izoprenoidice au ntre l5 i 40 atomi de C. Membrana plasmatic la Archaea are dou


suprafee polare, cea intern i cea extern, datorit resturilor de glicerol, iar interiorul este hidrofob, ca i
la celelalte membrane, dar nu conine fosfolipide.
Glicerol-dieterii formeaz stratul dublu lipidic, prezent n structura membranelor celulare. La
unele Archaea predomin net diglicerol-tetraeterii i membrana este format dintr-un monostrat lipidic.
Diglicerol-tetraeterii sunt echivalentul chimic al dublului strat lipidic, dar diferena const n faptul c
cele dou straturi sunt legate covalent.
Glicerol-dieterii au catene laterale izoprenoidice de 20 atomi de C, iar diglicerol-tetraeterii au
catene laterale de 40 atomi de C. La unele Archaea, catenele de C ale diglicerol-tetraeterilor sunt
complicate prin existena a 4 inele pentaciclice, dar se pstreaz lungimea de 40 de atomi de C.

Glicerol-eterii sunt markeri biochimici ai Archaea.


2.2.2. Funciile membranei plasmatice
Membrana plasmatic este bariera major structural i de permeabilitate ntre mediul celular i
cel extern. Membrana este n primul rnd bariera de permeabilitate care mpiedic difuzia liber a
componentelor citoplasmatice. Permeabilitatea foarte selectiv este asigurat de asimetria sa funcional:
este mai permeabil pe faa intern, ceea ce asigur meninerea constanei mediului intern fa de cel
extern, foarte variabil.
Membrana este sediul sinergonului respirator (constituenii moleculari care realizeaz procesele
de respiraie celular i formeaz sistemul de transport al electronilor) i al sinergonului fotosintetizant.
Dovada structural a rolului membranei ca suport structural al sinergonului repirator este faptul c la
Azotobacter, care are cea mai nalt rat respiratorie, membrana i mrete adaptativ suprafaa formnd
numeroase intruzii veziculare.
Membrana este implicat n sinteza i eliminarea exoenzimelor, iar la bacteriile patogene, n
sinteza si eliminarea unor substane toxice (exotoxine). Sinteza acestor molecule are loc la nivelul
ribosomilor ataai pe faa intern a membranei plasmatice.
Membrana este sediul structural al sarcinii electrice i energetice: protonii (H+) i ionii OH- sunt
distribuii separat pe cele 2 fee. Se genereaz o form de energie metabolic asemntoare potenialului
energetic al unei baterii. Starea energetic a membranei denumit for proton-motrice este utilizat
pentru transport, mobilitate flagelar i biosinteza ATP.
Membrana este sediul proteinelor cu rol de chemoreceptori, n special a celor ce au rol n
mobilitatea orientat a celulei. Unele proteine membranare au rol de enzime ale sistemului ATP-azic.
Altele asigur modelarea peretelui celular: sunt murein-hidrolaze i murein-sintetaze.
La nivelul membranei se gsesc proteinele de transport, ce asigur transferul moleculelor din
mediu n celul i invers, precum i proteinele enzime ce realizeaz turnover-ul lipidelor i proteinelor
membranare.
2.2.3. Mecanismele fiziologice ale permeabilitii membranei
Creterea i multiplicarea microorganismelor sunt condiionate de disponibilitatea nutrienilor
care trebuie s strbat nveliurile celulare i de eliminarea produselor de catabolism.
Caracterul hidrofob al membranei i confer acesteia proprietatea de barier de permeabilitate
selectiv: difuzeaz liber unele molecule hidrofobe mici, molecule lineare i cele solubile n mediul
lipidic al membranei (antibioticele cu molecula polar). Apa difuzeaz liber printre fosfolipidele
membranei pentru c este o molecul mic i lipsit de sarcin. Membrana exclude moleculele mai mari
dect glicerolul, dac nu se dizolv n lipide sau dac nu sunt transportate de sisteme membranare. n
acelai timp, barierele celulare asigur transportul substanelor nutritive i rein n interiorul celulei
substanele necesare, funcionnd ca adevrate pori moleculare, ce controleaz intrarea i ieirea
diferitelor molecule. Datorit structurilor de suprafa, celula bacterian nu este niciodat n stare de
echilibru cu mediul nconjurtor, n privina concentraiei diferitelor molecule de o parte i de alta a
membranei citoplasmatice.
n funcie de mecanismele fizico-chimice care stau la baza lor, transportul moleculelor (electrolii
i neelectrolii) prin membran se face prin dou categorii de procese fiziologice:
- difuzia pasiv
- mecanismele de transfer cu molecul purttor (Maloney i colab, 1990; Fath i Colter, 1993; Paulsen
i colab., 1996).
2.3. Mezosomul

Mezosomul (sau corpul din mijloc) este o structur derivat din membran, a crei poziie n celul este
adesea median. Se mai numete plasmalemasom (corp derivat din membran).
Pentru ca o structur membranar s poat fi ncadrat n categoria mezosomilor trebuie s ndeplineasc
trei condiii de baz:
- s derive din membrana citoplasmatic, adic s fie rezultatul unor intruzii ale membranei
citoplasmatice, cu care structura mezosomal pstreaz permanent legturi de continuitate direct;
- s poat fi extruzat n spaiul dintre membrana plasmatic i peretele celular, prin creterea
presiunii osmotice a mediului de suspensie;
s fie asociat cu urmtoarele procese importante ale celulei:
a) cu replicarea cromosomului i cu distribuia celor doi cromosomi n celulele surori;
b) cu procesul de sporulare.
S-au descris trei tipuri morfologice de mezosomi: tubulari, veziculari i lamelari. Unii autori
consider c aceste forme sunt reciproc reversibile, realiznd un continuum structural.
Mezosomii sunt mai frecveni i au o structur mai complex, de tip lamelar, la bacteriile Gram
pozitive. La cele Gram negative sunt mai rari i au aspect tubular.
n mediile hipertonice, mezosomii se extruzeaz n spaiul dintre membrana citoplasmatic i
peretele celular, ca o dovad cert a legturii lor structurale directe cu membrana plasmatic.
Structura molecular a membranelor mezosomale este identic cu aceea a membranei plasmatice
din care deriv: un strat dublu fosfolipidic, n care sunt inclavate proteinele structurale i enzimatice.
Mezosomii sunt structuri foarte dinamice, prezente doar n anumite stri fiziologice ale celulei,
cnd prezena lor este necesar. Formarea lor este o modalitate de extindere a membranei citoplasmatice
spre interior care, datorit rigiditii peretelui celular nu se poate mri pe alt cale (fig. 14).

Fig. 14. Imagine electrono-optic a structurii mezosomale de tip tubular (a) la o bacterie Gram negativ i de tip lamelar (b) la
Bacillus subtilis (original).

Funciile mezosomului. Mezosomul este o structur multifuncional:


este asociat cu procesele de biosintez i de cretere celular;
la nivelul mezosomului se gsesc situsuri de legare pentru cromosom i pentru plasmide;
este calea de transmitere a semnalului, originar la nivelul membranei, pentru replicarea
cromosomului i pentru diviziune, dup ce dimensiunile celulei au atins o valoare critic;
particip la procesul de segregare a celor doi cromosomi ntre celulele surori rezultate din diviziune;
deoarece deriv din membran i mpreun cu aceasta este sediul sinergonului respirator (adic la
nivelul su se desfoar procese energetice celulare), mezosomul este considerat echivalentul
structural i funcional al mitocondriei;
este echivalentul funcional al lizosomului, deoarece la nivelul su se gsesc enzime cu rol
degradativ;
este asociat cu funciile secretorii ale celulei. Mezosomii sunt mai numeroi n celulele de B. subtilis
productoare de enzime. Particip ntr-un mod necunoscut la sinteza i secreia unor enzime
inductibile (de exemplu, penicilinaza, pe care o secret bacteriile rezistente la penicilin). n mediu

fr penicilin nu se secret penicilinaza i mezosomii lipsesc, dar apar n celulele care cresc pe
mediul ce conine penicilin.
2.4. Citoplasma
Citoplasma celulei bacteriene este un sistem complex reprezentat de soluie propriu-zis *, de soluie
coloidal**, de emulsie*** i de micele****, format din proteine, glucide, ap i substane minerale.
*
Soluiile adevrate sunt formate de moleculele mici dizolvate ntr-un solvent. Moleculele dizolvate nu se pot distinge prin
metode fizice de moleculele solventului. Ele confer soluiei (citoplasmei) presiune osmotic.
**
Soluiile coloidale sunt formate de moleculele mari, cu dimensiuni ntre 1-100 nm: soluiile coloidale sunt opalescente i
absorb o parte a razelor de lumin care le strbate lateral.
***
Emulsia este o suspensie de picturi mici ale unui lichid n alt lichid, cu care nu este miscibil.
****
Micelele sunt particule formate din macromolecule amfipatice i ap. Moleculele amfipatice au o grupare carboxil polar i
o caten lung apolar (de exemplu, acizi grai).

Electroliii sunt n concentraie mare i sunt reinui n citoplasm datorit permeabilitii selective a
membranei. Concentraia mare a substanelor dizolvate organice i anorganice, genereaz o presiune
hidrostatic sau presiune de turgor, ce se manifest n raport cu faa intern a membranei .
*

Presiunea de turgor este diferena de presiune osmotic ntre mediul citoplasmatic i mediul extracelular.

Cele 4 stri fizice ale citoplasmei sunt ntr-o continu modificare a raportului lor cantitativ, care
n ansamblu, datorit lipsei curenilor citoplasmatici, confer caracterul unui gel fluid.
Caracterul de gel al citoplasmei este consecina strii apei. Molecula de ap este un ion dipolar
(zwitterion). O molecul dipolar are simultan un grup ncrcat pozitiv i un grup ncrcat negativ
(aminoacizii individuali, dar i moleculele proteice au o grupare cu sarcin pozitiv (NH 2+) i o grupare
ncrcat negativ (COO-) Proprietatea de polaritate a apei este foarte important, deoarece este mediul n
care se dizolv multe molecule polare. Apa formeaz o reea tridimensional att cu ea nsi, ct i cu
macromoleculele. Polaritatea nalt a moleculei de ap face ca moleculele nepolare s formeze agregate
stabile. Faptul c moleculele de ap sunt legate n reea condiioneaz proprietile sale de solvent,
tensiunea superficial* nalt i cldura specific nalt.
*
Tensiunea superficial este fora elastic ce se manifest la suprafaa unui lichid, ce tinde s se micoreze la un minim posibil
n contact cu aerul.

n celul, apa se gsete n dou stri:


apa liber este cea care se deplaseaz liber n celul i care la creterea presiunii osmotice a
mediului extracelular trece n afara celulei;
- apa legat (de hidratare) n structura gelului citoplasmatic.
n celula bacterian vegetativ, apa liber (care constituie circa 70% din totalul apei) creeaz un
mediu de suspensie pentru macromolecule.
Apa liber este foarte mobil, iar cea din structura gelului este practic imobil. Starea de gel a
citoplasmei pstreaz componentele celulare separate spaial (Wiggins, 1990).
Absena curenilor citoplasmatici are ca rezultat imobilitatea coninutului celular.
La celulele bacteriene tinere, aflate n faza logaritmic de cretere, citoplasma este fin granular,
dens i omogen, intens bazofil, datorit coninutului ridicat de acizi nucleici. ARN citoplasmatic este
reprezentat de ARNr (80%), ARNt (l0-20%) i ARNm (2%).
n citoplasma celulelor tinere se gsesc, ntr-o proporie mare, proteinele-factori de cretere implicate
n sinteza noilor proteine.
-

n citoplasma celulelor mbtrnite apar materiale de incluzie i vacuole. Aspectul devine


granular neomogen, iar bazofilia se diminueaz datorit scderii pn la 0 a ratei sintezei ARN, precum i
datorit reducerii treptate a cantitii existente. Afinitatea pentru coloranii bazici este neuniform.

2.5. Nucleoidul bacterian


Aparatul genetic bacterian este reprezentat de dou tipuri de structuri: nucleoidul, care din punct
de vedere structural i funcional corespunde cromosomului i plasmidele. Corespunztor celor dou tipuri
de structuri, determinanii genetici sunt de dou categorii: gene eseniale (eucromosomale), localizate n
structura cromosomului i genele accesorii, cu localizare plasmidial sau n structura elementelor
genetice transpozabile i a unor fagi.
Cromosomul bacterian, ca structur genetic esenial, poart informaia genetic ce asigur
desfurarea funciilor eseniale pentru existena celulei, adic setul de determinani minim necesari
pentru a codifica arhitectura celulei i pentru a asigura metabolismul energetic i de biosintez, creterea,
diviziunea i reglarea diferitelor activiti celulare.
Structurile genetice extracromosomale (plasmidele) poart informaia genetic accesorie, de
confort, care permite celulei o mai bun adaptare la condiii de mediu noi sau modificate.
Genomul E. coli K12 este alctuit din circa 4400 de gene. Pentru creterea n laborator ar fi
necesare numai cteva sute. Genomul este rezultatul aciunii forelor selective pentru eficien metabolic
i adaptabilitate.
Spre deosebire de celulele eucariote care au un nucleu cu structur bine definit, delimitat de o
membran i coninnd un numr definit de cromosomi, nucleul bacterian reprezint o form primitiv
de organizare, lipsit de membran, inclavat direct n citoplasm. Particularitatea structurii nucleare
lipsa membranei delimitante este fundamental pentru organizarea celular de tip procariot, cruia i
aparin bacteriile.
Datorit caracterelor structurale particulare, nucleul bacterian a primit diferite denumiri:
nucleoid, material nuclear, nucleoplasm, echivalent nuclear sau chiar nucleu, prin analogie cu nucleul
celulei eucariote, lineom sau genofor.
Pe micrografiile electrono-optice, materialul nuclear este localizat, n mod obinuit, n partea
central a celulei i se distinge de citoplasma nconjurtoare, prin densitatea sa mai mic la fluxul de
electroni, n contrast cu celula eucariot, la care nucleul este mai electronodens, comparativ cu
citoplasma. Celula procariot are un contrast invers al structurilor sale, n raport cu celula eucariot, care
se datoreaz att faptului ca ADN nu este asociat cu proteine, ct i densitii foarte mari a citoplasmei
bacteriene.
Pe seciuni ultrafine, zona materialului nuclear este ocupat de fibrile fine, cu diametrul de 2,5
nm, uneori aranjate n iruri ondulate, paralele, asemntoare cu o jurubi de a (fig. 15) i sunt sensibile
la hidroliza cu DN-az.

Fig. 15. Imagine electrono-optic a nucleoidului la B. subtilis, x 150 000 (original).

2.5.1. Organizarea fizic a cromosomului

Materialul nuclear poate fi izolat din celul sub forma unui corpuscul dens i compact. Corpusculul
corespunde strii mpachetate a cromosomului. Dup tratamentul moderat cu RN-az i proteaze, din
structura compact se izoleaz molecula de ADN sub forma cromosomului circular nchis covalent
(60%), ARNm, ARNt (30%) i ARN-polimeraza (l0%) (Robinow i Kellenberger, 1994). Cromosomul are
o lungime de l400 m i diametrul de 2,5 nm, corespunztor diametrului moleculei de ADN dublu
catenar. Circularitatea este o condiie a existenei sale. Sub aceast form, molecula de ADN este
rezistent la aciunea exonucleazelor citoplasmatice, active asupra moleculelor lineare de ADN.
Cromosomul bacterian este cea mai mare molecul biologic. Prin lungimea sa (l400 m), molecula de
ADN cromosomal depete de circa l000 de ori lungimea celulei bacteriene.
Raportat la dimensiunile mici ale unei bacterii, molecula de ADN este supus constrngerilor topologice *
de supraspiralizare (suprarsucire), prin care este mpachetat pentru a forma un corp compact de l500
de ori mai mic (Krawiec i Riley, 1990).
*

Topologia este o ramur a matematicii care studiaz proprietile corpurilor geometrice, proprieti care rmn nealterate dup
rsucirea sau contorsionarea lor.

Pentru a ocupa un volum att de mic, molecula de ADN se mpacheteaz dup norme foarte riguroase,
aa nct, n orice moment, oricare dintre cele 3000-5000 de gene cromosomale, s fie accesibil
sistemelor celulare de transcriere i traducere.
Moleculele de ARN au un rol esenial n meninerea strii compacte a ADN. S-au propus mai multe
modele de mpachetare a moleculei de ADN. Cel mai acceptat este acela propus de Pettijohn i Hecht
(l974), citai de Mathews, 1992, n acord cu care, mpachetarea se face printr-un proces de pliere si
supraspiralizare (formare de suprahelice). Se formeaz astfel o structur condensat, meninut prin
aciunea asociat a proteinelor din nucleoid.
Modelul de mpachetare prin pliere i supraspiralizare ncearc s explice mecanismul molecular al
drumului invers, de la structura circular relaxat a macromoleculei de ADN, la arhitectura corpuscului
dens existent n celul.
Pentru mpachetare, se consider c molecula dublu catenar, circular, iniial se pliaz n 40-60 de
domenii egale. Punctele de pliere sunt determinate de molecule de ARN nscnde, legate cu una dintre
extremiti de ARN-polimeraz. Moleculele de ARNr i ARNt, mpreun cu ARN-polimeraza particip la
formarea i meninerea domeniilor de pliere. Prin pliere, diametrul cromosomului scade la circa 30 m. n
interiorul fiecrui domeniu de pliere are loc un proces de supraspiralizare. Supraspiralizarea este o stare
fizic n care molecula de ADN se pliaz prin rsucire n jurul propriei axe (fig. 16 ).

