Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
ADN-ul cromozomial
ARNm
CODUL GENETIC
= Informatia genetica stocata/ inregistrata in moleculele acizilor nucleici
-este determinat de ordinea bazelor azotate in structura primara a ADN
Orice informatie genetica este reprezentata conventional prin
semne simboluri (A, G, C, T/U);
Toate simbolurile
din care => mesaj
genetic
alfabetul genetic
4 simboluri (A, G, C, T/U) = 20 aminoacizi
Watson si Crick au introdus in 1961 notiunea de codon unitatea
de functie a codului genetic, format dintr-o succesiune de baze
azotate, necesare pentru codificarea unui aminoacid din structura
proteinelor;
Obs: Initial s-a crezut ca unitatea de functie = codonul univoc
(alcatuit doar dintr-o singura baza azotata- A, T, G, C)
Daca codonul ar specifica strict un aminoacid, numarul codonilor
obtinuti ar fi de 4 x 1 = 4 => ar fi specificati numai 4 aminoacizi
restul de 16 ar ramane nespecificati;
Acelasi rationament poate fi aplicat si in cazul codonului biunivoc
4 x 4 = 16 codoni, respectiv 16 aminoacizi, admitand faptul ca
ordinea bazelor modifica tipul de aminoacid;
Nierenberg si Matthaei(1961) au demonstrat ca, dimensional,
codonul este triunivoc, iar fiecare aminoacid este codificat de o
tripleta (succesiunea a trei nucleotide adiacente)
numarul combinatiilor posibile este de 4 x 4 x 4 = 64
( acopera si depaseste numarul aminoacizilor din structura
proteinelor)
( in 1965 si a insemnat
inceputul erei geneticii
moleculare )
++ codoni
codifica pentru =
acelasi aa
De exemplu, leucina este codificata de 6 codoni diferiti:
CUU, CUC, CUA si CUG, iar arginina de 6 codoni: CGU,
CGG, AGA si AGG.
redundanta
informationala
UUA, UUG,
CGC, CGA,
T=A
G=C
A=U
Mesajele au punctuatie.
Semnele de punctuatie = codon start sau initiator AUG
= 3 codoni non-sens(UAA, UAG, UGA) care
semnifica oprirea sintezei proteice.
Codonul initiator AUG (cu care se incepe cadrul deschis de lectura)
specifica metionina.
Codonii stop semnaleaza incheierea sintezei si eliberarea
polipeptidului format (prin fixarea unor factori de eliberare).
Codoni start alternativi pot fi GUG sau UUG; acestia in mod
obisnuit reprezinta valina si leucina dar in prezenta unor factori
initiatori ai translatiei sunt tradusi drept metionina si formilmetionina
Ceilalti 61 de codoni sunt codoni sens care semnifica cei 20 de
aminoacizi.
Intre codoni nu exista semne de separare sau virgule.
Citirea mesajului se face in flux continuu pana la codonul
terminator. (Intre codoni nu raman dezoxi-ribonucleotide izolate/
neintegrate in componenta unui triplet functional)
Codul genetic nu accepta suprapunere.
Fiecare codon poseda bazele proprii, care nu participa in acelasi
timp la structurarea altui codon.
Codul genetic este universal.
Aceeiasi codoni codifica aceiasi aminoacizi la majoritatea genelor
(animale, plante si micoorganisme), iar semnalele START si STOP
sunt universale si ele.
Exceptii de la universalitate ale codului genetic
se refera mai ales la 1 sau 2 codoni stop, utilizati drept codoni
codificatori la nivelul:
Genelor mitocondriale
Aminoacizilor nestandardizati
- deletia
Daca intr-o celula prin mutatie se suprima sau se insera 1-2
nucleotide (sau un alt numar care nu este multiplu de 3) se
produce o decalare a cadrului de lectura al genei care duce la
aparitia altui codon.
Toti codonii vor fi diferiti fata de cum erau initial
Repetitii trinucleotidice
Boala Huntington: insertii CAG care adauga serii de glutamina
Ataxia Friedreich: repetitii GAA in primul intron
Atrofia dentatorubral-pallidoluysiana (DRPLA), produsa prin
amplificarea unor secvente CAG ce produce poliglutamina in
proteina atrofina-1
Boala Kennedy, produsa prin amplificarea trinucleotidica a
secventei CAG in primul exon al genei receptorului androgenic
Sindromul X Fragil: insertii CGG pe cromozomul X; practic acestea
nu sunt legate de arginina deoarece mutatia este localizata in
regiunea 5 netranslata;
CTG in distrofia miotrofica ;
Ataxia spinocerebelara, cu repetitii CAG
Mutatii missense
Anemia Sickle-cell: GAG se transforma in GTG in gena beta a
hemoglobinei;
APC: varianta missense GAC la GTC
Cancer prostatic: mutatie missense GCC la ACC in gena steroid 5
alfa-reductaza
Mutatii nonsens:
-thalassemia (-globin gene)
Boala McArdles glicogenoza prin mutatie nonsens in gena
miofosforilazei
Deletia:
Fibroza chistica deletia UUU
ARN polimeraza
Sinteza ARN implica existenta unei enzime
Enzima capabila sa sintetizeze ARN se numeste ARNpolimeraza
(ARNpol), mai exact ARN-polimeraza-ADN-dependenta;
ARNpol pentru a functiona necesita:
ADN dublu catenar
Cele 4 ribonucleozide 5-trifosforilate:
NTP(ATP, GTP, CTP, UTP)
Mg2+.