Fig. 16. Reprezentarea schematic a diferitelor stri fizice ale cromosomului bacterian. a. Bucle multiple de ADN dintr-o celul
spart prin oc hipotonic, rspndite pe suporul reprezentat de o protein bazic. b. Diagrama ADN supraspiralizat. n stnga sunt
reprezentate 7 domenii (numrul real este de circa 50) supraspiralizate, meninute astfel de un set de proteine, care stabilizeaz
capetele unui domeniu. Buclele mici ale fiecrui domeniu pot fi spiralizate n jurul unui set de proteine nucleosomale, reducnd
tensiunea n dublul helix, creat prin supraspiralizare. n dreapta, dou domenii au fost incizate la nivelul unei catene, permind
rotaia helixului i relaxarea supraspiralei (dup Pettijohn i Snider, 1985).

ntr-o etap ulterioar, domeniile suprahelicale se pliaz din nou unul fa de altul, superior i inferior
fa de un plan orizontal. Astfel, rezult masa compact a nucleoidului, aa cum se evideniaz la
microscopul optic i se poate izola din celul.
ADN bacterian, ca i la eucariote este asociat cu proteine.
n celula eucariot, corpii proteici n jurul crora se spiralizeaz dubla caten de ADN se numesc
nucleosomi. La bacterii, organizarea molecular a nucleosomilor este puin cunoscut. Se pare c ei
conin dou proteine de legare pentru ADN: proteina HU (Helix Unwinding) i proteina I. Ele se gsesc n
structura nucleosomului, n proporia de o molecul la l50-200 perechi de baze.
Bacteriile au o cantitate mic de ADN neinformaional (genele bacteriene nu conin introni).
Secvenele repetate la bacterii pot fi:
- homopolimerice (multimeri ai uneia din cele 4 nucleotide: poli-A, poli-G, poli-T, poli-C), cu o
lungime de pn la 42 nucleotide;
- secvene scurte de 2-6 baze. Dac sunt localizate n interiorul genelor i au o secven diferit de 3
sau 6 nucleotide, modific potenialul codificator al genei.
- secvene mai lungi de 8 nucleotide. La numeroase bacterii s-au evideniat cteva sute de secvene
repetitive palindromice de 20-40 de baze, cu localizare extragenic, care delimiteaz unele gene i a
cror funcie nu este cunoscut.
La bacterii nu s-au gsit gene nndite. Comparnd secvenele genelor ce codific proteine bine
conservate n evoluie, reiese c intronii au fost prezeni n genele ancestrale, dar s-au pierdut n evoluia
organismelor mici, care i-au redus la minimum cantitatea de ADN i s-au adaptat la o cretere foarte
rapid (eubacterii i levuri).
Genele bacteriene sunt strns mpachetate: se poate estima c circa 30% dintre ele se suprapun
parial cu genele nvecinate.
n mod obinuit, n celula bacterian se gsete un singur cromoson, dar n culturi tinere, pe medii
care ofer condiii optime de cretere, celulele apar multinucleate, avnd 2-4 cromosomi, identici genetic,
deoarece provin prin replicarea cromosomului parental, astfel c, n esen, bacteriile sunt organisme
haploide. Situaia de celul polinucleat este temporar i este rezultatul lipsei de sincronizare ntre
procesele de diviziune nuclear i diviziune celular.
Cromosomul bacterian este un singur replicon*, deoarece se replic de la o singur origine.
2.6. Ribosomii
Ribosomii sunt particule ribonucleoproteice cu funcie enzimatic ce catalizeaz formarea
legturilor peptidice, localizate n citoplasm. La microscopul electronic au form sferic, cu diametrul de
20 nm.
Pe baza constantei de sedimentare * (S) se disting urmtoarele categorii de ribosomi: a) ribosomi
80 S, n citoplasma celulelor eucariote; b) ribosomi mitocondriali i cloroplastici, ntre 55 S la mamifere
i 75 S la plantele superioare; c) ribosomii archaea, de 70 S, asemntori din punct de vedere funcional
cu ribosomii 80 S ai eucariotelor, datorit absenei sensibilitii la streptomicin i cloramfenicol i prin
sensibilitatea la toxina difteric; d) ribosomii eubacteriilor, de 70 S.
*

Simbolul S semnific viteza de sedimentare a unei particule sau a unei molecule prin tehnica ultracentrifugrii . Unitatea
Svedberg (inventatorul centrifugii) este unitatea de timp (de 1 x 10 -13 secunde) n care sunt exprimai coeficienii de sedimentare
(valorile S) ai unei molecule ntr-un cmp gravitaional. Viteza de sedimentare n cmpul gravitaional este dependent de dou
proprieti fizice ale moleculei:
- gr. mol. (M): cu ct gr. mol. crete, cu att crete i viteza de sedimentare;
- aspectul moleculei: o molecul aerodinamic se deplaseaz mai repede dect una sferic. O molecul mai compact
ntmpin o for de frecare mai mic i se deplaseaz mai repede.
Raportul dintre viteza de deplasare a moleculei i fora centrifug aplicat se numete coeficient de sedimentare (S).
S = Viteza/Fora centrifug
Valoarea lui S pentru o macromolecul este aceiai n diferite soluii, fiind cuprins, n funcie de gr. mol., ntre 1 x l0 -13 secunde
i l00 x l0-l3 secunde.

Numrul ribosomilor n celula bacterian este corelat cu activitatea ei fiziologic: este mic n
celulele n repaus, dar crete foarte mult n celulele fiziologic active (n medie 20000 ribosomi/celul, cu
variaii ntre l5-l00000).
Ribosomii sunt structuri dinamice, calitate ce se reflect n capacitatea lor de a se disocia n dou
subuniti, de 30 S i 50 S i de a se reasocia. Disocierea i reasocierea sunt corelate cu variaia
concentraiei ionilor de Mg2+: creterea concentraiei ionilor favorizeaz asocierea, iar scderea
concentraiei lor produce disocierea. Circa l0% din numrul total de ribosomi sunt asamblai, liberi n
citoplasm. Ei sintetizeaz proteinele structurale. Ali l0% se gsesc sub forma subunitilor disociate, iar
restul de 80% sunt polisomi.
Ribosomii au dou localizri: liberi n citoplasm sau ataai feei interne a membranei
citoplasmatice. La nivelul celor ataai se sintetizeaz proteinele de export.
Din punct de vedere biochimic, ribosomii bacterieni conin circa 55 de tipuri de molecule proteice i
trei tipuri de molecule de ARNr. Ribosomul este un polianion mare (sarcinile negative conferite de
gruprile fosfat), deoarece ARN reprezint 2/3 din componentele sale.
Studiile privind structura funcional a ribosomilor s-au fcut cu dou metode foarte sensibile:
difracia cu neutroni i imunoelectronomicroscopia.
Subunitatea mic 30 S cuprinde (la E. coli), 21 tipuri de molecule proteice (S 1-S21), n ordinea
descreterii mrimii, cu gr. mol. ntre 60 kDa i 8 kDa i o molecul de ARNr 16 S, alctuit din circa l600
nucleotide.
Subunitatea mare, 50 S conine (la E. coli), 34 tipuri de molecule proteice (Ll - L34, L= Large), cu
gr. mol. cuprins ntre 9-28,5 kDa i dou molecule de ARNr, de 23 S (2900 nucleotide) i respectiv 5 S
(120 nucleotide). Cele dou tipuri de molecule de ARN provin prin clivarea unui precursor comun, de 30
S. Structura teriar (pliat) a ARNr este stabilizat prin 3 tipuri de interaciuni: ionii de Mg 2+ ce formeaz
puni ntre dou sau mai multe grupri fosfat; interaciunile ARN-ARN; interaciunile ARN-proteine.
ARNr este transcris din 7 operoni (rrn), fiecare cu doi operoni n tandem (P 1 i P2), din care sunt
transcrise copiile 16 S, 23 S i 5 S.
Sinteza ARNr este controlat de concentraia aminoacizilor n celul: rata sintezei ARNr este
dependent de rata de aprovizionare cu aminoacizi, corelat direct cu capacitatea ribosomilor de a
consuma aminoacizii n sinteza proteinelor. Dac un singur aminoacid lipsete, sinteza proteinelor
ribosomale este stopat i celula nu mai asambleaz ribosomi.
Cele 55 de tipuri de proteine ribosomale se gsesc ntr-un singur exemplar (o singur molecul
din fiecare tip). Unele au rol structural, fiind eseniale pentru asamblarea ribosomului, altele au rol
funcional, permind legarea ARNm n procesul traducerii i sintezei lanului proteic. La E. coli, n
fiecare subunitate ribosomal, raportul ARN-proteine este 2/l, iar la alte bacterii, raportul este 2/3.
Moleculele componente au o distribuie fix, riguroas n structura ribosomului. ARNr este pliat
ntr-o structur tridimensional ce formeaz regiunea central a ribosomului i determin aspectul su.
Proteinele sunt localizate n general la suprafaa ribosomului, n depresiunile pe care le creeaz ARN
pliat. Unele proteine conin domenii globulare, localizate la suprafa, ce trimit extensii n regiunea
central a ribosomului. Interaciunile fixe ale componentelor condiioneaz procesele de autoasamblare a
ribosomilor.
Ribosomii reprezint componenta esenial a sistemului de traducere a informaiei genetice. Ei
sunt adevratele fabrici de proteine ale celulei, avnd rolul de a menine att molecula de ARNm, ct i
complexul aminoacil-ARNt, ntr-o orientare corespunztoare pentru a permite att citirea mesajului, ct i
formarea legturilor peptidice.
Ribosomii se asociaz n polisomi (poliribosomi), adic grupri funcionale formate din 4-50
uniti ribosomale. Dimensiunile polisomilor variaz n funcie de lungimea ARNm. Polisomii
sintetizeaz concomitent mai multe molecule proteice pe aceeai molecul de ARNm.
2.6.1. Particularitile sintezei proteice la bacterii

n celula eucariot, transcrierea i traducerea informaiei genetice sunt evenimente separate n


timp i spaiu, datorit compartimentrii spaiului celular.
n celula procariot, ribosomii au relaii spaiale strnse cu ADN, deoarece transcrierea i
traducerea informaiei sunt dou procese intim coordonate, care se desfoar aproape concomitent.
Transcrierea moleculei de ARNm dureaz circa 1 minut. Rata traducerii este controlat de rata
transcrierii. Cele dou procese sunt intim corelate i se petrec cvasisimultan.
Traducerea este procesul ce const n conversia mesajului secvenei bazelor ARNm n secvena
aminoacizilor catenei polipeptidice. Structura ribosomului, capacitatea sa de a determina poziia ARNt pe
ARNm, precum i cataliza legturii peptidice sunt determinate de ARNr i nu de proteine.
Traducerea cuprinde 4 faze: iniierea, alungirea, terminarea i reciclarea ribosomilor.
La bacterii, traducerea ncepe foarte repede, deoarece ARNm are o durat funcional scurt (l-2
minute), fiind degradat de nucleaze (la eucariote ARNm are stabilitate de ordinul orelor). Pentru a
compensa instabilitatea ARNm, traducerea se iniiaz timpuriu: complexul de iniiere se ataeaz la
captul 5 al mesajului, nainte de transcrierea captului 3. Ulterior se ataeaz succesiv ali ribosomi,
rezultnd structuri polisomice. Fiecare ribosom este legat de o molecul proteic nascent, a crei
lungime este direct proporional cu lungimea mesajului pe care ribosomul l-a citit. Dup ce a citit
integral informaia ARNm, ribosomul se desprinde din polisom, elibernd polipeptidul sintetizat (Laursen
i colab., 2005) (fig. 17).

Fig. 17. Funciile ribosomului n biosinteza proteinelor. ARNm este tradus prin aciunea cooperant a ARNt i a
ribosomului. Prin secvena anticodon, ARNt se leag la codonii complementari a ARNm. Formarea unei legturi peptidice ntre
gruparea NH2 a ARNt-aa nou venit i gruparea COOH terminal a catenei polipeptidice n cretere este catalizat de una dintre
moleculele de ARNr (R= grupare lateral; aa = aminoacid, dup Lodish, 5th Edition).

Cuplarea transcrierii cu traducerea are dou consecine: a) accelereaz rata sintezei proteice, n
sensul c traducerea nu trebuie s atepte eliberarea ARNm de pe matria de ADN; b) buclele de ADN
sunt conectate la membrana citoplasmatic.
Pe medii nutritive bogate, cele mai multe celule bacteriene sintetizeaz i secret exoproteine, n
special n faza staionar a culturii. Proteinele pentru export se sintetizeaz pe ribosomii atasai
membranei plasmatice.
2.6.2. Secreia proteinelor extracelulare la bacterii
Multe proteine rmn solubile n citoplasm, iar altele sunt secretate prin membrana
citoplasmatic.
Termenul de secreie semnific trecerea unei molecule de la locul sintezei sale (citoplasma),
prin membran, la exteriorul celulei Gram pozitive sau n spaiul periplasmic al celulei Gram negative, iar
cel de translocaie semnific transferul extracitoplasmatic al unei molecule care rmne legat de
membran.

Toate celulele, eucariote i procariote secret (export) proteine n spaiul extracelular.


La bacterii, proteinele pentru export se sintetizeaz pe ribosomii asociai membranei plasmatice.
Sinteza ncepe cu o secven semnal, de l8-35 aminoacizi, la captul N-terminal. Prin secvena peptidic
semnal, proteinele pentru export se deosebesc de cele citoplasmatice i se orienteaz spre calea de export.
Orientarea este rezultatul legrii peptidului semnal, de membran, fie direct, fie prin intermediul unei
proteine citoplasmatice denumit chaperone*.
*
Chaperonii (chaperon, lb. englez = a nsoi, a supraveghea) s-au definit ca o familie de proteine celulare care mediaz
plierea corect a altor polipeptide i uneori asamblarea lor n structuri oligomere, dar care nu sunt componente ale structurilor
funcionale finale (Craig i colab., 1993). Multe proteine se pliaz spontan, dar plierea iniial a unui numr mare de proteine
celulare necesit asistena chaperonilor. Proteinele care s-au pliat greit sunt degradate proteolitic .

Unele proteine destinate exportului nu apar niciodat n citoplasm, ceea ce sugereaz c secreia
lor se face pe msur ce sunt sintetizate. Acestea sunt molecule relativ mici (20-40 kDa) i sunt flexibile
pentru c nu au legturi S-S i, de cele mai multe ori, nici component glucidic. Pentru aceaste proteine,
translocaia este cotranslaional. Secvena semnal hidrofob N-terminal se angajeaz n traversarea
membranei, nainte ca restul moleculei s fie sintetizat. Dup ce secvena semnal ajunge pe suprafaa
extern a membranei plasmatice, este clivat i digerat, iar proteinele exportate rmn asociate
membranei, pn ce plierea este complet.
Alte molecule se sintetizeaz complet nainte de nceperea exportului. Dup terminarea sintezei,
moleculele destinate exportului nu dobndesc configuraia teriar n citoplasm, deoarece factori
proteici din categoria chaperonilor, interacioneaz cu polipeptidele nascente i blocheaz plierea lor,
astfel nct proteinele sunt meninute ntr-o configuraie parial nepliat, compatibil cu transferul.
Circa 20% dintre proteinele sintetizate nu ajung la destinaia final, datorit erorilor care au aprut
n timpul transcrierii, traducerii sau pentru c nu s-au pliat corect.
La bacterii, sinteza proteinelor are loc cu o rat foarte nalt: 15-20 aminoacizi/ribosom/secund, ceea
ce echivaleaz cu sinteza a 30 000 polipeptide/min. Rata nalt a traducerii necesit un control riguros al
calitii proteinelor. Circa 30% din totalul proteinelor, necesit asistena chaperonilor. Decizia destinaiei
unei proteine (pliere-degradare) trebuie luat rapid.
Chaperonii asist plierea proteinelor n periplasm, cel mai probabil independent de ATP, deoarece
existena ATP n periplasm este foarte improbabil.
Prevenirea plierii proteinelor este o etap esenial pentru exportul proteinelor, deoarece, dup ce
dobndete structura teriar definitiv, proteina nu mai poate fi exportat.
Chaperonii au funcii multiple:
- interacioneaz cu polipeptidul nascent i previn adoptarea conformaiei incorecte, pn la terminarea
sintezei proteinelor care rmn n citoplasm;
- asist asamblarea structurilor de suprafa ale celulei: flageli, fimbrii, pili;
- asist asamblarea OMP i secreia proteinelor n mediu;
- au rol important n replierea proteinelor denaturate, constituind un mecanism important de protecie
fa de agentul termic sau alte condiii de stress. Unele molecule chaperone sunt sintetizate specific n
condiiile care duc la acumularea proteinelor denaturate i se numesc proteine de oc termic.
Molecula precursoare este orientat spre situsul su membranar specific, prin intermediul peptidului
semnal, al chaperonului sau al ambelor tipuri de molecule.
Proteinele structurilor de nveli sunt sintetizate de asemenea, pe polisomii ataai membranei
citoplasmatice. Pe msur ce sunt sintetizate, catenele peptidice nascente sunt transferate n grosimea
membranei. Unele se termin n membrana intern, iar altele n spaiul periplasmic sau n membrana
extern.
Chiar i fosfolipidele apar iniial n membrana intern i ulterior difuzeaz spre membrana
extern.
La bacteriile Gram negative, translocaia este un proces complex, deoarece moleculele trec n
spaiul periplasmic, printr-un proces dependent de energie (Pugsley, 1993). O protein de translocaie

(Sec A) localizat n membrana intern, leag i hidrolizeaz ATP. Energia eliberat este utilizat pentru
iniierea translocaiei prin membrana citoplasmatic. Cele mai multe proteine secretate de bacteriile Gram
negative ramn n spaiul periplasmic i au o semnificaie metabolic (sunt enzime degradative).
Majoritatea sunt proteaze i furnizeaz nutrieni asimilabili pentru celul. Membrana extern a peretelui
celular nu are sursa de energie necesar excreiei. Din aceast cauz, o protein translocat n spaiul
periplasmic printr-un proces dependent de energie, nu poate fi translocat printr-un mecanism similar,
prin membrana extern, ceea ce demosntreaz intervenia unor proteine specifice de translocaie ale
membranei externe.
La bacteriile Gram pozitive, proteinele destinate membranei citoplasmatice i peretelui celular se
sintetizeaz fr secvene semnal. Prin analogie cu exportul proteinelor la E. coli, proteinele membranei
citoplasmatice sunt integrate spontan, prin interaciuni ionice i hidrofobe.
Proteinele secretate sunt n special enzime degradative: proteaze, amilaze, RN-aza, levan-sucraza.
Proteinele de export se sintetizeaz cu o secven semnal, de l8-35 aminoacizi, cu captul amino
ncrcat pozitiv, urmat de o secven hidrofob, pe ribosomii asociai membranei citoplasmatice.
Mecanismul de export al exoproteinelor, la B. subtilis este probabil, asemntor cu cel de la E. coli.
La B. subtilis, proteinele translocate prin membran sunt supuse clivajului secvenei semnal i
rmn legate de peretele celular sau sunt eliberate n mediul extern (Simonen i Palva, 1993).
Mecanismul de export al exoproteinelor este complicat de faptul c, unele specii de Bacillus (dar
nu B. subtilis) i la numeroase tulpini Gram negative, la exteriorul peptidoglicanului se gsete un strat
proteic (stratul S) prevzut cu pori, care permit trecerea proteinelor.
Unele proteine se sintetizeaz cu o secven suplimentar de aminoacizi, localizat ntre peptidul
semnal i proteina propriu-zis, denumit propeptid. Unele propeptide sunt lungi, altele scurte. Cele lungi
sunt caracteristice proteazelor. Exoproteazele la B. subtilis sunt sintetizate ca preproenzime, adic au att
secvena semnal, ct i propeptidul. Propeptidul pare a avea mai multe funcii:
- n excreia moleculei de exoproteaz;
- mpiedic activarea enzimei n timpul secreiei;
- leag proteaza de membrana citoplasmatic.
Datorit secvenei propeptidului, la procariote, proteazele, sunt secretate sub forma inactiv, ca
zimogen, la fel ca i la eucariote,
Propeptidele scurte sunt formate din cteva resturi de aminoacizi. Funcia lor nu se cunoate.
Dup translocaie, exoproteinele sunt eliberate n mediu cu propeptidele scurte ataate, dar clivajul lor
survine imediat.
2.7. Sporul
Sporul este o forma primitiv de difereniere celular, care const n reorganizarea structural i
funcional a celulei vegetative i formarea unui nou tip de celul, cu proprieti noi. Diferenierea
celular este un proces biologic fundamental.
Sporii se formeaz la bacteriile cilindrice: totdeauna la bacilii anaerobi din g. Clostridium i la
actinobacterii, facultativ la cei aerobi din g. Bacillus (fig. 18), excepional la coci (Sporosarcina). Toate
bacteriile sporulate sunt Gram pozitive. Sporularea este condiionat de existena unui perete mureinic
gros.
Exist circa l0 tipuri de spori, ce se deosebesc prin modul de formare, prin structur i prin gradul
de rezisten la factorii de mediu. Cel mai caracteristic este endosporul, denumit astfel deoarece se
formeaz n interiorul unei celule vegetative.
La actinobacterii se formeaz cteva tipuri de spori: artrospori (prin segmentare), oidiospori (prin
fragmentare), aleuriospori (se formeaz apical sau lateral pe sporofori scuri), zoospori (spori mobili), iar
aplanosporii se formeaz prin septarea hifelor i sunt meninui n interiorul unui nveli. La Azotobacter
se formeaz chiti.

Endosporul sau sporul endogen a fost considerat ca unic tip sporal bacterian, pn la descrierea
celorlalte tipuri. Are form sferic sau ovalar. Cei ovalari au dimensiuni cuprinse ntre 0,5 1 m,
pentru axul scurt i 1,2 2 m pentru axul lung.
Evideniere. Endosporul este o structur refringent i n celula vie, la microscopul optic apare
strlucitor. Datorit nveliurilor groase, greu penetrabile pentru colorani (n special cortexul) i datorit
coninutului lor chimic particular, sporul se coloreaz prin tehnici speciale.
Poziia sporului n celul poate fi terminal, subterminal sau central. Sporii pot fi deformani (diametrul
lor este mai mare dect al celulei) i nedeformani (diametrul este mai mic dect al celulei).
ntr-o celul bacterian sporulant, sporul este unic, cu rare excepii: n sol apar bacterii bisporulate,
iar n intestinul unor vertebrate aquatice, s-au evideniat bacterii polisporulate. Probabil c sporii multipli
apar ca rezultat al perturbrii mecanismului de separare a celulelor dup diviziune. Ei se formeaz n
celulele n care materialul nuclear s-a replicat, dar nu s-a format septul de diviziune.
Sporogeneza este declanat n mod obinuit de lipsa unui nutrient esenial n mediu (sursa de azot sau de
carbon). Procesul este foarte complex din punct de vedere genetic, biochimic, structural i funcional.
Sporularea implic activarea unui numr de peste 50 de gene sporale, inactive n celula vegetativ
(Errington, 1993). Sub aspect biochimic, sporularea este nsoit de modificri majore ale componentelor
moleculare. Se sintetizeaz un set de proteaze care mresc turnover-ul proteic, furniznd aminoacizii
necesari sintezei proteinelor noi.
Din punct de vedere structural, la nivel electrono-optic, sporularea la B. subtilis parcurge 7 stadii
(numerotare introdus de Ryter, cu cifre romane - I - VII), n cursul crora celula sporal se formeaz i se
elibereaz (fig. 20).
Celula vegetativ n care nu se detecteaz modificri structurale legate de sporulare a fost desemnat cu
stadiul 0. Sporularea este precedat de replicarea materialului nuclear. Cei doi cromosomi fuzioneaz,
formnd o structur axial alungit, unic (stadiul I). Nucleoidul axial diploid segreg n dou structuri
cromosomale: una migreaz spre polul sporal i va deveni nucleoidul sporului, iar cealalt rmne n
celula vegetativ. Celula se divide asimetric, subpolar prin formarea septului sporal i se formeaz dou
celule inegale.
Diviziunea pentru sporulare se aseamn cu cea vegetativ, dar se deosebete prin expresia genic
diferit. Diviziunea pentru sporulare, fiind asimetric, necesit relocalizarea aparatului de diviziune
celular. Asimetria morfologic a celor dou celule duce la evoluii ulterioare diferite.
Diviziunea vegetativ i cea de sporulare se deosebesc prin mai multe caracteristici:
- septul de diviziune pentru sporulare este mai subire dect septul diviziunii vegetative;
- cele dou celule rezultate nu se separ, iar celula mam nglobeaz presporul;
- autoliza peptidoglicanului din septul de diviziune ncepe la centrul septului i progreseaz pn la
liza complet a materialului septal. n contrast, autoliza materialului parietal al septului diviziunii
vegetative ncepe la periferia septului i progreseaz spre centru, dar nu e complet, deoarece septul
va forma peretele polar al celor dou celule rezultate din diviziune;
- dup diviziunea de sporulare, n cele dou celule se iniiaz programe diferite de expresie genic,
controlate de factorii care orienteaz legarea ARN-polimerazei de promotori diferii.
Septul sporal se iniiaz sub forma a dou mici intruzii simetrice ale peretelui mureinic, spre
interiorul celulei. Formarea complet a septului corespunde stadiului II.
n timpul diviziunii asimetrice, numai 1/3 din cromosom este prezent n structura presporal. Restul
de 2/3 este pompat rapid de o translocaz, rezultnd dou celule inegale, dar cu genomuri identice. Dup
diviziunea asimetric, presporul i celula vegetativ sunt celule adiacente, complet separate.
n stadiul al III-lea, septul polar se subiaz i se lizeaz din zona central spre periferie.
Membrana citoplasmatic, dup ce i pierde punctele de legtur cu septul, ncepe s se plieze i acoper
progresiv suprafaa sporului. Cnd plierea este complet, cele dou pliuri membranare fuzioneaz la polul
celulei i celula sporal este complet nglobat n celula vegetativ.
n spaiul dintre cele dou membrane care nconjur presporul se depun cele dou straturi de
peptidoglican: peretele celular primordial i cortexul (stadiul IV).

Stadiul V corespunde depunerii unei structuri proteice complexe pe suprafaa extern a


presporului, format din dou lame: nveliul sporal intern (intina) i nveliul sporal extern (exina).
Stadiul VI corespunde maturrii sporului i dobndirii rezistenei la cldur i la radiaiile UV, iar stadiul
VII corespunde lizei celulei i eliberrii sporului matur.

Fig. 18. Reprezentarea schematic a etapelor de formare a endosporului.

Schimbrile morfologice profunde care se produc n timpul sporulrii sunt cuplate cu


modificarea expresiei genelor, datorit activrii n cascad a factorilor , care modific
specificitatea de legare a ARN-polimerazei, de promotorii diferitelor gene.
S-au izolat mutante bacteriene care blocheaz sporogeneza n diferite etape.
2.7.1. Structura intern a endosporului
La diferite grupe de bacterii exist variaii importante ale structurii sporului, n special n privina
nveliurilor, care difer prin numrul i grosimea lor. Exist de asemenea variaii cu privire la relaia
sporului cu celula vegetativ n care s-a format: sporul rmne inclus n celul sau se elibereaz curnd
dup formare, prin liza acesteia.
Sporul este alctuit din protoplastul sporal, care conine sporoplasma i materialul nuclear.
Protoplastul sporal este acoperit de urmtoarele structuri:
- un perete intern subire, originar din membrana intern a presporului. Dup germinare, acesta va
forma peretele celulei vegetative;
- cortexul sporal, cu grosime variabil, electronoclar. Este o structur multilaminar ce se formeaz pe
feele adiacente ale celor dou membrane ale presporului i const, n general, din peptidoglican i
un lactam muramic specific sporului;
- stratul extern al cortexului, derivat din membrana extern a presporului;
- nveliul sporal intern (intina), un strat dens, de natur proteic;
- nveliul sporal extern (exina). Uneori, aceste dou nveliuri sunt pluristratificate;
- exosporul, este constituit dintr-un rest al celulei vegetative, adiacent celorlalte nveliuri sporale,
prin intermediul filamentelor suspensoare.
nveliurile sporale cuprind o fracie major a sporului. Aceste structuri sunt de natur proteic,
cu o fracie de polipeptide acide solubile n baze, n nveliul intern i o fracie rezistent la baze, datorat
legturilor S-S.
La unele categorii de spori se gsesc structuri suplimentare denumite apendice sporale.
Semnificaia lor funcional nu este cert, dar ar putea fi implicate n dispersarea sporilor n natur sau ar
facilita absorbia substanelor nutritive n perioada premergtoare germinrii sporului.

2.7.2. Particularitile biochimice ale sporului


Sporularea este iniiat ca rspuns la numeroase semnale externe i interne: epuizarea unui
nutrient, densitatea celular. Sporularea eficient necesit o densitate celular mare. Scderea ampl a
concentraiei GTP i GDP se coreleaz cu declanarea sporulrii. Schimbarea specificitii ARNpolimerazei este foarte important pentru controlul sporulrii la B. subtilis. Cnd ncepe sporularea, multe
gene active n celula vegetativ sunt represate i sunt activate genele specifice. Fiecare stadiu al sporulrii
este marcat de schimbarea expresiei unor gene, mediat de factorul , care schimb specificitatea legrii
de promotor a ARN-polimerazei.
Protoplastul sporal conine toate categoriile de molecule necesare relurii creterii: materialul
nuclear i cantiti mici ale fiecrui component al aparatului de sintez proteic (ribosomi, ARNt,
enzime). Lipsesc componentele celulare instabile (ARNm i nucleozid-trifosfaii), dar sunt prezeni
precursorii lor mai stabili (nucleozid mono- i difosfai). Aminoacizii i enzimele lor de biosintez sunt
virtual absente, dar la germinare, ambele tipuri vor fi generate prin hidroliza proteinelor de depozit,
solubile, cu molecul mic.
Puine enzime sporale deriv din enzimele celulei vegetative prin clivare. Majoritatea enzimelor
sporale sunt noi. Sinteza lor este codificat de gene activate n timpul sporulrii.
Toate enzimele sporale sunt termorezistente, fapt explicabil prin dimensiunile lor mici, fiind
reprezentate numai de situsul activ al moleculei. Lipsesc enzimele fundamentale ale metabolismului
celular, ca si sistemele transportoare de electroni.
La cele mai multe bacterii, ionii de Ca 2+ lipsesc. n stadiile timpurii ale sporulrii se activeaz
sistemele de transport activ pentru Ca. Ionii de Ca sunt legai cu o cantitate echivalent de acid
dipicolinic (se formeaz din acidul diaminopimelic un precursor al peptidoglicanului) i formeaz
dipicolinatul, care poate constitui circa l5% din greutatea uscat a sporului .

Acidul dipicolinic

S-a considerat c sporul este rezultatul unui proces de deshidratare profund. Cercetrile
ulterioare au evideniat c deosebirile dintre spor i celula vegetativ nu sunt de ordin cantitativ, ci de
ordin calitativ i se refer la starea apei. n celula vegetativ, apa liber reprezint 70% din cantitatea
total, iar n spor oscileaz ntre 3-l0%, restul de 90-97% fiind apa legat. Din aceast cauz, sporul este
lipsit de metabolism, sau are un metabolism de intensitate foarte mic, nedecelabil. Celula sporal este
vie, dar procesele vieii sunt latente. Fenomenul se numete criptobioz (via ascuns).
Consecina particularitilor de compoziie chimic, la care se adaug nveliurile groase multiple
i pluristratificate, este rezistena deosebit a sporului la cldur, la aciunea substanelor chimice
(antiseptice, dezinfectani) i a radiaiilor. Rezistena termic este conferit de dipicolinatul de Ca.
Mutaiile care reduc cantitatea de dipicolinat diminu rezistena sporului la agentul termic.
Rezistena termic a sporului impune o metodologie costisitoare de sterilizare, la temperaturi
foarte ridicate. Uneori, sporii rezist la temperatura de l80 oC, de la cteva minute, la cteva ore. Fierberea
nu este o metod de sterilizare, deoarece omoar numai formele vegetative, iar sporii rmn viabili.
Germinarea este procesul ireversibil n care sporul se activeaz de la starea dormind, la o stare
metabolic activ, ntr-un interval scurt. L-alanina se leag la un receptor specific pe suprafaa nveliului
sporal i iniiaz germinarea, care decurge n trei stadii:
- activarea sporului prin deshidratare, asociat cu mrirea volumului;
- germinarea, adic modificarea localizat prin gelificare a nveliurilor sporale;

emergena celulei vegetative din nveliuri, delimitat de un perete derivat din peretele sporal intern.
ntr-un mediu nutritiv optim, germinarea este rapid: de la iniiere pn la diviziunea celular,
procesul dureaz 90 de minute. n medii favorabile, majoritatea sporilor germineaz, dar o proporie mic
rmn dorminzi.
Pentru iniierea germinrii, sporii necesit un factor suplimentar: un compus cu grupri SH, pH
acid. Dup circa o or de la nceputul activrii ncepe sinteza ADN.
2.8. Incluziile
Incluziile sunt structuri inerte, ce apar n celula bacterian la sfritul fazei de cretere
logaritmic.
Dup compoziia chimic, incluziile sunt de 3 tipuri:
polimeri organici: polizaharidici (amidon, glicogen), incluzii de poli -hidroxibutirat (PHB) conin lipide
(2%) i proteine, polimeri de natur proteic (incluzia parasporal la B. thuringiensis) (fig. 19);
- polimeri anorganici (polimetafosfat, denumite incluzii de volutin);
- incluzii anorganice simple (de sulf coloidal, CaCO3).
Dup criterii structurale se disting:
- incluzii delimitate de membrane, ce au ca prototip pe cele de poli--hidroxibutirat. Ca trstur
distinctiv, ele relev o structur lamelar concentric, ce corespunde creterii progresive a incluziei.
Sinteza se face pe o cale lateral a sintezei acizilor grai;
- incluzii lipsite de membrane (cele de glicogen, de sulf, incluzia proteic parasporal).
La microscopul optic, n celula vie, incluziile au aspect granular cu form neregulat, refringente,
cu dimensiuni de 50-100 nm.
Natura chimic a incluziilor se evideniaz prin metode citochimice, cu colorani specifici.
Incluziile de amidon (poliglucozid neramificat) se coloreaz n albastru cu soluia Lugol, iar glicogenul
(poliglucozid ramificat) se coloreaz brun. Incluziile de PHB se coloreaz cu negru de Sudan, ca i
depozitele lipidice neutre ale celulei eucariote i din aceast cauz au fost identificate incorect ca rezerve
lipidice. Incluziile proteice se coloreaz cu amido-schwarz, iar cele de polimetafosfat sunt metacromatice,
pentru c dup colorare cu albastru de metilen, dobndesc culoarea roie .

Fig. 19. Incluzii bacteriene. a. Formula structural a glicogenului (molecule de glucoz legate -1,4, cu ramificaii -1,6. b.
Polifosfatul. c. Acidul poli--hidroxibutiric. d. Imaginea electrono-optic a celulei de Azotobacter cu incluzii de poli-hidroxibutirat. e. Imaginea electrono-optic a incluziei proteice parasporale la B. thuringiensis (original).

Ca regul general, o specie bacterian formeaz un singur tip de depozit celular.


Granulele de volutin (polimetafosfat), denumite astfel pentru c s-au identificat la Spirillum
volutans, sunt polimeri lineari de ortofosfai, de lungime variabil. Se sintetizeaz n condiiile deficitului
oricrui nutrient major, prin adugarea secvenial a resturilor de fosfat la pirofasfat, dup reacia :

Degradarea polifosfatului urmeaz reacia invers i furnizeaz energie celular sub form de
ATP.
Incluziile de sulf anorganic pot fi citoplasmatice sau sunt localizate la nivelul unor pliuri ale
membranei plasmatice i apar la dou grupe fiziologice de bacterii:
- la cele sulfuroase purpurii (Chromatiaceae), care folosesc H2S ca donor de electroni n procesul
fotosintezei;
- la cele filamentoase chimiolitotrofe (Beggiatoa, Thiotrix), care oxideaz H2S i elibereaz energie.
Dup epuizarea H2S din mediu, sulful depozitat n celul este oxidat la sulfat.
Semnificaie biologic. Formarea incluziilor constituie o modalitate a celulei de a depozita
cantiti mari de materiale de rezerv. Ele se formeaz n condiiile unui mediu bogat n substane
nutritive, sau n cazul unui dezechilibru al compoziiei chimice a mediului, n special al raportului C/N.
Materialele incluziei sunt consumate dup epuizarea resurselor energetice din mediu sau cnd raportul
C/N revine la normal.
Stocarea moleculelor sub forma polimerilor este o modalitate de pstrare a echilibrului osmotic
ntre celul i mediu, deoarece prin polimerizare moleculele devin inactive osmotic. Prin polimerizarea
acidului PHB se evit acidifierea citoplasmei, consecutiv acumulrii monomerilor. Gruprile libere
COOH ale acidului PHB sunt anihilate prin formarea legturilor esterice ntre monomeri.
Sinteza incluziilor proteice parasporale este sincronizat strns cu iniierea procesului de
sporogenez.

2.9. Glicocalixul
Glicocalixul este reprezentat de totalitatea structurilor polizaharidice extraparietale:
capsula, cu diferite grade de dezvoltare i glicocalixul comportamental.
2.9.1. Capsula
Capsula (fig. 20) este o structur accesorie, cu o consisten gelatinoas, vscoas, care acoper
complet celula bacterian. n funcie de gradul de dezvoltare se disting urmtoarele structuri capsulare:
microcapsula, reprezentat de o pelicul fin de material polizaharidic, n jurul peretelui celular (pn la
0,2 m grosime). La microscopul optic se evideniaz numai prin metoda imunofluorescenei, dar este
vizibil la microscopul electronic;
macrocapsula, o structur omogen, aderent de celul, mai groas de 0,2 m, vizibil la microscopul
optic prin tehnici speciale de colorare negativ. Dac are o structur lax i flexibil, coloranii o
penetreaz. Aderena macrocapsulei de celul este ferm i prin centrifugare se depune concomitent cu
celulele;
stratul mucos este o structur capsular cu o grosime neuniform i distribuie dezordonat n jurul
celulei. Consistena este mai fluid, iar prin centrifugare, celulele se desprind i se depun, iar materialul
polizaharidic ramne n suspensie;
zoogleea o mas de material polizaharidic, n care sunt cuprinse un numr mare de celule bacteriene.
Materialul capsular se gsete la bacteriile Gram pozitive i Gram negative din sol, ape (dulci i
srate), rumen, la bacteriile patogene ce produc infecii urinare i pulmonare.

Fig. 20. Capsula bacterian (coloraie negativ, original).