Comparatie ARN-pol si ADN-pol
Asemanari ntre ARN-polimeraza si ADN-polimeraza
Sensul sintezei este ntotdeauna 5-3.
Necesita o matrita, 4 nucleotide si Mg2+.
Diferente ntre ADN-polimeraza si ARN-polimeraza
Spre deosebire de ADN-pol, ARNpol:
-nu necesita primer pentru a initia sinteza
-are o fidelitate mai mica (1 eroare la10.000 baze): face mai
multe erori decat ADN-pol (dar eroarea persista doar o generatie
de proteine, nu toata viata celulei, ca n cazul ADN-pol)
Tipuri de ARN-polimeraze
Procariote Toate cele 3 tipuri de ARN sunt transcrise de aceeasi
ARN-polimeraza
Eucariote Fiecare tip de ARN este transcris de catre un tip diferit
de ARN-polimeraza :
ARN-pol I(localizata n nucleol): ARNr 45 S
ARN-poI II(localizata n nucleoplasma): ARNm, ARNsn
ARN-pol III(localizata n nucleoplasma): ARNt si ARN 5S,
ARNsn.
TRANSCRIPTIA INFORMATIEI GENETICE
Prin asamblarea ribonucleotidelor in structura ARN-m (principiul
complementaritatii bazelor) se reproduce (fidel, in negative) informatia
genetica
din
segmentul
cistronului
de
ADN.
Transcriptia ARN-m are loc in 3 etape:
Initierea;
Elongatia;
Terminarea.
FAZA DE INITIERE A TRANSCRIPTIEI
Incepe cu o secventa particulara de ADN denumita situs promotor,
unde se ataseaza enzima ARN-polimeraza-ADN-dependenta, care
initiaza transcriptia;
ARN-polimeraza sintetizeaza acid nucleic in directia 5 la 3, iar
citirea matritei de ADN se face in directia 3 la 5;
La acest nivel se gaseste si o subunitate proteica denumita factor
sigma, care are rolul de a mentine conformatia de dublu helix
necesara recunoasterii situsului promotor;
In momentul in care complexul ARN-polimeraza/factor sigma
recunoaste corect promotorul, factorul sigma se disociaza de ARN
polimeraza si enzima incepe sa despiralizeze helixul de ADN,
Initierea
Rolurile subunitaatilor ARN pol:
-leaga ADN(secvente reglatorii), proteine, ARN-pol;
-catalitic(leaga NTP si formeaza legaturile fosfatdiesteri
- leaga ADN;
recunoaste promotorul;
asambleaza ARN-pol.
formeaza
impreuna
centrul activ
al enzimei.
conditionata de o serie de
factori de transcriptie
Doar catena
ANTISENS(35) = matrita
Faza de elongatie
In timp ce polimeraza se deplaseaza de-a lungul catenei antisens,
pe lantul de ARN sunt adaugate resturi de ribonucleozid
monofosfati(AMP, CMP, GMP, sau UMP) la capatul 3;
Aceste nucleotide rezulta din clivarea precursorilor ribonucleozid
trifosfati(ATP, CTP, GTP si UTP) de o molecula de pirofosfat(PPi);
Transcriptia la eucariote
Diferita fata de procariote
Eucariotele nu sintetizeaza ARNm policistronic;
ARNm eucariot este prelucrat inainte de a fi utilizat pentru sinteza
proteinelor.
Eucariotele au 3 ARN-polimeraze diferite, in vreme ce procariotele
nu au decat una
ARN polimeraza I (nucleol) ARNr 20S si ARNr 50S;);
ARN polimeraza II sintetizeaza ARNm
genele structurale si ARNsn;
codificat in toate
Matisarea ARNm
Termen care semnifica innadirea a doua capete
Se descriu urmatoarele Secvente de semnal
5GT(GU in ARN) situs donor
3AG situs acceptor
Situsul de conexiune sau de legatura(branch site) cu nucleotidul A
Etape
1. Sectionarea jonctiunii exon intron 5GU
2. Atasarea nucleotidului terminal G la nucleotidul A al situsului de
bransare(transesterificare) si formarea unei structuri lasou/bucla
3. Sectionarea intronului la jonctiunea 3AG, indepartarea lui si
unirea segmentelor de ARN exonic.