2.9.1.1. Natura chimic a materialului capsular


Materialul capsular este de natur polizaharidic. De cele mai multe ori, n alctuirea sa se gsesc
D-glucoza, D-fructoza, D-galactoza. Mai rare sunt manoza, fucoza, pentozele. Unele polizaharide
extracelulare se aseamn cu acizii teichoici deoarece conin glicerol-fosfat sau ribitol-fosfat.
Materialul capsular poate fi un homopolizaharid sau un heteropolizaharid. Cele mai cunoscute
homopolizaharide sunt dextranii i levanii.
Dextranii formeaz o clas mare de polizaharide, alctuii din uniti de D-glucopiranozil, legate
l-6, cu puni de ramificare n poziiile 2, 3 sau 4. Lungimea lanului este cuprins ntre 40-500 resturi de
glucoz. Dextranii sunt produi de Peptococcus (Leuconostoc) mesenteroides, din sucroz. Sinteza lor
este abundent n melasa de la fabricile de zahr, unde o cantitate semnificativ de zahr este convertit la
dextran, aducnd prejudicii economice importante.
n stare purificat, dextranul se folosete n practica transfuziilor, ca nlocuitor al plasmei, fiind
solubil n ap, iar sephadexul este un dextran folosit n cromatografia bazat pe principiul sitei
moleculare.
Levanii sunt poli-D-fructani (fructozizi), sintetizai de unele bacterii patogene pentru plante
(Pseudomonas, Xanthomonas), de Streptococcus salivarius, de Bacillus. Au greuti moleculare de l000
kDa sau mai mult.
Heteropolizaharidele sunt alctuite dintr-un numr variat de uniti repetitive alctuite din
monomeri diferii: glucoz, fructoz, galactoz, manoz, acid galacturonic, derivai aminai i acetilai ai
acestora.
Structura biochimic a heteropolizaharidelor este foarte diferit nu numai n funcie de compoziia
chimic global, ci i de secvena diferiilor monomeri n catena polizaharidic (de exemplu, pentru
xantan, structura repetitiv este un pentazaharid).
Diversitatea monomerilor glucidici confer heteropolizaharidelor o anumit diversitate a
structurii chimice i n consecin, o anumit specificitate antigenic. De exemplu, la Str. pneumoniae
exist peste 80 de tipuri chimice diferite de material capsular, care corespund nu numai unor diferene de
compoziie chimic, dar i de secven a monomerilor. Varianta antigenic a polizaharidului capsular
imprim specificitatea anticorpilor n reaciile de aprare fa de diferitele tulpini patogene ale acestei
bacterii.
La bacteriile care au informaia codificatoare, sinteza materialului capsular este modulat
cantitativ de compoziia mediului de cretere. De exemplu, Peptococcus mesenteroides sintetizeaz
dextrani numai dac crete pe mediul cu sucroz. Celulele de Azotobacter, cultivate pe un mediu cu N
combinat nu sintetizeaz material polizaharidic, dar pe un mediu fr N combinat, produc un strat mucos
abundent, cu caracter adaptativ care limiteaz difuzia O 2 n celule, protejnd astfel nitrogenaza, sensibil
la prezena O2.
Bacteriile enterice sintetizeaz polizaharide n condiiile unui exces de glucide i a limitrii
surselor de N, P, S, n mediul nutritiv.
Pe msur ce cultura bacterian care sintetizeaz polizaharide se dezvolt, mediul lichid devine
tot mai vscos, datorit solubilitii polimerilor n ap.

Unele bacterii sintetizeaz continuu exopolizaharide, n timpul fazei de cretere, iar altele, numai
n faza logaritmic trzie i n faza staionar.
Capsula este o structur inert, accesorie ce nu face parte integrant din celula bacterian. Cel mai
adesea nu ndeplinete o funcie esenial pentru celul.
Bacteriile patogene capsulate sunt virulente, deoarece capsula este un material chimiotactic
negativ pentru fagocite. Pe mediul solidificat, ele produc colonii netede (S, smooth). Mutantele lor
necapsulate produc colonii rugoase (R, rough) i sunt mult mai puin virulente.
Materialul capsular este higroscopic (reine apa) i astfel protejeaz celula de desicaie. Materialul
capsular ar putea avea rolul de depozit al unor nutrieni din mediu.
Biosinteza celulozei. Unele bacterii sintetizeaz celuloza ca un produs exclusiv extracelular, care
ndeplinete funcii fiziologice importante n mediile naturale: protecie mecanic, chimic i fiziologic
la Acetobacter xylinum i Sarcina ventriculi; uureaz aderena n timpul interaciunii simbiotice
Rhizobium-plante leguminoase sau a interaciunii infecioase pentru speciile de Agrobacterium. Ipoteza
actual a biogenezei celulozei la plante i la bacterii consider c, complexul membranar al celulozosintazei polimerizeaz resturile de glucoz (UDP-Glc) n lanuri de glucani legai beta-1,4 i rezult fibrile
cristaline rigide, care sunt extruzate la suprafaa celulei (Ross i colab., 1991). La A. xylinum, sintaza
celulozei este alctuit din cel puin dou subuniti asemntoare, dar distincte funcional.
2.9.2. Glicocalixul comportamental
La anumite bacterii structurile superficiale sunt acoperite de un glicocalix adevrat, constituit
dintr-o reea de filamente polizaharidice i glicoproteice, legate de LPS ale membranei externe la
bacteriile Gram negative (fig. 21) sau de mureina celor Gram pozitive. Filamentele formeaz o structur
pericelular dezordonat, ca o psl, prin intermediul creia celula se ancoreaz fie pe alte celule, fie pe
suporturi inerte.
Glicocalixul se gsete numai la bacteriile care triesc n mediile naturale, avnd un caracter adaptativ,
adic exist numai n condiiile n care prezena ei confer celulei un avantaj selectiv. Dup cultivare n
medii artificiale (bulion, geloza), glicocalixul dispare i din aceast cauz s-a evideniat trziu. Deoarece
nu persist la celulele cultivate n mediile artificiale, s-a propus denumirea de glicocalix comportamental.

Fig. 21. Reprezentarea schematic a glicocalixului legat de membrana extern a unei bacterii Gram negative (dup Costerton,
1978).

Glicocalixul a fost studiat la celulele bacteriene din placa dentar. Placa este un depozit de
culoare alb-glbuie, vizibil cu o lup, ce se formeaz pe suprafaa smalului dentar, iniiat de Str. mutans.
Celulele sale sintetizeaz un polizaharid glucanic i acizi lipoteichoici, prin intermediul crora ader
foarte strns de suprafaa smalului, formnd iniial o microcolonie, iar ulterior, o colonie. Celulele ader
ntre ele, dar i de smalul dentar (hidroxil-apatita), prin glicocalix. Dup impregnare cu sruri i
glicoproteine salivare se creeaz un micromediu anaerob, n care bacteriile elimin produsele de
catabolism. Micromediul coloniei se acidific i se creeaz condiiile favorabile degradrii smalului. n
prezena sucrozei, la pH acid, sinteza ALT este stimulat semnificativ. Astfel se iniiaz formarea cariei.
n mediul aquatic, celulele bacteriene lipsite de structur capsular se asociaz, formnd
biofilme*. Celulele se ancoreaz de suport, prin intermediul glicocalixului, formnd un consoriu
funcional. Biofilmul se definete ca un ansamblu format din celule i din produse extracelulare prin
intermediul crora se ancoreaz de suportul viu sau inert, formnd asociaii. n biofilm, celulele
bacteriene au un fenotip modificat n ceea ce privete rata de cretere i de transcriere a genelor. Legarea
(aderena) celulelor de suport este prima etap a procesului de colonizare. Astfel se iniiaz formarea
coloniei bacteriene.
*
Majoritatea microorganismelor din mediile aquatice nu se gsesc ca organisme libere plutitoare, ci triesc ataate de suprafee,
inclusiv la suprafaa apei, unde formeaz un biofilm. n matricea unui biofilm, asociaiile naturale de bacterii funcioneaz ca un
consoriu cooperant. Biofilmele reprezint sisteme biologice cu un nivel nalt de organizare, n care comunitile de bacterii sunt
coordonate funcional.

n mediile naturale, glicocalixul este structura care mediaz asocierile bacteriene polispecifice. Astfel,
n rumen, se formeaz asociaii coloniale polispecifice (colonii polibacteriene). ntre ele se stabilesc
relaii metabolice sinergice, prin care bacteriile realizeaz activiti metabolice, pe care speciile separate
nu le pot desfura. De exemplu, n rumen se sintetizeaz CH 4: unele bacterii produc H2, altele CO2, iar
bacteriile metanogene reduc CO2, utiliznd H2 ca surs reductoare.
Capacitatea lor de a popula ntreaga biosfer se datoreaz versatilitii lor metabolice i plasticitii
fenotipice. Teoria plasticitii fenotipice consider c bacteriile rspund modificrilor mediului de via
prin schimbri structurale i funcionale (metabolice) profunde, n cadrul aceleiai norme genetice.
Prin intermediul biofilmului, celulele bacteriene se ataeaz de suport i se agreg, amplificnd
interaciunile celulare. Prin ataare, bacteriile dobndesc avantajul versatilitii fenotipice.
Biofilmele formate in situ de bacteriile patogene sau potenial patogene pe dispozitivele medicale
(catetere venoase centrale, catetere urinare, lentile de contact, dispozitive intrauterine) prezint un interes
special. Cateterele centrale se monteaz pentru administrarea fluidelor (produse din snge, medicamente,
soluii nutritive) sau pentru monitorizarea hemodinamicii.
Glicocalixul capsular i cel comportamental sunt structuri foarte variabile din punct de vedere
fenotipic, avnd grade foarte diferite de dezvoltare la aceeai tulpin bacterian, n diferite condiii de
mediu. Dei sinteza reprezint o cheltuial semnificativ de energie, rolul lor funcional n mediile
naturale justific existena structurilor polizaharidice. Glicocalixul dispare la celulele cultivate n medii
artificiale. Pe medii nutritive bogate, existena acestor structuri nu mai este necesar, dar reapar prin
transferul celulelor n medii naturale nefavorabile.
Pentru bacteriile patogene, glicocalixul este structura prin care celulele se ancoreaz de celulele
mucoaselor i iniiaz procesul infecios. De exemplu, Neisseria gonorrhoeae ader la celulele uretrale i
vaginale prin filamentele glicocalixului. Uneori, legarea mediat de glicocalix are caracter de specificitate
pentru un anumit tip de celule ale gazdei (de exemplu, bacteriile care iniiaz procese patologice
intestinale se leag cel mai adesea exclusiv de epiteliul intestinal).
Reunirea tuturor structurilor polizaharidice extraparietale, indiferent de gradul de dezvoltare sub
denumirea de glicocalix a fost propus de Costerton (l982). Capsula este cea mai important dintre ele, ca
grad de dezvoltare, dar toate structurile polizaharidice ndeplinesc aceiai funcie esenial aderena
celulei de substrat. Gradul diferit de dezvoltare, de la glicocalix la macrocapsul implic o diversificare
corespunztoare a funciilor acestor structuri.

Prin gradul lor foarte diferit de dezvoltare n raport cu condiiile de mediu, structurile
polizaharidice extraparietale sunt expresia autentic a plasticitii fenotipice structurale a bacteriilor.
Plasticitatea fenotipic a bacteriilor permite adaptarea rapid la schimbri majore ale mediului.
Bacteriile sunt primele organisme care se adapteaz la condiiile noi de mediu, n timp ce organismele
superioare se adapteaz mult mai lent, prin selecia mutantelor.
Bacteriile colonizeaz ecosistemele noi i prin mecanismul genetic al seleciei mutantelor.
Aceast dubl capacitate adaptativ prin plasticitate fenotipic i prin selecia mutantelor explic
uriaul succes al bacteriilor de a popula chiar i cele mai ostile medii.
2.10. Flagelul
Flagelul (flagelum = bici) este organitul extracelular al mobilitii celulei procariote. Organitele
omologe de mobilitate ale celulei eucariote sunt flagelii i cilii. Flagelii se mai numesc i undulipode
(undula = und mic; pus, podos = picior).
Flagelul bacterin se prezint ca un filament extracelular, filiform, ondulat, cu grosimea uniform pe
toat lungimea sa. Lungimea este variabil, de la 4-5 m pn la 70 m, iar diametrul este de 20 nm.
Flagelii nu se observ prin examinarea direct a celulelor la microscopul optic. Existena lor se
deduce indirect, din mobilitatea celulelor bacteriene pe preparatele din cultura vie. Celulele fr flageli se
numesc atrihe. Dup numrul i modul de aezare a flagelilor, bacteriile sunt (fig. 22):
monotrihe (cu un singur flagel);
amfitrihe (cu doi flageli aezai la cei doi poli ai unui bacil);
Poziia flagelului (sau flagelilor) poate fi polar, subpolar sau ecuatorial.

Fig. 22. Reprezentarea schematic a modului de aezare a flagelilor unei celule bacteriene. Bacteriile fr
flageli se numesc atrihe.
2. 10.1. Structura flagelului
Comparativ cu flagelul celulei eucariote, flagelul bacterian are o structur simpl, cu originea n
structurile de nvelis ale celulei i este alctuit din urmtoarele elemente (fig. 23):
- corpusculul bazal, localizat n nveliurile celulare;
- crligul;
- filamentul extern (flagelul propriu-zis).
Corpusculul bazal formeaz o structur rotativ unic, att ca alctuire ct i ca funcionalitate n
sistemele biologice, asemntoare n general cu un buton de cma. La bacteriile Gram negative,
structura sa este mai complex, deoarece discurile componente sunt duble, alctuite din proteine diferite
i ndeplinesc funcii diferite. Se disting urmtoarele discuri, aezate pe o structur axial, fin:
- discul M (mobil) este ancorat n structura membranei citoplasmatice;
- discul S (stator) este legat de peptidoglican;

discul P este localizat n spaiul periplasmic;


discul L este legat de lipopolizaharidele membranei externe a peretelui.
Crligul are rolul de articulaie flexibil ntre corpusculul bazal i filamentul extern. Prin axul su
central, crligul se leag de corpusculul bazal.

Fig. 23. Reprezentarea schematic a motorului rotativ al flagelului de E. coli. Rotorul este un disc
proteic integrat n membrana plasmatic i se rotete cu circa 100 revoluii/secund, fa de discul stator,
sursa de energie fiind gradientul de protoni (dup Todar, 2004).
Micarea de rotaie a discului M (3000-4000 r/min) este transmis crligului i filamentului
extern.
n alctuirea flagelului intr cel puin 11 tipuri de molecule proteice: cte unul n filamentul
extern i crlig i cel puin 9 tipuri de proteine n corpusculul bazal. Cea mai cunoscut este proteina
filamentului extern, denumit flagelin (gr. mol. 40 kDa). Moleculele sale sunt aezate dup o simetrie
helical, formnd o structur tubular, canalicular. Moleculele de flagelin au proprietatea de
autoasamblare: dac moleculele de flagelin sunt dispersate, n condiii adecvate ele se reasambleaz
spontan.
Flagelina se sintetizeaz sub forma monomerilor, n interiorul celulei. Moleculele de flagelin
strbat axul central al structurii bazale i se aeaz la captul distal al flagelului, dup o simetrie helical,
pentru a forma filamentul extern. Flagelul bacterian crete prin regiunea sa apical. Moleculele de
flagelin nu sunt eliberate n mediul extracelular nainte de a fi asamblate n structura flagelului.
Crligul este format din subuniti proteice identice. Funcia sa nu este cunoscut.
Corpusculul bazal are o structur molecular mult mai complex. Cele 9 proteine diferite sunt
organizate n discurile care nconjur un ax subire, ce se inser n membrana citoplasmatic.
2.10.2. Motilitatea i chimiotaxia
Motilitatea bacterian are dou particulariti: este foarte rapid i se face dup o direcie
aleatorie. Motilitatea a fost studiat cu ajutorul unui microscop special (microscop de urmrire) la o
mutant monoflagelar de E. coli.
Cercetrile de reologie au artat c datorit structurii flagelului, n mediul nutritiv lichid (bulion),
deplasarea celulei bacteriene ntmpin o rezisten foarte mare. Explicaia rezid n metabolismul foarte
intens al celulei bacteriene i n natura particular a sursei de energie utilizat. Pentru mobilitate, celula
bacterian nu utilizeaz ATP, ci energia electrochimic, adic fluxul de electroni care strbate regiunea
bazal a motorului rotativ. Energia de rotaie a structurii bazale este energia protonic (chemiosmotic)
generat de deplasarea protonilor prin membrana celular, care furnizeaz fora inegalabil de deplasare a
celulei bacteriene.

Celulele de Proteus (la origine, termenul se referea la zeul grec al mrii, care ia multiple nfiri
pentru a se face nevzut) se deplaseaz pe suprafaa mediului solidificat prin roire (swarming). Roirea se
produce pe o suprafa solid care nu permite micarea flagelar obinuit n mediul lichid. Studiile de
roire pe agar ncep prin uscarea suprafeei agarului pentru a ndeprta umiditatea. Astfel este mpiedicat
migrarea prin deplasarea n mediul lichid.
Procesul roirii cuprinde urmtoarele evenimente: a) creterea celulelor roitoare; b) migrarea lor
pe suprafaa agarului; c) diviziunea lor n celule scurte.
Comportamentul cunoscut sub denumirea de roire poate fi descris ca o micare a celulelor
alungite i flagelate pe suprafaa mediului solid, n cicluri periodice de micare i consolidare. Celulele
care roiesc sufer importante modificri morfologice. Roirea este determinat de apariia celulelor
filamentoase (20-80 m lungime), cu un numr mare de flageli (500-1000 flageli/celul), denumite celule
roitoare. n timpul consolidrii, celulele roitoare se divid pentru a produce celule scurte (2-4 m lungime,
cu 1-10 flageli) care cresc i se divid o perioad de timp, apoi se difereniaz pentru a forma o alt
generaie de celule roitoare. Celulele roitoare apar la periferia coloniei, pe suprafaa liber, n grupe mici,
care se deplaseaz pe o distan scurt i se ntorc din nou la colonie. Pe msur ce perioada de roire
crete, celulele se deplaseaz n grupe mai mari, tot mai departe de colonie, nainte de a se rentoarce.
Deplasarea n grupe mai mari este mai eficient. La terminarea primei perioade de roire, micarea se
oprete i celulele intr ntr-o perioad de consolidare. Din celulele filamentoase, prin diviziune
transversal n cteva puncte rezult celule scurte normale. Celulele scurte rezultate prin diviziunea
celulelor roitoare cresc i se divid i ciclul se repet cu a II-a band de roire, care ncepe de la marginea
primei benzi. Fenomenul se numete zonare i continu pn cnd ntreaga suprafa a plcii este
acoperit de cteva benzi concentrice de cretere dens i lax. Micarea poate fi rezultatul chimiotaxiei
negative fa de cataboliii care se acumuleaz, sau al chimiotaxiei pozitive fa de substanele nutritive.
La spirochete, micarea este rezultatul contraciei i relaxrii unui fascicul de fibrile axiale
(axostil), situate ntre corpul celulei i o membran ce acoper celula. Se produc micri pulsatorii prin
flexia i extensia celulei, precum i o micare concomitent de rotaie n jurul axului longitudinal.
2.11. Fimbriile
Fimbriile sunt structuri de tipul unor apendice filamentoase, rigide sau flexibile i neuniforme ca
lungime, care se extind de la suprafaa celulei bacteriene.
Termenul de fimbrii a fost introdus de Duguid (1955) ( lat. = fibra, franjuri), iar n 1959 Brinton a
folosit termenul de pil (lat. pilus = pr). Apoi s-a sugerat ca termenul de pil s fie folosit pentru structurile
filamentoase codificate de plasmidele conjugative, cu rol n procesul de conjugare ce const n transferul
unui fragment de ADN de la o celul donor la o celul receptoare. Adeseori, cei doi termeni se folosesc
pentru a descrie aceiai stuctur. Fac excepie structurile fimbriale de la Neisseria, pentru care literatura
folosete termenul de pil.
Fimbriile sunt alctuite din molecule proteice de fimbrilin, cu gr. mol. de 15-30 kDa, aezate
totdeauna dup o simetrie helical. Dup sintez, fimbrilina este transferat extracelular i depus la baza
fimbriei. Numrul lor este de pn la l000/celul. Dac sunt numeroase, au o dispoziie pericelular. Dac
sunt puine, au localizare polar sau bipolar. Lungimea lor este foarte variabil (l-20 m), ceea ce
sugereaz c au vrste diferite.
Fimbriile se observ la microscopul electronic, dup coloraia negativ a celulelor ntregi sau se
evideniaz indirect prin capacitatea lor de a aglutina hematiile diferitelor specii de animale i pot fi
mprite n 3 categorii structurale:
- fimbrii rigide, cu diametrul de 5-10 m, cu un lumen de circa 2 nm (la enterobacterii). Regiunea
hidrofob este la captul COOH al fimbrilinei;
- fimbrii flexibile, cu diametrul de 5-6 m. Se mai numesc fimbrii N-metil-fenilalanin, deoarece la
captul N-terminal al fimbrilinei au un rest de fenilalanin metilat. Se gsesc la Ps. aeruginosa, N.
gonorrhoeae, N. meningitidis. Regiunea N-terminal este hidrofob;

fimbrii flexibile subiri spiralate, cu diametrul de 4 m sau mai puin, fr lumen (K 88, K99, la E.
coli).
Unele fimbrii au att o regiune rigid, ct i una flexibil.
Fimbriile sunt comune la bacteriile Gram negative i mai rare la bacteriile Gram pozitive
(Corynebacterium, Actinomyces), dar sunt diferite structural.
O bacterie posed cteva tipuri de fimbrii, n funcie de grosime, lungime, specificitatea
antigenic (determinat de secvena aminoacizilor n molecula de fimbrilin) i de specificitatea
receptorilor glicoproteici ai celulelor epiteliale de care ader.
Cea mai important funcie care li se atribuie ar fi aceea de puni de aderen intercelular sau
aderen de suportul inert. La bacteriile din mediile aquatice, fimbriile favorizeaz asocierea celulelor i
astfel se formeaz pelicule fine (filme) de neuston la suprafaa apei, cu rol adaptativ, ce asigur condiii
bune de aerare pentru bacteriile aerobe i de luminozitate pentru cele fotosintetizante.
Pentru bacteriile patogene, prezena fimbriilor (tulpinile fim+) le confer un grad superior de
virulen, deoarece fimbriile ader ferm la receptorii suprafeei celulelor epiteliale ale mucoaselor i ai
hematiilor.
Receptorul major al suprafeei celulelor eucariote pentru fimbriile bacteriene este o glicoprotein
cu manoz. Proteina de aderen localizat pe fimbrii se leag de resturile de manoz ale glicoproteinelor.
n funcie de comportamentul n prezena manozei, in vitro, s-au identificat fimbrii manozosensibile i manozo-rezistente. La E. coli s-au evideniat fimbrii manozo-sensibile (manoza inhib
hemaglutinarea, in vitro, prin competiia cu receptorii suprafeei hematiilor).
Fimbriile manozo-rezistente aglutineaz numai eritrocitele tanate. Celulele bacteriene cu astfel de
fimbrii ader la celulele endoteliale, la celulele epiteliale ale tractului respirator, urogenital, la membrana
bazal a tubilor renali, a capsulei Bowmann.
O celul bacterian exprim simultan fimbrii cu specificiti multiple de legare la suportul celular.
Astfel se explic selectivitatea bacteriilor patogene i comensale pentru anumite gazde i esuturi.
Elaborarea conceptului adezinelor i a specificitii lor de legare explic tropismul tisular selectiv
al bacteriilor infecioase. Caracterul progresiv ascendent al infeciei urinare, de la vezica urinar spre
rinichi, mpotriva fluxului urinar, se explic prin fenomenul de aderen, mediat de fimbrii cu diferite
specificiti de legare, de celulele epiteliale.
Exprimarea fimbriilor pe suprafaa celulei este adaptativ. Ele favorizeaz aderena celulei
bacteriene la substraturi celulare diferite.
Fimbrilina este codificat de gene cromosomale, ceea ce denot c fimbriile au o importan
ecologic deosebit, prezena lor fiind asociat cu anumite condiii favorizante de mediu.
Orice linie bacterian poate s existe alternativ n varianta fim+ sau fim- i s poarte simultan mai
multe tipuri de fimbrii, cu specificiti diferite de legare. Rata de mutaie a genelor care codific sinteza
fimbriilor este foarte mare, astfel nct celulele fim+ trec n varianta fim- i invers, prin retromutaie.
Uneori fimbriile sufer fenomenul variaiei de faz i al variaiei antigenice. Variaia de faz
nseamn c o structur dat este sau nu produs. Variaia antigenic semnific faptul c aceeai structur
se produce n variante biochimice diferite.
Variaia antigenic a fimbriilor bacteriene este rezultatul aciunii mai multor mecanisme. Cel mai
simplu este acumularea lent a mutaiilor punctiforme n gena codificatoare. Fenomenul se numete drift
antigenic i are loc att la bacteriile patogene ct i la cele nepatogene.
Semnificaia biologic. Fimbriile sunt structuri din categoria adezinelor, care mediaz interaciunea
celul-suport. n ceea ce privete capacitatea de legare, cele mai multe adezine fac parte din familia
lectinelor*.
*

Lectinele sunt glicoproteine care se leag nespecific cu glucidele sau cu gruprile glucidice ale glicoproteinelor. Ele precipit
polizaharidele si glicoproteinele sau aglutineaz celulele. Activitatea lor aglutinant i precipitant poate fi inhibat de haptene
(monozaharide i oligozaharide).

2.12. Pilii

Pilii sunt apendice filamentoase neflagelare, a cror sintez este codificat de gene localizate n
structura unor plasmide denumite conjugoni sau plasmide sex.
Celulele purttoare de pili au capacitatea potenial de a dona material genetic (sunt
celulemascul). Numrul pililor pentru o celul este cuprins ntre 1 i l0, iar lungimea este de circa 20
m. Diametrul extern este de 6-l5 nm, iar cel intern de 2,5 nm.
Pilii sunt alctuii din molecule identice de pilin, o fosfoglicoprotein de l2-l5 kDa. Se
sintetizeaz n celul, de unde este transferat n lumenul piliar i este asamblat dup o simetrie helical,
la extremitatea liber a acestuia.
Pilii pot fi ndeprtai mecanic, prin agitare, dar se pot resintetiza. Prin nclzire sau tratament
acid, pilii se dezagreg n moleculele componente (pilina). Restabilirea neutralitii i a nivelului termic
permite autoasamblarea i formarea unei structuri identice cu pilul original.
Rolul pililor. Prezena pililor este asociat totdeauna cu procesul de conjugare bacterian. Pilii ar
putea fi structuri eseniale de transfer al materialului genetic de la celula donor la celula receptor.
Molecula de ADN ar trece prin lumenul pilului.
Dup ali autori, pilii ar avea numai rolul de a aga celula receptoare de material genetic, iar
prin retracia sa ulterioar, cele dou celule s-ar apropia.
Rolul pililor n conjugare este argumentat de faptul c depilierea (prin agitare cu perle de sticl)
este nsoit de pierderea capacitii de conjugare i de restabilirea ei odat cu resinteza pililor.
Capacitatea de sintez a pilinei se pierde odat cu pierderea plasmidei de sex i este redobndit
odat cu rectigarea plasmidei.
Pilii poart receptori de fagi. Pe suprafaa pililor se gsesc receptori pentru fagii ARN masculi.
Se numesc fagi masculi deoarece infecteaz numai celulele cu potenialitate de donor de material
genetic. Marcajul cu fagii ARN masculi este modalitatea de a-i distinge de alte structuri filamentoase.
La extremitatea liber a pililor se gsesc receptori pentru fagii filamentoi.
2.13. Dinamica (evoluia) unei culturi bacteriene
Cultura bacterian este rezultatul creterii i multiplicrii ntr-un mediu lichid sau solid, a unei
mici cantiti iniiale de celule, care constituie inoculul.
Microorganismele se cultiv n mai multe scopuri:
izolarea si identificarea lor;
meninerea viabilitii lor n colecie;
studiul sensibilitii la antibiotice n laboratorul clinic sau n scopul cercetrii;
n scop industrial pentru obinerea biomasei, a unor produi de biosintez sau de fermentaie.
Exist dou modaliti de cultivare a microorganismelor i tot attea tipuri de culturi:
culturile bacteriene discontinui se obin prin cultivarea n mediul nutritiv lichid sau solidificat, ce nu
se rennoiete;
culturile bacteriene continui se obin prin cultivarea n mediu lichid rennoit permanent, cu o
anumit rat.
n mod curent, n laborator se obin culturi bacteriene discontinui, ntr-un volum fix de mediu
lichid sau solidificat, nerennoit. Odat cu creterea culturii bacteriene, compoziia chimic a mediului se
modific: scade cantitatea de substane nutritive i se acumuleaz catabolii, care pot fi toxici.
ntr-o cultur discontinu, numrul de celule viabile variaz continuu. Ritmul de diviziune este
condiionat de concentraia nutrienilor: este foarte nalt n faza iniial a evoluiei culturii, cnd mediul
ofer condtii optime, dar se diminueaz treptat, pn la 0, pe msura epuizrii nutrienilor i a acumulrii
cataboliilor.
ntr-o cultur discontinu, ciclul celular este sincron numai n primele cicluri de diviziune
celular Curnd apar decalaje i ritmul diviziunii devine asincron. Diferite grupe de celule se gsesc n
faze diferite ale ciclului de cretere i multiplicare. Vrsta celulelor unei culturi discontinui este diferit.
Numrul de generaii celulare este limitat.

Analiza evoluiei numrului de celule ntr-o cultur discontinu se poate face pe o curb de
cretere, trasat n coordonate semilogaritmice. Panta curbei reflect valoarea ratei de cretere, variabil
n timp. Curba relect variaiile numrului de celule i implicit a masei celulare, n funcie de timp.
n raport cu variaiile ratei de cretere, pe curb se disting 6 momente:
l) Faza de laten (de lag sau de cretere 0) este greu de delimitat de faza urmtoare (fig. 24). Are o
durat foarte variabil: poate s fie foarte scurt (chiar inexistent) sau s dureze cteva ore. Numrul
celulelor ramne neschimbat, egal cu cel din inocul sau poate chiar s scad uor. Este caracterizat
printr-o intens activitate celular. n cursul acestei faze, celulele se pregtesc pentru procesele de
multiplicare care vor urma.

Fig. 24. Curba ideal de cretere a unei culturi staionare. Linia continu reprezint numrul total de celule, iar linia discontinu
ilustreaz numrul celulelor viabile.

Timpul de laten este lung (1-3 ore) pentru inoculul bacterian care provine dintr-un mediu
complex, ce conine numeroi compui organici, nsmnat ntr-un mediu sintetic minimal. Latena
corespunde timpului necesar sintezei enzimelor celulare pentru biosinteza metaboliilor eseniali. Latena
este de asemenea ndelungat, dup inocularea unui mediu sintetic minimal, cu un numr mic de celule
care provin din acelai mediu. n acest caz, bacteriile sunt adaptate fiziologic la mediul de cretere, dar
creterea ntrzie, deoarece anumite componente toxice (de exemplu, ionii metalici) nu au fost
neutralizate.
Timpul de laten depinde de starea fiziologic a celulelor din inocul: celulele aflate n faza
staionar se adapteaz uor la un mediu diferit. Dac inoculul provine dintr-o cultur aflat n faza de
declin, alterarea proceselor fiziologice se reflect n creterea perioadei de laten. Timpul de laten nu
influeneaz durata celorlalte faze de evoluie a unei culturi.
De cele mai multe ori, celulele bacteriene se adapteaz la noile condiii de mediu datorit
plasticitii fenotipice, n cadrul aceleiai norme genetice. Uneori, adaptarea unei culturi la noile condiii
de mediu se poate datora seleciei unei populaii mutante i timpul de lag este lung. n acest caz, n inocul
se gsete o proporie foarte mic de celule mutante, capabile s metabolizeze aceste surse. Din punct de
vedere genetic, mutantele sunt diferite de restul celulelor. Din aceast cauz, perioada de lag este foarte
lung. Masa celular a culturii va deveni vizibil numai dup ce celulele mutante s-au multiplicat ntr-o
msur suficient pentru a constitui o proporie semnificativ a inoculului. n acest caz, perioada de lag
este aparent i nu real, deoarece celulele mutante capabile s creasc se multiplic exponenial cu mult
nainte ca rezultatul multiplicrii s se evidenieze prin creterea masei celulare.
Perioada de lag este foarte scurt sau chiar absent, dac inoculul este transferat pe un mediu
identic. Celulele posed deja, echipamentul necesar metabolizrii mediului respectiv.
2) Faza de iniiere a creterii este un interval scurt de timp, n care celulele bacteriene cresc i se divid
cu un ritm care crete progresiv. Este faza de accelerare a ritmului de cretere.
3) Faza de cretere exponenial. Creterea numrului celulelor bacteriene se face cu o rat
exponenial (geometric) constant. Ritmul de diviziune este maxim. Mortalitatea celular este practic

nul. Dup fiecare diviziune, numrul celulelor se dubleaz. Daca Xo este numrul de celule/ml la
nceputul fazei de cretere exponenial, numrul de celule se dubleaz succesiv astfel:
dup o diviziune: X1 = 2 x Xo;
dup dou diviziuni: X2 = 22 x Xo
dup n diviziuni: Xn = 2n x X0.
Expresia se poate scrie: logXn = log Xo + n log 2.
Creterea unei culturi bacteriene se realizeaz ntr-un interval de timp dependent de timpul de
generaie sau timpul de dublare a numrului de celule.
Timpul de generaie este intervalul necesar pentru ca o celul tnr rezultat din diviziune, s
creasc i s se divid i se msoar n intervalul de timp dintre dou diviziuni.
La bacterii, timpul de generaie se exprim n minute sau ore: la B. subtilis, B. megatherium 9l0 min; la E. coli 20 min; la Lactobacillus l00 min; la levuri 60-l20 min; la Paramecium 600
min; la Amoeba l400 min; la M. tuberculosis l600 min; la T. pallidum 2000 min.
Durata timpului de generaie este diferit de la o specie la alta i este controlat genetic. n funcie
de condiiile de mediu, timpii de generaie sunt diferii pentru aceeai tulpin bacterian. ntr-un mediu
optim, timpul de generaie al unei specii se scurteaz, dar crete mult n condiii modificate de mediu.
n culturile bacteriene aerobe staionare, n mediul lichid, numrul maxim de celule care se
acumuleaz n aceast faz este de 200 milioane/ml. n condiii de agitare, contactul cu nutrienii este
favorizat i se realizeaz densiti de l0-20 de ori mai mari.
Capacitatea de diviziune ramne numai potenial i se realizeaz numai pentru intervale foarte
scurte de timp, deoarece condiiile de mediu devin foarte rapid limitante. n condiii nefavorabile,
multiplicarea este nul.
n cursul fazei de cretere logaritmic, celulele prezint cteva particulariti: sunt uniforme ca
mrime i puin mai mari fa de dimensiunile tipice speciei respective. Se coloreaz omogen deoarece
nu conin incluzii i sunt intens bazofile.
ntr-o celul care crete, circa 80% din ARN total este ARN ribosomal, iar restul este reprezentat,
n cea mai mare parte, de ARNt. ARNm, dei ndeplinete funcia de sintez a proteinelor, are o
proporie foarte mic din ARN total, deoarece funcioneaz pentru cteva cicluri ale sintezei proteice,
dup care, fiind instabil, este degradat.
4) Faza de ncetinire a creterii se caracterizeaz prin diminuarea pregresiv a ritmului de
diviziune. Este o faz scurt i la sfritul ei, celulele au ncetat s se multiplice i s creasc.
5) Faza staionar (sau de cretere maximal) este caracterizat prin faptul c numrul total de
celule rmne constant. Celulele unei culturi n faza staionar sunt considerate ca tipice pentru specia
respectiv: dimensiunile lor sunt normale (mai mici dect cele din faza precedent), se coloreaz normal
i pe baza comportamentului lor n coloraia Gram sunt atribuite grupului Gram pozitive sau Gram
negative. n celule apar substane de rezerv, vacuole spori.
Faza staionar corespunde platoului curbei de cretere. Durata ei este variabil: n mediile
sintetice este scurt.
Oprirea creterii este datorat epuizrii unui compus nutritiv esenial, denumit limitant al
creterii. Dac componentele minerale ale mediului sunt n exces, compusul limitant este de obicei
energetic. n cazul bacteriilor auxotrofe, n prezena componentelor minerale i energetice, oprirea
creterii se datoreaz epuizrii unui factor de cretere.
6) Faza de declin a culturii este ilustrat grafic de panta descendent a curbei. Masa celular scade
progresiv datorit fenomenului de liz. Cu o rat similar scade numrul celulelor viabile. Cele care nu
sporuleaz mor i se lizeaz. Morfologia celulelor este alterat. ntr-o cultur de bacili apar forme
atipice: sferice, filamentoase, ramificate. Celulele conin substane de rezerv, vacuole. Afinitatea pentru
coloranii bazici se diminueaz treptat, odat cu scderea cantitii de ARN. Sunt celule mbtrnite.
Numrul lor se micoreaz treptat, iar pentru speciile nesporulate tinde repede spre 0 i cultura se
sterilizeaz.
Creterea colonial. Bacteriile diseminate individual sau ca grupri elementare pe suprafaa sau
n masa unui mediu nutritiv agarizat, se divid i formeaz o colonie bacterian. Fiecare colonie, izolat