Reactiile
sunt
mediate
printr-un
proteine(spliceozomi)
format
din
ARNsn(U1,U2,U4,U5,U6) si proteine
complex
5
tipuri
ARNde
Matisarea alternative
Ordinea exonilor in ADN si transcriptul primar sunt pastrate in
ARNm matur
Exista, cu toate acestea, o flexibilitate in utilizarea exonilor, in
sensul ca in celule diferite vor fi retinuti in ARNm numai o parte din
exoni, restul fiind eliminati odata cu intronii Matisare alternativa
Aceasta duce la tipuri diferite de ARN din aceeasi gena, deci tipuri
diferite de polipeptide
Aceste proteine pot fi inrudite(izoforme) ca in cazul mielinei sau
troponinei C sau complet diferite(de exemplu gena calcitoninei
produce in celulele C tiroidiene precursorul calcitoninei iar in creier
precursorul unui neuromediator CGRP.
TRANSLATIA/TRADUCTIA INFORMATIEI GENETICE
Elementele implicate in realizarea translatiei sunt:
ARN-r
ARN-t
Aminoacizi
Enzime
Donatorii de energie
Elementele
implicate
ARN-t, aminoacizi
in
realizarea
translatiei:
NH2
NH2
aminoacid
aminoacid activat
ARN-t:
R-CH-CO-O-AMP-E + ARN-t = R-CH-CO-O-ARN-t + AMP + E
NH2
aminoacil-ARN-t
Elementele
ARN-t
implicate
in
realizarea
translatiei:
Elementele
implicate
ARN-r, ribozomi
in
realizarea
translatiei:
Ribozomii, descrisi de E. Pallade in 1953, au un diametru de 150200 , fiind formati din doua subunitati inegale, cuplate intre ele
prin legaturi stabilizate de ionii de Mg+;
La bacterii sunt formati din doua subunitati, diferite prin constanta
de sedimentare: marea subunitate are 50S(ARNr 23S, 5S, 34
proteine) iar mica subunitate are constanta 30S(ARNr 16S, 21
tipuri de proteine);
La om, subunitatile sunt 60S(ARNr 5S, 5,8S, 28S, 46 tipuri de
proteine) si 40S(ARNr 18S, 33 tipuri de proteine).
Fiecare subunitate este constituita din complexe de proteine(40%)
si ARN-r(60%);
Ribozomii au 4 situsuri functionale:
Pe subunitatea mica situsul de fixare al extremitatii 5 a ARNm
Pe subunitatea mare situsul P(peptidil) si A(aminoacil) unde se
fixeaza moleculele de ARNt incarcate cu aminoacizi specifici si
situsul de iesire E (exit)
INFORMATIEI
GENETICE
reglatoare
care
blocheaza
SINTEZEI
ACTIVITATII
PROTEICE
ENZIMATICE
Inhibitie non-competitiva;
Inhibitie competitiva.
Inhibitia noncompetitiva prin enzime allosterice
Produsul final (inhibitor) al caii metabolice se combina cu situsul
allosteric al enzimei, aceasta altereaza situsul activ al enzimei
astfel incit ea nu se mai poate lega la substratul initial al caii;
regiuni
CONTROL TRANSCRIPTIONAL
Punctul primar de control este reglarea activitatii ARNpolimerazei II
Activitatea ei este controlata de:
Elemente cis-reglatoare
Factori de transcriptie transreglatori
Controlul la distanta al expresiei genice prin enhancers sau
silencers
Reglare ca raspuns la semnalele extracelulare liganzi - sunt
receptori intracelulari la care se ataseaza diferiti hormoni si au
efect de factori de transcriptie)
Selectarea promotorilor pentru gene care au mai multi
promotori(gena distrofinei, cu cel putin 8 promotori: initiali-cortex,
mm, cerebel,limfocite; interni-rinichi retina)
CONTROL POSTTRANSCRIPTIONAL
Sunt mecanisme secundare care controleaza expresia genica
dupa transcriptie.
Acestea cuprind:
Controlul procesarii ARN;
Controlul translational;
Controlul degradarii mRNA;
Controlul activitatii proteice;
I.
Controlul procesarii ARN
Este limitat la eucariote si determina cum si cand este splitat sau
procesat transcriptul primar pentru a forma ARNm;
De exemplu, unele transcripturi de ARN produc diferite tipuri de ARNm
din aceeasi gena, in diferite tipuri de celule numai prin folosirea
selectiva a exonilor-matisare alternativa(gena calcitoninei cu 2 variantecalcitonina in cel. tiroidei si peptidul neuromodulator in hipotalamus)