spaial de vecinele sale, constituie o clon celular. Numrul celulelor ntr-o colonie depinde de talia
celulelor i de rata lor de cretere. Numai celulele situate la periferia coloniei, n contact cu mediul
nutritiv sunt metabolic active.
Dac dup fiecare diviziune, cele dou celule surori se separ complet, colonia va lua o forma
regulat: sferic sau de lentil biconvex, pentru cea inclus n grosimea gelozei i o form bombat,
neted, pentru cea de pe suprafaa agarului. Acestea sunt colonii S(Smooth).
Dac celulele surori ader ntre ele, aspectul coloniei devine neregulat, cu suprafaa ncreit,
rugoas, proprie coloniei de tip R (Rough).
Msurarea creterii se face prin determinri cantitative a doi parametri: masa celular i numrul
de celule. Ambele msurtori se raporteaz la un volum fix de mediu, de exemplu la 1 ml. Masa celular
i numrul de celule nu sunt n mod necesare echivalente pentru c masa celulelor individuale poate s
varieze, masa total a celulelor crete continuu, iar creterea numrului de celule este discontinu n
cazul culturilor sincrone. De obicei, multiplicarea ntr-o populaie mare de celule este asincron i n
aceste condiii creterea masei celulare i a numrului de celule sunt echivalente.
Metoda direct de msurare a masei celulare este determinarea greutii uscate a celulelor ntr-un
volum fix de cultur. n timpul creterii compoziia chimic a materialului celular rmne constant.
Masa celular se poate determina prin metode indirecte: msurarea coninutului n C, N sau n
proteine.
Metodele indirecte mai sensibile pentru estimarea masei celulare sunt determin rile cantitative ale
unei enzime particulare sau ale ratei unui proces metabolic cum este respiraia sau fermentaia(de
exemplu, rata producerii de acid lactic este folosit ca parametru al creterii bacteriilor lactice).
Metoda optim pentru msurarea masei celulare a unei culturi bacteriene este cea optic,
ce const n determinarea cantitii de lumin dispersat de o suspensie celular. Capacitatea de
dispersie a luminii este proporional cu densitatea suspensiei celulare. Cnd o raz de lumin trece prin
suspensie, reducerea cantitii de lumin transmis permite msurarea densitii celulare.
Raportul dintre masa de celule n suspensie i densitatea sa optic, pentru un organism dat, se face
empiric prin msurarea direct a greutii uscate a celulelor ntr-o prob cu o densitate optic dat.
Determinarea numrului de celule se poate face microscopic, numrnd celulele ntr-un volum
determinat. Calculul se face cu ajutorul camerelor de numrat. Astfel se determin numrul total de
celule dintr-o suspensie.
Numrarea automat a celulelor se face cu un instrument electronic (coulter counter). O cantitate
de suspensie este trecut printr-un orificiu foarte fin. Detectarea celulelor se bazeaz pe diferenele de
conductivitate electric ntre celul i mediul de suspensie. Se nregistreaz numrul de celule/unitate de
volum. Metoda se utilizeaz pentru numrarea celulelor mari (protozoare, alge), dar numrarea celulelor
mici (bacterii) este dificil, deoarece orificiul trebuie s fie foarte mic, iar mediul nu trebuie s conin
particule neanimate mici, care pot fi uor nregistrate ca celule bacteriene.

Numrarea microorganismelor unicelulare se face prin metoda cultivrii (viable cell


plate count), pentru c celulele viabile separate spaial una de alta prin dispersie pe sau ntr-un
mediu agarizat, prin cretere formeaz colonii vizibile macroscopic. Metoda permite numai
calculul celulelor viabile, deoarece determin numai celulele care cresc i se divid pe un mediu
de cultivare.
2.14. Metabolismul bacterian
Metabolismul (gr. metabole= a schimba) este reprezentat de totalitatea reaciilor biochimice
implicate n activitile biologice ale celulei bacteriene, prin intermediul crora substanele biogene sunt
preluate din mediul extern i sunt supuse reaciilor productoare de energie i de biosintez.
Substanele sunt preluate din mediul extern, fie sub form simpl, utilizabil direct n
metabolism, fie sub form complex. Substanele biogene sunt folosite de celul n urmtoarele direcii
eseniale:

pentru sinteza metaboliilor primari (aminoacizi, baze purinice i pirimidinice, enzime, acizi grai),
necesari biosintezei constituenilor structurali, rezultatul fiind creterea celulei. Aceti compui se
sintetizeaz n faza de cretere primar, denumit i trofofaz;
pentru producerea energiei, n metabolismul energetic i a produselor metabolismului energetic
(produi de fermentaie alcoolic, lactic, butiric, propionic, acid etc.);
pentru producerea (uneori) a metaboliilor secundari (antibiotice, alcaloizi, ergotina, giberelina). Se
sintetizeaz n faza de cretere secundar, denumit idiofaz, dup epuizarea unui nutrient major
(sursa de C sau de N). Metaboliii secundari nu sunt eseniali pentru creterea celulei i sinteza lor
este expresia procesului de difereniere biochimic.
Reglarea metabolismului bacterian este perfect i este subordonat principiului optimalitii
activitii celulare, astfel nct pierderea de energie s fie minim.
Reaciile metabolice fundamentale ale celulelor bacteriene nu difer mult de acelea care au loc n
celula eucariot. Totui, bacteriile au o serie de particulariti metabolice, n special ale metabolismului
energetic, care este mult mai diversificat dect cel al celulei eucariote.
-

2.14.1. Particularitile generale ale metabolismului bacterian


Metabolismul bacterian se distinge de acela al celulei eucariote prin cteva trsturi particulare:
l) Metabolismul bacterian are o intensitate neobinuit, de sute i chiar de mii de ori mai mare
dect metabolismul organismelor superioare, raportat la unitatea de greutate (gramul). Diferitele ci
metabolice i activiti enzimatice la bacterii se desfoar cu o intensitate deosebit de nalt, proprie
acestor organisme. Particularitatea deriv n cea mai mare parte din valoarea nalt a raportului
suprafa/volum (greutate celular). La bacterii, suprafaa este foarte mare n raport cu volumul, ceea ce
uureaz schimburile ntre celul i mediu. Suprafaa de schimb, prin care substanele nutritive ptrund n
celul, iar cataboliii sunt eliminai, este foarte mare n raport cu volumul celulei, care reprezint
consumatorul.
2) Natura substratului pe care bacteriile l pot cataboliza este foarte divers. Bacteriile reprezint
grupul cel mai omnivor din ntreaga lume vie. Ele metabolizeaz substane inaccesibile pentru alte
organisme, de la substane anorganice simple, inclusiv substane toxice pentru sistemele biologice, pn la
substane organice complexe: cauciucul, asfaltul, fenolii, parafinele, petrolul, lemnul, substanele
antibiotice, cheratina, detergenii, masele plastice. Reprezentani ai g. Pseudomonas pot metaboliza pn
la 200 substane diferite.
3) Plasticitatea metabolismului bacterian este fr echivalent n lumea vie i se refer la
capacitatea bacteriilor de a folosi, alternativ, diferite surse de carbon i energie. Foarte multe
microorganisme, considerate ca strict autotrofe (capabile s utilizeze numai substane anorganice pentru
nutriie) sunt de fapt facultativ heterotrofe i pot folosi substanele organice ca substrat generator de
potenial reductor. La rndul lor, microorganismele heterotrofe (organotrofe), n absena substanelor
organice utilizeaz compui anorganici.
4) Corelat direct cu intensitatea metabolismului, potenialul de sintez al celulei bacteriene este
deosebit de mare, ca o consecin a faptului c, transcrierea este simultan cu traducerea informaiei
genetice. Dac potenialul de sintez, exprimat n kg/zi, n mod convenional, la bovine l considerm a
avea valoarea 1, la soia este l0, la levuri este l05, iar la bacterii este l0ll, raportat la unitatea de greutate. O
celul de E. coli sintetizeaz circa l000 molecule de proteine/secund, circa 4000 molecule de lipide i 4
molecule de ARN. Acest uria potenial de sintez este numai teoretic i ar putea deveni real numai n
condiii optime de mediu. n condiii obinuite de mediu, acest potenial nalt de sintez se manifest o
perioad foarte scurt de timp, datorit factorilor limitani ai mediului: diminuarea cantitativ a
nutrienilor, acumularea rapid a substanelor toxice i de catabolism, modificarea pH, variaiile de
temperatur.
5) Metabolismul bacterian se caracterizeaz prin diversitatea cilor catabolice alternative, prin
care poate fi degradat un compus chimic: calea glicolizei, a untului hexozo-monofosfailor, calea EntnerDoudoroff.

2.14.2. Metabolismul energetic bacterian


Metabolismul celulei bacteriene, ca i al celulei eucariote, are dou compartimente fundamentale:
- cile de producere a energiei, denumite catabolice sau degradative;
- cile consumatoare de energie, denumite anabolice sau de biosintez.
Deoarece cile catabolice i anabolice sunt strns interconectate prin intermediul unor compui
cheie ai metabolismului intermediar, adevrate plci turnante ale metabolismului, denumirea comun de
ci amfibolice este justificat.
La bacterii, datorit ratei foarte nalte a metabolismului, funcioneaz o categorie special de ci,
denumite anaplerotice (sau de alimentare), menite s aprovizioneze o cale metabolic ce funcioneaz
intens, cu produsul intermediar necesar.
Cile catabolice reprezint ansamblul proceselor biochimice prin care are loc degradarea
nutrienilor preluai din mediu i eliberarea energiei. Complexitatea reaciilor catabolice este variabil, n
funcie de natura i complexitatea substanelor supuse proceselor de degradare.
n general, reaciile catabolice degradative ale unei macromolecule se desfoar n trei faze
succesive:
n prima faz au loc reaciile biochimice catalizate de exoenzime, n cursul crora macromoleculele
nutritive sunt scindate n spaiul extracelular, la subunitile specifice: glucide, aminoacizi,
oligopeptide, nucleozide, fosfai organici cu molecul mic (glicerol-fosfat). Bacteriile, fungii i
protozoarele produc enzime extracelulare cu rol de hidrolaze pe care le elimin n mediu sau rmn
legate de structurile de suprafa ale celulei: polizaharidaze (amilaz, celulaz, pectinaz),
mucopolizaharidaze (hialuronidaz, chitinaz, neuraminidaz, lizozim), nucleaze, lipaze,
fosfolipaze, proteaze. Ele hidrolizeaz moleculele mari, rezultnd oligomeri sau monomeri, pentru
care structurile celulare de nveli sunt permeabile. Pentru microorganismele patogene, exoenzimele
reprezint un factor major de virulen, deoarece atac esuturile constitutive ale gazdei;
n etapa a II-a, monomerii sunt degradai pe ci specifice i rezult un numr limitat (circa l2) de
molecule mici, denumite intermediari metabolici ai cilor centrale, aceiai la diferite tipuri de
bacterii. n aceast etap se elibereaz circa 1/3 din energia molecular;
n etapa a III-a este diferit n funcie de natura reaciilor metabolice: n aerobioz, reaciile
evolueaz n sensul metabolizrii integrale a compuilor, pn la CO 2 i H2O, cu eliberarea ntregii
cantiti de energie. n anaerobioz, reaciile evolueaz dup modelul respiraiei anaerobe sau al
proceselor fermentative i cantitatea de energie care se elibereaz este mic.
Reaciile catabolice sunt exergonice: ele realizeaz tranziia unei molecule de la o stare mai puin
stabil, cu un coninut mai mare de energie, la molecule mai mici i mai stabile, cu un coninut mai mic
de energie.
2.14.3. Tipuri de metabolism energetic in funcie de acceptorul final de electroni
Metabolismul energetic este o nlnuire de reacii de oxido-reducere, n cursul crora substratul
energetic este oxidat. Reaciile de oxidare constau ntr-o dehidrogenare, n care apa are, n acelai timp,
rolul de donor de O i de surs de protoni i e -. Toate reaciile de oxidare biologic au comun faptul c, n
esen, semnific o pierdere de e - de ctre substrat i eliberarea energiei. Molecula care cedeaz e - sau
protonii (H+) se oxideaz, iar cea care i accept se reduce. n funcie de natura acceptorului final de e -,
microorganismele pot prezenta trei tipuri de metabolism energetic:
metabolism energetic de tip aerob (oxibiotic) sau metabolism respirator, dependent de citocromii
catenei de respiraie celular, propriu microorganismelor al cror acceptor final de e -, la captul
catenei de respiraie este O2;
metabolism energetic anaerob (anoxibiotic), caracteristic microorganismelor al cror acceptor final
de e- este un compus anorganic oxigenat (nitratul, sulfatul, carbonatul) sau un compus organic

(fumaratul) (Zumft, 1997). n prezena O2, respiraia unora este de tip aerob, deoarece catena de
respiraie celular este funcional;
reacii metabolice de tip fermentativ sunt acelea care au loc numai n condiii de anaerobioz, dar
acceptorul final de e- este un compus organic (de exemplu, piruvatul).
La bacteriile fermentative lipsete lanul citocromilor din catena de respiraie, pentru transportul
e-. Substratul acceptor este redus la produse de fermentaie (de exemplu, piruvatul, la lactat). Reducerea
acceptorului final este cuplat cu reoxidarea coenzimelor.
Pentru nevoile curente ale cultivrii microorganismelor n condiii de laborator sunt recunoscute
urmtoarele tipuri respiratorii:
bacterii strict aerobe sunt acelea care necesit O 2 molecular ca acceptor final de e -. Ele realizeaz
metabolism de tip oxidativ i nu cresc n absena O 2. Pentru multe bacterii aerobe este necesar
aerarea extensiv, pentru c O2 este puin solubil n ap i nu difuzeaz cu o rat care s egaleze rata
utilizrii. Aerarea se face prin agitarea viguroas a recipientului sau prin barbotarea aerului sterilizat
n mediul lichid, printr-un tub de sticl. Bacteriile aerobe cresc mult mai bine n condiii de aerare
forat dect dac O2 difuzeaz liber;
bacteriile microaerofile folosesc O2 ca acceptor final de e -, dar concentraia natural a O 2, de 2021% este prea mare i din aceast cauz nu cresc pe suprafaa mediului expus aerului atmosferic,
dar nu cresc nici n anaerobioz;
bacteriile facultativ anaerobe i obin energia pe cale oxidativ, folosind O 2 ca acceptor final de e-,
dar cresc i n condiii de anaerobioz i i obin energia pe cale fermentativ;
bacteriile anaerobe nu folosesc O2 molecular ca acceptor de e -. n interiorul acestui grup se disting
cteva diviziuni fiziologice:
a) bacteriile anaerobe aerotolerante cresc slab n condiii de aerobioz, ntr-o ambian care conine
ntre 2-8% O2. Creterea optim are loc n anaerobioz (de exemplu, bacteriile lactice);
b) bacteriile anaerobe obligate variaz n privina sensibilitii lor la O 2: unele tolereaz cantiti
mici de O2, iar altele strict anaerobe nu cresc n prezena unei concentraii mai mari de 0,5% O 2.
Efectul toxic asupra bacteriilor anaerobe l exercit O 2 i nu potenialul redox ridicat al mediului.
n prezena O2, bacteriile anaerobe i pierd viabilitatea deoarece nu pot s detoxifice intermediarii toxici
ai reducerii O2: H2O2, O2- (radicalul superoxid), OH- (ionul hidroxil), OH. (radicalul hidroxil), 1O2 (oxigen
singlet*).
*1

O2 se formeaz dup ce molecula de O2 absoarbe o cantitate de energie. n molecule, n general, e - apar n perechi stabilizate,
cu spini de direcie opus. O 2 este o molecul neobinuit, prin faptul c spinii electronilor au aceeai direcie. Absorbia
energiei schimb unul dintre e- pe un orbital cu energie mai nalt i se produce inversia spinului.

Multe bacterii anaerobe obligate sunt bogate n flavine (enzime), care pot reaciona spontan cu O 2
i forma produse toxice. Din aceast cauz, cultivarea lor se face n recipiente din care O 2 se elimin
complet, pentru a crea un potenial redox sczut.
Exist numeroase procedee pentru diminuarea coninutului de O2:
unele
simple (umplerea recipientelor cu mediu i acoperirea cu dop de cauciuc), pentru bacteriile
care tolereaz o concentraie mic de O2 n mediu;
altele mai complexe pentru cultivarea bacteriilor strict anaerobe: n mediul de cretere se adaug
ageni reductori (acidul tioglicolic, cistein) sau alturi de placa cu mediu, n atmosfera nchis a
recipientului de cultivare (pirogalolul).

Pirogalolul

Agenii reductori reacioneaz cu O 2 dizolvat n mediu sau existent n atmosfera recipientului i-l
reduc la H2O.
2.14.3.1 Respiraia aerob
Respiraia aerob este procesul catabolic productor de energie n cursul cruia compuii
energetici organici sau anorganici redui, cu rolul de donori de e-, sunt degradai complet pe cale
oxidativ pn la CO2 i H2O. n respiraia aerob, O2 este ultimul acceptor de e- (fig. 27).
Trstura distinctiv a procesului respirator este prezena mai multor sisteme redox, constituite
din enzime care alctuiesc catena transportoare de e-. Electronii sunt transportai n cascada enzimelor
sistemului redox, permind eliberarea treptat a energiei. Lanul de sisteme redox formeaz catena de
respiraie celular.
Substratul energetic poate fi anorganic pentru bacteriile chimiolitotrofe (H 2, NH3, nitriii, So i
compuii si redui, compuii Fe) sau organic pentru cele chimioorganotrofe.
Setul de reacii de importan esenial n respiraia aerob este ciclul Krebs. Protonii (H+) cedai
de diferii intermediari ai ciclului Krebs ajung, prin sistemele redox ale catenei de respiraie, la O2.
Electronii eliberai din substrat strbat componentele catenei, pn la acceptorul final, O 2 n
condiii de aerobioz sau un alt acceptor final, dac O2 nu este disponibil. Concomitent se sintetizeaz
ATP. Ansamblul reaciilor de oxidare i de fosforilare poart denumirea de fosforilri oxidative.
Testul oxidazei se folosete ca un caracter fenotipic pentru identificarea tulpinilor bacteriene cu
metabolism respirator de tip aerob. Se determin astfel dac o tulpin bacterian produce citocromoxidaz i dac folosete O2 n catena de transport al e -. Bacteriile care utilizeaz O2 sunt cele obligataerobe, iar cele care pot s-l foloseasc sunt facultative.
Oxidaza este enzima care catalizeaz reacia de oxidare/reducere ce implic O 2 ca acceptor de e-.
n aceste reacii O2 este redus la H2O sau H2O2. Oxidazele sunt o subclas a oxido-reductazelor (glucozoxidaza, monoamin-oxidaza, NADPH-oxidaza, xantin-oxidaza, lizil-oxidaza, citocrom P 450 - oxidaza).
Citocrom P450 - oxidaza este enzima cheie component a catenei de transport al e -, ce permite folosirea O2
n respiraie pentru generarea energiei.
Mecanisme moleculare protectoare care permit respiraia aerob
Multe reacii biochimice eseniale pentru metabolismul aerob al celulei necesit transferul a 4 e la molecula de O2 pentru a forma H2O (dup reacia: O2 + 4e- + 4 H+ = 2H2O). De cele mai multe ori
transferul are loc simultan, fr formarea altor intermediari ai reducerii.
Deoarece O2 este un oxidant puternic i acceptor de mare afinitate al e -, el poate avea rolul de
acceptor de e- nu numai la captul catenei respiratorii membranare, ci i n alte reacii de oxidare a
substratului, catalizate de enzimele solubile n citoplasm. Aceste reacii pot fi fiziologice, productoare
sau neproductoare de energie sau sunt nefiziologice i n anumite condiii sunt letale, deoarece O2
molecular este redus secvenial, univalent, formnd intermediari reactivi cu diferite grade de toxicitate.
Reducerea O2 cu un singur e- produce radicalul superoxid (.O2-), care la pH fiziologic se reduce nc odat
univalent i formeaz H2O2 (produsul reducerii bivalente).

Reducerea complet a unei molecule de O2 la H2O, necesit 4 e-. n acest proces se formeaz compui
intermediari (radicalul anionic superoxid (O -2), peroxidul de O (H2O2) i radicalul hidroxil (OH-). Ionul O2 este eliminat de superoxid dismutaze (SOD), iar H 2O2 este ndeprtat de catalaze i peroxidaze.
Intermediarii reducerii O2 reacioneaz cu toate tipurile de macromolecule i produc leziuni ale
moleculelor de ADN, ARN, proteine, iar prin peroxidarea lipidelor apar leziuni membranare.
Toate organismele i-au dezvoltat mecanisme protectoare pentru a atenua efectele oxidanilor.
Mecanismele de aprare a celulei fa de stressul oxidativ sunt de dou categorii: preventive i
reparatorii.
Mecanismele preventive acioneaz prompt i previn apariia leziunilor oxidative, prin neutralizarea
derivailor reactivi ai O2 sau limiteaz durata aciunii unor reacii, ca de exemplu, peroxidarea lipidelor.
Peroxidul de H (H2O2) are o toxicitate moderat. Oxideaz componentele membranare i enzimele,
lezeaz ADN i produce mutaii, inhib procesele de transport membanar. H 2O2 este ndeprtat, cel mai
adesea sub aciunea catalazei, prin conversia la H2O i O2, sau a peroxidazelor, care o reduc la H2O, dup
reacia:
O molecul de H2O2 se reduce, iar alta se oxideaz.
Catalaza este o hemoprotein, un homotetramer cu un protohem/subunitate, ce conine 4 grupri
hem. Este o enzim protectoare care catalizeaz degradarea H 2O2, prevenind formarea radicalului OH,
mult mai reactiv. Catalaza are activitate peroxidazic i folosete o molecul de H2O2 ca donor de e- i o
alta ca acceptor de e-.
catalaza

H2O2 + H2O2 --------- 2 H2O + O2.


Catalaza se gsete n snge, mduva osoas, membranele mucoase, rinichi, ficat. Enzima a dobndit
notorietate pentru rolul de activator al izoniazidei, fiind folosit n tratamentul tuberculozei. Pierderea
enzimei prin mutaie duce la rezistena la izoniazid, unul dintre motivele creterii frecvenei
tuberculozei.
De cele mai multe ori, este o enzim neinductibil. Este produs abundent de bacteriile aerobe i de
cele facultativ aerobe. Cele microaerofile produc cantiti mici de catalaz. Enzima nu este produs de
bacteriile strict anaerobe i nici de cele anaerobe aerotolerante. Unele bacterii lactice sintetizeaz totui o
catalaz adevrat, dac n mediu se gsete hemina, deoarece ele nu sintetizeaz grupul prostetic hem al
catalazei.
Peroxidazele sunt flavoproteine fr metale grele i catalizeaz dehidrogenarea unui substrat
(AH2), n prezena H2O2. Cea mai important este NADH-peroxidaza. Peroxidazele se gsesc la plante,
animale i microorganisme i catalizeaz oxidarea diferitelor substraturi pe seama peroxidului:
Glutationul este substratul glutation-peroxidazei (GP) care ndeprteaz H 2O2 i peroxizii lipidici
care rezult din atacul radicalilor liberi asupra lipidelor.

Structura glutationului: L--Glutamil- L-Cysteinil-Glycin. Glutationul este compusul tiolic al multor celule procariote i
eucariote. Lipsete la eucariotele care nu au mitocondrii.

Ionul O2- (superoxid) se formeaz n cantiti mici n timpul procesului respirator normal, prin
reducerea univalent (O2 + e- = O2-). Are reactivitate moderat, capabil s acioneze ca oxidant sau ca
reductor n sistemele biologice. Este relativ stabil, ceea ce i permite s difuzeze la distane relativ mari

nainte de a-i exercita efectele toxice. O 2- generat extracelular poate dobndi acces la intele intracelulare
pe calea canalelor pentru anioni. La pH acid (n focarul inflamator sau n interiorul fagosomului), O 2- se
protoneaz i formeaz HO2. (hidroniu) cu sarcin neutr i de aceea trece mai uor prin membrane i
reacioneaz cu sine nsui, formnd H2O2.
O2- produce distrugerea oxidativ (peroxidarea) lipidelor (introducerea neenzimatic a O n
catenele de acizi grai nesaturai) i a altor componente ale celulei. Este cel mai stabil dintre toi
intermediarii reducerii O2 i poate aciona succesiv, asupra mai multor molecule. O 2- este eliminat sub
aciunea superoxid-dismutazelor (SOD). SOD se combin cu 2 molecule de O2-, dup reacia:
Ionul superoxid este eliminat rapid i nu se acumuleaz n celul. Anihilarea .O2- este o strategie
esenial de aprare, deoarece nu numai c limiteaz aciunea sa direct, dar previne reducerea Fe mediat
de .O2- i generarea .OH (Lovely, 1991).
Unii fungi i puine bacterii produc n special CuZnSOD, homodimere, fiecare subunitate cu cte
un atom de Cu i Zn. Bacteriile anaerobe obligate produc n special FeSOD (dimeri), iar cele aerobe
produc predominant MnSOD (dimeri i tetrameri). Unele bacterii produc ambele tipuri de SOD. Unele
bacterii patogene (M. tuberculosis) secret FeSOD n mediul extracelular, ca mecanism de rezisten la
atacul oxidant. La bacteriile facultativ-anaerobe (E. coli), SOD este periplasmic i nivelul activitii ei
crete dup expunerea la O2.
Singurele organisme care nu posed enzime protectoare sunt bacteriile anaerobe stricte. De aceea,
O2 exercit efecte toxice letale asupra lor.
Radicalul hidroxil liber (OH.) se formeaz prin reducerea trivalent a O2 in vitro, prin reacia
H2O2 cu .O2-. Aceast reacie este amplificat de un catalizator metalic (Fe 3+). Radicalul se formeaz i ca
rezultat al aciunii radiaiei ionizante.
OH. este cel mai puternic agent oxidant dintre toi intermediarii reducerii O 2. OH. oxideaz toate
categoriile de macromolecule (proteine, ADN, lipide). Este probabil unul dintre agenii care omoar
celulele dup iradiere x sau .
Datorit reactivitii foarte nalte, difuzia .OH este limitat nainte de a ntlni substraturile
oxidabile. Oxidarea acizilor grai nesaturai ntr-o membran lipidic poate produce radicalul peroxil
(HO2), care reacioneaz cu alte molecule lipidice nvecinate, genernd ali radicali lipidici. Se iniiaz
reacia n lan a radicalilor liberi, care se propag la situsuri ndeprtate de situsul primar al reaciei.
Oxigenul singlet (1O2) este o form molecular cu energie superioar i se formeaz cnd cei doi
e- pereche dobndesc spini antiparaleli, fie c se afl pe acelai orbital, fie pe orbite diferite. n aceast
form, O2 nu primete un e- suplimentar, ci numai energie suplimentar, care schimb spinul unuia dintre
e-.
1
O2 este un poluant atmosferic. Poate fi produs fie spontan, fie prin sisteme enzimatice. Cea mai
comun cale chimic a producerii sale este reacia O2 cu lumina vizibil. Procesul implic prezena unei
molecule a unei substane colorate care absoarbe lumina.
1
O2 se genereaz prin aciunea lactoperoxidazei i mieloperoxidazei, prezente n lapte, saliv i n
fagocite. n fagocite, 1O2 are rolul de a omor agentul fagocitat. n prezena 1O2 se produc reacii de
oxidare, al cror rezultat este distrugerea oxidativ a componentelor celulare vitale, ca de exemplu,
fosfolipidele membranei celulare.
Mecanismele reparatorii acioneaz tardiv i repar leziunile cauzate de molecule reactive care
nu au fost anihilate de sistemele de aprare preventiv. Fiecare condiie de stres induce sinteza unui set de
proteine, unic pentru categoria agentului inductor al stresului. Unele proteine induse de stresul oxidativ
sunt comune i pentru alte tipuri de stres (stresul hipertermic, nfometarea etc.).
Stresul oxidativ altereaz numeroase ci metabolice. Gradul de alterare este dependent de capacitatea de
rspuns al celulei la stres. Eliminarea timpurie a stresului oxidativ, prin mecanismele preventive este
esenial pentru supravieuirea celulei.
2.14.3.2 Respiraia anaerob

Majoritatea organismelor capabile de respiraie anaerob sunt procariote. Bacteriile anaerobe nu


au sistemul citocromilor pentru metabolismul O 2. Cele aerotolerante au niveluri sczute de SOD, iar
catalaza este prezent sau absent. Dac anaerobii au SOD i catalaz evit efectul toxic al radicalilor O 2
i H2O2 i tolereaz O2. Unele dintre bacteriile heterotrofe care realizeaz respiraia anaerob au caten de
respiraie i sunt facultativ anaerobe. n prezena O2, realizeaz metabolism oxibiotic. Transformrile
chimice pe care le realizeaz n timpul generrii energiei, n absena O 2, au o deosebit importan
ecologic sau industrial.
n absena O2, bacteriile heterotrofe facultativ-anaerobe i obin energia din substratul energetic,
fie prin respiraia anaerob, fie prin fermentaie. Respiraia anaerob este mai eficient din punct de
vedere energetic, comparativ cu fermentaia.
n procesul respiraiei anaerobe, e - cedai de substratul organic oxidabil sunt preluai de catena de
respiraie celular i sunt transferai unui acceptor final, care este fie un compus oxigenat (nitrat, sulfat,
carbonat), fie un singur compus organic (fumaratul). Transferul e- de-a lungul catenei respiratorii este
cuplat cu fosforilrile oxidative membranare.

Acceptorii finali de electroni n respiraia anaerob i n fementaii. Catabolismul compuilor organici produce CO 2.

2.14.3.3. Fermentaia
Denumirea de fermentaie vine de la latinescul fervere, care nseamn a fierbe i semnific
degajarea, uneori abundent, a CO2 n timpul fermentaiei. Studiul tiinific al fermentaiilor a fost iniiat
de L. Pasteur. n perioada l857-l875, el a demonstrat c procesele de transformare biochimic a unor
substraturi sunt consecina vieii fr aer a unor microorganisme, cu rolul de fermeni.
Din punct de vedere fiziologic, fermentaia este un proces catabolic productor de energie n
absena O2, n care compuii organici au rolul de donori i de acceptori de electroni. Compuii chimici
care ndeplinesc aceste funcii sunt, de regul, metabolii derivai dintr-un substrat fermentabil (de
exemplu, un glucid). Procesele redox se produc n absena oricrui acceptor terminal de electroni.
Din punct de vedere biochimic, fermentaia poate fi definit ca un ansamblu de reacii biochimice
anaerobe de oxidare i de reducere care furnizeaz celulei energia necesar prin mecanismul fosforilrilor
la nivelul substratului, care au loc n citoplasm.
Funcia major sau unic a fermentaiei este cea energetic, adic producerea ATP. ATP rezult
prin transferul grupelor fosfat din intermediarii fosforilai cu potenial energetic nalt ce se formeaz n
timpul degradrii substratului.
Fermentaiile se desfoar n condiii anaerobe. La microorganismele strict anaerobe, n prezena
O2, cile fermentative sunt represate i nu se dezvolt, iar cele facultativ-anaerobe i schimb calea
metabolic de producere a energiei, de la fermentaie la respiraie. Inhibiia fermentaiei n aerobioz la
microorganismele aerobe-facultativ anaerobe, poart denumirea de efect Pasteur* i se manifest prin
diminuarea net a cantitii produselor de fermentaie, precum i prin creterea randamentului energetic ce
se reflect n producerea unui volum net superior de biomas pentru aceeai cantitate de substrat
consumat. Efectul inhibitor al O2 asupra fermentaiei la microorganismele facultativ anaerobe ar fi datorat
inactivrii uneia dintre enzimele cheie ale cii Embden-Meyerhof, fosfofructokinaza. Numai bacteriile

lactice fac excepie: O2 nu modific modul lor de a produce energie, astfel nct fermentaia continu
chiar n prezena O2.
*

O celul facultativ-anaerob metabolizeaz glucoza pe cale aerob sau anaerob. n anaerobioz, glucoza este degradat la
lactat, rata degradrii fiind mult mai mare dect n condiii aerobe. Diferena se datoreaz randamentului mai mic de sintez a
ATP/molecul : n timpul glicolizei se produc 2 molecule de ATP/molecul, iar n aerobioz se sintetizeaz 36 molecule de
ATP/molecul. n anaerobioz, pentru sinteza aceleiai mase celulare este necesar de 18 ori mai mult glucoz.
Dac suspensia celular anaerob se oxigeneaz, rata de consum a glucozei scade foarte mult, iar acumularea lactatului scade
pn spre 0. Fenomenul inhibrii consumului de glucoz i stoparea acumulrii lactatului n prezena O 2 se numete efect Pasteur.
Efectul s-a descoperit pentru fermentaia alcoolic, dar este o caracteristic a tuturor celulelor facultative, inclusiv a celulelor
musculare.

Substraturile fermentabile sunt compui organici diveri: glucide sau compui nrudii (acizi
organici, alcooli), aminoacizi, amine, purine, pirimidine. n procesul fermentaiei, anumii compui
organici, de obicei doi metabolii diferii, derivai dintr-un substrat fermentabil, au rolul de donor i
respectiv, de acceptor de e-.
n procesul fermentativ este meninut echilibrul redox. Nivelul mediu de oxidare a produselor
finale este egal cu al produsului fermentabil: din glucoz rezult att metabolii oxidabili, ct i
reductibili.
Degradarea substratului n fermentaie este incomplet i de aceea se elibereaz o cantitate mult
mai mic de energie dect n procesul de respiraie, n cursul creia oxidarea substratului este complet.
Procesele de fermentaie sunt iniiate de fosforilri la nivelul substratului. Rezultatul lor este
sinteza ATP, dar i a altor compui cu o legtur bogat n energie, cel mai important fiind acetil-CoA.
Diferena esenial ntre metabolismul aerob i anaerob const n soarta acidului piruvic i a
NADH. n metabolismul aerob, NADH este oxidat n catena transportoare de e, cu sinteza ATP prin
fosforilare oxidativ, iar n anaerobioz NADH este folosit n reducerea anaerob a compuilor organici.

Structura molecular a acetil CoA.

Glucoza poate fi fermentat virtual de toate bacteriile anaerobe. Fermentaia ei este cel mai
cunoscut proces fermentativ i este iniiat printr-o reacie de fosforilare, n urma creia rezult glucozo-6
fosfatul. Se consider c procesul decurge n dou etape:
n prima etap se desfoar reaciile de oxidare a glucozei. Rezultatul lor este formarea
intermediarului central al metabolismului fermentativ al glucidelor acidul piruvic. Acest compus
este mai oxidat dect glucoza i diferena de potenial redox este stocat n piridin-nucleotidele
reduse;
n etapa a II-a au loc reacii de reducere a compuilor intermediari, prin care se formeaz mai multe
produse finale.
Glucoza este oxidat pe una din urmtoarele 4 ci:
calea Embden-Meyerhoff-Parnas (EMP, denumit i calea hexozo-difosfatului sau a glicolizei);
calea hexozo-monofosfatului (HMP, denumit i calea pentozo-fosfatului);
calea fosfocetolazei;
calea Entner-Doudoroff.
-

Fermentaia lactic
Fermentaia lactic este procesul biologic prin care microorganismele catabolizeaz glucoza din
mediu i o transform n acid lactic. n cantitate mic, acidul lactic este produsul de catabolism al unui
numr mare de microorganisme, dar unele bacterii furnizeaz acidul lactic ca produs principal al
metabolizrii glucidelor.
Bacteriile lactice se mpart n dou categorii:
a) bacteriile homofermentative produc numai acid lactic ca produs final al procesului fermentativ:
Lactobacillus delbrueckii, L. bulgaricus, L. acidophilus, L. casei, L. plantarum, Streptococcus lactis, S.
cremoris, S. thermophilus;
b) bacteriile heterofermentative produc, pe lang acid lactic, cantiti mari ale altor produse finale
(CO2, etanol, acid acetic, glicerin, manit, n funcie de specie): L. brevis, L. lycopersici, Leuconostoc
mesenteroides, L. dextranicum, L. citrovorum.
Cantiti mari de acid lactic sunt produse de unii fungi filamentoi (Rhizopus), dar pentru
producerea industrial a acidului lactic se folosesc bacteriile lactice.
Bacteriile lactice sunt Gram pozitive, nesporulate, anaerobe-aerotolerante sau microaerofile,
mobile, nepatogene i cresc n mediu acid.

Acidul lactic (-hidroxipropionic) conine un atom de carbon asimetric i de aceea poate exista sub dou
forme optic active: izomerii D (-) i L (+).

Fermentaia aceto-lactic
Bacteriile din g. Bifidobacterium, ntr-o fermentaie mixt aceto-lactic produc un amestec de acizi lactic
i acetic, dup reacia:
Glucoza este fosforilat i convertit la fructozo-6 fosfat, ca i n calea glicolitic EMP. Fructozo6 fosfatul este clivat ntr-o reacie de fosforilare cu fosfat anorganic, ntr-o molecul de acetil-fosfat i
eritrozo-4 fosfat. Reacia eritrozo-4 fosfatului, cu o molecul de fructozo-6 fosfat iniiaz o serie
complex de rearanjri moleculare, din care rezult gliceraldehid-3 fosfat i acetil-fosfat.
Fermentaia alcoolic produs de levuri
Fermentaia alcoolic este foarte asemntoare celei lactice, diferena fiind numai cu privire la
transformrile acidului piruvic. Cea mai mare parte a etanolului produs n natur i n industrie rezult
prin catabolizarea anaerob a glucozei i a altor zaharuri de ctre S. cerevisiae.
Levurile catabolizeaz glucoza pe calea EMP. Dintr-o molecul de glucoz se formeaz dou
molecule de piruvat, care nu este convertit la acetil-CoA, ca n metabolismul aerob i nici redus la acid
lactic, ci sub aciunea piruvat-decarboxilazei, o enzim cheie n fermentaia alcoolic, este decarboxilat la
acetaldehid. Acetaldehida este redus de NAD-reductaz, la etanol.

Producia net de ATP n fermentaia alcoolic este de dou molecule pentru fiecare molecul de
glucoz, mult mai mic dect n catabolizarea aerob.
Prin transferul celulelor n condiii anaerobe, rata degradrii glucozei se intensific de 3-4 ori.
Transferul invers este nsoit de diminuarea ratei de catabolizare a glucozei i oprirea fermentaiei
alcoolice. Fenomenul poart denumirea de efect Pasteur.
Fermentaia alcoolic bacterian
O alt cale a fermentaiei alcoolice este aceea care se desfoar n celulele bacteriene
saprobionte anaerobe, aerotolerante, ce aparin g. Zymomonas. Glucoza este catabolizat pe calea EntnerDoudoroff (ED).
Calea ED a fost descoperit la Pseudomonas saccharophila i la Zymomonas mobilis, dar este
funcional i la unii viermi parazii.
Primul intermediar al cii este glucozo-6 P, care este oxidat, ca i pe calea HMP, la 6-fosfogluconat.
Prin reacia de dehidrogenare, 6-fosfo-gluconatul formeaz un compus intermediar
2-ceto-3-dezoxi-6-fosfo-gluconatul, care este scindat sub aciunea aldolazei, la piruvat i aldehida-3fosfogliceric.
Aldehida-3-fosfogliceric poate fi catabolizat de enzimele cii EMP i rezult piruvat sau de
enzimele cii HMP i se formeaz precursori pentru biosinteza ADN, ARN, a vitaminelor, aminoacizilor
aromatici etc. Calea funcioneaz i la Rhizobium. Lipsete la bacteriile Gram pozitive, cu excepia unora
din g. Nocardia.
Bacteriile din g. Zymomonas metabolizeaz piruvatul prin decarboxilare, deoarece au o enzim
rar la bacterii piruvat-decarboxilaza. Pe aceast cale, dintr-o molecul de glucoz se formeaz dou
molecule de etanol i dou molecule de CO2.
Multe bacterii lactice, enterobacterii i clostridii formeaz cantiti mari de piruvat n procesul
fermentaiei, dar nu au piruvat-decarboxilaz pentru producerea acetaldehidei.
Catabolismul piruvatului
Piruvatul este catabolizat pe cale aerob sau anaerob. Microorganismele strict aerobe sau cele
facultative, realizeaz n prezena O2 decarboxilarea oxidativ a piruvatului i formeaz acetil-coenzima
A, care intr n ciclul Krebs, la nivelul oxalo-acetatului.
n anaerobioz, piruvatul este decarboxilat sub aciunea piruvat-decarboxilazei i se formeaz
acetaldehid i CO2, redus ulterior la etanol, de ctre bacteriile din g. Zymomonas.
Piruvat-decarboxilaza poate fi asociat cu un sistem transportor de electroni, pan la CO 2.
Fermentaiile acide
La cele mai multe bacterii, catabolizarea glucozei la acid piruvic se desfoar pe calea EMP.
Exist cteva tipuri de fermentaii care se deosebesc de fermentaia homolactic prin reacia de reducere
a piruvatului, deoarece numai o parte a acestui intermediar este redus direct la lactat, dar majoritatea
moleculelor sale sunt supuse unei reacii de decarboxilare, sub aciunea piruvat decarboxilazei. Se
formeaz acetaldehida, care este oxidat n trepte succesive, rezultatul fiind un amestec de produse de
fermentaie n care predomin acizii.
Echilibrul cantitativ al produselor finale depinde de echipamentul enzimatic al speciei bacteriene, dar i
de un mecanism general de reglare a metabolismului bacterian, n funcie de pH-ul mediului de cretere.
Dac pH-ul scade sub un anumit nivel, datorit producerii iniiale a acizilor tari (acetic, lactic),
metabolismul bacterian este reglat spre producerea acizilor mai slabi (propionic, butiric) i n anumite
cazuri, a corpilor cetonici (butanediol) sau a alcoolilor (etanol, butanol).

Cele mai multe fermentaii bacteriene sunt acide. n funcie de raportul cantitativ al produselor finale se
disting cteva tipuri de fermentaii acide.
Fermentaia acid mixt este caracteristic unui numr mare de enterobacterii negative pentru
reacia Voges-Proskauer i se caracterizeaz prin acumularea de acetil-metil-carbinol (CH 3 CO CHOH
CH3). n varianta sa cea mai simpl, fermentaia acid mixt este rezultatul a dou serii principale de
reacii:
reducerea direct a piruvatului la lactat;
clivarea piruvatului la formiat i acetil, n prezena CoA.
Produsele finale ale fermentaiei acide mixte sunt lactatul, acetatul, etanolul i formiatul.
Consecutiv clivrii formiatului, la multe enterobacterii (E. coli), din fermentaia glucozei rezult gaze
(CO2, H2). Dac din echipamentul enzimatic lipsete formiat-liaza, fermentaia se produce fr gaze.
Unele enterobacterii, n special cele care au formiat-dehidrogenaz, produc o cantitate mic de
acid succinic, n prezena ATP, prin reacia de condensare a unei molecule de CO 2 cu o molecul de
piruvat. Reacia este catalizat de piruvat-feredoxin-oxidoreductaz.
Proporia produselor finale ale fermentaiei depinde de condiiile de cultivare. Valoarea pH a mediului
scade datorit acumulrii acizilor rezultai n fermentaie.
Fermentaia butiric este caracteristic, dar nu exclusiv, bacteriilor zaharolitice din g. Clostridium.
Butiratul se formeaz pe o cale metabolic ce ncepe cu clivarea piruvatului, n prezena CoA, n acetilCoA, CO2 i H2. CO2 i H2 se formeaz direct, fr faza intermediar a acidului formic.
Conversia piruvatului la acetil-CoA implic sistemul enzimatic al piruvat-feredoxinoxidoreductazei (PFO), o enzim ce catalizeaz oxidarea piruvatului pentru a forma acetil-CoA i CO 2.
Feredoxinele sunt proteine mici, foarte acide, cu rolul principal de transportori de e -, care conin ca
grupri prostetice aglomerri de metale: 2Fe-2S, 4Fe-4S sau 3Fe-4S. Au potenial redox mic i
funcioneaz ca transportori de e - n procese metabolice fundamentale ca fotosinteza, fixarea N 2,
asimilarea H2 i S. Electronii pot fi donai unei hidrogenaze, cu formarea H 2. Cele mai comune feredoxine
bacteriene conin 2 aglomerri de metale ntr-un lan peptidic de 50-60 de resturi, sunt specifice
anaerobilor i au rolul de transfer al e- n sistemele cu potenial redox sczut.
PFO are un rol important n procesele de oxido-reducere ale bacteriilor anaerobe (Clostridium).
Enzima permite reutilizarea H2 ca potenial reductor, avnd rol de hidrogenaz de nglobare. Are un
potenial redox foarte mic, asemntor cu al H 2 (-0,42 V). Funcia de hidrogenaz de nglobare a PFO
catalizeaz reducerea produselor primare acide ale fermentaiei mixte, rezultate din acidul piruvic, la
molecule neutre: prin reducerea aceto-acetilului rezult butanol, prin decarboxilarea aceto-acetil-CoA se
formeaz acetona, iar prin reducerea acetonei rezult izopropanol.
Recircularea H2 i utilizarea sa ca potenial reductor pstreaz echilibrul redox al mediului de
cretere a acestor bacterii.
Fermentaia butanediolului (2,3 butan-glicol) este produs de unele enterobacterii (Vibrio,
Aeromonas), de unele specii de Bacillus i de unele bacterii lactice (Streptococcus cremoris,
Lactobacillus cremoris).
Pe lng sistemul enzimatic al fermentaiei acide mixte, ele au i setul de enzime al fermentaiei
particulare, denumit butanediolic sau butilen-glicolic, care furnizeaz ca produs final o molecul
neutr de 2,3-butanediol. Aceast cale metabolic se activeaz dup ce valoarea pH a mediului de cretere
scade sub 6.
Reacia cheie a cii este cea de condensare a dou molecule de piruvat, prin decarboxilare i
eliberare a acidului formic. Rezult diacetilul, care este redus la acetoin (acetil-metil-carbinol). Acetoina
este redus i se formeaz butanediolul.
Diacetilul i acetoina dau aroma caracteristic untului. Diacetilul se formeaz din lapte. Citratul
este scindat n acetat i oxalo-acetat. Oxalo-acetatul este decarboxilat la piruvat.
La enterobacterii, butanediolul se formeaz pe calea acetolactatului.

Acetolactatul este decarboxilat sub aciunea aceto-lactat-decarboxilazei i se formeaz acetoina,


care este redus la butanediol.
Calea fermentaiei butanediolice se evideniaz prin reacia Voges-Proskauer * i prin valoarea
relativ ridicat a pH.
*

Reactia Voges-Proskauer evideniaz capacitatea unor microorganisme de a produce prin fermentaia


glucozei, acetil-metil-carbinol (acetoina), care n prezena alcalilor este oxidat la diacetil. Diacetilul se
combin cu arginina, creatina sau cu creatinina din mediu i determin apariia culorii roii.
Fermentaia acidului propionic
Acidul propionic este produs pe cale fermentativ de un grup de bacterii nesporulate din g.
Propionibacterium. Ele pot fermenta acidul lactic (produsul final al altor fermentaii bacteriene) (fig. 66).
Se formeaz acid propionic, acid acetic i CO 2. Aceast cale de fermentaie permite generarea ATP prin
metabolizarea acidului lactic sau a acidului piruvic, rezultat pe calea glicolizei.
2.14.4. Catabolismul lipidelor
Trigliceridele sunt hidrolizate la glicerol si acizi grai, sub aciunea exo- sau endolipazelor. Aceste
enzime sunt produse de fungi filamentoi (A. flavus, P. roqueforti, Rhizopus sp., Geotrichum), levuri
(Candida lipolytica, Torulopsis, S. cerevisiae), bacterii (Serratia liquefaciens, Ps. aeruginosa, Alcaligenes
sp., S. aureus).
Glicerolul intr n calea glicolizei, la nivelul dihidroxi-aceton-fosfatului, trecnd prin dihidroxiaceton sau prin glicerol fosfat. Ulterior, aceste produse sunt degradate pe calea glicolizei. Procesul este
anaerob.
Acizii grai sunt activai de ATP n prezena CoA i se formeaz acil-CoA. Acesta este oxidat la
carbonul beta (-oxidare) i prin hidroliz rezult acetil-CoA. AG -oxidat este mai scurt dect cel iniial
cu doi atomi de carbon.
2.14.5. Catabolizarea compuilor organici azotai
Numeroase bacterii (n special din g. Clostridium i Bacillus) secret exoproteaze care scindeaz
lanurile polipeptidice n fragmente de civa aminoacizi. Sinteza enzimelor proteolitice este represat
dac n mediu se adaug hidrolizat de proteine sau amestec de aminoacizi. Peptidazele hidrolizeaz
polipeptidele i le transform n aminoacizi. n funcie de modul de aciune asupra lanului polipeptidic,
peptidazele sunt de dou tipuri: endopeptidaze i exopeptidaze. La rndul lor, exopeptidazele sunt de dou
categorii:
- aminopeptidaze, cele care ncep aciunea lor la extremitatea NH 2 liber a polipeptidului. Activitatea lor
depinde de prezena ionilor metalici;
- carboxipeptidaze, cele a cror aciune se iniiaz la extremitatea COOH liber a polipeptidului.
Aciunea acestor enzime are ca efect formarea di- i tripeptidelor, ulterior hidrolizate n
aminoacizi.
Majoritatea bacteriilor oxideaz puin sau deloc aminoacizii. Ele sunt mult mai active n sinteza
dect n degradarea lor, n special n faza de cretere rapid. Unele bacterii pot degrada aminoacizii, n
special dac acetia sunt unica surs de C n mediu. La plantele superioare, ca i la bacterii, dominant
este sinteza, deoarece ca i bacteriile, tind s creasc continuu.
Aminoacizii sunt catabolizai pe dou ci principale:
prin dezaminare;
prin decarboxilare.
-

Dezaminazele microorganismelor sunt foarte diverse. Ele cuprind enzime oxidative i


neoxidative. Rezultatul dezaminrii oxidative este formarea iminoacidului, care este apoi hidrolizat n
acid - cetonic i NH3:

Dezaminarea neoxidativ poate fi de trei feluri:


dezaminare
desaturant, cu formarea acidului nesaturat i a NH3;
dezaminare reductiv, ce const n reducerea aminoacizilor la acidul saturat corespunztor i
formarea NH3;
dezaminare prin deshidratare, o cale exclusiv a microorganismelor pentru aminoacizii hidroxilai.
Se formeaz acidul cetonic i NH3;
Un tip special de dezaminare este dezaminarea cuplat (reacia Stickland). Reacia se numete
dezaminare cuplat, deoarece necesit cel puin o pereche de aminoacizi complementari, unul fiind
oxidat, iar cellalt avnd rolul de acceptor de electroni.
Aminoacidul donor este oxidat sub aciunea unei NAD-dehidrogenaze. Rezultatul reaciei este
dezaminarea celor doi aminoacizi. Acidul alfa-cetonic este decarboxilat secundar, reacie n cursul creia
se produce fosforilarea la nivelul substratului (pentru o pereche de aminoacizi se sintetizeaz o molecul
de ATP).
Mecanismul reaciei Stickland, ca modalitate a metabolismului fermentativ productor de energie.
L-alanina are rol de donor de e-, iar glicina de acceptor. Ambele sunt convertite la acid acetic.
Dup comportamentul lor n reacia Stickland, aminoacizii se mpart n trei grupe: reductori,
oxidani i cei care se comport ca reductori sau oxidani, n funcie de condiiile de mediu.
Reacia de dezaminare cuplat este catalizat de numeroase bacterii anaerobe (de exemplu,
Clostridium).
Decarboxilarea aminoacizilor este o cale de catabolizare comun multor microorganisme,
proteolitice sau neproteolitice. Se formeaz CO 2 i o amin.
Un mediu acid favorizeaz biosinteza decarboxilazelor i pH crete, datorit producerii NH 3,
ureii, aminelor, iar ntr-un mediu alcalin este stimulat sinteza dezaminazelor i valoarea pH scade.
Unele bacterii i obin energia prin catabolizarea unui singur aminoacid (arginina), pe ci
fermentative foarte specifice i complexe sau prin fermentarea unor compui aminai (purine, pirimidine).
2.14.6. Catabolismul compuilor aromatici

n raport cu capacitatea de a metaboliza compuii aromatici, bacteriile se mpart n trei categorii:


cele care nu degradeaz astfel de compui;
cele care realizeaz o degradare incomplet (de exemplu, enterobacteriile). E. coli scindeaz
triptofanul la indol i piruvat, sub aciunea unei triptofanaze, fr s deschid ciclul benzenic sau
pirolic. Reacia de evideniere a indolului n mediile nutritive peptonate este un test de identificare a
enterobacteriilor, utilizat frecvent;
bacteriile care metabolizeaz complet compuii aromatici, prin ruperea structurilor ciclice. Reacia
de clivare a moleculelor ciclice este generatoare de energie. E. coli scindeaz triptofanul la indol i
acid piruvic.

Bibliografie
Schnaitman C. A., Klena J. D. 1993. Genetics of lipopolysccharidae biosynthesis in enteric bacteria. Microbiol. Rev. 57 (3) :
655-682.
Vaara M. 1992. Agents that increase the permeability of the outer membrane. Microbiol. Rev. 565 (3) : 430-481.
Mihescu G., Ionescu M.D., Mencinicopschi Gh. 1991. Electron-optic studies of protoplasts release from I C A-1.65 line of
Bacillus subtilis cells. Roum. Arch. Micr. Immun. 50, 1, 27-35.

Magnuson K., Jackowski S., Rock C. O., Cronan J. E. Jr. 1993. Regulation of fatty acid biosynthesis in Escherichia coli.
Microbiol. Rev. 57(3): 522-542.
Maloney P. C., Ambudkar S. V., Anatharam V., Sonna L. A., Varadhachary A. 1990. Anion-exchange mechanisms in
bacteria. Microbiol. Rev. 54(1): 1-17.
Paulsen I. T., Brown M. H., Skurray R. A. 1996. Proton-dependent multidrug efflux systems. Microbiol. Rev. 60(4): 575-608.
Fath M. J., Kolter R. 1993. ABC transporters: bacterial exporters. Microbiol. Rev. 57 (4): 995-1017.
Wiggins P. M. 1990. Role of water in some biological processes. Micr. Rev. 54, p. 432.
Krawiec S., Riley M. 1990. Organization of the bacterial chromosome. Microbiol. Rev. 54(4): 502-539.
Matthews K. S. 1992. DNA looping. Microbiol. Rev. 56 (1): 123-136.
Robinow C., Kellenberger E. 1994. The bacterial nucleoid revisited. Microbiol. Rev. 58(2): 162-210.
Laursen B.S., Sorensen H.P., Mortensen K.K., Sperling Peterson H.U. 2005. Initiation of Protein Synthesis in Bacteria
MMBR. 69, 1, p. 101-123.
Pugsley A. P. 1993. The complete general secretory pathway in gram-negative bacteria - Microbiol. Rev. 57(1): 50-108.
Simonen M., Palva I. 1993. Protein secretion in Bacillus species. Microbiol. Rev. 57(1): 109-137.
Michael Dunne Jr. 2002. Type III Secretion System in Bacteria. Clin. Micr. Reviews. 15: 2
Henderson I.R., Garcia F.N., Desvaux M., Fernandez R.C., AlaAldeen D. 2004. Type V Secretion Pathway: the
Autotransporter Story MMBR. 68, 4: 692-744.
Ghosh P. 2004. Process of Protein Transport by the Typ III Secretion System. MMBR. 68, 4:771-795.
Coburn B., Sekirov I., Finlay B.B. 2007. Type III Secretion Systems and Disease. Clin. Micr. Reviews. 20, 4: 535-549.
Craig E. A., Gambill B. D., Nelson R. J. 1993. Heat shock proteins: molecular chaperones of protein biogenesis. Microbiol.
Rev. 57(2): 402-414.
Errington J. 1993. Bacillus subtilis sporulation: regulation of gene expression and control of morphogenesis. Microbiol. Rev.
57(1): 1-33.
Brock T. 1988. Biology of microorganisms. Prentice Hall, Englewood Cliffs, New Jersey.
Todar's Online Textbook of Bacteriology, 2004. Kenneth Todar, University of Wisconsin,
http://www.textbookofbacteriology.net/
Ross P., Mayer R., Benziman M. 1991. Cellulose biosynthesis and function in bacteria Microbiol. Rev. 55 (1): 35-58.
Zumft W.G. 1997. Cell Biology and Molecular Basis of Denitrification. MMBR 61, 4 : 533-616.
Lovely D. R. 1991. Dissimilatory Fe(III) and Mn(IV) reduction Microbiol. Rev. 55(2): 259-287
Lodish H. Molecular cell biology. 5th Edition